一种高效液相色谱法测定溶液中盐酸半胱氨酸的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于分析化学领域，具体涉及一种高效液相色谱法测定溶液中盐酸半胱氨 酸的方法。
【背景技术】
[0002] 盐酸半胱氨酸为氨基酸类药物，白色结晶或结晶性粉末；有臭，味酸。可用于治疗 尿道疾病，在盐酸多巴酚丁胺葡萄糖注射液中，盐酸半胱氨酸用于抗氧剂作用，保证盐酸多 巴酚丁胺葡萄糖注射液的质量要求。
[0003] 现有盐酸半胱氨酸的测定方法有以下三种：
[0004] (1)碘量法：方法来源（《中国药典》2010年版第一增补本第435页），现有检测盐 酸半胱氨酸原料的方法。方法：取本品约0. 25g，精密称定，置碘瓶中，加水20ml与碘化钾 4g，振摇溶解后，加稀盐酸5ml，精密加入碘滴定液（0. 05mol/L) 25ml，于暗处放置15分钟， 再置冰浴中冷却5分钟，用硫代硫酸钠滴定液（0. lmol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液 2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml的碘滴定液（0. 05mol/ L)相当于 15. 76mg 的 C3H7NO2S · HCl。
[0005] 此法用于该品种时，由于在溶液中浓度较低，不能进行有效测定；由于葡萄糖的存 在，干扰其测定；方法本身的精度决定其不太适应目前国家的相关要求。
[0006] (2)比色法：方法来源（杨雷著复方氨基酸注射液（18AA-V)中盐酸半胱氨酸的含 量测定）。方法：a.标准曲线的制备：精密称取盐酸半胱氨酸对照品适量，加水溶解并稀释 成每1ml中约含盐酸半胱氨酸0. 7mg的溶液；分别精密量取31111、41111、51111、61111、71111，置5〇1111 量瓶中，加水稀释至刻度，作为对照液；精密量取各对照液lml，置25ml具塞试管中，分别 加冰乙酸和酸性茚三酮溶液2. 0ml，轻轻摇匀，密塞，水浴加热5min，立即冰水冷却，加乙醇 20ml，摇匀。以水Iml同法操作作为空白，立即于559nm波长处测定。以吸收度与其对应浓 度进行线性回归，得回归方程。b.供试液的制备和测定：精密量取本品4ml，置25ml量瓶 中，加水稀释到刻度，摇匀，作为供试液；精密量取lml，照标准曲线制备项下的方法，自"置 25ml具塞试管中"起，同法操作、测定。从回归方程计算盐酸半胱氨酸的浓度，即得。
[0007] 此法用于该品种时发现：测样时间不好把控，检验较繁琐，检测结果不及高效液相 色谱法准确，试剂有毒，易污染环境。
[0008] (3)柱前衍生方法：方法来源（曹玲著柱前衍生化HPLC法同时测定注射用复方甘 草酸苷中盐酸半胱氨酸和甘氨酸的含量）。方法：色谱条件色谱柱：Phen〇menexLunaC18(2) 柱（4. 6mmX25cm，5ym);流动相A:乙腈-水（50 : 50);流动相B:0. 014mol/L磷酸氢二钾 溶液（磷酸调节pH值至8. 2);流速：1.0 mL · min-1 ;检测波长：360nm ;柱温：30°C ;进样量 10 μ 1。梯度程序见表1 :
[0009] 表1 :梯度程序
[0010] CN 105181863 A ^ ΗΠ T> 2/6 贞
[0011] 衍生化反应精密称取盐酸半胱氨酸和甘氨酸对照品适量，加水溶解并稀释制成 每1ml中分别含40 μ g与800 μ g的溶液，精密量取Iml置IOml量瓶中，加4%碳酸氢钠溶 液lml，1 % DNFB乙腈溶液lml，置60°C水浴中暗处反应20min后，放冷，用磷酸盐缓冲液 (PH7.0)稀释至刻度，摇匀。取10 μ 1注入液相色谱仪，记录色谱图。可见该色谱条件下， 盐酸半胱氨酸和甘氨酸衍生化产物之间的分离度大于23,且与各自相邻色谱峰的分离度符 合要求。
[0012] 该方法有以下不足：检验方法繁琐且时间较长，试剂有毒，易污染环境。
【发明内容】
[0013] 本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种高效液相色谱法测定溶液中盐 酸半胱氨酸的方法，该方法具有简便、准确、重复性好、专属性强的特点。
[0014] 本发明的目的通过以下技术方案来实现：一种高效液相色谱法测定溶液中盐酸半 胱氨酸的方法，它包括以下步骤：
[0015] Α.供试品溶液的制备：精密称取本品5ml，置于50ml容量瓶中，用流动相稀释至刻 度，摇匀；
[0016] B.对照品溶液的制备：取盐酸半胱氨酸对照品15mg，精密称定，置50ml容量瓶中， 用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml置50ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度， 摇匀；C.测定：精密量取对照品溶液及供试品溶液各20 μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色 谱图，按外标法以峰面积计算溶液中盐酸半胱氨酸的含量；
[0017] 其中，色谱条件与系统适应性实验：色谱柱以阳离子交换树脂为填充剂；以pH值 为2~4的水为流动相；流动相的流速为0. 8~I. 2ml/min ;检测波长为190~210nm ;柱 温为20~50°C;理论板数按盐酸半胱氨酸计算应不低于3000,盐酸半胱氨酸的分离度应达 到 1. 5〇
[0018] 所述流动相用lmol/L的硫酸溶液调节pH值。
[0019] 所述阳离子交换树脂为Agilent ZORBAX SB-C18液相色谱柱。
[0020] 所述按外标法以峰面积计算公式为供试品标示含量（％) =(供试品溶液峰面积 /标准品溶液峰面积）X100%。
[0021] 本发明具有以下优点：本发明采用高效液相色谱法对溶液中的盐酸半胱氨酸进行 了测定，该法对设备的要求不高，流动相为水，安全环保，本发明方法操作简单、提高了检测 的灵敏度和准确度，具有简便、准确、重复性好、专属性强的特点。
【附图说明】
[0022] 图1为实施例1的高效液相色谱图。
【具体实施方式】
[0023] 下面结合实施例对本发明做进一步的描述，本发明的保护范围不局限于以下所 述。
[0024] 实施例1 :一种高效液相色谱法测定溶液中盐酸半胱氨酸的方法，它包括以下步 骤：
[0025] A.供试品溶液的制备：精密称取本品（品名：盐酸多巴酚丁胺葡萄糖注射液批号： H13080102S厂家：四川科伦药业股份有限公司试制样品）5ml，置于50ml容量瓶中，用流动 相稀释至刻度，摇匀；
[0026] B.对照品溶液的制备：取盐酸半胱氨酸对照品15mg，精密称定，置50ml容量瓶中， 用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml置50ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度， 摇匀；C.测定：精密量取对照品溶液及供试品溶液各20 μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色 谱图，如图1所示，按外标法以峰面积计算溶液中盐酸半胱氨酸的含量；
[0027] 其中，色谱条件与系统适应性实验：色谱柱以阳离子交换树脂为填充剂；Agilent Z0RBAXSB-C18液相色谱柱；以pH值为2~4的水为流动相，用lmol/L的硫酸溶液调节pH 值；流动相的流速为〇. 8~I. 2ml/min ;检测波长为190~210nm ;柱温为20~50°C ;理论 板数按盐酸半胱氨酸计算应不低于3000盐酸半胱氨酸与其它峰的分离度应达到1. 5。
[0028] 供试品标示含量（％) =(供试品溶液峰面积/标准品溶液峰面积）X 100%。
[0029] 实施例2 :专属性实验
[0030] 空白辅料：配制不含有盐酸半胱氨酸的辅料空白溶液，按照色谱条件进行分析，辅 料空白溶液不干扰盐酸半胱氨酸含量检测。
[0031] 对照溶液：取盐酸半胱氨酸对照品溶液，按照色谱条件进行分析。
[003