9-O-β-D-小檗红碱葡萄糖醛酸苷在制备降糖药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及小築红碱II相代谢产物9-O-0-D-小築红碱葡萄糖醒酸巧(BRBG)降糖 活性和潜在应用价值，有望通过进一步研究成为一类创新药物，还设及生物样本中该化合 物的分离、纯化和制备。
【背景技术】
[0002] 小築碱是从传统中药黄连中分离的一种具有多重药理作用的生物碱。作为其主要 的代谢产物之一，小築红碱（即9-去甲基小築碱)近些年来被发现具有多重药理活性，前期 研究发现具有比小築碱更强的体内降血糖作用。本发明中的BRBG为小築红碱9-0-位葡萄糖 醒酸取代产物，是小築红碱体内最主要的代谢产物，与小築红碱体内发挥药效密切相关。研 究发现其可W促进肝脏细胞葡萄糖的消耗和利用，促进葡萄糖类似物的摄取，促进糖原合 成。但到目前为止，国内外尚未见有关小築红碱葡萄糖醒酸巧药理活性的研究报告。
【发明内容】
[0003] 本发明所用的BRBG采用常规的分离纯化方法从生物样本中制得。本实验室采用 LC-MS-PDA检测分析，其纯度达95%，经质谱(MS)法和核磁共振(Ih-NMR)法分析鉴定，本研 究所用的BRBG产品化学结构正确，即9-O-0-D-小築红碱葡萄糖醒酸巧纯度和化学结构符合 展开生物学活性和药理作用的研究要求。
[0004] 发明人通过对小築红碱体内代谢产物进行研究，发现小築红碱体内主要代谢产物 之一 BRBG具有良好的降糖作用，有望经过进一步研究用于临床降血糖和糖尿病治疗。
[0005] 本发明的有益效果
[0006] 本发明提供了小築红碱体内活性代谢产物9-O-0-D-小築红碱葡萄糖醒酸巧具有 良好的降糖药效证据，为制备新型降糖药物提供更好的选择。
【附图说明】
[0007] 图1为口-TOF测定的MSl和MS2特征离子碎片。
[000引图2为BRBG促进k02肝细胞葡萄糖消耗。其中，Blank为空白对照组;BBR为阳性对 照组(小築碱50iiM)，BRB和服BG分别为小築红碱和9-O-0-D-小築红碱葡萄糖醒酸巧给药组 (浓度分别为5，20,50咖）。冲<0.05，*冲<0.01，**冲<0.0 Olvs空白对照组。
[0009] 图3为BRBG促进k02肝细胞摄取巧光标记葡萄糖类似物(2-N抓G) Control为未给 药的空白对照组，BRB和BRBG分别为小築红碱和9-O-0-D-小築红碱葡萄糖醒酸巧给药组(浓 度为50咖）。
[0010] 图4为9-O-0-D-小築红碱葡萄糖醒酸巧促进肝细胞糖原生成。其中，Blank为空白 对照组;BBR为阳性对照组(小築碱50iiM)，BRB和BRBG分别为小築红碱和9-0-e-D-小築红碱 葡萄糖醒酸巧给药组(50iiM)。*冲<0.01，林冲<0.001VS空白对照组。
【具体实施方式】
[0011] 本发明通过下面的实施例进行详细的解释，但并不意味着本发明仅限于此。
[0012] 实施例1. 9-O-0-D-小築红碱葡萄糖醒酸巧分离制备和结构鉴定。
[0013] 方法:取小築红碱灌胃给药后的生物样品（尿液、胆汁等），沉淀蛋白并过滤，旋蒸 浓缩，液相制备柱分离纯化。目标产物冻干处理后，LC-MS-PDA分析纯度，IT-TOF分析碎片特 征，DMS0-d6溶解Ih NMR 500MHz核磁共振波谱仪测定结构。
[0014] 结果：其口-T0F碎片特征如图l，MSl[M + H]+m/z 498.1379，推测结构为 [C2甜24N010] +，MS2[M+H]+m/z 322.1070,推测结构为[C19H16N04] +。
[0015] 其核磁共振氨谱结果如下：
[0016] iH-NMR，7.75(lH，s，H_l)，7.08(lH，s，H_4)，3.20(2H，o，H_5)，5.02-5.05(lH，m，H_ 6),4.87-4.91(lH，m，H_6),10.09(1H，S，H_8)，8.16-8.18(lH，d，8.5甜Z，H_11),8.00-8.02 (lH，d，9.10Hz，H_12)，8.87(lH，s，H_13)，6.17(2H，s，2,3-0CH20)，4.03(3H，s，10-0CH3)， 4.89-4.91(IH，d，7.55Hz,GlcUA-I).
[0017] 解析目标化合物iH-醒R谱共振峰归属，结合离子碎片推测其结构为9-0-e-D-小築 红碱葡萄糖醒酸巧，结构式如式I。
[0019] 实施例2. 9-O-0-D-小築红碱葡萄糖醒酸巧促进肝细胞葡萄糖消耗。
[0020] 方法:取心02细胞株，用含10%胎牛血清DMEM培养基培养至对数生长期，传代接种 于96孔板中，每孔含2(K)化培养基，培养至一定密度后，弃除初始培养基加入不同含药无血 清培养基，分别为：空白对照组、SOiiM小築碱组为阳性对照组、SiiM小築红碱组、20yM小築红 碱组、50測小築红碱组、5測小築红碱葡萄糖醒酸巧组、20測小築红碱葡萄糖醒酸巧组、SOiiM 小築红碱葡萄糖醒酸巧组，每组N=5。给药后解育2地，测培养基上清葡萄糖含量，并计算培 养基中葡萄糖的消耗量。
[002U 结果：测定结果表明，小築红碱（BRB，5iiM，P<0.05;20iiM，50iiM，P<0.01，vs 81日1110和小築红碱葡萄糖醒酸巧（81^6，扣]\1，20咖，？<0.05;50咖，？<0.001，￥8 81日111〇都 能够显著的促进心〇2肝细胞葡萄糖消耗。显示作为小築红碱的代谢产物，9-O-0-D-小築红 碱葡萄糖醒酸巧具有很好的体外降糖药效，结果如图2所示。
[0022] 实施例3. 9-0-e-D-小築红碱葡萄糖醒酸巧促进肝细胞对巧光标记的葡萄糖类似 物的摄取。
[0023] 方法:取心02细胞株，用含10 %胎牛血清DMEM培养基培养至对数生长期，传代接种 于巧光板中，待细胞生长至一定密度后，弃除初始培养基加入不同含药无血清培养基，分别 为：空白对照组、小築红碱组(50iiM)、小築红碱葡萄糖醒酸巧组(50iiM)。给药后解育24h，弃 含药培养基，含IOOiiM巧光标记的葡萄糖类似物（2-NBDG，2-(N-(7-Nitrobenz-2-oxa-l，3-diazol-4-yl)Amino)-2-Deo巧glucose)的无血清培养基解育60min后，PBS润洗S遍。于巧 光倒置纤维镜下观察各组巧光强度差异。
[0024] 结果:测定结果表明，小築红碱和9-O-0-D-小築红碱葡萄糖醒酸巧（50咖)可W促 进肝细胞心〇2对巧光标记的葡萄糖类似物摄取，提示9-O-0-D-小築红碱葡萄糖醒酸巧具有 很好的体外降糖药效，结果如图3所示。
[0025] 实施例4. 9-O-0-D-小築红碱葡萄糖醒酸巧促进肝细胞糖原生成。
[00%]方法:取心02细胞株，用含10 %胎牛血清DMEM培养基培养至对数生长期，传代接种 于6孔板中。待细胞生长至一定密度后，弃除初始培养基加入不同含药无血清培养基，分别 为:空白对照组、小築碱组(50山〇、小築红碱组(50山〇、小築红碱葡萄糖醒酸巧组巧OiiM)。给 药后解育24h，测定细胞中糖原含量。
[0027] 结果:测定结果表明，小築红碱和9-O-0-D-小築红碱葡萄糖醒酸巧（50咖)可W促 进肝脏细胞糖原生成，结果如图4所示。
【主权项】
1. 如式I所示的9-0-β-0-小築红碱葡萄糖醒酸巧在制备治疗糖尿病、高血糖和糖代谢 素乱药物中的应用；式I;分子式：[C2甜24Ν010] +;分子量:498.14。2. 式I所示9-0-β-0-小築红碱葡萄糖醒酸巧与药学上可接受的酸结合所形成的盐，所 述药学上可接受的酸为巧樣酸、马来酸、班巧酸、富马酸、苹果酸、氨漠酸、硝酸、酒石酸、草 酸、较酸、甲横酸、泛酸、盐酸、硫酸、亚硫酸、焦亚硫酸、氨硫酸、憐酸、二氨憐酸、亚硫酸、丙 酬酸、尼克酸、乳酸、乳清酸、抗坏血酸、叶酸、甲酸、乙酸、丙酸、下酸、戊酸、甘油酸、径乙酸、 牛横酸、甘氨酸、精氨酸、谷氨酸、赖氨酸。3. 根据权利要求2所述的盐，其特征在于，还含有一种或多种其它降血糖活性成分。4. 一种降血糖药物的组合物，由式I所示的9-0-β-0-小築红碱葡萄糖醒酸巧或权利要 求2所述的盐与一种或多种药学上可接受的载体制成。5. 根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于:还含有一种或多种其它降血糖活性 成分。6. 根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于:在药物组合物中，式I所示的9-0-β-D-小築红碱葡萄糖醒酸巧的纯度大于95%。7. 根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于：组合物被制成临床上可接受的剂 型，包括口服W及胃肠外给药形式的剂型。8. 根据权利要求7所述的药物组合物，其特征在于，所述剂型为片剂、胶囊、口服液、糖 浆、颗粒、滴丸、日崩片、缓释片、贴剂、微丸、微囊、脂质体、微球、缓控释制剂、控释制剂、水 针、冻干粉针、无菌粉针或输液。9. 根据权利要求7或8所述的药物组合物，其特征在于:所述药学上可接受的载体选自 填充剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、溶剂、助溶剂、抗氧剂、渗透压调节剂、抑调节剂。
【专利摘要】本发明提供一种具有降糖作用的化合物，9-O-β-D-小檗红碱葡萄糖醛酸苷，其为具有多重药理活性的小檗红碱(又名9-去甲基小檗碱)体内最主要的代谢产物。通过细胞实验证明，给予9-O-β-D-小檗红碱葡萄糖醛酸苷后，肝细胞对于葡萄糖的消耗和摄取量以及糖原合成量增加。该发现可能导致一种新型降糖药物的发现，具有潜在的对于临床治疗糖尿病等相关疾病的应用价值。
【IPC分类】A61P3/08, A61P3/10, A61K31/706
【公开号】CN105535010
【申请号】CN201610118576
【发明人】王广基, 阿基业, 杨娜, 赵玉清, 孙润彬, 何骏, 冯思琦, 黄京秋
【申请人】中国药科大学
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2016年3月2日