一种盐酸阿米洛利的药物组合物及其医药用图
【专利摘要】本发明公开了一种盐酸阿米洛利的药物组合物及其医药用途，本发明提供的盐酸阿米洛利的药物组合物中含有盐酸阿米洛利和一种从石韦的干燥叶中分离得到的结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)，盐酸阿米洛利、化合物(Ⅰ)单独作用时，可以防治缺血性心律失常；盐酸阿米洛利和化合物(Ⅰ)联合作用时，对缺血性心律失常的治疗效果更为明显，可以开发成防治缺血性心律失常的药物，与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【专利说明】
一种盐酸阿米洛利的药物组合物及其医药用途
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，涉及盐酸阿米洛利的新用途，具体涉及盐酸阿米洛利 的药物组合物及其在缺血性心律失常中的应用。
【背景技术】
[0002] 盐酸阿米洛利为较强的保钾利尿药，其作用部位为远曲小管和皮质的集合管。降 低该部位氢、钾分泌和钠、钾的交换，因而保钾利尿。常和氢氯噻嗪、呋塞米合用，因不经肝 代谢，肝功能损害者仍可应用。
[0003] 缺血性心律失常的发生是由于心肌细胞缺血期间，ATP减少，心肌上ATP敏感钾通 道激活，钾外流增加，细胞膜向超极化发展，心肌动作电位被抑制，兴奋传导中断或减慢，导 致细胞脱耦联而造成的。缺血性心律失常的治疗不仅要抗心律失常，更重要的是要改善心 肌的缺血缺氧状态保证心肌细胞得到充足的氧供、血供，以消除心律失常发生的诱因。
[0004] 迄今为止，尚未见盐酸阿米洛利及其药物组合物与缺血性心律失常的相关性报 道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种盐酸阿米洛利的药物组合物，该药物组合物中含有盐 酸阿米洛利和一种天然产物，盐酸阿米洛利和该天然产物可以协同治疗缺血性心律失常。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] 一种具有下述结构式的化合物（I)，
[0008]
[0009] -种盐酸阿米洛利的药物组合物，包括盐酸阿米洛利、如权利要求1所述的化合物 (I)和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。
[0010] 进一步地，药学上可以接受的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、 崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。
[0011] 进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、 膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
[0012] 上述化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将石韦的干燥叶粉碎，用70~ 80%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正 丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中正丁醇 萃取物用大孔树脂除杂，先用15%乙醇洗脱6个柱体积，再用70%乙醇洗脱10个柱体积，收 集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙醇洗脱浓缩物用正 相硅胶分离，依次用体积比为80:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组 分；（d)步骤(c)中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1、15:1和2:1的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离， 用体积百分浓度为72 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓 缩得到纯的化合物(I)。
[0013] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)用75%乙醇热回流提取，合并提取 液。
[0014] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，所述大孔树脂为D101型大孔吸附树脂。
[0015]进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯进行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0016] 上述化合物(I)在制备治疗缺血性心律失常的药物中的应用。
[0017] 上述盐酸阿米洛利的药物组合物在制备治疗缺血性心律失常的药物中的应用。
[0018] 本发明的优点：
[0019] 本发明提供的盐酸阿米洛利的药物组合物中含有盐酸阿米洛利和一种从石韦的 干燥叶中分离得到的结构新颖的天然产物，盐酸阿米洛利和该天然产物单独作用时，对缺 血性心律失常具有治疗作用;二者联合作用时，对缺血性心律失常的治疗效果进一步提高， 可以开发成治疗缺血性心律失常的药物。本发明与现有技术相比具有突出的实质性特点和 显著的进步。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0021 ]实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0022] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0023]分离方法：（a)将石韦的干燥叶（2kg)粉碎，用75 %乙醇热回流提取(20L X 3次），合 并提取液，浓缩至无醇味(4L)，依次用石油醚(4L X 3次）、乙酸乙酯(4L X 3次)和水饱和的正 丁醇（4LX 3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤 (a)中正丁醇萃取物用D101型大孔树脂除杂，先用15%乙醇洗脱6个柱体积，再用70%乙醇 洗脱10个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙 醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1 (8个柱体积）、30:1 (8个柱体积）、15:1 (8个柱体积)和5:1(10个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组 分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1(8个柱体积）、15:1(10个柱体积)和2:1(5 个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键 合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为72 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱体积洗 脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物（I) (290mg，HPLC归一化纯度大于98% )。
[0024] 结构确证:黄色粉末;册431-1^显示[1+似] +为111/2 447.2912，结合核磁特征可得 分子式为C28H4Q〇3，不饱和度为9。核磁共振氢谱数据δΗ(ΡΡπι，DMS〇-d 6，600MHz):H-1 (1 · 48， m)，H-l(1.91，m)，H-2(2.29，m)，H-3(2.32，m)，H-4(2.20，m)，H-4(2.45，m)，H-6(5.56，d，J = 9.8)，H-7(6.17，d，J=9.8)，H-ll(1.96，m)，H-ll(2.35，m)，H-12(1.71，m)，H-12(1.87，m)， H-15(2.25，m)，H-15(2.32，m)，H-16(1.38，m，2H)，H-17(1.25，m)，H-18(0.98，s)，H-19 (1.27，s)，H-20(2.06，m)，H-21(0.98，d，J = 6.5)，H-22(5. ll，dd，J=15.3,7.7)，H-23 (5.19，dd，J = 15.3,7.0)，H-24(1.81，m)，H-25(1.42，m)，H-26(0.79，d，J = 6.5)，H-27 (0.80，(1，了 = 6.5)，!1-28(0.88，(1，了 = 6.7);核磁共振碳谱数据6。（卯111，0130-(16，1501〇^) :31.4(CH2d-C)，37.3(CH2,2-C)，210.6(C，3-C)，47.7(CH2,4-C)，84.5(C，5-C)，130.4(CH，6- C)，124.7(CH，7-C)，126.6(C，8-C)，103.5(C，9-C)，82.3(C，10-C)，31.1(CH2，11-C)，36.2 (CH2，12-C)，43.8(C，13-C)，150.7(C，14-C)，24.6(CH2，15-C)，27.5(CH2，16-C)，56.1(CH， 17-C)，17.3(CH3，18-C)，19.6(CH3，19-C)，38.8(CH，20-C)，20.7(CH 3,21-C)，134.7(CH，22- C)，132.0(CH，23-C)，42.6(CH，24-C)，32.5(CH，25-C)，19.3(CH3,26-C)，19.9(CH 3,27-C)， 17.1(013,28-〇。1!1-匪1?谱显示六个甲基信号[3!10.79((1，了 = 6.5泡，]\^-26)，0.80((1，了 = 6.5Hz，Me-27)，0.88(d，J = 6.7Hz，Me-28)，0.98(s，Me-18)，0.98(d，J = 6.5Hz，Me-21)，1.27 (8，]\^-19)]，四个烯烃质子[3!15.11((1(1，了=15.3,7.7抱，!1-22)，5.19((1(1，了=15.3,7.0抱， H-23)，5.56(d，J = 9.8Hz，H-6)，6.17(d，J = 9.8Hz，H-7)L13C-NMR 谱显示 28 个共振碳信号， 包括六个甲基，七个亚甲基，八个次甲基[四个烯属次甲基SC124.7(C-7)，130.4(C-6)， 132.0((：-23)，134.7((：-22)]，以及七个季碳[两个烯属季碳5(：126.6((：-8)和150.7((：-14)， 一个羰基碳 SC210.6(C-3)，三个含氧季碳 SC82.3(C-10)，84.5(C-5WP103.5(C-9)]<X-9(S C103.5)低场的化学位移表明C-9为缩醛碳。HMBC谱中H-6与C-5和C-10，Me-19与C-5和C-10， !1-7与(：-5、(：-8、(：-9和(：-14，!12-12与(：-9的相关性表明6,8-二氧杂双环[3.2.1]辛-2-烯环和 固醇的 A和 C环相连。N0ESY 谱中 Μθ-19(δΗ1.27)与 Η-4β(δΗ2.45)和 Η-11β(δΗ2.35)之间的交 叉峰表明Α环和二氧戊环烷环为顺式稠合，并且二氧戊环的C-0键为α导向。此外，Η-22和Η- 23之间较大的耦合常数（15.3Hz)表明C-22和C-23之间的双键为Ε构型。综合氢谱、碳谱、 HMBC谱和N0ESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如下所示，立体 构型进一步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致。该化合物化学式及碳原子编号如 下：
[0025]
[0026] 实施例2:药理作用
[0027] 1、材料与方法 [0028] 1.1动物
[0029] 健康Wistar雄性大鼠，体重230~250g;豚鼠，体重280~300g，均由哈尔滨医科大 学实验动物中心提供。
[0030] 1.2试剂与样品
[0031 ]盐酸阿米洛利购自中国药品生物制品检定所。化合物（I)自制，制备方法见实施例 1。阿托品、异丙肾上腺素、硝基四氮唑红购自Sigma公司；2%盐酸利多卡因注射液购自天津 金耀氨基酸有限公司，其它试剂均为市售分析纯。
[0032] 1.3仪器
[0033] JH-2肌张力换能器(北京航天医学工程研究所）；BL-420E生物机能实验系统(成都 泰盟科技有限公司）；数控恒温浴锅(上海申胜生物技术有限公司）。
[0034] 1.4大鼠分组及模型制备
[0035] 取Wistar健康雄性大鼠60只，随机分为6组，每组10只。即假手术组，模型对照组 (给等容量的生理盐水）、阳性对照组(利多卡因注射液）、盐酸阿米洛利组(30mg · kg^1)、化 合物（I)组(30mg · kg<)、盐酸阿米洛利与化合物（I)组合物组【15mg · kg<盐酸阿米洛利+ 15mg · 1?1化合物（I )】、阳性药对照组(利多卡因注射液）。将大鼠腹腔注射2 %戊巴比妥钠 麻醉后，剪开心包膜，挤出心脏，将1号丝线穿过冠状动脉前降支下，然后将心脏复位，稳定 5min后，尾静脉注射药物。15min后拉紧丝线，造成冠状动脉心肌缺血，冠状动脉阻断lOmin 后，记录心电图（ECG)。假手术组大鼠仅开胸，不施行冠脉结扎。观察30min内所出现的心律 失常类型；早搏(VPB)出现的次数和首次出现的时间。上述实验后，将实验用大鼠按照硝基 四氮唑法测定梗死面积。并与对照组进行比较。
[0036] 梗死重量百分率（％ )=心肌梗死区重量X 100%/心肌总重量 [0037] 1.5对右心房的影响
[0038]浴槽中药物，每隔5min加药一次，每次加药前，记录上一次标本收缩情况，计算收 缩幅度增加率，观察药物对大鼠离体右心房收缩力的影响。
[0039] 1.6统计学方法
[0040]实验数据用均数土标准差(X土S)表示，应用SPSS18.0版统计软件进行单因素方差 分析和t检验，以Ρ<0.05为差异有统计学意义。
[0041 ] 2、实验结果
[0042] 2.1对大鼠心肌梗死模型心电图的影响
[0043]尾静脉注射药物组与生理盐水比较，早搏（VPB)的首发时间各组均有推迟（Ρ〈 0.05); Vro的发生频数(30、15、7.5mg)各组都减少(Ρ〈0.05);与模型对照组比较，盐酸阿米 洛利与化合物（I)组合物组和阳性药对照组早搏频数明显减少(Ρ<〇.01)，早搏首次发生时 间明显延长(Ρ<〇.01);与模型对照组比较，盐酸阿米洛利组、化合物（I)组早搏频数减少(Ρ <0.05)，早搏首次发生时间明显延长(Ρ<0.05)。结果见表1。
[0044] 2.2对大鼠心肌梗死面积的影响
[0045] 尾静脉注射药物组与模型对照组比较，大鼠心肌梗死面积缩小(Ρ〈0.05)。与模型 对照组比较，盐酸阿米洛利与化合物（I)组合物组和阳性对照组心肌梗死面积显著缩小(Ρ <〇.〇1);与模型对照组比较，盐酸阿米洛利组、化合物（I)组心肌梗死面积缩小(Ρ<〇.05)。 结果见表1。
[0046] 2.3对大鼠右心房收缩性的影响
[0047]以右心房收缩幅度增加率（％ )计算，药物可使大鼠离体右心房收缩力呈现增强趋 势即正性肌力，与Κ-Η液溶剂对照组比较，存在显著性差异(Ρ〈0.05)。与Κ-Η液溶剂对照组比 较，盐酸阿米洛利与化合物（I)组合物组和阳性对照组大鼠离体右心房收缩频率明显增加 (Ρ<0.01);与模型对照组比较，盐酸阿米洛利组、化合物（I)组大鼠离体右心房收缩频率增 加(Ρ<0.05)。结果见表1。
[0048] 表1对冠脉结扎大鼠心电图、心肌梗死面积及右心房收缩性的影响
[0049]
[0050] 上述结果表明，盐酸阿米洛利、化合物（I)单独作用时，可以防治缺血性心律失常； 盐酸阿米洛利和化合物(I)联合作用时，对缺血性心律失常的治疗效果更为明显，可以开发 成防治缺血性心律失常的药物。
[0051] 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的化合物（I)，2. -种盐酸阿米洛利的药物组合物，其特征在于:包括盐酸阿米洛利、如权利要求1所 述的化合物(I)和药学上可W接受的载体，制备成需要的剂型。3. 根据权利要求2所述的盐酸阿米洛利的药物组合物，其特征在于:药学上可W接受的 载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附 载体或润滑剂。4. 根据权利要求2所述的盐酸阿米洛利的药物组合物，其特征在于：所述剂型包括片 剂、胶囊剂、日服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注 射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。5. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含W下操作步骤：（a)将石 韦的干燥叶粉碎，用70~80%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油酸、 乙酸乙醋和水饱和的正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取 物；（b)步骤(a)中正下醇萃取物用大孔树脂除杂，先用15%乙醇洗脱6个柱体积，再用70% 乙醇洗脱10个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（C)步骤(b)中 70%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为80:l、30:l、15:l和5:l的二氯甲烧- 甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分3用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为 25:1、15:1和2:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基 硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为72 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~14个柱 体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)。6. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)用75%乙醇热回 流提取，合并提取液。7. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为D101型 大孔吸附树脂。8. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)中用二氯甲烧代 替乙酸乙醋进行萃取，得到二氯甲烧萃取物。9. 权利要求1所述的化合物（I)在制备治疗缺血性屯、律失常的药物中的应用。10. 权利要求2~4任一所述的盐酸阿米洛利的药物组合物在制备治疗缺血性屯、律失常 的药物中的应用。
【文档编号】A61K31/357GK105837593SQ201610261884
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2016年4月23日
【发明人】高满珍
【申请人】高满珍