专利名称：育亨宾和小檗碱混合在制药中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及育亨宾和小檗碱混合制剂在制药中的应用。
背景技术：
尽管在过去50年中抗生素的应用和临床治疗措施取得了长足的进步，但是脓毒症患者的死亡率仍高达40％-60％，降低感染性多器官功能衰竭患者的死亡率是目前医学面临的一大难题。研究表明，45％-60％的脓毒症是由革兰氏阴性细菌感染引起，革兰氏阴性细菌细胞壁的主要成分内毒素或脂多糖(LPS)在这种感染引起的全身炎症反应综合症(SIRS)中发挥重要的作用。因此，寻找新的药物防治内毒素性多器官功能衰竭，对降低脓毒症患者的死亡率具有重大意义。
80年代以来，内毒素性休克的分子机制的研究已取得了许多新的进展，特别是LPS信号转导通路的深入研究，致炎细胞因子和细胞黏附分子的分子克隆、内皮素和一氧化氮介导作用的发现，导致了一系列阻断LPS信号通路和对抗各种单一介质的治疗制剂的产生，如抗LPS抗体、抗肿瘤坏死因子抗体、血小板活化因子拮抗剂、抗凝血酶III、一氧化氮合酶抑制剂、内皮素拮抗剂等。但迄今为止，多中心临床研究发现，还没有一种制剂能够显著降低死亡率。另一方面，肠源性内毒素血症是严重烧伤、创伤并发多器官功能障碍的重要致病因素，目前尚缺乏防治肠源性内毒素血症的有效药物。因此，如何防治内毒素性多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome，MODS)一直是医学面临的重要课题。
发明内容
为了克服以上现有医疗技术存在的不足，本发明提供了一种育亨宾(yohimbine)和小檗碱(berberine)混合制剂在制备防治内毒素性多器官功能障碍综合征的药物中的应用，并进一步提供该防治内毒素性多器官功能障碍综合征的药物。
该防治内毒素性多器官功能障碍综合征的药物的有效成分为育亨宾和小檗碱。
在该药物中，育亨宾与小檗碱的质量比为1～4∶40～60。
作为最佳方案，所述育亨宾与小檗碱的质量比为2∶50。
所述药物可制成各种口服制剂。
经过大量的实验证明本发明发现小檗碱(berberine)与育亨宾(yohimbine)混合制剂的联合应用能防治内毒素性多器官功能衰竭，明显提高内毒素血症小鼠的生存率，其效果明显强于小檗碱单独应用，提供了防治内毒素性多器官功能障碍的新制剂，可用于内毒素血症的治疗。临床上，除革兰氏阴性细菌感染可引起内毒素血症外，严重创伤、烧伤都能引起肠源性内毒素血症，此新制剂也可作为辅助药物，因此，小檗碱与育亨宾合剂用于防治内毒素性多器官功能障碍具有广泛的应用前景。
图1是实施例1中不同试验组在6天中的存活率对照图。
图2是实施例2中不同试验组在6天中的存活率对照图。
图3是实施例4中各组小鼠肝脏组织学照片。A对照组，BLPS组，C小檗碱与育亨宾合剂防治组，D小檗碱与育亨宾合剂组，LPS或生理盐水注射后12小时，取肝脏组织切片，H&E染色。
图4是实施例4中各组小鼠肾脏组织学照片。A对照组，BLPS组，C小檗碱与育亨宾合剂防治组，D小檗碱与育亨宾合剂组，LPS或生理盐水注射后12小时，取肾脏组织切片，H&E染色。
图5是实施例4中各组小鼠肺组织学照片。A对照组，BLPS组，C小檗碱与育亨宾合剂防治组，D小檗碱与育亨宾合剂组，LPS或生理盐水注射后12小时，取肺组织切片，H&E染色。
图6是实施例4中各组小鼠小肠组织学照片。A对照组，BLPS组，C小檗碱与育亨宾合剂防治组，D小檗碱与育亨宾合剂组，LPS或生理盐水注射后12小时，取小肠组织切片，H&E染色。
具体实施例方式
下面结合附图和实施例对本发明进一步说明。
实施例1观察小檗碱与育亨宾联合应用对内毒素血症小鼠死亡率的影响。
将健康雄性BALB/C小鼠(体重20-25g)随机分成6组分别做如下处理①对照组(control)，图1中用实心正方形表示提前3天，腹腔注射生理盐水(0.05ml/10g)，30分钟后用水灌胃(0.2ml/10g)，每天1次，最后1天灌胃后1小时，腹腔注射生理盐水；②LPS组(LPS)，图1中用空心三角形表示提前3天，腹腔注射生理盐水(0.05ml/10g)，30分钟后用水灌胃(0.2ml/10g)，每天1次，最后1天灌胃后1小时，腹腔注射内毒素(LPS，055B5，Sigma，20mg/kg)；③小檗碱防治组[Ber(50mg/kg)+LPS]，图1中用实心三角形表示提前3天，腹腔注射生理盐水(0.05ml/10g)，30分钟后用小檗碱灌胃(0.2ml/10g，50mg/kg)，每天1次，最后1天灌胃后1小时，腹腔注射内毒素(LPS，20mg/kg)；④50mg/kg小檗碱与2mg/kg育亨宾联合应用防治组[Y(2mg/kg)+Ber(50mg/kg)+LPS]，图1中用空心正方形表示提前3天，腹腔注射育亨宾(0.05ml/10g，2mg/kg)，30分钟后用小檗碱灌胃(0.2ml/10g，50mg/kg)，每天1次，最后1天灌胃后1小时，腹腔注射内毒素(LPS，20mg/kg)；⑤2mg/kg育亨宾防治组[Y(2mg/kg)+LPS]，图1中用空心圆圈表示提前3天，腹腔注射育亨宾(0.05ml/10g，2mg/kg)，30分钟后用水灌胃(0.2ml/10g)，每天1次，最后1天灌胃后1小时，腹腔注射内毒素(LPS，20mg/kg)；⑥50mg/kg小檗碱与2mg/kg育亨宾对照组[Y(2mg/kg)+Ber(50mg/kg)]，图1中未表示提前3天，腹腔注射育亨宾(0.05ml/10g，2mg/kg)，30分钟后用小檗碱灌胃(0.2ml/10g，50mg/kg)，每天1次，最后1天灌胃后1小时，腹腔注射生理盐水。
于内毒素注射后不同时间，观察各组小鼠的死亡率。
实验结果如图1所示腹腔注射LPS组，6天小鼠的死亡率为86％(空心三角形表示)；50mg/kg小檗碱灌胃3天(每天1次)能明显降低内毒素血症小鼠的死亡率，小檗碱防治组小鼠的死亡率为60％(实心三角形表示)；2mg/kg育亨宾防治组LPS攻击后6天，小鼠的死亡率为65％(空心小圆圈表示)；50mg/kg小檗碱与2mg/kg育亨宾联合应用防治组LPS攻击后6天小鼠的死亡率仅为25％(空心正方形表示)；单纯用50mg/kg小檗碱与2mg/kg育亨宾并没有引起小鼠死亡。表明50mg/kg小檗碱与2mg/kg育亨宾联合应用能明显提高内毒素血症小鼠的存活率，其效果明显强于小檗碱或育亨宾单独作用。(图1中n＝20-21.*P＜0.05vs LPS组，#P＜0.05vs小檗碱防治组或2mg/kg育亨宾防治组，图2同)实施例2不同剂量的育亨宾与50mg/kg小檗碱联合应用对内毒素血症小鼠死亡率的影响。
将健康雄性BALB/C小鼠(体重20-25g)随机分成5组分别做如下处理①对照组(control)，图2中用空心正方形表示提前3天，腹腔注射生理盐水(0.05ml/10g)，30分钟后用水灌胃(0.2ml/10g)，每天1次，最后1天灌胃后1小时，腹腔注射生理盐水；②LPS组(LPS)，图2中用空心三角形表示提前3天，腹腔注射生理盐水(0.05ml/10g)，30分钟后用水灌胃(0.2ml/10g)，每天1次，最后1天灌胃后1小时，腹腔注射内毒素(LPS，055B5，Sigma，20mg/kg)；③1mg/kg育亨宾与50mg/kg小檗碱联合应用防治组[Y(1mg/kg)+Ber(50mg/kg)+LPS]，图2中用空心小圆圈表示提前3天，腹腔注射育亨宾(0.05ml/10g，1mg/kg)，30分钟后用小檗碱灌胃(0.2ml/10g，50mg/kg)，每天1次，最后1天灌胃后1小时，腹腔注射内毒素(LPS，20mg/kg)；④2mg/kg育亨宾与50mg/kg小檗碱联合应用防治组[Y(2mg/kg)+Ber(50mg/kg)+LPS]，图2中用实心小圆圈表示提前3天，腹腔注射育亨宾(0.05ml/10g，2mg/kg)，30分钟后用小檗碱灌胃(0.2ml/10g，50mg/kg)，每天1次，最后1天灌胃后1小时，腹腔注射内毒素(LPS，20mg/kg)；⑤4mg/kg育亨宾与50mg/kg小檗碱联合应用防治组[Y(4mg/kg)+Ber(50mg/kg)+LPS]，图2中用实心三角形表示提前3天，腹腔注射育亨宾(0.05ml/10g，4mg/kg)，30分钟后用小檗碱灌胃(0.2ml/10g，50mg/kg)，每天1次，最后1天灌胃后1小时，腹腔注射内毒素(LPS，20mg/kg)；于内毒素注射后不同时间，观察各组小鼠的死亡率。
试验结果如图2所示50mg/kg小檗碱与2mg/kg育亨宾联合应用防治内毒素血症的作用明显优于50mg/kg小檗碱与1mg/kg育亨宾或50mg/kg小檗碱与4mg/kg育亨宾联合应用，50mg/kg小檗碱与2mg/kg育亨宾联合应用是防治小鼠内毒素血症的最佳剂量。
实施例32mg/kg育亨宾与50mg/kg小檗碱混合制剂(小檗碱与育亨宾合剂)灌胃对内毒素血症小鼠死亡率的影响。
将健康雄性BALB/C小鼠(体重20-25g)随机分成4组分别做如下处理①对照组(control)用水灌胃(0.2ml/10g)3天，每天1次，最后1天灌胃后1小时，腹腔注射生理盐水；②LPS组(LPS)用水灌胃(0.2ml/10g)3天，每天1次，最后1天灌胃后1小时，腹腔注射内毒素(LPS，055B5，Sigma，20mg/kg)；③2mg/kg育亨宾与50mg/kg小檗碱混合制剂3天防治组[小檗碱与育亨宾合剂(3)组]2mg/kg育亨宾与50mg/kg小檗碱混合制剂灌胃，每天1次，共3天，第3天灌胃后1小时，腹腔注射LPS(20mg/kg)；④2mg/kg育亨宾与50mg/kg小檗碱混合制剂1天防治组[小檗碱与育亨宾合剂(1)组]用水灌胃(0.2ml/10g)2天，每天1次，第3天用2mg/kg育亨宾与50mg/kg小檗碱混合制剂灌胃1次，灌胃后1小时，腹腔注射LPS(20mg/kg)；于内毒素注射后不同时间，观察各组小鼠的死亡率。
试验结果如表1所示，在上述实验的基础上，将2mg/kg育亨宾与50mg/kg小檗碱混合配成小檗碱与育亨宾合剂，用此合剂灌胃3天或1天，每天1次，观察该混合制剂口服对内毒素血症小鼠死亡率的影响。结果发现，LPS组，内毒素攻击后6天100％的小鼠死亡；小檗碱与育亨宾合剂灌胃3天能明显降低内毒素血症小鼠的死亡率，该组小鼠的死亡率仅为20％；即使是内毒素攻击前1小时给予小檗碱与育亨宾合剂灌胃一次也能明显降低内毒素血症小鼠的死亡率。
表1.育亨宾(Y，2mg/kg)与小檗碱(Ber，50mg/kg)混合制剂灌胃对内毒素血症Balb/C小鼠死亡率(％)的影响
*P＜0.01vs Control组，#P＜0.01vs LPS组。
实施例4小檗碱与育亨宾合剂灌胃对内毒素血症小鼠器官组织结构和功能的影响。
将健康雄性BALB/C小鼠(体重20-25g)随机分成4组分别做如下处理①对照组(control)用水灌胃(0.2ml/10g)3天，每天1次，最后1天灌胃后1小时，腹腔注射生理盐水；②LPS组(LPS)用水灌胃(0.2ml/10g)3天，每天1次，最后1天灌胃后1小时，腹腔注射内毒素(LPS，055B5，Sigma，20mg/kg)；③小檗碱与育亨宾合剂防治组2mg/kg育亨宾与50mg/kg小檗碱混合制剂灌胃，每天1次，共3天，第3天灌胃后1小时，腹腔注射LPS(20mg/kg)；④小檗碱与育亨宾合剂组2mg/kg育亨宾与50mg/kg小檗碱混合制剂灌胃，每天1次，共3天，第3天灌胃后1小时，腹腔注射生理盐水。
于内毒素注射后12小时，测定各组小鼠肝、肾功能，并在光学显微镜下观察肺、肠、肝、肾组织结构的变化。
试验结果如表2所示，LPS攻击后12小时，小鼠血尿素氮含量和血丙氨酸氨基转移酶的活性明显高于对照组，小檗碱与育亨宾合剂防治组小鼠血尿素氮含量和血丙氨酸氨基转移酶的活性明显低于LPS组，单独给予小檗碱与育亨宾合剂灌胃组，小鼠血尿素氮含量和血丙氨酸氨基转移酶的活性与对照组比较没有明显差别。这些结果说明，小檗碱与育亨宾合剂灌胃能显著减轻内毒素引起的肝、肾功能损伤；单独给予该剂量的小檗碱与育亨宾合剂灌胃并不会引起小鼠肝、肾功能损伤。
如图3～6所示，组织学检查发现，LPS注射后12h，肝细胞出现变性肿胀、部分细胞发生凋亡；肾脏间质出血、肾小管上皮细胞发生水变性；小鼠肺泡间隔明显增厚，有大量的炎症细胞浸润，可见肺血管淤血、肺出血及肺气肿；肠绒毛充血水肿、坏死，有炎症细胞浸润，肠腔可见大量炎症细胞。小檗碱与育亨宾合剂灌胃防治组，LPS注射后12h，上述各器官病理变化明显减轻。单纯用小檗碱与育亨宾合剂灌胃，并没有引起肝、肾、肺、肠发生明显病理改变。
表2.小檗碱与育亨宾合剂灌胃对内毒素血症小鼠肝、肾功能的影响
*P＜0.01vs对照组，#P＜0.01vs LPS组。
权利要求
1.育亨宾(yohimbine)和小檗碱(berberine)混合在制备防治内毒素性多器官功能障碍综合征的药物中的应用。
2.一种防治内毒素性多器官功能障碍综合征的药物，其特征在于有效成分为育亨宾和小檗碱。
3.根据权利要求2所述的药物，其特征在于所述药物中育亨宾与小檗碱的质量比为1～4∶40～60。
4.根据权利要求3所述的药物，其特征在于所述药物中育亨宾与小檗碱的最佳质量比为2∶50。
5.根据权利要求2、3或4所述的药物，其特征在于所述药物为口服制剂。
全文摘要
本发明提供育亨宾和小檗碱混合在制备防治内毒素性多器官功能障碍综合征的药物中的应用。育亨宾和小檗碱混合能防治内毒素性多器官功能衰竭，明显提高内毒素血症患者的生存率，其效果明显强于小檗碱单独应用，提供了防治内毒素性多器官功能障碍的新制剂，可用于内毒素血症的治疗。临床上，除革兰氏阴性细菌感染可引起内毒素血症外，严重创伤、烧伤都能引起肠源性内毒素血症，此新制剂也可作为辅助药物，因此，小檗碱与育亨宾合剂用于防治内毒素性多器官功能障碍具有广泛的应用前景。
文档编号A61P31/04GK1965831SQ20061012339
公开日2007年5月23日 申请日期2006年11月7日 优先权日2006年11月7日
发明者陆大祥, 王华东, 张昊晴, 戚仁斌 申请人:暨南大学