专利名称：13－已基小檗碱盐的制备及其抗病毒和抗菌作用的制作方法
专利说明1 3-己基小檗碱盐的制备及其抗病毒和抗菌作用 概述1.13-己基小檗碱盐(其盐酸盐见化学式〔I〕)是以小檗碱盐为原料，经结构改造而得的小檗碱衍生物。盐酸小檗碱原是一种肠道抑菌药，收载于中华人民共和国药典二部。在临床上也用于心血管病如心律失常等，其用途比较广。小檗碱有季铵盐结构(化学式〔II〕)，它能作用于病毒和细菌的DNA、蛋白质、酶而产生广泛的抗病毒和抗生活性。但是季铵盐的亲脂性较差，难以通过组织的脂质膜，因此影响其吸收利用和作用强度。本发明采用正交优化的新型衍生制备方法，制备了13-己基小檗碱盐酸盐。药理动物模型试验首创发现，13-己基小檗碱盐酸盐具有很强的抗病毒作用。体外抗菌试验表明，本品抗葡萄菌的作用最高可比盐酸小檗碱强32倍以上。而测定其静注和口服急性毒性，只比盐酸小檗碱高1倍和3倍。因此，13-己基小檗碱盐作为一种新的抗病毒和抗生药物，具有巨大潜力，是十分有前途的。
13-己基小檗碱盐酸盐 [2]工艺方法1.13-己基小檗碱(盐酸盐)合成路线 2.二氢小檗碱制备将20.0g盐酸小檗碱溶解于400mL0.3～5％氢氧化钠或氢氧化钾溶液。另取0.5～3.0g硼氢化钠溶于200mL0.3～5％氢氧化钠或氢氧化钾溶液，得到稳定化的硼氢化钠溶液。将经碱稳定化处理的硼氢化钠溶液滴入小檗碱溶液，室温下搅拌反应2～4小时。抽滤，将滤上物水洗至滤液呈中性，得到二氢小檗碱粗品；将二氢小檗碱粗品以10～40％乙醇和60～95％乙醇精制，在50％丙酮中析出二氢小檗碱盐粉状晶体，产率在80％以上。
取二氢小檗碱盐酸盐10.0g，以800mL50～100％乙醇溶液溶解，加150～300mL冰醋酸，正己醛10～200mL，摇匀后80～95℃水浴加热回流1～8小时，减压浓缩后加入1～10％盐酸溶液(v/v)500mL，搅匀后静置，将析出物过滤并用水充分洗涤，得到13-己基小檗碱粗品；将13-己基小檗碱粗品溶于5～20％乙醇——盐酸混合溶液，以非极性(或弱极性)大孔吸附树脂吸附，依次用盐酸溶液及不同浓度的乙醇——盐酸混合溶液洗脱，解吸液浓缩至无醇，静置后析出13-己基小檗碱盐酸盐晶体。产率约55％。13C-NMR测定1.13-己基小檗碱盐酸盐的13C-NMR测定13C-NMR(CD3OD，AV-500)δ30.58(1’C)，32.01(2’C)，30.06(3’C)，23.62(4’C)，32.40(5’C)，14.32(6’C)，29.29(C-5)，58.91(C-6)，57.56(C(10)-Ome)，62.65(C(9)-Ome)，103.72(OCH2O)，109.34(C-4)，110.45(C-1)，122.23(C-12)，127.26(C-11)，121.85(C-1a)，123.14(C-8a)，134.50(C-12a)，135.14(C-4a)，136.38(C-13)，137.81(C-13a)，145.18(C-8)，146.40(C-9)，148.78(C-2)，151.36(C-3)，151.79(C-10).药理和毒理1.13-己基小檗碱盐酸盐的药理试验对感染致死剂量甲型流感病毒的小鼠，口服给予4mg/kg的13-对感染致死剂量甲型流感病毒的小鼠，口服给予4mg/kg的13-己基小檗碱盐酸盐，可以显著降低流感小鼠的肺病变指数并显著降低死亡率。而对照阳性药利巴韦林在相同条件下则需剂量75mg/kg方才有此效果。此外，体外抗菌试验表明，13-己基小檗碱盐酸盐对于抗性金黄色葡萄球菌(氨苄青霉素抗性+帕那沙星抗性+头孢霉素抗性)及对常规金葡菌的最低抑菌浓度(MIC)分别为4μg/ml和8μg/ml，作用强度比小檗碱强16倍至32倍以上。而毒性试验(LD50)则表明，13-己基小檗碱盐酸盐血管给药和口服给药的急性毒性只比小檗碱强1倍和3倍。由此说明，13-己基小檗碱盐作为小檗碱的衍生改造产品是十分成功的，它将成为一种新的抗病毒药和抗菌药，是非常有前途的。
实施例1二氢小檗碱的制备将20.0g盐酸小檗碱溶解于400mL0.5％氢氧化钠溶液。另取1.6g硼氢化钠溶于200mL0.5％氢氧化钠溶液，得到稳定化的硼氢化钠溶液。将经碱稳定化处理的硼氢化钠溶液滴入小檗碱溶液，室温下搅拌反应3.0小时。抽滤，将滤上物水洗至滤液呈中性，得到二氢小檗碱粗品g；将二氢小檗碱粗品以100mL温热的30％乙醇溶液溶解，冷却后抽滤，滤上物以100mL70％乙醇溶液溶解，迅速抽滤，滤上物以200ml丙酮温热溶解，加等体积水，搅匀后静置，将析出物抽滤并用水充分洗涤至滤液呈中性，经干燥后得到二氢小檗碱粉末状晶体17.6g，产率为88.0％。
实施例213-己基小檗碱盐酸盐的合成取二氢小檗碱10.0g，以800mL80％乙醇溶液溶解，加200mL冰醋酸，正己醛30mL，摇匀后95℃水浴加热回流3小时，减压浓缩后加入2％盐酸溶液500mL，搅匀后静置，将析出物过滤并用水充分洗涤，得到13-己基小檗碱盐酸盐粗品；将13-己基小檗碱粗品溶于5～20％乙醇——0.5～2％盐酸混合溶液，以D-101(或AB-8或D-130或其它类似非极性或弱极性)大孔吸附树脂吸附，依次用盐酸溶液及20％、40％、60％、95％乙醇——1％盐酸溶液洗脱，收集60％乙醇——1％盐酸溶液的洗脱液，浓缩至无醇，冷却、静置，抽滤析出物，得到13-己基小檗碱盐酸盐晶体5.6g，纯度99.6％，产率为56.0％。
实施例313-己基小檗碱盐酸盐的抗病毒试验1.材料病毒甲型流感病毒A/PR/8/34(中国预防医科院病毒所)，制备成鸡胚尿囊液，血凝滴度640以上。
小鼠ICR鼠，13-16g，雌雄各半。
2.方法小鼠分组后按设定剂量给受试药，对照给生理盐水。每日一次，共给5日。首次给药后当天，各组用乙醚轻度麻醉，以病毒尿囊液(20倍半致死量)滴鼻感染小鼠。5天后介剖测定病变肺指数(下表1)。另批小鼠在感染和给药后于14天后作死亡率统计(下表2)。
3.结果表113-己基小檗碱盐酸盐(简称13-HB)对甲型流感病毒感染小鼠肺指数的影响(x±s)组别 剂量动物数 肺指数值 肺指数抑制率(mg/kg) (只)(g/10g) (％)正常对照组-- 10 0.095±0.008病毒对照组- 10 0.158±0.060利巴韦林组75 10 0.103±0.014*34.813-HBI组 2.0 10 0.137±0.047 13.313-HBII组 4.0 10 0.111±0.044*29.713-HBIII组8.0 10 0.101±0.042*36.1与病毒对照组比较*p＜0.05；肺指数＝小鼠肺重/小鼠体重。
表213-己基小檗碱盐酸盐(13-HB)对甲型流感病毒感染小鼠死亡的保护作用组别 动物数 剂量 死亡数 保护率 存活天数(只)(mg/kg) (只)(％) (x±s)正常对照组18 -- 0 100.0病毒对照组18 -15 16.7 7.33±3.25利巴韦林组18 75.0 7 61.1 11.33±3.39**13-HBI组 18 1.0 9 50.0 10.33±3.76*13-HBII组 18 2.0 8 55.5*10.67±3.80*13-HBIII组18 4.0 6 66.6*11.50±3.61**与病毒对照组比较*p＜0.05**p＜0.01表1和表2结果表明，13-己基小檗碱具有减轻甲型流感病毒感染小鼠肺部病变的作用，延长感毒小鼠存活天数降低死亡数。
实施例413-己基小檗碱盐酸盐的抗菌试验1.材料与方法菌株金黄色葡萄球菌(ATCC25925)、金黄色葡萄球菌(氨苄青霉素抗性+帕那沙星抗性)、金黄色葡萄球菌(氨苄青霉素抗性+帕那沙星抗性+头孢霉素抗性)、表皮葡萄球菌的肉汤培养物以及白色念球菌(ATCC10231)标准菌株的查氏培养基培养物。培养基M-H(Mueller-Hinton Agar)培养基，白念菌用查氏培养基。平板培养，用多点接种仪接种。37℃培养18小时。
2.结果1、13-己基小檗碱盐酸盐抗菌活性
①ATCC25925；②氨苄青霉素抗性+帕那沙星抗性；③氨苄青霉素抗性+帕那沙星抗性+头孢霉素抗性。
2、盐酸小檗碱抗菌活性
①②③菌种特性如前。
3、链霉素抗菌活性
①②③菌种特性如前。
以上1.2.3.表表明，13-己基小檗碱盐酸盐对金黄色葡萄球菌的标准株及抗药性株都有较强的抗菌作用，其作用比盐酸小檗碱增强8倍至32倍以上。13-己基小檗碱盐酸盐在16μg/ml以上浓度表现有抗白色念珠菌的作用，具有一般抗菌素所不多见的特色。
〔说明书附图
〕说明附图为本专利所制备13-己基小檗碱的碳13核磁共振图谱，数据及解析详见本说明书第3页〔3〕13C-NMR测定。
权利要求
1.一种具有高效抗病毒作用的小檗碱衍生物，其特征是在小檗碱13位具有正己基的取代基，其盐酸盐定名为13-己基小檗碱盐酸盐，化学式如图。
2.按权利要求1所提出的13-己基小檗碱盐酸盐，以不同种类的有机酸或无机酸取代其盐酸所形成的13-己基小檗碱有机酸盐或无机酸盐。
3.一种以小檗碱盐为原料，制备13-己基小檗碱盐的方法，方法的特征是先制备二氢小檗碱，然后与正己醛反应合成13-己基小檗碱盐。
4.按权利要求3制备方法中二氢小檗碱的制备，其特征是使用稀碱液中稳定化的硼氢化钠，室温下与小檗碱盐在水介质中反应的工艺。以盐酸小檗碱为原料进行制备，具体配比及步骤为将20.0g盐酸小檗碱溶解于400mL 0.3～5％氢氧化钠或氢氧化钾溶液。另取0.5～3.0g硼氢化钠溶于200mL0.3～5％氢氧化钠或氢氧化钾溶液，得到稳定化的硼氢化钠溶液。将经碱稳定化处理的硼氢化钠溶液滴入小檗碱溶液，室温下搅拌反应2～4小时。抽滤，将滤上物水洗至滤液呈中性，得到二氢小檗碱粗品；将二氢小檗碱粗品用10～40％乙醇溶液和60～95％乙醇溶液各精制一次，最后在50％丙酮中结晶，淋洗并干燥后得到二氢小檗碱的粉末状晶体。
5.按权利要求3中合成13-己基小檗碱盐的方法，其特征是采用正己醛与二氢小檗碱盐在醋酸乙醇液中反应，生成13-己基小檗碱盐。其盐酸盐制备的具体配比和步骤为取二氢小檗碱10.0g，以800mL50～100％乙醇溶液溶解，加150～300mL冰醋酸，正己醛10～200mL，摇匀后80～95℃水浴加热回流1～8小时，减压浓缩后加入1～10％盐酸溶液(v/v)500mL，搅匀后静置，将析出物过滤并用水充分洗涤，得到13-己基小檗碱盐酸盐粗品；将13-己基小檗碱盐酸盐粗品溶于5～20％乙醇——盐酸混合溶液，以非极性(或弱极性)大孔吸附树脂吸附，依次用盐酸溶液及不同浓度的乙醇——盐酸混合溶液洗脱，解吸液浓缩至无醇，静置后析出13-己基小檗碱盐酸盐晶体。
6.用专利要求1和专利要求2所述的13-己基小檗碱及其盐类，配加药用赋形剂或载体而制成的抗病毒药品或抗生素类药品，其特征是具有抗病毒作用和抗生素作用。
全文摘要
采用经正交优化的新型衍生制备方法，制得13－己基小檗碱盐。经动物试验和微生物试验发现，此品具有高效的抗病毒作用和抗菌作用。
文档编号C07D455/00GK1629160SQ20031011263
公开日2005年6月22日 申请日期2003年12月15日 优先权日2003年12月15日
发明者李耐三, 汪海峰 申请人:李耐三, 汪海峰