多西紫杉醇、小檗胺双载药壳聚糖纳米粒及其制备方法
【专利摘要】本发明属于药物制剂技术领域，具体涉及一种多西紫杉醇、小檗胺双载药壳聚糖纳米粒及其制备方法。本发明所述纳米粒是先将多西紫杉醇与烟酰胺制备成共晶，再与小檗胺同时包封于壳聚糖纳米粒。本发明提供的口服纳米粒是利用烟酰胺与主药形成共晶，提高多西紫杉醇的水溶性；利用小檗胺的增敏作用，促进肿瘤细胞的凋亡；利用壳聚糖增加药物体内滞留时间，降低药物体内清除率；本发明将三者联合应用，并制备成纳米粒，口服后经胃肠道吸收，具有显著提高紫杉醇的口服生物利用度的作用。本发明的制备纳米粒方法简单，生产成本低，易于规模化生产。
【专利说明】
多西紫杉醇、小檗胺双载药壳聚糖纳米粒及其制备方法
技术领域
[0001 ]本发明属于药物制剂技术领域，具体涉及一种多西紫杉醇、小檗胺双载药壳聚糖 纳米粒及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 多西紫杉醇是第二代紫衫烷化合物，是最有效的广谱抗癌药物之一。目前，多西紫 杉醇上市剂型为注射剂Taxotere和Abraxane，由于多西紫杉醇水中溶解度极低，Taxotere 中含有吐温-80作为助溶剂，临床使用前又加入了大量的乙醇增溶，这使Taxotere存在严重 的毒性和致敏性。相比注射剂，口服制剂具有很多优点，比如患者顺应性强，不需要专门的 医护人员注射给药，患者用药后降低注射给药C max过大引起的毒副作用等，因此，多西紫杉 醇口服制剂具有更广阔的应用前景。
[0003] 将多西紫杉醇制备成口服制剂需要克服诸多障碍，如多西紫杉醇溶解度很低(〈10 yg/mL)，吸收差，且多西紫杉醇是P-gp外排蛋白和CYP3A代谢酶的底物，已吸收入细胞的多 西紫杉醇也容易被P-gp外排蛋白识别或肝脏中的CYP3A代谢排出体外。根据生物药剂学分 类系统对低溶解度类药物的指导，可以采取下列方法提高多西紫杉醇的生物利用度：（1)制 成共晶提高水溶性；（2)采用纳米技术增加药物的表面积；（3)采用壳聚糖增加药物在胃肠 道内的停滞时间。此外，利用小檗胺的增敏作用，促进肿瘤细胞的凋亡。
[0004] 共晶，即活性药物成分与共晶形成物，以氢键或其他非共价键、并以固定的化学计 量比相连而结合在同一晶格中，从而形成共晶物。烟酰胺是一种水溶性的维生素 B，易被身 体吸收，能提供较多的氢键。
[0005] 小檗胺，是一种钙调蛋白拮抗剂，可调控肿瘤细胞的钙调蛋白，影响肿瘤细胞内游 离钙离子浓度，从而对肿瘤细胞的增殖有一定的抑制作用;有研究报道小檗胺可以逆转肿 瘤的多药耐药性，作用机理可能也与小檗胺调节细胞内钙离子浓度和抑制耐药基因的表达 有关;小檗胺还对肿瘤细胞具有明显的增敏作用，显著提高肿瘤细胞对抗癌药物的敏感性。
[0006] 纳米粒作为抗肿瘤药物的载体，更是得到了药学研究领域巨大的关注。目前已有 关于壳聚糖纳米粒作为多西紫杉醇载体的研究报道，其在控制多西紫杉醇的释放，降低毒 副作用，提高靶向性，提高药物溶解度、稳定性和生物利用度等方面都具有较大的优势和特 点。
【发明内容】
[0007] 针对现有技术中的缺陷，本发明的目的是提供一种多西紫杉醇、小檗胺双载药壳 聚糖纳米粒及其制备方法，特别是为了将多西紫杉醇的给药途径从注射给药转变为口服给 药，提供一种多西紫杉醇小檗胺双载药壳聚糖纳米粒及其制备方法。本发明提供的多西紫 杉醇、小檗胺双载药壳聚糖纳米粒由壳聚糖、三聚磷酸钠、多西紫杉醇-烟酰胺共晶和小檗 胺组成，其结构为多西紫杉醇-烟酰胺共晶和小檗胺两种药物包封于壳聚糖纳米粒中，多西 紫杉醇与烟酰胺以共晶的形式包载于纳米粒中。
[0008] 本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
[0009] 第一方面，本发明提供一种多西紫杉醇、小檗胺双载药壳聚糖纳米粒，包括如下质 量百分比的各原料组分： 壳聚糖 73. 5~79. 6%, 三聚磷酸钠 19. 6~24. 9%，
[0010] 多西紫杉醇-烟酰胺共晶 0. 20~0/74%， 小檗胺 0.25~1.32%;
[0011] 优选地，所述壳聚糖的分子量为50~lOOKDa，脱乙酰度大于95%。当壳聚糖的分子 量过小不利于纳米粒的颗粒的形成和载药，当分子量过大，其溶解能力变差，且纳米粒的粒 径增大。
[0012] 本发明提供的纳米粒平均粒径为150~300nm。
[0013] 第二方面，本发明提供一种所述多西紫杉醇、小檗胺双载药壳聚糖纳米粒的制备 方法，包括以下步骤：
[0014] 将壳聚糖、小檗胺溶解于醋酸溶液中，制备混合溶液I;
[0015] 将多西紫杉醇-烟酰胺共晶和三聚磷酸钠溶解于水中，制备混合溶液Π ;
[0016] 将所述混合溶液Π 加入混合溶液I中混合，制备得多西紫杉醇、小檗胺双载药壳聚 糖纳米粒。
[0017] 优选地，所述醋酸溶液的质量浓度为0.5~1.5 %。当醋酸浓度低于0.5 %，不利于 壳聚糖的溶解;而过高的的醋酸浓度对动物具有较大的刺激性，且对壳聚糖的链状结构也 有所影响。
[0018] 优选地，所述混合溶液I中，壳聚糖浓度为0.5~1. Omg/mL，小檗胺浓度为3.3~8.3 yg/mL。当壳聚糖浓度低于0.5mg/mL时，载体材料过少，不利于纳米颗粒的形成和载药，当大 于1. Omg/mL时，纳米粒粒径则增大。
[0019] 优选地，所述水为超纯水。
[0020] 优选地，所述混合溶液Π 中，多西紫杉醇-烟酰胺共晶（以多西紫杉醇计)浓度为10 ~30yg/mL、三聚磷酸钠的浓度为1. Omg/mL的混合溶液。
[0021 ]优选地，所述加入具体为滴加。
[0022]优选地，所述混合的方式具体为搅拌;进一步地，所述搅拌的方式为磁力搅拌。 [0023]优选地，所述滴加完毕后，还需继续搅拌30min。
[0024] 优选地，所述混合后所得混合物中的壳聚糖与三聚磷酸钠的质量比为（3~4): 1。 当壳聚糖与三聚磷酸钠的质量比小于4:1时，三聚磷酸钠量相对不足，该体系的交联成球能 力差;当大于3:1时，三聚磷酸钠含量相对增大，纳米粒容易发挥团聚而导致沉淀。
[0025] 优选地，所述多西紫杉醇-烟酰胺共晶通过如下步骤制备：
[0026] 将多西紫杉醇、烟酰胺加入有机溶剂中，恒温搅拌，得有机溶剂体系；
[0027] 冷却所述有机溶剂体系，析出晶体，即为多西紫杉醇-烟酰胺共晶。
[0028]优选地，所述多西紫杉醇与烟酰胺的投料摩尔比1:(1~20)。
[0029] 优选地，每5mg多西紫杉醇匹配的有机溶剂用量为2.5~20mL。
[0030]优选地，所述有机溶剂包括甲醇、乙醇。多西紫杉醇为脂溶性药物，烟酰胺是水溶 性物质，而两种物质在甲醇、乙醇均具有良好的溶解能力。
[0031] 优选地，所述恒温搅拌的条件为:40~60°C、200~1500rpm、2~24h。
[0032] 优选地，所述冷却具体指冷却至室温。
[0033] 进一步优选地，所述冷却采用的设备为通风橱中。
[0034] 优选地，析出晶体后还需将所得晶体干燥。
[0035] 优选地，所述干燥具体采用真空干燥。
[0036] 进一步地，所述真空干燥采用的装置为真空干燥器。
[0037] 优选地，所述干燥后还需对干燥晶体进行纯化。
[0038] 进一步地，所述纯化的方式具体为将所得晶体置于抽滤漏斗中，用超纯水少量多 次洗涤，再将共晶物置于真空干燥器中干燥即得。
[0039] 优选地，所述纯化后的多西紫杉醇-烟酰胺共晶中二者的摩尔比是1:(1~2)。
[0040] 与现有技术相比，本发明具备如下有益效果：
[0041 ] (1)利用共晶技术，显著提高药物的水溶性；
[0042] (2)将多西紫杉醇和增敏剂小檗胺联合用药，促进肿瘤细胞的凋亡；
[0043] (3)将共晶、壳聚糖纳米粒、多西紫杉醇和小檗胺联用三者联合应用，增加药物吸 收，提高口服生物利用度，使用方便等优点。
【附图说明】
[0044]通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、 目的和优点将会变得更明显：
[0045]图1为多西紫杉醇-烟酰胺共晶的XRD表征；
[0046]图2为双载药纳米粒的粒径分布图；
[0047]图3为双载药纳米粒的透射电镜图；
[0048]图4为双载药纳米粒体外释放曲线；
[0049]图5为双载药纳米粒的细胞毒性图；
[0050]图6为双载药纳米粒的体外小肠吸收曲线；
[00511图7为双载药纳米粒的药动学曲线。
【具体实施方式】
[0052]下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术 人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术 人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变化和改进。这些都属于本发明 的保护范围。
[0053] 实施例1
[0054]本实施例涉及一种多西紫杉醇-烟酰胺共晶的制备方法，包括如下步骤：
[0055] 将5mg多西紫杉醇与烟酰胺(投料摩尔比1:1)加入到2.5mL甲醇中，50°C以200rpm 的转速搅拌2h。将此甲醇溶剂体系置于通风橱中冷却至室温，使体系中的溶剂缓慢挥发析 出晶体，再置于真空干燥器中干燥即得。
[0056]本实施例中，多西紫杉醇-烟酰胺共晶的XRD表征如图1所示，由图1可知，多西紫杉 醇和烟酰胺都具有明显的晶体衍射峰;物理混合物的图谱中，多西紫杉醇的特征衍射峰比 较明显，烟酰胺特征峰有所减弱，但没有特征峰的消失;在共晶物的图谱中，多西紫杉醇在 8°、17°、19°、20°左右的特征衍射峰完全消失，而9°左右的特征峰则明显加强，烟酰胺在 15°、25°、28°的特征衍射峰完全消失;共晶物的图谱与多西紫杉醇和烟酰胺物理混合物的 衍射图谱完全不同，说明多西紫杉醇和烟酰胺之间可能构成了一种新的晶型。
[0057] 实施例2
[0058]本实施例涉及一种多西紫杉醇-烟酰胺共晶的制备方法，包括如下步骤：
[0059] 将5mg多西紫杉醇与烟酰胺(投料摩尔比1:10)加入到5mL甲醇中，60°C以500rpm的 转速搅拌2h。将此甲醇溶剂体系置于通风橱中冷却至室温，使体系中的溶剂缓慢挥发析出 晶体，再置于真空干燥器中干燥即得。
[0060]本实施例中，多西紫杉醇-烟酰胺共晶在水中的溶解度为31yg/mL。
[0061 ] 实施例3
[0062]本实施例涉及一种多西紫杉醇-烟酰胺共晶的制备方法，包括如下步骤：
[0063] 将5mg多西紫杉醇与烟酰胺(投料摩尔比1:20)加入到20mL乙醇中，40°C以1500rpm 的转速搅拌24h。将此乙醇溶剂体系置于通风橱中冷却至室温，使体系中的溶剂缓慢挥发析 出晶体，再置于真空干燥器中干燥即得。该实施例中的多西紫杉醇-烟酰胺共晶形成率为 97.6%〇
[0064] 实施例4
[0065] 本实施例涉及一种多西紫杉醇-烟酰胺共晶纯化的方法，包括如下步骤：
[0066] 将多西紫杉醇-烟酰胺共晶置于抽滤漏斗中，用超纯水少量多次洗涤，再将共晶物 置于真空干燥器中干燥即得。
[0067] 实施例5
[0068] 本实施例涉及一种多西紫杉醇、小檗胺双载药壳聚糖纳米粒的制备方法，包括如 下步骤： 壳聚糖 73.5%， 三聚磷酸钠 24.5%，
[0069] 多西紫杉醇-烟酰胺共晶 0. 25%， 小檗胺 1.2:3%。
[0070] 将分子量为50KDa壳聚糖和小檗胺溶解于0.5%醋酸溶液中，制备壳聚糖浓度为 0.5mg/mL，小檗胺浓度为8.3yg/mL的混合溶液(相I);
[0071] 多西紫杉醇-烟酰胺共晶（多西紫杉醇和烟酰胺摩尔比1:1)和三聚磷酸钠溶解于 超纯水中，制备成多西紫杉醇-烟酰胺共晶（以多西紫杉醇计)浓度为30yg/mL，三聚磷酸钠 的浓度为1.〇mg/mL的混合溶液(相Π );
[0072] 在磁力搅拌条件下，将一定体积的相Π 缓慢恒速滴加至相I中，使壳聚糖与三聚磷 酸钠的质量比为3:1，继续搅拌30min。
[0073] 本实施例中，纳米的粒径分布如图2所示，粒径为215nm，PDI为0.171。
[0074] 实施例6
[0075] 本实施例涉及一种多西紫杉醇、小檗胺双载药壳聚糖纳米粒的制备方法，包括如 下步骤： 壳聚糖 74.6%:， 三聚磷酸钠 24.娜，
[0076] 多西紫杉醇-烟醜胺共晶. 0.· 25%, 小檗胺 0.25%。
[0077]将分子量为50KDa壳聚糖、小檗胺溶解于1.0%醋酸溶液中，制备壳聚糖浓度为 1 .Omg/mL，小檗胺浓度为3.3yg/mL的混合溶液(相I);
[0078] 多西紫杉醇-烟酰胺共晶（多西紫杉醇和烟酰胺摩尔比1:2)和三聚磷酸钠溶解于 超纯水中，制备成多西紫杉醇-烟酰胺共晶（以多西紫杉醇计)浓度为l〇yg/mL，三聚磷酸钠 的浓度为1.Omg/mL的混合溶液(相Π );
[0079] 在磁力搅拌条件下，将一定体积的相Π 缓慢恒速滴加至相I中，使壳聚糖与三聚磷 酸钠的质量比为3:1，继续搅拌30min。
[0080] 本实施例中，纳米粒的透射电镜图如图3所示，纳米粒呈圆形，分布均匀，微观形态 较好。
[0081 ] 实施例7
[0082] 本实施例涉及一种多西紫杉醇、小檗胺双载药壳聚糖纳米粒的制备方法，包括如 下步骤： 壳聚糖 7B. 5%, 三聚磷酸钠 19. 6%，
[0083] 多西紫杉醇-烟酰胺共晶 0. 59%， 小檗胺 1.31%?
[0084]将分子量为50KDa壳聚糖和小檗胺溶解于1.5%醋酸溶液中，制备壳聚糖浓度为 0.5mg/mL，小檗胺浓度为8.3yg/mL的混合溶液(相I);
[0085] 多西紫杉醇-烟酰胺共晶（多西紫杉醇和烟酰胺摩尔比1:1.6)和三聚磷酸钠溶解 于超纯水中，制备成多西紫杉醇-烟酰胺共晶（以多西紫杉醇计)浓度为30yg/mL，三聚磷酸 钠的浓度为1.Omg/mL的混合溶液(相Π );
[0086] 在磁力搅拌条件下，将一定体积的相Π 缓慢恒速滴加至相I中，使壳聚糖与三聚磷 酸钠的质量比为4:1，继续搅拌30min;
[0087] 本实施例中，纳米粒的体外释放曲线如图4所示，细胞毒性如图5所示，体外小肠吸 收曲线如图6所示。图4所示，多西紫杉醇原药体外释放较慢，12h累计释放量为37%，双载药 纳米粒中多西紫杉醇释放量为66%，小檗胺累计释放量为78%。图5所示，双载药纳米粒对 MCF-7肿瘤细胞的细胞毒性高于多西紫杉醇原药和单载药纳米粒，说明多西紫杉醇和小檗 胺联用，能够增强对肿瘤细胞的毒性的作用。图6所示，双载药纳米粒能够增加药物的吸收， 降低药物的外排作用；壳聚糖纳米粒、多西紫杉醇和烟酰胺共晶、多西紫杉醇和小檗胺联 用，这三者均具有增加吸收减低外排的作用。
[0088] 实施例8
[0089] 本实施例涉及一种多西紫杉醇小檗胺双载药壳聚糖纳米粒的制备方法，包括如下 步骤： 壳聚糖 79,6%，： 三聚磷酸钠 19. 9%，
[0090] 多西紫杉醇-烟酰胺_晶 20%， 小檗胺 0.27%。
[0091] 将分子量为lOOKDa壳聚糖和小檗胺溶解于1.0%醋酸溶液中，制备壳聚糖浓度为 1 .Omg/mL，小檗胺浓度为3.3yg/mL的混合溶液(相I);
[0092] 多西紫杉醇-烟酰胺共晶（多西紫杉醇和烟酰胺摩尔比1:1.6)和三聚磷酸钠溶解 于超纯水中，制备成多西紫杉醇-烟酰胺共晶（以多西紫杉醇计)浓度为l〇yg/mL，三聚磷酸 钠的浓度为1.Omg/mL的混合溶液(相Π );
[0093] 在磁力搅拌条件下，将一定体积的相Π 缓慢恒速滴加至相I中，使壳聚糖与三聚磷 酸钠的质量比为4:1，继续搅拌30min。
[0094] 本实施例中，纳米粒的粒径为300nm。纳米粒的药动学曲线如图7所示，相对于多西 紫杉醇原药，生物利用度提高了 45倍。
[0095] 对比例1
[0096]本对比例是实施例9的对比例，不同之处仅在于，对比例采用200KDa的壳聚糖。结 果表明，壳聚糖不能完全溶解于1%醋酸溶液，有少量的不溶物。
[0097] 对比例2
[0098] 本实施例涉及一种单载药纳米粒（多西紫杉醇纳米粒）的制备方法，包括如下步 骤：
[0099] 将分子量为50KDa壳聚糖溶解于1.0%醋酸溶液中，制备壳聚糖浓度为0.5mg/mL (相 I);
[0100]将多西紫杉醇-烟酰胺共晶（多西紫杉醇和烟酰胺摩尔比1:1.5)和三聚磷酸钠溶 解于超纯水中，制备成多西紫杉醇-烟酰胺共晶（以多西紫杉醇计)浓度为30yg/mL，三聚磷 酸钠的浓度为1.0mg/mL的混合溶液(相Π );
[0101]在磁力搅拌条件下，将一定体积的相Π 缓慢恒速滴加至相I中，使壳聚糖与三聚磷 酸钠的质量比为3:1，继续搅拌30min。
[0102] 本实施例制备的纳米粒的粒径分布为150nm，包封率为78.1%，载药量为0.74%。
[0103] 本对比例与实施例的效果对比见图4、图5、图6、图7。
[0104]综上所述，本发明利用共晶技术，显著提高药物的水溶性;利用壳聚糖增加药物体 内滞留时间，降低药物体内清除率;将多西紫杉醇和增敏剂小檗胺联合用药，促进肿瘤细胞 的凋亡;本发明将三者联合应用，实现了增加药物吸收、提高生物利用度，使用方便等诸多 显著的技术进步。
[0105]以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述 特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变化或修改，这并不影 响本发明的实质内容。在不冲突的情况下，本申请的实施例和实施例中的特征可以任意相 互组合。
【主权项】
1. 一种多西紫杉醇、小築胺双载药壳聚糖纳米粒，其特征在于，包括如下质量百分比的 各原料组分： 壳聚糖 73. 5~79. 6%， H聚磯酸钢 19. 6~24. 9%， 多西紫杉醇-烟醜胺共晶 化20~0. 74%， 小裴胺 0.巧~L 32%。2. -种根据权利要求1所述的多西紫杉醇、小築胺双载药壳聚糖纳米粒的制备方法，其 特征在于，包括W下步骤： 将壳聚糖、小築胺溶解于醋酸溶液中，制备混合溶液I; 将多西紫杉醇-烟酷胺共晶和S聚憐酸钢溶解于水中，制备混合溶液n; 将所述混合溶液n加入混合溶液I中混合，制备得多西紫杉醇、小築胺双载药壳聚糖纳 米粒。3. 根据权利要求2所述的多西紫杉醇、小築胺双载药壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征 在于，所述混合溶液忡，壳聚糖浓度为0.5~1. Omg/mL，小築胺浓度为3.3~8.3iig/mL。4. 根据权利要求2所述的多西紫杉醇、小築胺双载药壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征 在于，所述混合溶液n中，多西紫杉醇-烟酷胺共晶的浓度为10~30yg/mL、S聚憐酸钢的浓 度为 l.Omg/mL。5. 根据权利要求2所述的多西紫杉醇、小築胺双载药壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征 在于，所述加入具体为滴加;所述混合的方式具体为揽拌。6. 根据权利要求2所述的多西紫杉醇、小築胺双载药壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征 在于，所述混合后所得混合物中的壳聚糖与=聚憐酸钢的质量比为(3~4): 1。7. 根据权利要求2所述的多西紫杉醇、小築胺双载药壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征 在于，所述多西紫杉醇-烟酷胺共晶通过如下步骤制备： 将多西紫杉醇、烟酷胺加入有机溶剂中，恒溫揽拌，得有机溶剂体系； 冷却所述有机溶剂体系，析出晶体，即为多西紫杉醇-烟酷胺共晶。8. 根据权利要求7所述的多西紫杉醇、小築胺双载药壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征 在于，所述多西紫杉醇与烟酷胺的投料摩尔比1:(1~20);每5mg多西紫杉醇匹配的有机溶 剂用量为2.5~20mL。9. 根据权利要求7或8所述的多西紫杉醇、小築胺双载药壳聚糖纳米粒的制备方法，其 特征在于，所述有机溶剂为甲醇或乙醇。10. 根据权利要求7所述的多西紫杉醇、小築胺双载药壳聚糖纳米粒的制备方法，其特 征在于，所述t旦溫揽拌的条件为:40~60 °C、200~1500巧m、2~24h。
【文档编号】A61K47/02GK106031726SQ201610153954
【公开日】2016年10月19日
【申请日】2016年3月17日
【发明人】沈琦, 李静, 吴健, 张君
【申请人】上海交通大学