一种盐酸半胱氨酸的药物组合物及其医药用图
【专利摘要】本发明公开了一种盐酸半胱氨酸的药物组合物及其医药用途，本发明提供的盐酸半胱氨酸的药物组合物中含有盐酸半胱氨酸和一种结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)，盐酸半胱氨酸和该天然产物单独作用时，具有改善白血病肝脏浸润致肝损伤作用；二者联合作用时，改善白血病肝脏浸润致肝损伤作用更强，可以开发成改善白血病肝脏浸润致肝损伤的药物，与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【专利说明】
一种盐酸半胱氨酸的药物组合物及其医药用途
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，涉及盐酸半胱氨酸的新用途，具体涉及一种盐酸半胱 氨酸的药物组合物及其医药用途。
【背景技术】
[0002] 盐酸半胱氨酸为氨基酸类药物，白色结晶或结晶性粉末。可用于治疗尿道疾病。
[0003] 迄今为止，尚未见盐酸半胱氨酸及其药物组合物与改善白血病肝脏浸润致肝损伤 的相关性报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种盐酸半胱氨酸的药物组合物，该药物组合物中含有盐 酸半胱氨酸和一种天然产物，盐酸半胱氨酸和该天然产物可以协同改善白血病肝脏浸润致 肝损伤。
[0005] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0006] 一种具有下述结构式的化合物（I)，
[0008] -种盐酸半胱氨酸的药物组合物，包括盐酸半胱氨酸、如权利要求1所述的化合物 (I)和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。
[0009] 进一步地，药学上可以接受的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、 崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。
[0010] 进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、 膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
[0011]上述化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将野马追粉碎，用75~85%乙 醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃 取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中正丁醇萃取物 用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱8个柱体积，再用70%乙醇洗脱10个柱体积，收集70% 洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶 分离，依次用体积比为60:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d) 步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1、4:1和2:1的二氯甲烷-甲醇 梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积 百分浓度为75%的甲醇水溶液等度洗脱，收集10~15个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得 到化合物(I)。
[0012]进一步地，化合物（I)的制备方法中，所述大孔树脂为D101型大孔吸附树脂。
[0013] 上述化合物(I)在制备改善白血病肝脏浸润致肝损伤的药物中的应用。
[0014] 上述盐酸半胱氨酸的药物组合物在制备改善白血病肝脏浸润致肝损伤的药物中 的应用。
[0015] 本发明的优点：
[0016] 本发明提供的盐酸半胱氨酸的药物组合物中含有盐酸半胱氨酸和一种结构新颖 的天然产物，盐酸半胱氨酸和该天然产物单独作用时，具有改善白血病肝脏浸润致肝损伤 作用；二者联合作用时，改善白血病肝脏浸润致肝损伤作用更强，可以开发成改善白血病肝 脏浸润致肝损伤的药物。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0018] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0019] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0020] 分离方法：（a)将野马追(2kg)粉碎，用80%乙醇热回流提取（15LX 3次），合并提取 液，浓缩至无醇味（3L)，依次用石油醚（3L X 3次）、乙酸乙酯（3L X 3次）和水饱和的正丁醇 (3LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中 正丁醇萃取物用D101型大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱8个柱体积，再用70%乙醇洗脱10 个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙醇洗脱 浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为60:1 (10个柱体积）、30:1 (8个柱体积）、15:1 (10个 柱体积)和5:1(8个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分4用 正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1 (10个柱体积）、4:1 (8个柱体积)和2:1 (6个柱体 积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反 相硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集10~15个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得到化合物（I) (HPLC归一化纯度大于98% )。
[0021] 结构确证:册431-]\^显示[]\?1]+为111/2 377.1886，结合核磁特征可得分子式为 〇21出〇〇7，不饱和度为8。核磁共振氢谱数据5[1(口口111，口5^(1;[116-(15,5001抱）：11-10(3.88，111)，11-2a(1.66，m)，H-20(1.58，m)，H-3a(1.32，m)，H-30(1.37，m)，H-50(2.Ol，s)，H-90(2.43，d，J = 3.5Hz)，H-ll(5.89，dd，J = 3.5，12.0Hz)，H-12(5.92，d，J = 12.0Hz)，H-13a(2.69，br，s)， H-14a(2.43，m)，H-140(1.85，m)，H-16(2.27，m)，H-17a(3.77，d，J=10.0,4.0Hz)，H-170 (3.66，d，J=10.0,4.0Hz)，H-18(1.22，s)，H-19(1.04，s)，H-20a(5.14，d，J = 9.50Hz)，H-20 0(4.36，d，J = 9.50Hz)，17-0Me(3? 27，s);核磁共振碳谱数据5C(ppm，pyridine_d5，125MHz): 73.5(CH，1-C)，29.7(CH2,2-C)39.6(CH 2,3-C)，34.3(C，4-C)，64.5(CH，5-C)，215.1(C，6-C)， 101.7(C，7-C)，61.8(C，8-C)，57.4(CH，9-C)，44.1(C，10-C)，136.9(CH，11-C)，129.4(CH， 12-C)，30.1(CH，13-C)，29.5(CH2，14-C)，225.2(C，15-C)，58.9(CH，16-C)，69.1(CH 2，17-C)， 34.4(CH3，18-C)，22.1(CH3，19-C)，66.1(CH2,20-C)，58.2(CH3，17-0CH 3)。在氢谱中可以观察 到两个单峰甲基信号[Sh1.22(3H，s)和1.04(3H，s)]，一个甲氧基信号[S h3.27(3H，s，17- 016)]，两个连氧亚甲基质子信号[知3.77(111，(1，1=10.0,4.0泡）与3.66(111，(1，1=10.0， 4.0他），5.14(111，(1，1 = 9.50他）与4.36(111，(1，1 = 9.50他）]，两个烯属次甲基质子信号[5 而.89(111，(1(1，1 = 3.5，12.0抱）与5.92(111，(1，1=12.0抱）]以及一个连氧次甲基质子信号[6 H3.88(lH，m)];在碳谱中显示该化合物有21个碳信号，其中有两个羰基碳信号，一组环内双 键碳信号，一个半缩醛碳信号以及三个连氧碳信号。结合以上信息可以得出该化合物可能 是一个二萜类化合物，通过文献查阅可以发现该化合物和61^-10，6€ 1，7€[，110-tetrahydroxy-17_methoxy-70，20-epoxy-kauran-15_one具有相似结构。将其核磁数据和 ent_10，6a，7a，110_tet;rahyd;roxy_17-methoxy_70，20_epoxy_kauran_15_one 进 比车交，发 现该化合物多出了一个羰基碳信号，同时在已知化合物中的C-6位的羟基也消失，故而推测 该新化合物和已知化合物的区别在C-6的羟基氧化成了羰基。进一步的对新化合物的HMBC 谱的解析中，H-5/C-6，H-5/C-7之间的相关性证实了C-6位为羰基。同时，H-9/C-11，H-9/C-12以及H-13/C-11的相关信号表明该化合物在C-11和C-12之间有一个环内双键。ROESY谱 中，H-1/H-卵之间的相关性表明C-1位的羟基是a构型。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和ROESY谱， 以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如下所示，立体构型进一步通过ECD 试验确定，理论值与实验值基本一致。
[0022]该化合物化学式及碳原子编号如下：
[0024] 实施例2:药理作用
[0025]本实例使用尾静脉移植K562细胞建立人白血病N0D/SCID小鼠模型，通过测定外周 血白细胞数、丙氨酸氨基转移酶（ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶（AST)活性与总胆红素 (TBiL)，白蛋白（Alb)升高，抗氧化酶谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px)、超氧化物歧化酶 (S0D)，谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)，观察药物减少肝脏内白血病细胞聚集，降低肝功能损 伤和炎症因子水平，提高肝组织抗氧化能力等方面的抗移植性人白血病方面的作用。
[0026] 1、材料与方法
[0027] 1.1动物
[0028]雄性N0D/SCID小鼠，8~10周龄，体重18~23g，由重庆医科大学实验动物研究所提 供。
[0029] 1.2试剂与样品
[0030] 盐酸半胱氨酸购自中国药品生物制品检定所。化合物（I)自制，制备方法见实施例 1。3〇〇，1?^，6311，631?^购自南京建成生物工程研究所。几-10，几-6￡1134试剂盒购自武汉 博士德生物工程有限公司。TUNEL试剂盒购自碧云天生物技术研究所。
[0031] 1.3仪器
[0032] 550酶标仪（BI0RAD)，CM1950冰冻切片机（Leica)，IX71-A12FL/PH荧光显微镜 (Olympus)，HFX_IIA光学显微镜(Nikcon)。
[0033] 1.4小鼠分组及模型制备
[0034]动物随机分为正常对照组、模型对照组、盐酸半胱氨酸组(80mg ? kg<)、化合物（I) 组(80mg ? kg^1)、盐酸半胱氨酸与化合物（I)组合物组【40mg ? kg"1盐酸半胱氨酸+40mg ? kg 一1化合物（I )】。除正常组注射等量生理盐水外，其余组建立移植性人白血病N0D/SCID小鼠模 型：即给小鼠腹腔注射环磷酰胺每只2mg，qd，2d，第3天从尾静脉注射移植对数生长期K562 细胞(2 X 107个/只），接种K562细胞30d后模型建立成功。从第31天开始按上述剂量分别腹 腔注射盐酸半胱氨酸、化合物（I)以及盐酸半胱氨酸与化合物（I)组合物治疗各组小鼠，共 14d，接种K562细胞45d处死小鼠取材。
[0035] 1.5外周血白细胞计数与分类和肝功能检测
[0036]各组小鼠取尾静脉血，自动血细胞分析仪测定白细胞总数，血涂片经Wright ' s染 色，光镜下分类计数。取小鼠眼球血制备血清，全自动生化仪检测ALT，AST，Alb，TBiL等肝功 能指标。
[0037] 1.6肝组织抗氧化能力的检测
[0038] 各组小鼠分别取0.5g肝组织，制备10%的组织匀浆，留取上清用于后续检测。BCA 蛋白浓度测定试剂盒检测各组上清液的蛋白浓度，SOD，MDA，GSH，GSH-Px检测按照试剂盒说 明书进行。
[0039] 1.7统计学方法
[0040]运用SPSS17.0统计软件进行单因素方差分析。
[0041 ] 2、实验结果
[0042] 2.1对移植性人白血病模型小鼠外周血白细胞数目的影响
[0043] 接种K562细胞45d，与正常对照组比，模型对照组外周血白细胞数显著增加(P< 0.01)。与模型对照组比，盐酸半胱氨酸与化合物（I)组合物组白细胞数显著减少（p< 〇.〇1);与模型对照组比较，盐酸半胱氨酸组、化合物（I)组白细胞数减少(p<0.05)。结果见 表1。
[0044] 2.2对移植性人白血病模型小鼠肝功能指标的影响
[0045]与正常对照组比较，模型对照组小鼠血清检测肝功能指标ALT，AST，TBiL以及肝指 数均增加，Alb含量降低(P<0.05)。与模型对照组比较，盐酸半胱氨酸与化合物（I)组合物 组ALT，AST，TBiL以及肝指数均显著减少(P<0.01)，Alb含量显著升高(P<0.01);与模型对 照组比较，盐酸半胱氨酸组、化合物（I)组ALT，AST，TBi L以及肝指数减少(P<0.05)，Alb含 量升高(P<〇.〇5)。
[0046] 试验结果见表1。
[0047] 2.3对移植性人白血病模型小鼠肝组织抗氧化损伤能力的影响
[0048]与正常对照组比较，模型对照组小鼠抗氧化酶S0D含量，GSH和GSH-Px活性均显著 降低，MDA含量显著增高(P<0.05)。与模型对照组比较，盐酸半胱氨酸与化合物（I)组合物 组SOD含量，GSH和GSH-Px活性均显著升高(P<0.01)，MDA含量显著降低(P<0.01);与模型 对照组比较，盐酸半胱氨酸组、化合物（I)组SOD含量，GSH和GSH-Px活性升高(P<0.05)，MDA 含量降低(P<〇.〇5)。
[0049] 试验结果见表2。
[0050] 表1对移植性人白血病模型小鼠外周血白细胞、肝功能血清各指标以及肝指数的 影响
[0052] 表2对移植性人白血病模型小鼠肝组织SOD，MDA，GSH，GSH-Px的影响
[0054]迄今，白血病的治疗仍主要采用大剂量联合化疗，这种方法对机体造血系统和免 疫系统破坏最大，对全身各组织器官损伤也极大，病人最终多死于化疗所致全身衰竭。由于 肝脏特殊的解剖结构和生理功能，抗肿瘤药物很容易造成肝脏损害，且研究表明，抗白血病 药物在肝脏内潴留时间较短，且药物浓度相对较低，这些因素可能使肝脏成为白血病细胞 的庇护所。
[0055]上述结果表明，盐酸半胱氨酸、化合物（I )、盐酸半胱氨酸和化合物（I)组合物治疗 白血病模型小鼠是通过抑制白血病细胞的生长，提高肝组织抗氧化损伤能力，降低炎症细 胞因子水平，诱导白血病细胞凋亡，以此改善白血病肝脏浸润所致的肝损伤，可以开发成改 善白血病肝脏浸润致肝损伤的药物。
[0056]上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的化合物（I)，2. -种盐酸半脫氨酸的药物组合物，其特征在于:包括盐酸半脫氨酸、如权利要求1所 述的化合物(I)和药学上可W接受的载体，制备成需要的剂型。3. 根据权利要求2所述的盐酸半脫氨酸的药物组合物，其特征在于:药学上可W接受的 载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附 载体或润滑剂。4. 根据权利要求2所述的盐酸半脫氨酸的药物组合物，其特征在于：所述剂型包括片 剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注 射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。5. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含W下操作步骤：（a)将野 马追粉碎，用75~85%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油酸、乙酸乙 醋和水饱和的正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b) 步骤(a)中正下醇萃取物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱8个柱体积，再用70%乙醇洗 脱10个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（C)步骤(b)中70%乙醇 洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为60:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烧-甲醇梯度 洗脱得到4个组分；（d)步骤(C)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1、4:1和 2:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反 相硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集10~15个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得到化合物(I)。6. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为D101型 大孔吸附树脂。7. 权利要求1所述的化合物（I)在制备改善白血病肝脏浸润致肝损伤的药物中的应用。8. 权利要求2~4任一所述的盐酸半脫氨酸的药物组合物在制备改善白血病肝脏浸润 致肝损伤的药物中的应用。
【文档编号】A61K31/198GK105968082SQ201610380365
【公开日】2016年9月28日
【申请日】2016年5月31日
【发明人】黄芳
【申请人】黄芳