神经再生药的制作方法

专利名称：神经再生药的制作方法
技术分野本发明涉及一类含有抑制糖原合成酶激酶-3(下文简称为GSK-3)活性的物质作为有效成分的神经再生药、含有抑制GSK-3活性的物质作为有效成分的神经元再生促进剂、通过在该神经元再生促进剂的存在下培养神经干细胞而获得的神经元、以及该神经元的制造方法。
背景技术：
神经疾病是对神经变性疾病、不伴随神经变性的抑郁症和躁郁症等的总称，而这些疾病是由于遗传因素、环境因素、年龄增长因素等使大脑或末梢神经元受到伤害而导致的疾病。作为神经变性疾病的具体例子，可以举出帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、聚谷氨酸病、肌萎缩性侧索硬化症、多发性神经病、脊髓损伤、脑血管障碍等。作为这类神经变性疾病的一般的治疗法，可以举出补充由于神经元损伤导致的缺失的神经递质的治疗法，但是，该治疗法只限于改善帕金森氏病、阿尔茨海默氏病等的症状。而且，神经递质补充疗法不能阻止神经细胞的死亡。
作为一种可使帕金森氏病所导致失去的多巴胺能神经元功能积极地恢复的治疗法，对使中枢神经系统再生的再生治疗进行了研究，但是，该方法要使用流产胎儿的大脑，因此存在各种各样的问题，不能作为一般的方法来应用。
另一种治疗法也正在研究，该治疗法是把取自胎儿大脑的神经干细胞或取自人受精卵的ES细胞在生物体外大量培养，然后将其转变成目的神经元以用于移植，但是至今尚未确立使之正确分化成目的神经元的技术，而且使用来自胎儿的神经干细胞或人类ES细胞的方法也引起各种问题，因此没有进行临床应用。
另一方面，曾有报导，从成人大脑中分离出神经干细胞，结果发现，即使在成人大脑中，也会在其整个生命过程中引起神经元的再生，在此基础上，有人研究了一种通过使用药物等刺激患者脑内存在的神经干细胞来诱导其再生，从而治疗神经变性疾病的方法。
据报导，通过向脑内供给类胰岛素生成因子-1[J.Neuroscience，20，2896-2903(2000)]、成纤维细胞生成因子-2[Pro.Nat.Acad.Sci.USA，98，5874-5879(2001)]、干细胞因子[J.Clin.Invest.，110，311-319(2002)]、红细胞生成素[J.Neuroscience，21，9733-9743(2001)]等的细胞因子或者根据大脑整体缺血[J.Neuroscience，18，7768-7778(1998)]、癫痫刺激[J.Neuroscience，22，3174-3188(2002)]等疾病模型，可以促进海马内或嗅球内的神经元再生。另外还有报导，通过向脑内供给肿瘤生长因子-α，可以促使纹状体内的多巴胺能神经元再生，从而改善帕金森氏病的症状[Pro.Nat.Acad.Sci.USA，97，14686-14691(2000)]。此外还有报导，在海马发生局部缺血后第2天至第5天之间，通过向海马供给成纤维细胞生长因子-2和上皮细胞生长因子，可以使得由于海马受到的局部缺血损伤而导致缺失的CA1锥体细胞的40％完全恢复[Cell，110，429-441(2002)]。
然而，上述方法中的任一种方法都必须向脑内供给蛋白性因子，因此难以应用到一般的医疗中。
可以通过可末梢给药的低分子化合物引起神经元再生，例如报导使用单胺氧化酶抑制剂、5-羟色胺特异性转移抑制剂、磷酸二酯酶IV抑制剂等抗抑郁药[Neuropsychopharmacology，25，836-844(2001)]。认为这些药剂能够诱导脑内神经再生的机理是药物直接或间接地作用于5-羟色胺能神经元的5-羟色胺受体信号，产生神经营养因子，从而促进在5-羟色胺能神经元周围的神经元再生。因此认为，对于与5-羟色胺能神经元的变性无关的大部分的神经疾病来说，不能用上述的这些药剂作为神经再生药。
另外还有报导，心境稳定剂锂能够诱导细胞死亡抑制基因bc1-2的表达，从而保护在海马中经常再生的再生神经元，使其避免死亡，进而能够显著增加海马中的神经元再生[J.Neurochemistry，75，1729-1734(2000)]。另外还有报导，锂能够诱导神经营养因子BDNF的表达[Neuropharmacology，43，1173-1179(2002)]。然而，尚没有关于锂能直接地作用于神经干细胞并促进神经元分化，从而促进神经元再生的报导，另外，也没有关于锂具有能够促进海马以外的神经元再生的活性的报导。而且，锂为什么对不伴随神经变性的抑郁症和躁郁症具有治疗效果也尚不清楚。
对于阿尔茨海默氏病，有人提出了一种假说，即，糖原合成酶激酶-3(下文简称为GSK-3)能够使微管相关蛋白质tau蛋白质过度磷酸化，形成神经原纤维，从而诱导神经细胞死亡[Trends inMolecular Medicine，8，126-132(2002)]。另外还有报导，能抑制GSK-3活性的物质具有保护体外成熟的神经细胞的活性[J.Neurochemistry，77，94-102(2001)]。根据该报告，有人认为，能抑制GSK-3活性的物质可作为以阿尔茨海默氏病为代表的各种各样的神经变性疾病的治疗药使用(国际专利申请公开第00/38675号公报)，但是，尚不知道是否能够通过保护成熟的神经元来切实地治疗神经变性疾病，以及是否能抑制GSK-3活性的物质具有促进神经元再生的作用。

发明内容
本发明的目的是提供一种含有抑制GSK-3活性的物质作为有效成分的神经再生药、含有该物质作为有效成分的神经干细胞的神经元再生促进剂、通过在该神经元再生促进剂的存在下，培养神经干细胞而获得的神经元，以及该神经元的制造方法。
本发明涉及以下的(1)～(41)。
(1)含有抑制糖原合成酶激酶-3(下文简称GSK-3)活性的物质作为有效成分的神经再生药。
(2)如上述(1)的药物，其中，神经再生药是神经疾病的治疗药。
(3)如上述(2)的药物，其中，神经疾病是选自帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、唐氏症、脑血管障碍、脑中风，脊髓损伤、亨丁顿氏舞蹈病、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、癫痫、焦虑性障碍、综合失调症、抑郁症和躁郁症中的任一种神经疾病。
(4)如上述(1)～(3)中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3活性的物质是锂或其药理学上允许的盐。
(5)如上述(1)～(3)中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3活性的物质为双吲哚基马来酰亚胺衍生物、3-芳基-4-吲哚基马来酰亚胺衍生物、吲哚并咔唑衍生物、吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮衍生物或者靛玉红衍生物或者它们的药理学上允许的盐。
(6)如上述(1)～(3)中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3活性的物质为由式(I)表示的化合物、由式(II)表示的化合物或者由式(III)表示的化合物或者它们药理学上允许的盐 [式中，n和m相同或不同，表示1～3的整数；R1、R3和R4相同或不同，表示氢原子、取代或非取代的低级烷基、取代或非取代的低级链烯基、-COR6(式中，R6表示氢原子、取代或非取代的低级烷基、取代或非取代的低级链烯基、取代或非取代的芳基或者取代或非取代的环烷基)、-COOR7(式中，R7表示氢原子、取代或非取代的低级烷基、取代或非取代的芳基或者取代或非取代的环烷基)或者-OR8(式中，R8表示氢原子、取代或非取代的低级烷基、取代或非取代的芳基或者取代或非取代的环烷基)；R2和R5相同或不同，表示氢原子、取代或非取代的低级烷基、取代或非取代的低级链烯基、取代或非取代的低级烷氧基、取代或非取代的低级烷氧基羰基、取代或非取代的芳基、羧基、卤素、羟基、硝基、氨基或者单或二低级烷基氨基，当n和m分别为2或3时，各自的R2和R5可以相同或不同]； (式中，na、ma、R1A、R2A、R3A和R5A分别与前述n、m、R1、R2、R3和R5的含义相同) [式中，nb、mb、R1B、R2B和R5B分别与前述n、m、R1、R2和R5的含义相同，R3B和R4B相同或不同，表示氢原子、取代或非取代的低级烷基、取代或非取代的低级链烯基、-COR6(式中，R6与前述的含义相同)、-COOR7(式中，R7与前述的含义相同)或者-OR8(式中，R8与前述的含义相同)，或者R3B与R4B一起，形成 (式中，k表示1或2，X表示CH2、NH、氧原子或硫原子，R9表示羟基、羧基、氨基甲酰基或低级烷氧基羰基)]。
(7)上述(1)～(3)中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3活性的物质为由式(Ia)表示的化合物或其药理学上允许的盐 (式中，R2a表示氢原子、低级烷氧基、低级烷氧基羰基、芳基或硝基，R3a和R4a相同或不同，表示取代或非取代的低级烷基)。
(8)上述(1)～(3)中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3活性的物质为由式(IIa)表示的化合物或其药理学上允许的盐 (式中，ma与前述的含义相同，R3Aa表示取代或非取代的低级烷基，R5Aa表示卤素)。
(9)上述(1)～(3)中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3活性的物质为由式(IIIa)表示的化合物或其药理学上允许的盐 (式中，R9与前述的含义相同)。
(10)上述(1)～(3)中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3活性的物质为选自3，4-双(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-(1-甲基吲哚-3-基)-4-(1-丙基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-氰基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-氨基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-羧基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-氨基甲酰基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-氨基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基-5-丙氧基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-羟基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基-5-苯基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-氨基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基-5-苯基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-羟基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基-5-甲氧基羰基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-羟基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基-5-硝基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-(1-甲基吲哚-3-基)-4-[1-(3-羟基丙基)-5-硝基吲哚-3-基]-1H-吡咯-2，5-二酮、3-(2-氯苯基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-(2，4-二氯苯基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-(2-氯苯基)-4-[1-(3-羟基丙基)吲哚-3-基]-1H-吡咯-2，5-二酮、4-[1-(3-氨基丙基)吲哚-3-基]-3-(2-氯苯基)-1H-吡咯-2，5-二酮以及 中的化合物或其药理学上允许的盐。
(11)上述(1)～(3)中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3的物质为由式(IV)表示的化合物或其药理学上允许的盐 [式中，A为通过单键或双键于右侧键合的氧或硫；R10选自氢原子、芳基、低级脂肪族取代基，特别是烷基和低级烷基酯；R11～R14分别选自烷氧基、氨基、酰基、脂肪族取代基，特别是烷基、链烯基和炔基取代基、脂肪族醇、特别是烷基醇、脂肪族腈、特别是烷基腈、氰基、硝基、羧基、卤素、氢原子、羟基、亚氨基以及α，β不饱和酮；R15～R18分别选自脂肪族取代基，特别是烷基、链烯基和炔基取代基，特别是低级脂肪族取代基、脂肪族醇、特别是烷基醇、烷氧基、酰基、氰基、硝基、环氧基、卤代烷基、卤素、氢原子以及羟基；R19选自脂肪族基团，特别是低级烷基、脂肪族醇、特别是烷基醇、羧酸、和氢]。(12)上述(1)～(3)中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3的物质为选自7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂(benzazepin)-6(5H)-酮、2-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氯-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、11-氯-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、10-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、8-溴-6，11-二氢-噻吩并[3′，2′2，3氮杂并(azepino)[4，5-b]吲哚-5(4H)-酮、9-溴-7，12-二氢-4-甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-4-羟基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-4-甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2，3-二甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2，3-二羟基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-2，3-二甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-2，3-二甲氧基-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-溴-7，12-二氢-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-硫酮、9-溴-5，12-双-(叔丁氧基羰基)-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-12-(叔丁氧基羰基)-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-5，7-双-(叔丁氧基羰基)-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-5，7，12-三-(叔丁氧基羰基)-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-5-甲氧基羰基甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-12-甲氧基羰基甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-12-(2-羟基乙基)-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2，9-二溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、8，10-二氯-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氰基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-5-甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、5-苄基-9-溴-7，12-二氢-5-甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-12-甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-12-乙基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-12-(2-丙烯基)-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-9-甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-9-甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氟-7，12-二氢-12-(2-丙烯基)-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、11-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2-(甲基亚氨基胺(methyliminoamine))-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2-(羧酸)-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-10-羟基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-11-羟基甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-4-羟基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-2，3-二羟基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2，3-二甲氧基-9-硝基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氰基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2，3-二甲氧基-9-氰基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-硝基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、3-(6-氧代-9-三氟甲基-5，6，7，12-四氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-2-基)丙腈、2-溴-9-硝基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、3-(6-氧代-9-三氟甲基-5，6，7，12-四氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-2-基)丙烯腈、2-(3-羟基-1-丙炔基)-9-三氟甲基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-碘-9-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-(3-氧代-1-丁烯基)-9-三氟甲基-7，12-四氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、8-氯-6，11-二氢-噻吩并[3′，2′2，3]氮杂并[4，5-b]吲哚-5(4H)-酮、2-碘-9-三氟甲基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-吡啶并[3′，2′4，5]吡咯并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、11-甲基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-[2-(1-羟基环己基)乙炔基]-9-三氟甲基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-氰基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-碘-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、11-乙基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、8-甲基-6，11-二氢-噻吩并[3′，2′2，3]氮杂并[4，5-b]吲哚-5(4H)-酮以及3-(6-氧代-9-三氟甲基-5，6，7，12-四氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-2-基)丙烯酸甲酯中的化合物或其药理学上允许的盐。
(13)上述(1)～(3)中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3的物质为选自9-氰基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2，3-二甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-溴-7，12-二氢-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-2，3-二甲氧基-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2，9-二溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氯-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、8-溴-6，11-二氢-噻吩并[3′，2′2，3]氮杂并[4，5-b]吲哚-5(4H)-酮、7，12-二氢-9-甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、10-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、11-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、11-氯-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氟-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-甲基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-硫酮、8，10-二氯-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-12-(2-羟基乙基)-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2，3-二羟基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-2，3-二甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-12-甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-5-甲氧基羰基甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮和7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮中的化合物或其药理学上允许的盐。
(14)上述(1)～(3)中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3的物质为选自9-氰基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2，3-二甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-溴-7，12-二氢-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-2，3-二甲氧基-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2，9-二溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氯-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、8-溴-6，11-二氢-噻吩并[3′，2′2，3]氮杂并[4，5-b]吲哚-5(4H)-酮和7，12-二氢-9-甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮中的化合物或其药理学上允许的盐。
(15)上述(1)～(3)中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3的物质为9-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮或其药理学上允许的盐。
(16)上述(1)～(3)中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3的物质为由式(V)表示的化合物或者它们的药理学上允许的盐 [式中，可以相同或不同的R20和R25表示氢原子；卤素；羟基；亚甲基羟基；直链或支链的C1～C18烷基或烷氧基或亚甲基烷氧基；根据需要含有1个或多个杂原子、具有3～7个碳原子的环烷基；根据需要具有1个或多个杂原子的取代或非取代的芳基、芳烷基或芳氧基；各自相互独立地在直链或支链的烷基中具有1～6个碳原子的单、二或三烷基甲硅烷基；各自相互独立地具有取代或非取代芳基的单、二或三芳基甲硅烷基；三氟甲基；-COM；-COOM；或者-CH2COOM基(此处，M表示氢原子、如有必要被羟基和/或氨基的1个或多个取代的直链或支链的C1～C18烷基、或者如有必要具有1个或多个杂原子、可以被1个或多个卤素、烷基或烷氧基取代的芳基)；-NR30R31基(此处，可以相同或不同的R30和R31表示氢原子、在必要时被1个或多个的羟基和/或氨基取代的C1～C18直链或支链烷基、取代或非取代、如有必要含有1个或多个杂原子的芳基)；酰基；-CH2-NR30R31亚甲基氨基(此处，R30和R31具有前述的含义)；如有必要在苯环上具有1个或多个杂原子的苄基；如有必要具有1个或多个杂原子、具有碳原子3～7个的亚甲基环烷基；作为酰胺基的、结合在氮原子上的生理性氨基酸基；糖苷表示选自单糖或二糖的O-糖苷或N-糖苷；或者表示亚甲基磺酸酯基；可以相同或不同的R21、R22、R23、R24、R26、R27、R28和R29表示氢原子；卤素；羟基；亚硝基；硝基；烷氧基；如有必要被1个或多个羟基和/或氨基取代的直链或支链的C1～C18烷基；如有必要具有1个或多个杂原子的取代或非取代的芳基；如有必要具有1个或多个杂原子的取代或非取代芳烷基；如有必要具有1个或多个杂原子的取代或非取代芳氧基；如有必要具有1个或多个杂原子的取代或非取代的亚甲基芳氧基；如有必要含有1个或多个杂原子、具有3～7个碳原子的环烷基；如有必要含有1个或多个杂原子、具有3～7个碳原子的亚甲基环烷基；三氟甲基；-COM；-COOM；或者CH2COOM基(此处，M表示氢原子、如有必要另外被羟基和/或氨基的1个或多个取代的直链或支链的C1～C18烷基、或者如有必要具有1个或多个杂原子、可以被1个或多个卤素原子、烷基或烷氧基取代的芳基)；-NR30R31基(此处，可以相同或不同的R30和R31表示氢原子、如有必要另外被1个或多个羟基和/或氨基取代的直链或支链C1～C18烷基、取代或非取代、如有必要含有1个或多个杂原子的芳基、酰基；或者形成一种具有氮原子，如有必要含有1个或多个杂原子并具有3～7个碳原子的环烷基的一部分)；-CONR30R31基(此处，R30和R31具有前述的含义)；羟基氨基；磷酸酯基；膦酸酯基；硫酸酯基；磺酸酯基；磺酰胺基；-SO2NR30R31基(此处，R30和R31具有前述的含义)；-N＝N-R32偶氮基(此处，R32表示在必要时被1个或多个羧基、磷酰基或磺酸酯基取代的芳香族基团或者糖苷选自单糖或二糖的O-糖苷或N-糖苷基团)；R20和R24以及R25和R29分别在一起形成相互独立的如有必要可各自具有被取代的1～4个CH2基的环；可以相同或不同的Y和z表示氧；硫；硒；碲的原子；NR33基(此处，R33表示氢原子、如有必要被1个或多个羧基、磷酰基或磺酸酯基取代的直链或支链C1～C18烷基、如有必要含有1个或多个杂原子的取代或非取代的芳基、芳烷基或磺酸酯基)；或者-NOR33(此处，R33基具有前述的含义)]。
(17)上述(1)～(3)中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3的物质为选自靛玉红、5-碘-靛玉红、5-溴-靛玉红、5-氯-靛玉红、5-氟-靛玉红、5-甲基-靛玉红、5-硝基-靛玉红、5-SO3H-靛玉红、5’-溴-靛玉红、5-5’-二溴-靛玉红和5’-溴-靛玉红5-磺酸中的化合物或其药理学上允许的盐。
(18)上述(1)～(3)中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3的物质为选自靛玉红-3’-单肟、5-碘-靛玉红-3’-单肟和5-SO3Na-靛玉红-3’-单肟中的化合物或其药理学上允许的盐。
(19)上述(1)～(3)中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3的物质为靛玉红-3’-单肟或其药理学上允许的盐。
(20)一种含有抑制GSK-3活性的物质作为有效成分的神经干细胞的神经元再生促进剂。
(21)上述(20)的神经元再生促进剂，其中，抑制GSK-3活性的物质为锂或其药理学上允许的盐。
(22)上述(20)的神经元再生促进剂，其中，抑制GSK-3活性的物质为双吲哚基马来酰亚胺衍生物、3-芳基-4-吲哚基马来酰亚胺衍生物、吲哚并咔唑衍生物、吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮衍生物或者靛玉红衍生物或者它们的药理学上允许的盐。
(23)上述(20)的神经元再生促进剂，其中，抑制GSK-3活性的物质为由式(I)表示的化合物、由式(II)表示的化合物或者由式(III)表示的化合物或者它们的药理学上允许的盐 [式中，n和m相同或不同，表示1～3的整数；R1、R3和R4相同或不同，表示氢原子、取代或非取代的低级烷基、取代或非取代的低级链烯基、-COR6(式中，R6表示氢原子、取代或非取代的低级烷基、取代或非取代的低级链烯基、取代或非取代的芳基或者取代或非取代的环烷基)、-COOR7(式中，R7表示氢原子、取代或非取代的低级烷基、取代或非取代的芳基或者取代或非取代的环烷基)或者-OR8(式中，R8表示氢原子、取代或非取代的低级烷基、取代或非取代的芳基或者取代或非取代的环烷基)；R2和R5相同或不同，表示氢原子、取代或非取代的低级烷基、取代或非取代的低级链烯基、取代或非取代的低级烷氧基、取代或非取代的低级烷氧基羰基、取代或非取代的芳基、羧基、卤素、羟基、硝基、氨基或者单或二低级烷基氨基，当n和m分别为2或3时，各自的R2和R5可以相同或不同] (式中，na、ma、R1A、R2A、R3A和R5A分别与前述n、m、R1、R2、R3和R5的含义相同) [式中，nb、mb、R1B、R2B和R5B分别与前述n、m、R1、R2和R5的含义相同；R3B和R4B相同或不同，表示氢原子、取代或非取代的低级烷基、取代或非取代的低级链烯基、-COR6(式中，R6与前述的含义相同)、-COOR7(式中，R7与前述的含义相同)或者-OR8(式中，R8与前述的含义相同)，或者R3B与R4B一起形成 (式中，k表示1或2；X表示CH2、NH、氧原子或硫原子；R9表示羟基、羧基、氨基甲酰基或低级烷氧基羰基)]。
(24)上述(20)的神经元再生促进剂，其中，抑制GSK-3活性的物质为由式(Ia)表示的化合物或其药理学上允许的盐 (式中，R2a表示氢原子、低级烷氧基、低级烷氧基羰基、芳基或硝基；R3a和R4a相同或不同，表示取代或非取代的低级烷基)。
(25)上述(20)的神经元再生促进剂，其中，抑制GSK-3活性的物质为由式(IIa) (式中，ma与前述的含义相同；R3Aa表示取代或非取代的低级烷基；R5Aa表示卤素)表示的化合物或其药理学上允许的盐。
(26)上述(20)的神经元再生促进剂，其中，抑制GSK-3活性的物质为由式(IIIa)表示的化合物或其药理学上允许的盐 (式中，R9与前述的含义相同)。
(27)上述(20)的神经元再生促进剂，其中，抑制GSK-3活性的物质为选自3，4-双(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-(1-甲基吲哚-3-基)-4-(1-丙基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-氰基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-氨基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-羧基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-氨基甲酰基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-氨基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基-5-丙氧基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-羟基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基-5-苯基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-氨基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基-5-苯基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-羟基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基-5-甲氧基羰基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-羟基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基-5-硝基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-(1-甲基吲哚-3-基)-4-[1-(3-羟基丙基)-5-硝基吲哚-3-基]-1H-吡咯-2，5-二酮、3-(2-氯苯基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-(2，4-二氯苯基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-(2-氯苯基)-4-[1-(3-羟基丙基)吲哚-3-基]-1H-吡咯-2，5-二酮、4-[1-(3-氨基丙基)吲哚-3-基]-3-(2-氯苯基)-1H-吡咯-2，5-二酮以及 中的化合物或其药理学上允许的盐。
(28)上述(20)的神经元再生促进剂，其中，抑制GSK-3的物质为由式(IV) [式中，A为通过单键或双键于右侧键合的氧或硫；R10选自氢原子、芳基、低级脂肪族取代基、特别是烷基或低级烷基酯；R11～R14分别选自烷氧基、氨基、酰基、脂肪族取代基、特别是烷基、链烯基和炔基取代基、脂肪族醇，特别是烷基醇、脂肪族腈、特别是烷基腈、氰基、硝基、羧基、卤素、氢原子、羟基、亚氨基以及α，β不饱和酮；R15～R18分别选自脂肪族取代基、特别是烷基、链烯基和炔基取代基、特别是低级脂肪族取代基、脂肪族醇、特别是烷基醇、烷氧基、酰基、氰基、硝基、环氧基、卤代烷基、卤素、氢原子以及羟基；R19选自脂肪族的基团、特别是低级烷基、脂肪族醇、特别是烷基醇、羧酸、以及氢]表示的化合物或其药理学上允许的盐。
(29)上述(20)的神经元再生促进剂，其中，抑制GSK-3的物质为选自7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氯-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、11-氯-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、10-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、8-溴-6，11-二氢-噻吩并[3′，2′2，3氮杂并[4，5-b]吲哚-5(4H)-酮、9-溴-7，12-二氢-4-甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-4-羟基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-4-甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2，3-二甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2，3-二羟基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-2，3-二甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-2，3-二甲氧基-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-溴-7，12-二氢-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-硫酮、9-溴-5，12-双-(叔丁氧基羰基)-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-12-(叔丁氧基羰基)-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-5，7-双-(叔丁氧基羰基)-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-5，7，12-三-(叔丁氧基羰基)-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-5-甲氧基羰基甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-12-甲氧基羰基甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-12-(2-羟基乙基)-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2，9-二溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、8，10-二氯-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氰基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-5-甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、5-苄基-9-溴-7，12-二氢-5-甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-12-甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-12-乙基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-12-(2-丙烯基)-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-9-甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-9-甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氟-7，12-二氢-12-(2-丙烯基)-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、11-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2-(甲基亚氨基胺)-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2-(羧酸)-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-10-羟基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-11-羟基甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-4-羟基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-2，3-二羟基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2，3-二甲氧基-9-硝基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氰基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2，3-二甲氧基-9-氰基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-硝基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、3-(6-氧代-9-三氟甲基-5，6，7，12-四氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-2-基)丙腈、2-溴-9-硝基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、3-(6-氧代-9-三氟甲基-5，6，7，12-四氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-2-基)丙烯腈、2-(3-羟基-1-丙炔基)-9-三氟甲基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-碘-9-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-(3-氧代-1-丁烯基)-9-三氟甲基-7，12-四氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、8-氯-6，11-二氢-噻吩并[3′，2′2，3]氮杂并[4，5-b]吲哚-5(4H)-酮、2-碘-9-三氟甲基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-吡啶并[3′，2′4，5]吡咯并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、11-甲基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-[2-(1-羟基环己基)乙炔基]-9-三氟甲基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-氰基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-碘-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、11-乙基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、8-甲基-6，11-二氢-噻吩并[3′，2′2，3]氮杂并[4，5-b]吲哚-5(4H)-酮以及3-(6-氧代-9-三氟甲基-5，6，7，12-四氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-2-基)丙烯酸甲酯中的化合物或其药理学上允许的盐。
(30)上述(20)的神经元再生促进剂，其中，抑制GSK-3的物质为选自9-氰基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2，3-二甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-溴-7，12-二氢-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-2，3-二甲氧基-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2，9-二溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氯-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、8-溴-6，11-二氢-噻吩并[3′，2′2，3]氮杂并[4，5-b]吲哚-5(4H)-酮、7，12-二氢-9-甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、10-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、11-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、11-氯-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氟-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-甲基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-硫酮、8，10-二氯-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-12-(2-羟基乙基)-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2，3-二羟基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-2，3-二甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-12-甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-5-甲氧基羰基甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮以及7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮中的化合物或其药理学上允许的盐。
(31)上述(20)的神经元再生促进剂，其中，抑制GSK-3的物质为选自9-氰基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2，3-二甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-溴-7，12-二氢-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-2，3-二甲氧基-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2，9-二溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氯-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、8-溴-6，11-二氢-噻吩并[3′，2′2，3]氮杂并[4，5-b]吲哚-5(4H)-酮以及7，12-二氢-9-甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮中的化合物或其药理学上允许的盐。
(32)上述(20)的神经元再生促进剂，其中，抑制GSK-3的物质为9-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮或其药理学上允许的盐。
(33)上述(20)的神经元再生促进剂，其中，抑制GSK-3的物质为由式(V)表示的化合物或其药理学上允许的盐 [式中，可以相同或不同的R20和R25表示氢原子；卤素；羟基；亚甲基羟基；直链或支链的C1～C18烷基或烷氧基或亚甲基烷氧基；根据需要含有1个或多个杂原子的、具有3～7个碳原子的环烷基；根据需要具有1个或多个杂原子的取代或非取代的芳基、芳烷基或芳氧基；各自相互独立地在直链或支链的烷基中具有1～6个碳原子的单、二或三烷基甲硅烷基；各自相互独立地具有取代或非取代芳基的单-、二或三芳基甲硅烷基；三氟甲基；-COM；-COOM；或者-CH2COOM基(此处，M表示氢原子、如有必要被羟基和/或氨基的1个或多个取代的直链或支链的C1～C18-烷基、或者如有必要具有1个或多个杂原子、可以被1个或多个卤素、烷基或烷氧基取代的芳基)；-NR30R31基(此处，可以相同或不同的R30和R31表示氢原子、在必要时还被1个或多个羟基和/或氨基取代的C1～C18直链或支链烷基、取代或非取代的、如有必要含有1个或多个杂原子的芳基)；酰基；-CH2-NR30R31亚甲基氨基(此处，R30和R31具有前述的含义)；如有必要可在苯环上具有1个或多个杂原子的苄基；如有必要具有1个或多个杂原子、具有3～7个碳原子的亚甲基环烷基；作为酰胺基的、与氮原子键合的生理性氨基酸基；糖苷选自单糖或二糖的O-糖苷或N-糖苷；或者亚甲基磺酸酯基；可以相同或不同的R21、R22、R23、R24、R26、R27、R28和R29表示氢原子；卤素；羟基；亚硝基；硝基；烷氧基；如有必要被1个或多个羟基和/或氨基取代的直链或支链的C1～C18烷基；如有必要具有1个或多个杂原子的取代或非取代的芳基；如有必要具有1个或多个杂原子的取代或非取代芳烷基；如有必要具有1个或多个杂原子的取代或非取代芳氧基；如有必要具有1个或多个杂原子的取代或非取代亚甲基芳氧基；如有必要含有1个或多个杂原子、具有3～7个碳原子的环烷基；如有必要含有1个或多个杂原子、具有3～7个碳原子的亚甲基环烷基；三氟甲基；-COM；-COOM；或者CH2COOM基(此处，M表示氢原子、必要时也可以是被1个或多个羟基和/或氨基取代的直链或支链的C1～C18烷基、或者如有必要具有1个或多个杂原子、可以被1个或多个卤素原子、烷基或烷氧基取代的芳基)；-NR30R31基(此处，可以相同或不同的R30和R31表示氢原子、必要时还可是被1个或多个羟基和/或氨基取代的直链或支链C1～C18烷基、取代或非取代的、如有必要含有1个或多个杂原子的芳基、酰基，或者形成一种具有氮原子，如有必要含有1个或多个的杂原子并具有3～7个碳原子的环烷基的一部分)；-CONR30R31基(此处，R30和R31具有前述的含义)；羟基氨基；磷酸酯基；膦酸酯基；硫酸酯基；磺酸酯基；磺酰胺基；-SO2NR30R31基(此处，R30和R31具有前述的含义)；-N＝N-R32偶氮基(此处，R32表示在必要时被1个或多个羧基、磷酰基或磺酸酯基取代的芳香族基或者糖苷选自单糖或二糖的O-糖苷或N-糖苷基)；R20和R24以及R25和R29一起形成相互独立的如有必要可各自具有被取代的1～4个CH2基的环；可以相同或不同的Y和z表示氧；硫；硒；碲的原子；NR33基(此处，R33表示氢原子、如有必要被1个或多个羧基、磷酰基或磺酸酯基取代的直链或支链C1～C18烷基、如有必要含有1个或多个杂原子的取代或非取代的芳基、芳烷基或磺酸酯基)；或者-NOR33(此处，R33基具有前述的含义)]。
(34)上述(20)的神经元再生促进剂，其中，抑制GSK-3的物质为选自靛玉红、5-碘-靛玉红、5-溴-靛玉红、5-氯-靛玉红、5-氟-靛玉红、5-甲基-靛玉红、5-硝基-靛玉红、5-SO3H-靛玉红、5’-溴-靛玉红、5-5’-二溴-靛玉红以及5’-溴-靛玉红5-磺酸中的化合物或其药理学上允许的盐。
(35)上述(20)的神经元再生促进剂，其中，抑制GSK-3的物质为选自靛玉红-3’-单肟、5-碘-靛玉红-3’-单肟以及5-SO3Na-靛玉红-3’-单肟中的化合物或其药理学上允许的盐。
(36)上述(20)的神经元再生促进剂，其中，抑制GSK-3的物质为靛玉红-3’-单肟或其药理学上允许的盐。
(37)在上述(20)～(36)任一项的神经元再生促进剂的存在下，培养神经干细胞得到的神经元。
(38)一种神经元的制造方法，其特征在于，在上述(20)～(36)任一项的神经元再生促进剂的存在下，培养神经干细胞使神经元再生，由培养物中收集神经元。
(39)一种神经再生方法，其特征在于，投与抑制GSK-3的物质。
(40)抑制GSK-3的物质在神经再生药制造中的应用。
(41)抑制GSK-3的物质在神经干细胞的神经元再生促进剂的制造中的应用。
具体实施例方式
1.本发明的神经再生药以及神经干细胞的神经元再生促进剂中所含有的具有能抑制GSK-3活性的物质作为抑制GSK-3活性的物质，只要是抑制GSK-3的活性的化合物即可，例如，可列举出锂、双吲哚基马来酰亚胺衍生物、3-芳基-4-吲哚基马来酰亚胺衍生物、吲哚并咔唑衍生物、吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮衍生物、靛玉红衍生物等。
作为双吲哚基马来酰亚胺衍生物、3-芳基-4-吲哚基马来酰亚胺衍生物、吲哚并咔唑衍生物，具体可列举出例如由式(I)～(III)表示的化合物。其中，优选3，4-双(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-(1-甲基吲哚-3-基)-4-(1-丙基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-氰基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-氨基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-羧基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-氨基甲酰基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-氨基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基-5-丙氧基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-羟基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基-5-苯基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-氨基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基-5-苯基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-羟基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基-5-甲氧基羰基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-羟基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基-5-硝基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-(1-甲基吲哚-3-基)-4-[1-(3-羟基丙基)-5-硝基吲哚-3-基]-1H-吡咯-2，5-二酮、3-(2-氯苯基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-(2，4-二氯苯基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-(2-氯苯基)-4-[1-(3-羟基丙基)吲哚-3-基]-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-氨基丙基)吲哚-3-基]-4-(2-氯苯基)-1H-吡咯-2，5-二酮以及 等。
作为吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮衍生物，具体可列举出例如由式(IV)表示的化合物。其中，优选7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氯-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、11-氯-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、10-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、8-溴-6，11-二氢-噻吩并[3′，2′2，3氮杂并[4，5-b]吲哚-5(4H)-酮、9-溴-7，12-二氢-4-甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-4-羟基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-4-甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2，3-二甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2，3-二羟基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-2，3-二甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-2，3-二甲氧基-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-溴-7，12-二氢-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-硫酮、9-溴-5，12-双-(叔丁氧基羰基)-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-12-(叔丁氧基羰基)-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-5，7-双-(叔丁氧基羰基)-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-5，7，12-三-(叔丁氧基羰基)-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-5-甲氧基羰基甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-12-甲氧基羰基甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-12-(2-羟基乙基)-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2，9-二溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、8，10-二氯-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氰基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-5-甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、5-苄基-9-溴-7，12-二氢-5-甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-12-甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-12-乙基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-12-(2-丙烯基)-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-9-甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-9-甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氟-7，12-二氢-12-(2-丙烯基)-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、11-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2-(甲基亚氨基胺)-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2-(羧酸)-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-10-羟基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-11-羟基甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-4-羟基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-2，3-二羟基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2，3-二甲氧基-9-硝基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氰基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2，3-二甲氧基-9-氰基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-硝基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、3-(6-氧代-9-三氟甲基-5，6，7，12-四氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-2-基)丙腈、2-溴-9-硝基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、3-(6-氧代-9-三氟甲基-5，6，7，12-四氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-2-基)丙烯腈、2-(3-羟基-1-丙炔基)-9-三氟甲基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-碘-9-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-(3-氧代-1-丁烯基)-9-三氟甲基-7，12-四氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、8-氯-6，11-二氢-噻吩并[3′，2′2，3]氮杂并[4，5-b]吲哚-5(4H)-酮、2-碘-9-三氟甲基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-吡啶并[3′，2′4，5]吡咯并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、11-甲基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-[2-(1-羟基环己基)乙炔基]-9-三氟甲基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-氰基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-碘-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、11-乙基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、8-甲基-6，11-二氢-噻吩并[3′，2′2，3]氮杂并[4，5-b]吲哚-5(4H)-酮以及3-(6-氧代-9-三氟甲基-5，6，7，12-四氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-2-基)丙烯酸甲酯等。
作为靛玉红衍生物，具体地可列举出例如由式(V)表示的化合物。其中，优选靛玉红、5-碘-靛玉红、5-溴-靛玉红、5-氯-靛玉红、5-氟-靛玉红、5-甲基-靛玉红、5-硝基-靛玉红、5-SO3H-靛玉红、5’-溴-靛玉红、5-5’-二溴-靛玉红、5’-溴-靛玉红5-磺酸、靛玉红-3’-单肟、5-碘-靛玉红-3’-单肟以及5-SO3Na-靛玉红-3’-单肟等。
以下，将由式(I)～(V)表示的化合物分别称为化合物(I)～(V)。对于其他的式编号的化合物也是同样的。
在化合物(I)～(III)和化合物(Ia)～(IIIa)的各基团的定义中，可列举出以下的例示。
(i)作为低级烷基、低级烷氧基和低级烷氧基羰基的低级烷基部分，可列举出例如直链或支链的碳原子数1～10的烷基，具体地可列举出甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、己基、庚基、辛基、6-甲基庚基、异辛基、壬基、癸基等。
(ii)作为环烷基，可列举出例如碳原子数3～8的环烷基，具体地可列举出环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基等。
(iii)作为低级链烯基，可列举出例如直链、支链或环状的碳原子数2～8的链烯基，具体地可列举出乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基、环己烯基、2，6-辛二烯基(octadienyl)等。
(iv)单或二低级烷基氨基的低级烷基部分，与前述低级烷基的含义相同，二低级烷基氨基的2个低级烷基部分可以相同或不同。
(v)卤素表示氟、氯、溴和碘的各原子。
(vi)作为芳基，可列举出例如碳原子数6～14的单环式、二环式或三环式的芳基，具体地可列举出苯基、萘基、茚基、anthranil等。
(vii)作为取代低级烷基、取代低级链烯基、取代低级烷氧基和取代低级烷氧基羰基中的取代基，可以相同或不同，可列举出例如取代数1～3的、卤素、氰基、硝基、羟基、羧基、氨基甲酰基、氨基、单或二低级烷基氨基、环烷基、低级烷酰基、低级烷氧基、芳基、取代芳基、芳氧基、取代芳氧基、低级烷氧基羰基、低级烷酰氧基等。
此处所示的卤素、单或二低级烷基氨基、环烷基、芳基和芳氧基的芳基部分、以及低级烷氧基、低级烷氧基羰基、低级烷酰基和低级烷酰氧基的低级烷基部分，分别与前述卤素(v)、单或二低级烷基氨基(iv)、环烷基(ii)、芳基(vi)和低级烷基(i)的含义相同。
另外，作为此处所示的取代芳基和取代芳氧基中的取代基，可以相同或不同，可列举出例如取代数1～3的低级烷基、低级烷氧基、低级烷氧基羰基、卤素、氰基、硝基、羟基、羧基、氨基等。
此处，所示的卤素以及低级烷基、低级烷氧基和低级烷氧基羰基的低级烷基部分，分别与前述卤素(v)和低级烷基(i)的含义相同。
(viii)作为取代芳基和取代环烷基中的取代基，除了按前述取代低级烷基中的取代基(vii)的定义所列举的基团以外，还可列举出例如低级烷基、取代低级烷基等。
此处，作为所示的取代低级烷基中的取代基，可以相同或不同，可列举出例如取代数1～3的低级烷氧基、低级烷氧基羰基、卤素、氰基、硝基、羟基、羧基、氨基等。
此处，所示的卤素以及低级烷氧基和低级烷氧基羰基的低级烷基部分，分别与前述卤素(v)和低级烷基(i)的含义相同。
另外，此处所示的低级烷基与前述低级烷基(i)的含义相同。
作为双吲哚基马来酰亚胺衍生物、3-芳基-4-吲哚基马来酰亚胺衍生物、吲哚并咔唑衍生物、吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮衍生物、靛玉红衍生物、化合物(I)～(V)以及化合物(Ia)～(IIIa)的药理学上允许的盐，优选无毒性的水溶性衍生物，可列举出例如盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐等的无机酸盐、乙酸盐、马来酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐等的有机酸盐，作为可药用的金属盐，可列举出钠盐、钾盐等的碱金属盐；镁盐、钙盐等的碱土类金属盐；铝盐、锌盐等，作为可药用的铵盐，可列举出铵、四甲基铵等的盐，作为可药用的有机胺加成盐，可列举出吗啉、哌啶等的加成盐等。
双吲哚基马来酰亚胺衍生物、3-芳基-4-吲哚基马来酰亚胺衍生物、吲哚并咔唑衍生物、吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮衍生物、靛玉红衍生物、化合物(I)～(V)以及化合物(Ia)～(IIIa)，可以按照EP 470490、WO 93/18766、WO 93/18765、EP 397060、WO98/11105、WO 98/11103、WO 98/11102、WO 98/04552、WO 98/04551、DE 4243321、DE 4005970、DE 4217964、DE 4005970、DE 3914764、WO 96/04906、WO 95/07910、DE 42179464、US 5856517、US 5891901、WO 99/42100、EP 328026、EP 384349、EP 540956、DE 4005969、EP508792、WO 99/65910、WO 01/037819等中记载的方法或者以这些方法为基准的方法来制备。
另外，也可以使用短的干扰RNA(siRNA)作为抑制GSK-3活性的物质。与GSK-3对应的siRNA通过其RNAi活性可以抑制GSK-3的表达，其结果可抑制GSK-3的活性。通过将siRNA本身导入到细胞内可以抑制GSK-3的活性，除此之外，通过将能够表达siRNA的载体导入到细胞内也可以抑制GSK-3的活性。
为了制备对人的GSK-3有效的siRNA，选择高效的靶序列是重要的。已知有多种用于确定序列的算法，但是，通过选择尽可能多地满足下列各条件的序列，就可以选择出效果更高的靶序列，所说的条件是，例如，在人的GSK-3的信使RNA序列中任意的19序列中，鸟嘌呤或胞嘧啶的含量为30～52％，在3’末端的5个碱基中，有3个以上的碱基是腺嘌呤或尿苷，其解链温度小于20℃，第3个碱基是腺嘌呤，第10个碱基是尿苷，第13个碱基是甘氨酸以外的碱基，第19个碱基是腺嘌呤，第19个碱基不是甘氨酸和胞嘧啶。通过把在该靶序列寡聚RNA3’末端添加2个碱基核苷酸而形成的正义链寡聚RNA和、在与该靶序列互补的寡聚RNA序列的3’末端上添加2个碱基核苷酸而形成的反义链寡聚RNA这两者杂交，可以制得对人的GSK-3有效的siRNA。siRNA的合成、纯化、杂交可以按各种方法实施，例如，可以使用沉默子siRNA构建试剂盒(Ambion公司制)，按照其附带的说明书来实施。另外，用于表达siRNA的载体可以是各种质粒载体或者逆转录病毒载体、慢病毒载体、腺病毒载体等各种病毒的载体，这些载体可以通过例如把按照上述方法选择出的靶序列低聚DNA，根据附带的说明书组装到piGENE hU6载体(iGENE公司制)中进行制备。用于将siRNA或能够表达siRNA的载体导入到细胞内的方法可以是各种各样的方法，但是可以通过使用例如Nucleofector Device(Amaxa公司制)，按照附带的说明书来实施。
2.寻找抑制GSK-3活性的物质的方法作为寻找抑制GSK-3活性的物质的方法，可列举出下述方法[i]在被检验物质存在的条件下，使GSK-3、被GSK-3磷酸化的肽和ATP共存的场合；[ii]在没有被检验物质存在的条件下，使上述[i]的GSK-3、被GSK-3磷酸化的肽和ATP共存的场合；[iii]测定被磷酸化的肽的量，并进行比较；[iv]与没有被检验物质存在的条件下相比，选择那些在被检验物质存在下被磷酸化的肽的量较少的物质。
对被检验物质没有特殊限定，例如可列举出肽、蛋白质、细胞提取液或由该提取液得到的纯化物、细胞培养上清液或由该上清液得到的纯化物、血清等的生物体试样或由该生物体试样得到的纯化物、微生物的菌体提取液或由该提取液得到的纯化物、微生物培养上清液或由该上清液得到的纯化物、化合物、使用综合化学法合成的化合物等。
作为GSK-3，只要是具有GSK-3活性的物质即可，此外无特殊限定，但优选的是由哺乳液，更优选是由大鼠、小鼠、猴子或人得到的GSK-3α或β，具体可列举出那些具有在序列编号1中示出的氨基酸序列的蛋白质。
可以通过把具有GSK-3编码基因的表达载体导入到动物细胞中，按照培养该动物细胞的方法等获得GSK-3。GSK-3编码基因只要是能编码GSK-3的基因即可，此外无特殊限定，但优选是由哺乳类，更优选是由大鼠、小鼠、猴子或人得来的能够编码GSK-3α或β的基因，具体地可列举出那些具有序列编号2所示碱基序列的基因。
作为被GSK-3磷酸化的肽，可列举出糖原合成酶，而作为糖原合成酶的例子，可列举出那些具有序列编号3所示氨基酸序列的肽。
可以通过把具有编码糖原合成酶基因的表达载体导入到动物细胞中，然后培养该动物细胞的方法等获得糖原合成酶。编码糖原合成酶的基因只要是编码糖原合成酶的基因即可，此外无特殊限定，但优选编码来自哺乳类，更优选编码来自大鼠、小鼠、猴子或人的糖原合成酶的基因，具体地可列举出那些具有序列编号4所示碱基序列的基因。
另外，在与蛋白质的翻译有关的真核转录启起因子2B(eIF2B)蛋白质的氨基酸序列中具有被GSK-3磷酸化的部位，具有上述氨基酸序列的肽也可以作为被GSK-3磷酸化的肽使用，具体地可列举出那些具有序列编号5所示氨基酸序列的肽。
作为测定GSK-3活性的方法，例如可列举出下述方法，即使用[γ-33P]ATP作为提供磷酸的ATP，在存在被检验物质或者在不存在被检验物质的条件下，利用GSK-3使糖原合成酶或者含有该酶的磷酸化部位的肽发生磷酸化反应，然后使用液体闪烁计数器等测定掺入到该酶或肽中的33P的量。
3.神经再生药神经再生药是指那些通过直接作用于人或动物脑内的神经干细胞促进神经元再生、具有能使脑内神经元增加的作用的药剂。
该神经再生药可以作为神经变性或伴随损伤引起的神经疾病的治疗药使用。
作为该神经疾病，可列举出帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、唐氏症、脑血管障碍、脑中风，脊髓损伤、亨丁顿氏舞蹈病、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、癫痫、焦虑性障碍、综合失调症、抑郁症和躁郁症等。
抑制GSK-3活性的物质或其药理学上允许的盐可以作为神经再生药直接单独地给药，不过希望将其作为常规的各种药剂提供使用。而且这些药剂可以用于动物或人。
本发明的神经再生药可以单独的形式，或者作为与用于治疗的、任意其他的有效成分的混合物的形式含有抑制GSK-3活性的物质或其药理学上允许的盐作为活性成分。另外，这些药剂可以通过将活性成分与可药用的一种或更多的载体一起混合，按照制剂学技术领域公知的任意方法来制备。
作为给药途径，希望使用在治疗时最有效的途径，例如可列举出口服或者静脉内给药等非口服途径。
作为给药剂型，可列举出片剂、散剂、颗粒剂、糖浆剂、注射剂等。
作为适合于口服给药的例如糖浆剂之类的液体制剂，可以通过使用下述物质来制备，所说物质包括水、蔗糖、山梨糖醇、果糖等的糖类；聚乙二醇、丙二醇等二醇类；芝麻油、橄榄油、大豆油等的油类；对羟基苯甲酸酯类等防腐剂；草莓香精、薄荷等香料类等。另外，片剂、散剂和颗粒剂等可以通过使用下述物质来制备，所说物质包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露糖醇等赋形剂；淀粉、海藻酸钠等崩解剂；硬脂酸镁、滑石等润滑剂；聚乙烯醇、羟丙基纤维素、明胶等粘合剂；脂肪酸酯等表面活性剂；甘油等增塑剂等。
适合于非口服给药的制剂优选使用含有与接受者的血液等渗的活性化合物的灭菌水性剂来制备。例如，在注射剂的场合，可以使用由盐溶液、葡萄糖溶液或者盐水与葡萄糖溶液的混合物组成的载体等来配制注射用的溶液。
另外，即使在非口服剂的场合，也可以添加选自在描述口服剂时例示的稀释剂、防腐剂、香料类、赋形剂、崩解剂、润滑剂、粘合剂、表面活性剂、增塑剂等之中的一种或多种辅助成分。
抑制GSK-3活性的物质或其药理学上允许的盐的给药量和给药次数可根据给药的剂型、患者的年龄、体重、应予治疗的症状的性质和严重程度的不同而异，但是在通常口服的场合，按照成人每人0.01mg～1g，优选0.05～50mg的给药量，每天一次至数次给药。在静脉内给药等的非口服给药的场合，按照成人每人0.001～100mg，优选0.01～10mg的给药量，每天一次至数次给药。
4.神经干细胞的神经元再生促进剂神经干细胞的神经元再生促进剂是指那些在体内或在体外与神经干细胞接触时能够促进该神经干细胞的神经元再生的药剂。
神经干细胞只要是神经干细胞即可，此外无特殊限定，但优选是脑的成年神经干细胞。
作为脑可以是任一种动物的脑，但优选是哺乳动物的脑，更优选是大鼠、小鼠、猴子、人等的脑。
抑制GSK-3活性的物质或其药理学上允许的盐也可以单独地直接作为神经干细胞的神经元再生促进剂使用，但是希望作为通常的各种药剂提供使用。另外，这些药剂可以用于动物或人。
本发明的神经干细胞的神经元再生促进剂以抑制GSK-3活性的物质或其药理学上允许的盐作为活性成分，可以单独含有该活性成分或者是其与其他任意用于治疗的有效成分的混合物。这些药剂可以按照与上述的神经再生药的制剂同样的方法来制备，也可以按照同样的给药方法来给药。
本发明的神经干细胞的神经元再生促进剂可以用于神经元的制造方法中，该方法的特征在于，通过使上述的神经元再生促进剂在体外与神经干细胞接触，并培养该神经细胞，使神经元再生，然后从培养物中收集该神经元。当在体外使用本发明的神经干细胞的神经元再生促进剂的场合，优选将抑制GSK-3活性的物质或其药理学上允许的盐溶解于能够溶解该物质或该盐的溶液中之后，提供使用。作为该溶液，可列举出水、DMSO等。
5.在存在本发明的神经元再生促进剂的情况下，通过培养神经干细胞获得的神经元在存在本发明的神经元再生促进剂的情况下，通过培养动物的神经干细胞可以有效地促进该神经干细胞的神经元再生。动物的神经干细胞可以是任一种动物的神经干细胞，优选是由哺乳动物，更优选是由大鼠、小鼠、猴子、人得来的神经干细胞。作为神经干细胞，可列举出由大脑得来的神经干细胞。神经干细胞可以是由任何周龄或任何年龄的动物得来的细胞，但优选是成年的神经干细胞。
作为由动物取得成年神经干细胞的方法，可列举出下述方法，即，按照J.Neuroscinece，19，8487(1999)和Genes & Develop.，10，3129(1996)记载的方法，通过外科手术摘出成年动物的脑并将其制备成脑细胞粗提取液，然后从该粗提取液中富集成年干细胞。
另外，作为从人取得成年神经干细胞的方法，可列举出下述方法，即，按照Experimental Cell Research，289，378(2003)记载的方法，通过活组织检查从神经疾病患者的侧脑室壁采集组织并将其配制成脑细胞粗提取液，然后从该提取液中富集得到成年干细胞。
在本发明的神经元再生促进剂存在下培养成年神经干细胞时，相对于1.8×105个/cm2左右的成年神经干细胞，优选使该神经元再生促进剂以100nmol/l～100μmol/l的浓度起作用。但是，锂或其药理学上允许的盐优选以100μmol/l～10mmol/l的浓度起作用。通过使成年神经干细胞与本发明的神经元再生促进剂接触，在37℃下和5％CO2气体中，于4～14天内每3天一次地更换全部或部分培养基后进行静置培养，这样可以促进神经元的再生。
作为用于培养成年神经干细胞的培养基，只要是不妨碍促进神经元再生的培养基，任一种培养基都可使用，但优选使用含有1％的N2补充剂(Invitrogen公司制)的DMEM/F12培养基(Invitrogen公司制)等。
按上述培养方法获得的神经元可从培养基中回收，通过外科手术将其移植到神经疾病患者的障碍部位，即可用于治疗该神经疾病。作为该神经疾病，可列举出帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、唐氏症、脑血管障碍、脑中风，脊髓损伤、亨丁顿氏舞蹈病、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、癫痫、焦虑性障碍、综合失调症、抑郁症和躁郁症等。
6.本发明的神经再生药的评价法本发明的神经再生药可以在体内使神经元再生，可以按下述方法确认对神经疾病的治疗。
将上述本发明的神经再生药向大鼠或猴子等的实验动物给药。实验动物可以是没有受到伤害的健康动物，不过通过使动物受到海马局部缺血损伤，可以更有效地观察神经元的再生[Cell，110，429(2002)]，因此，优选使用通过局部缺血、供给6-羟基多巴胺(6-OHDA)或红藻氨酸等的方法而使其脑受到损伤的动物。作为给药途径，可列举出口服、口腔内、皮下、肌肉内、静脉内或脑室内等的给药途径。作为给药量和给药方法，例如，相对于每1kg体重，按照每天一次至数次供给100μg～10mg，优选500μg～500ng的药物。在静脉内给药等的非口服给药的场合，相对于每1kg体重，按照每天一次至数次供给10μg～1mg，优选100μg～100ng的药物。
再生的神经元可以按以下的方法检出。
在向实验动物给药的同时、给药前或给药后，将可以表达能标记细胞的基因(例如能够标记增殖细胞的溴脱氧尿苷(BrdU)、绿荧光蛋白(GFP)或β-半乳糖苷酶等)的逆转录病毒载体投与到该实验动物上，然后用该物质按每天给药一次至数次，饲养该实验动物10～20天。然后，摘出该实验动物的脑，制成脑的冷冻切片，用荧光显微镜观察，例如，在使用BrdU作为标记增殖细胞的试剂时，将每单位面积的BrdU阳性细胞数与作为神经元标记物的Tuj1阳性细胞数相对BrdU阳性细胞数的比例与阴性对照进行比较。
按照以上的方法，可以对本发明的神经再生药的神经元再生促进作用和神经疾病治疗效果进行评价。
7.本发明的神经元再生促进剂的评价法使用以聚鸟氨酸和层粘蛋白包被的12孔培养皿，向其中加入1ml含有1％的N2补充剂(Invitrogen公司制)和20ng/mlFGF-2(PeproTech公司制)的DMEM/F12培养基，然后向培养皿的每一个孔中接种1.8×105个按参考例2记载的方法取得的ANSC-7细胞，将其培养一夜。然后使用不含FGF2的0.5％胎牛血清和1％N2补充剂的DMEM/F12培养基(Invitrogen公司制。下文称为分化诱导培养基)替换全部培养液以诱导其分化。此时，分别按1/1000的体积添加以PBS(Invitrogen公司制)或DMSO按照0.01mmol/l～5mol/l的范围梯度稀释的能抑制GSK-3活性的物质。然后添加相同体积的PBS或DMSO作为阴性对照。
使用加入了能抑制GSK-3活性的物质的分化诱导培养基，按每3天一次更换培养液，共计进行6天的分化诱导后，换成15％中性缓冲福尔马林液(和光纯药工业)，固定20分钟。然后，用含有0.3％TritonX-100(Nacalai Tesque公司制)的PBS洗涤3次，每次5分钟。接着，用以PBS稀释的10％胎山羊血清(DAKO公司制)封闭细胞2小时后，使其与以PBS稀释1000倍的小鼠抗-Tuj1(β-微管蛋白同型抗原III)一抗抗体(Sigma-Aldrich公司制)在4℃下反应16小时。然后使用含有0.3％TritonX-100的PBS洗涤3次，每次5分钟。
然而，使其与稀释1000倍的Alexa Fluor 488偶联的山羊抗小鼠IgG二抗抗体(Molecular Probes公司制)在室温下反应2小时。同时向其中添加双苯并亚胺H 33342荧光染料三盐酸化物(Calbiochem公司制，下文称为H33342)至其终浓度为1μg/ml，从而使核染色。在浸泡于PBS中之后，利用倒置荧光显微镜(Nikon公司制)观察，对处于每个2.44mm2面积内的Tuj1阳性神经元的数目进行计数。
下面举出与本发明的神经元再生促进剂的神经元再生促进作用有关的实验例。
实验例1氯化锂对神经元再生的促进(1)按照上述7的方法，在分化诱导ANSC-7细胞时，将氯化锂或氯化钠(二者皆为Nacalai Tesque公司制)溶解于PBS中使成为0.01、0.1、1、3mol/l浓度的溶液，按照培养液的1/1000的体积添加到含有ANSC-7细胞的培养基中，分化诱导后的第6天，分析其中的神经元数目。其结果，在氯化锂终浓度为0.01、0.1、1、3mmol/l的溶液中，Tuj1阳性神经元的数目分别为1.1、1.3、1.8、2.1倍(氯化锂浓度在1mmol/l以上时有明显差别)，也就是神经元数目随着氯化锂浓度的增加而增加。而且，与没有氯化锂的对照样品相比，氯化锂浓度为3mmol/l时的H33342阳性的总细胞数为原来的1.1倍，也就是没有明显的差别。上面的事实表明，氯化锂具有ANSC-7细胞的神经元再生促进作用。另外，对于作为阴性对照的氯化钠，当其终浓度为0.01、0.1、1、3mmol/l时，Tuj1阳性的神经元数目分别成为1.0、1.1、1.2、1.2倍，全部都没有明显的差别，因此可以认为，神经元再生数目的增加不是由于盐浓度或氯化物离子的效果而是由于锂的效果。
实验例2由氯化锂引起的神经元的再生促进(2)为了探明对于ANSC-7细胞的神经元再生促进作用是否是由于BDNF和Bc1-2的表达诱导而引起的，采用半定量RT-PCR方法分析锂是否能促进BDNF和Bc1-2的表达。
使用以多聚鸟氨酸和层粘蛋白包被过的6孔培养皿，向其中加入2ml含有1％的N2补充剂和20ng/ml的FGF-2的DMEM/F12培养基，然后向培养皿内的每一个孔中接种4.5×105个ANSC-7细胞共计接种7个孔，将其培养一夜。然后使用RNeasy mini试剂盒(QIAGEN公司制)并按照其附带的说明书从一个孔的细胞中得到总RNA。将其余6个孔的培养基全部更换为分化诱导培养基，进行诱导分化。向其中的2个孔中添加相当于培养基1/1000体积的3mol/l的氯化锂，向另外2个孔中添加相当于培养基1/1000体积的1mol/l的氯化锂。向余下的2个孔中添加相同体积的PBS作为对照。
从分化诱导开始过24小时后，从添加了各浓度的氯化锂的每一个孔中收集细胞，按照与上述同样的方法从该细胞中得到总RNA；从分化诱导开始经过6天后，从其余的细胞中得到总RNA。向上述得到的各5μg的总RNA中分别加入10μl的5×DNase缓冲剂、0.5μl的RNase抑制剂(40U/μl)、2.5μl的无Rnase的DNaseI(1U/μl)(以上皆为Promega公司制)，然后用无菌水将总体积补充至50μl。在37℃下反应30分钟后，用苯酚/氯仿进行处理，然后用乙醇沉淀。
向经过DNase处理的各1μg的总RNA中加入0.5μg/μloligo(dT)12-18引物1μl，用无菌水将总体积补充至12μl。在65℃下加热10分钟后，在冰上迅速降温，向其中加入4μl的5×合成缓冲剂(Invitrogen公司制)、1μl的10mmol/l dNTP mix、2μl的0.1mol/l DTT、1μl的200U/μl Superscript IIRT(Invitrogen公司制)，在42℃下反应50分钟。再在90℃下加热5分钟，然后在冰上放置10分钟。
接着加入1μl的RNaseH(2U/μl)(Invitrogen公司制)，在37℃下反应20分钟，用无菌水将总体积补充至200μl，从而制成cDNA。
同样地由大鼠的脑的总RNA制成cDNA，将其作为阳性对照用。向1μl的该cDNA中加入2μl的10μmol/l引物对、1μl的DMSO(Nacalai Tesque公司制)、2μl的10×ExTaq缓冲剂、1.6μl的dNTPmix、0.1μl的ExTaq(以上皆为TAKARABIO公司制)，使用PCR仪在94℃下处理1分钟后，将用于Bc1-2扩增的、在94℃下1分钟、60℃下1分钟、74℃下1分钟的循环PCR反复进行27个循环，将用于BDNF扩增的PCR反复进行35个循环，从而扩增出各cDNA片段。在进行Bc1-2扩增时，使用序列编号6和7所示碱基序列的合成DNA作为引物对；在进行BDNF扩增时，使用由序列编号8和9所示碱基序列的合成DNA作为引物对。
可以按下述方法检测扩增的DNA，即使用1.8％琼脂糖(NacalaiTesque公司制)凝胶进行电泳处理，并使用溴化乙锭(Nacalai Tesque公司制)染色后，用紫外检测器(东洋纺公司制)进行检测。在分化开始后的第24小时和第6天时，Bc1-2的条带强度不随氯化锂的浓度差而变化。不管氯化锂的浓度差如何，均没有发现BDNF的表达。
从以上的结果可以看出，氯化锂引起的神经元再生的促进活性不是通过Bc1-2和BDNF抑制细胞死亡的结果，而是由于氯化锂积极地促进神经元再生的结果。
实验例3氯化锂对神经元再生的促进(3)
为了探明由锂引起的神经元的再生促进作用究竟是由于抑制了细胞凋亡而引起再生细胞数增加的结果，还是由于积极地诱导神经元分化的结果，对由锂引起的抑制ANSC-7细胞凋亡的效果进行了分析。
按照上述7的方法，向含有ANSC-7细胞的培养基中添加氯化锂至其终浓度为3mmol/l，将其培养6天，使用原位细胞死亡检测试剂盒和荧光黄(Roche Diagnostics K，K.制)，并按照附带的说明书，使其与添加了氯化锂培养的ANSC-7细胞和作为对照的添加了PBS培养的ANSC-7细胞反应。使用倒置荧光显微镜(Nikon公司制)观察该细胞，对在2.44mm2面积内的凋亡细胞数进行计数。
其结果，凋亡的阳性细胞数因添加氯化锂成为原来的1.0倍，也就是没有变化，由此可以看出，氯化锂不能抑制ANSC-7细胞的凋亡。因此可以看出，由锂引起的神经元再生促进作用是积极地促进神经元再生的结果。
实验例4关于胰岛素和毛喉素与锂的神经元再生促进作用的拮抗作用对关于已知具有神经元再生促进作用的胰岛素和毛喉素(forskolin)与锂的神经元再生促进作用方面的拮抗作用进行了分析。
按照上述7的方法，在进行ANSC-7细胞的分化诱导时，向培养基中添加胰岛素至其在培养基中的浓度为5μg/ml或25μg/ml，同时向含有各浓度的胰岛素的培养基中添加氯化锂至其终浓度为0、1和3mmol/l，然后分化诱导6天。
其结果，与5μg/ml胰岛素共存时相比，由3mmol/l氯化锂引起的神经元的增加率在25μg/ml胰岛素共存时明显降低了0.70倍。由此可以看出，胰岛素与锂的作用是拮抗作用。
另外，按照与上述同样的方法，以毛喉素代替胰岛素添加到培养基中至其终浓度为0、1和5μmol/l，并算出在终浓度0或3mmol/l的氯化锂共存时的神经元增加率。
其结果，在没有氯化锂的条件下，当毛喉素的浓度为1和5μmol/l时，相应的由毛喉素引起的神经元的神经元增加率分别为1.9和2.2倍，与此相对照，当有3mmol/l的氯化锂共存时，该增加率分别为1.2和1.1倍，也就是基本上没有增加。由此可以看出，氯化锂和毛喉素在神经元再生促进作用方面是拮抗的。
作为锂的靶分子，已知有GSK-3、肌醇-1-磷酸酯酶或肌醇磷酸酯酶[Nature，417，292-295(2002)]，另外，已知胰岛素和毛喉素能间接地抑制GSK-3的活性[Mol.Cell.Biol.，19，4989-5000(1999)]。由于认为与锂、胰岛素和毛喉素的神经元再生促进作用相关的靶分子是共同的，因此，锂通过抑制GSK-3的活性而表现出神经干细胞的神经元再生促进作用。
实验例5GSK-3的选择抑制剂SB-216763的神经元再生促进作用把按照参考例1记载的方法合成的已知为GSK-3的选择抑制剂的SB-216763[Chem.Biol.，7，793-803(2000)]溶解于DMSO中至其浓度为0.1和0.33mmol/l，然后，按照上述7的方法，在分化诱导ANSC-7细胞时，将上述溶解后所获的溶液按3/1000的体积添加到含有ANSC-7的培养基中，测定在分化诱导后第6天的神经元数。
其结果，通过终浓度为0.3和1.0μmol/l的SB-216763的作用，使得Tuj1阳性的神经元数目分别成为原来的1.2倍和1.8倍，也就是随着SB-216763浓度的增加而明显地增加。因此，可以看出，通过具有选择性地抑制GSK-3活性的化合物可以促进神经元再生。
如上所述，具有选择性地抑制GSK-3活性的物质可以作为神经干细胞的神经元的再生促进剂，同时可以作为神经的再生治疗药使用。
实验例6GSK-3抑制剂9-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮(Kenpaullone)的神经元再生促进作用按照与实验例1所示同样的方法，将已知可作为GSK-3和cyclin依赖性激酶(下文称为CDK)的抑制剂的Kenpaullone[Biochem.J.，371，199-204(2003)，CALBIOCHEM公司制]溶解于DMSO中至其浓度为0.5、2和5mmol/l，将相当于培养液的1/1000体积的该DMSO溶液添加到含有ANSC-7细胞的培养基中，在分化诱导的第6天分析其中的Tuj1阳性神经元数目。作为阴性对照，添加同体积的DMSO。另外，同样地，将已知可作为CDK抑制剂的、但对GSK-3几乎没有抑制作用的Roscovitine[Biochem.J.，371，199-204(2003)，Sigma-Aldrich公司制]溶解于DMSO中至其浓度为2、5和10mmol/l，将相当于培养液的1/1000体积的该DMSO溶液添加到含有ANSC-7细胞的培养基中，在分化诱导的第6天分析其中的Tuj1阳性神经元数。
其结果，与阴性的对照相比，Tuj1阳性神经元数目，在Kenpaullone的终浓度为0.5μmol/l时成为原来的1.3倍，该终浓度为2μmol/l时成为原来的2.7倍，该终浓度为5μmol/l时成为原来的3.7倍，也就是该神经元数目随着Kenpaullone浓度的增加而明显地增加。另一方面，与阴性对照相比，Tuj1阳性神经元数目，在Roscovitine的终浓度为2μmol/l时成为原来的1.0倍，在该终浓度为5μmol/l时成为原来的1.2倍，在该终浓度为10μmol/l时成为原来的1.1倍，也就是均无明显的差别，观察不到由Roscovitine引起的Tuj1神经元数目的增加。因此可以看出，Kenpaullone具有神经元再生促进作用，并且该作用不是由于Kenpaullone对CDK的抑制活性而是由于对GSK-3抑制活性而产生的。
如上所述，不限定于锂和SB-216763，凡是具有抑制GSK-3的活性的化合物，均可成为神经干细胞的神经元再生促进剂，同时可以成为神经疾病的再生治疗用药物。
实验例7GSK-3β基因的高表达对神经元再生的抑制作用从阿尔茨海默氏病患者的脑内发现了GSK-3β的高表达[J.Neuropathol.Exp.Neurol.，56，70-78(1997)]，因此，为了探明阿尔茨海默氏病的发病原因与GSK-3β的关系，利用逆转录病毒载体研究了GSK-3β的高表达对成年神经干细胞的神经元分化的影响。
首先，使用由实验例2中记载的大鼠脑得来的cDNA作为模板，按照下述方法制备编码野生型大鼠GSK-3β基因的cDNA。向2.5μl的模板cDNA中加入3μl含有序列编号10和11的10μmol/l的引物对(Proligo公司制)、5μl的用于KOD-plus-10×PCR缓冲液、5μl的2mmol/l dNTPs、2μl的25mmol/l MgSO4、1μl的KOD-plus-DNA聚合酶(以上皆为东洋纺织公司制)和31.5μl的无菌水，使用PCR仪在94℃下保温2分钟后，将94℃下15秒钟、60℃下30秒钟、68℃下1分20秒的循环反复进行25个循环，从而使cDNA片段扩增。
另一方面，同样地按下述方法制备编码突变型大鼠GSK-3β基因的cDNA，该GSK-3β基因是由85号位上的赖氨酸残基突变为精氨酸残基而得来的，这种突变会导致GSK-3β的激酶活性丧失[Proc.Nat.Acad.Sci.USA，92，8498-8502(1995)]。
将2.5μl编码野生型大鼠GSK-3β基因的cDNA作为模板，使用含有序列编号10和12的引物对扩增突变型大鼠GSK-3β的5’末端侧部分长度的cDNA，并使用含有序列编号11和13的引物对扩增突变型大鼠GSK-3β的3’末端侧部分长度的cDNA。将各的部分长度的cDNA的混合物作为模板，使用含有序列编号10和11的引物对扩增突变型大鼠GSK3β的全长cDNA。
将野生型和突变型各自的扩增反应液用苯酚/氯仿处理后，向其中加入乙醇使其沉淀，然后使用QIA快速PCR纯化试剂盒(QIAGEN公司制)并根据附带的说明书进行纯化。
接着，向10μg的pCLNCX质粒载体(IMGENEX公司制)中加入10μl的10×M缓冲液和5μl的HindIII(TAKARABIO公司制)，加入无菌水补充至100μl，在37℃下反应12小时。将反应液用苯酚/氯仿处理后，向其中加入乙醇以使DNA沉淀，然后将其溶解于32μl的无菌水中。向该DNA溶液中加入4μl的10×Blunting缓冲液、4μl的KOD DNA聚合酶，在72℃下反应2分钟平化末端。将反应液用苯酚/氯仿处理后，向其中加入乙醇以使DNA沉淀，将其溶解于43μl的无菌水中，然后向其中加入5μl的10×碱性磷酸酶缓冲液和2μl的碱性磷酸酶(以上皆为TAKARABIO公司制)，在65℃下反应30分钟。将反应液用苯酚/氯仿处理后，向其中加入乙醇以使DNA沉淀，然后将其溶解于无菌水中。
将该切断的pCLNCX质粒载体3μg与按上述方法制备的3μg编码野生型或突变型的大鼠GSK-3β基因的cDNA混合，向其中加入无菌水以补充至4μ1，再加入4μl的ligation high(东洋纺织公司制)，在16℃下反应12小时。将该产物转移到E.coliDH5α感受态细胞(TAKARABIO公司制)中。按照常规方法用液体LB培养基培养对氨苄青霉素具有耐药性的菌落，使用Endofree Plasmid Maxi试剂盒(QIAGEN公司制)并根据附带的说明书制备pCLNC-GSK3β质粒DNA和pCLNC-GSK3β(K85R)质粒DNA。
然后，按照下述方法制备病毒载体，并分析与ANSC-7细胞的神经元分化有关的功能。首先，将15μg的pCLNC-GSK3β、pCLNC-GSK3β(K85R)或者阴性对照pCLNCX质粒载体DNA分别与5μg的pMD.G质粒载体DNA(由美国Salk研究所提供)一起溶解于2ml的D-MEM高葡萄糖培养基(Invitrogen公司制)中，使用Transfast transfectionreagent(Promega公司制)并根据附带的说明书，对前一天准备好的293gp细胞(美国Salk研究所提供)进行转染。
在转染3天之后，用0.45μm的过滤器(Millipore公司制)过滤培养上清液，回收含病毒载体的溶液。将该病毒载体溶液转移入聚芳烃(polyaroma)管(日立工机制)中，使用超速离心机(日立工机制)在50,000×g、18℃的条件下离心分离90分钟。除去上清液，将沉淀下来的病毒重悬于含有1％的N2补充剂、20ng/ml的FGF-2和8μg/ml的hexadimethrin bromide(Sigma-Aldrich公司制)的DMEM/F12培养基中。按照与实验例1所示同样的方法，使用以多聚鸟氨酸和层粘蛋白包被过的12孔培养皿，向每1个孔中加入1.8×105个ANSC-7细胞，将其静置一夜，将ANSC-7细胞与培养上清液分离，除去上清液，添加该病毒悬浮液，将其置于37℃、5％CO2浓度的培养箱中培养2小时以使其感染。接着，将培养液全部更换成分化诱导培养基并开始分化诱导，与实验例1同样地分化诱导6天后，分析其中的Tuj1阳性神经元数。
其结果，与被从pCLNCX制备的逆转录病毒的阴性对照感染并发生分化的ANSC-7细胞相比，在被由pCLNC-GSK3β制备的逆转录病毒感染的、使GSK-3β高表达并发生分化的细胞中，其再生神经元数以33％的比率明显地减少。另一方面，在被由pCLNC-GSK3β(K85R)制备的逆转录病毒感染的、使不具有激酶活性的GSK-3β(K85R)高表达并发生分化的细胞中，其再生神经元数要比野生型GSK-3β高表达的细胞明显增多34％，而与被从pCLNCX制备的逆转录病毒的阴性对照感染并发生分化的情况大体相同。由此可以看出，GSK-3β的激酶活性使神经元的再生受到抑制。
因此，阿尔茨海默氏病是由于脑本身的再生能力受到抑制而表现为可以发病，而这种抑制是由于GSK-3β的高表达促进了靶分子的磷酸化，从而抑制神经元再生所导致的，因此，GSK-3抑制剂可以成为神经疾病例如阿尔茨海默氏病的治疗药。
实验例8聚集型β-淀粉状肽对神经元再生的抑制和GSK-3抑制剂对抑制的解除(1)β-淀粉状肽(下文称为Aβ)是老人斑的主要构成成分并被认为是阿尔茨海默氏病的病因物质[Proc.Nat.Acad.Sci.，USA，98，11039-11041(2001)]。将Aβ[1-40](BIOSOURCE公司制)溶解于0.1％(v/v)的三氟乙酸(Nacalai Tesque公司制)以使其浓度为10mg/ml，在25℃保温1小时后，用PBS稀释至0.5mg/ml。在25℃下保温24小时以形成聚集体[J.Biol.Chem.，276，42027-42034(2001)]，按照实验例1所示同样的方法，分化诱导的ANSC-7细胞时，将所获聚集体添加到培养基中至其终浓度为0.1mg/ml，另外，在阴性对照中添加相同体积的PBS。在分化诱导2天后和4天后，分别用分化诱导培养基更换原来的全部培养基，在分化诱导6天后，测定其中的神经元数。
其结果，添加聚集型Aβ使Tuj1阳性神经元数以78％的比率明显地减少。因此，作为神经疾病之一的阿尔茨海默氏病由于聚集型Aβ的作用使神经元的再生受到抑制，因此抑制了脑本身的再生能力，从而表现为可以发病。
实验例9聚集型β-淀粉状肽对神经元再生的抑制和GSK-3抑制剂对抑制的解除(2)为了探明由聚集型Aβ造成的神经元再生的抑制究竟是由于促进了凋亡所导致的再生细胞数减少造成的，还是由于神经元分化被抑制造成的，分析了聚集型Aβ对ANSC-7细胞的凋亡促进效果。
按照与实验例8同样的方法，得到用含终浓度为0.1mg/ml的聚集型Aβ的分化诱导培养基分化诱导了6天的ANSC-7细胞和作为对照的、用含PBS的分化诱导培养基分化诱导的ANSC-7细胞，使用原位细胞死亡检测试剂盒并根据附带的说明书，使荧光黄(RocheDiagnostics K，K.公司制)与上述的细胞反应。使用倒置荧光显微镜(Nikon公司制)观察该细胞，统计在每2.44mm2面积内的凋亡细胞数。
其结果，凋亡的阳性细胞数由于添加了聚集型Aβ增加了14％，但是没有明显的差别，因此可以看出，聚集型Aβ造成再生神经元数减少，这种减少除了是因为促进凋亡之外，主要还是因为抑制了神经元的分化。
实验例10聚集型β-淀粉状肽对神经元再生的抑制和GSK-3抑制剂对抑制的解除(3)按照与实验例8同样的方法，在利用含有终浓度为0.1mg/ml的聚集型Aβ的分化诱导培养基分化诱导ANSC-7细胞时，向培养基中加入氯化锂至其终浓度为3mmol/l，或者加入Kenpaullone至其终浓度为2μmol/l，在分化诱导6天后，分析其中的Tuj1阳性神经元数。
其结果，与只加入聚集型Aβ的情况相比，加入氯化锂或Kenpaullone使Tuj1阳性神经元数分别按73％和400％的比率明显增加。
因此可以看出，GSK-3抑制剂具有解除由聚集型Aβ对神经元再生的抑制的作用。
如上所述，具有选择性地抑制GSK-3的活性的化合物可以成为阿尔茨海默氏病等的神经疾病的神经再生药，并且该化合物可以成为神经干细胞的神经元再生促进剂。
实验例11GSK-3的抑制剂靛玉红-3’-monoxime造成的神经元再生促进按照与实验例1所示同样的方法，把据报道可作为GSK-3抑制剂的靛玉红-3’-monoxime[J.Biol.Chem.，276，251-260(2001)、Sigma-Aldrich公司制]溶解于DMSO中至其浓度为1mmol/l，将相当于培养液的1/1000体积的该DMSO溶液添加到含有ANSC-7细胞的培养基中，在分化诱导后第6天，分析其中的Tuj1阳性神经元数。作为阴性对照，添加相同体积的DMSO。其结果，与阴性对照相比，在添加终浓度为1μmol/l的靛玉红-3’-monoxime的条件下，Tuj1阳性神经元数按1.4倍明显地增加。因此可以看出，靛玉红-3’-monoxime具有神经元再生促进作用。
综上所述，不限定于锂、SB-216763、Kenpaullone，凡是具有抑制GSK-3活性的化合物皆能作为神经干细胞的神经元再生促进剂，同时可以作为神经疾病的再生治疗用药物。
实验例12GSK-3特异性的siRNA对神经元的再生促进短的干扰RNA(siRNA)可以特异性地抑制基因[Nature，411，494-498(2001)]。为了进一步探明特异性地抑制在成年神经干细胞中表达的GSK-3可以促进神经元再生的原因，将GSK-3β特异性的化学合成的siRNA导入到ANSC-7细胞中，研究其对神经元再生的效果。
首先按照下述方法研究两种化学合成siRNA的ANSC-7细胞对GSK-3β的抑制效果。使用Rat NSC NucleofectorTM试剂盒(Amaxa公司制)向ANSC-7细胞导入SiRNA。将150pmol含有序列编号14和15的双链siRNA-B1或含有序列编号16和17的双链siRNA-B2(Dharmacon公司制)按照其附带的说明书导入到1×106个ANSC-7细胞中。作为阴性对照，导入Non-specific Control Duplex IX(47％GC含量)siRNA(Dharmacon公司制)。导入后便立即将其悬浮于5ml的分化诱导培养基中，然后将其接种于以多聚鸟氨酸和层粘蛋白包被过的6cm培养皿中。在接种48小时之后，将细胞溶解于含有1％的Nonidet P-40、50mM的Tris-HCl(pH7.4)、50mM的NaCl(以上皆为Nacalai Tesque公司制)的、每10ml中含有一片Complete mini，EDTA free(RocheDiagnostics K，K.公司制)的水溶液中，回收细胞，根据常规方法，在按照SDS-PAGE法分离之后，使用Western印迹法检测GSK-3β的量。在检测时，使用能识别GSK-3α和β的抗GSK-3抗体(Sigma公司制)。其结果，与阴性对照相比，在导入了2种针对GSK-3β的siRNA的细胞中，二者的GSK-3β量均减少了90％以上，而GSK-3α的量则没有变化，因此可以看出，上述各种siRNA均能特异性地抑制GSK-3β。
接着，在将上述的2种siRNA导入到ANSC-7中之后，立即将细胞按每孔1.8×105个细胞接种到以多聚鸟氨酸和层粘蛋白包被过并随即加入了1ml的分化诱导培养基的12孔培养皿中，诱导其分化。按照与实验例1所示同样的方法，在分化诱导后的第6天，分析其中的Tuj1阳性神经元数。其结果，与阴性对照相比，Tuj1阳性神经元的数目，在导入了siRNA-B1的细胞的场合，增加至原来的2.5倍，在导入了siRNA-B2的细胞的场合，增加至原来的1.9倍。因此可以看出，针对GSK-3β的siRNA具有神经元再生促进作用。
综上所述，具有抑制GSK-3的活性的化合物和含有siRNA的核酸，可以作为神经干细胞的神经元再生促进剂，同时可以作为神经疾病的再生治疗用药物。
参考例13-(2，4-二氯苯基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮(SB-216763)的合成工序13-吲哚二羟乙酸甲酯的合成将市售的3-吲哚二羟乙酸(9.55g)悬浮于二氯甲烷(300mL)中，在冰冷下向其中加入草酰氯(8.8mL)，在20℃下搅拌20小时。将反应液冰冷，向其中加入甲醇(190mL)，然后将反应液在25℃下搅拌1小时。向反应液中加入水和二氯甲烷，过滤收集析出的结晶，将结晶用二氯甲烷洗涤。将结晶减压干燥，获得了3-吲哚二羟乙酸甲酯(7.07g、69％)。
工序22-(1-甲基吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯的合成将工序1中获得的3-吲哚二羟乙酸甲酯(5.88g)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(180mL)中，在0℃下一边搅拌，一边每次少量地加入氢化钠(按60％分散于油中，1.4g)。将反应混合物搅拌1小时，然后加入甲基碘(1.2mL)，在20℃下搅拌20小时。向反应液中添加冰冷水，然后用1mol/L的盐酸将pH值调节至5。过滤收集析出的结晶，用水洗涤。将结晶减压干燥，获得了2-(1-甲基吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯(1.96g、33％)。
工序32，4-二氯苯基乙酰胺将市售的2，4-二氯苯基乙酸(12.4g)溶解于二氯甲烷(350mL)中，在冰冷下向其中加入草酰氯(10.6mL)，在20℃下搅拌20小时。将反应液减压浓缩，将所获残渣溶解于二氯甲烷(100mL)中。将该溶液滴加到冰冷的28％氨水溶液(250mL)中，在减压下蒸馏除去二氯甲烷。过滤收集析出的结晶，用水洗涤。将结晶减压干燥，获得了2，4-二氯苯基乙酰胺(11.14g、90％)。
工序4SB-216763的合成将叔丁醇钾(0.5g)溶解于四氢呋喃(35mL)中，在冰冷下加入在工序2中获得的2-(1-甲基吲哚-3-基)-2-氧代乙酸甲酯(0.4g)，然后加入在工序3中获得的2，4-二氯苯基乙酰胺(0.3g)，在相同温度下搅拌3小时。向反应液中添加水，然后用乙酸乙酯萃取。将有机层顺次地用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥，然后将结晶用乙醇洗涤。将结晶减压干燥，获得了SB-216763(390mg、70％)。
1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)3.89(s，3H)，6.41(d，J ＝8.1Hz，1H)，6.80(t，J ＝7.1Hz，1H)，7.15(t，J＝7.1Hz，1H)，7.32-7.38(m，3H)，7.49(s，1H)，8.01(s，1H)，10.94(s，1H)元素分析理论值(C61.5、H3.3、N7.6)、测定值(C61.3、H3.5、N7.4)参考例2分离和培养来自大鼠脑的成年神经干细胞用乙醚麻醉7周龄的Sprague Dawley大鼠，使其昏迷之后将其断头，从头顶部切开头盖骨并摘出脑子。在显微镜下使用眼科剪子和镊子从摘出的脑中分离含有脑室周围部位的组织。使用眼科剪子和手术刀将含有脑室周围部位的组织剪切成1mm3左右的小块后，将其置于含有2.5U/ml木瓜蛋白酶、250U/ml DNase(二者均为Worthington，Freehold，NJ公司制)、1u/ml中性蛋白酶(DispaseBoehringerManheim公司制)的5ml HBSS缓冲液(Invitrogen公司制)中，在37℃下消化反应30分钟。把通过该反应获得的细胞与组织的混合物用含有10％胎牛血清(Hyclone公司制)的DMEM(Invitrogen公司制)洗涤3次，然后将其溶解于含有10％的胎牛血清的DMEM中，使用107μm的尼龙筛网除去未消化物。
将所获的细胞粗提取液转移到10cm的培养皿上，使用含有10％胎牛血清的DMEM/F12培养基(Invitrogen公司制)，在37℃培养箱中培养一夜。第二天将培养基换成含有1％的N2补充剂(Invitrogen公司制)和20ng/ml的FGF-2(PeproTech公司制)的DMEM/F12，开始培养。每3天一次地将培养基的一半更换成新鲜的含有1％N2补充剂和20ng/ml FGF-2的DMEM/F12，继续进行培养。如果形成了小型细胞的小克隆，则用1％的胰蛋白酶处理30秒至1分钟左右，回收脱落的细胞。使用以10μg/ml的多聚鸟氨酸(Sigma公司制)在室温下包被一夜的和以5μg/ml的来自小鼠EHS肿瘤的层粘蛋白(Becton Dickinson公司制)在37℃下包被一夜的多孔培养皿(Fisher Scientific公司制)，将上述回收的细胞接种到该培养皿上，继续培养。在继续进行上述培养时，出现了小型的突起物，富集该具有一定厚度的小型细胞。将该细胞作为成年神经干细胞株ANSC-7，提供给上述的实验使用。
发明的最佳实施方式实施例1片剂按照常规方法制备含有如下组成的片剂。
(1)处方SB-216763 5mg乳糖62mg马铃薯淀粉 30mg聚乙烯醇2mg
硬脂酸镁1mg100mg(2)Kenpaullone 5mg乳糖62mg马铃薯淀粉 30mg聚乙烯醇2mg硬脂酸镁1mg100mg(3)靛玉红-3’-monoxime 5mg乳糖62mg马铃薯淀粉 30mg聚乙烯醇2mg硬脂酸镁1mg100mg实施例2神经干细胞的神经元再生促进剂(1)按照常规方法将氯化锂溶解于PBS中至其浓度为3mol/l，从而配制成含氯化锂的神经干细胞的神经元再生促进剂。
实施例3神经干细胞的神经元再生促进剂(2)按照常规方法将SB-216763、Kenpaullone或靛玉红-3’-monoxime溶解于DMSO中至其浓度为0.1mmol/l，配制得到含SB-216763、Kenpaullone或靛玉红-3’-monoxime的神经干细胞的神经元再生促进剂。
工业实用性按照本发明，可以提供一种含有抑制糖原合成酶激酶-3活性的物质作为有效成分的神经再生药、含有该物质作为有效成分的神经干细胞的神经元再生促进剂、通过在该神经元再生促进剂的存在下培养神经干细胞而获得的神经元以及该神经元的制造方法。
序列表目录序列编号5-人工序列的说明合成蛋白质序列编号6-人工序列的说明合成DNA序列编号7-人工序列的说明合成DNA序列编号8-人工序列的说明合成DNA序列编号9-人工序列的说明合成DNA序列编号10-人工序列的说明合成DNA序列编号11-人工序列的说明合成DNA序列编号12-人工序列的说明合成DNA序列编号13-人工序列的说明合成DNA序列编号14-人工序列的说明合成RNA序列编号15-人工序列的说明合成RNA序列编号16-人工序列的说明合成RNA序列编号17-人工序列的说明合成RNA
序列表序列表<110>协和发酵工业株式会社<120>神经再生药<130>11562WO1<140>
<141>
<150>JP2003-114579<151>2003-04-18<160>17<170>PatentIn Ver.2.1<210>1<211>420<212>PRT<213>人(Homo sapiens)<400>1Met Ser Gly Arg Pro Arg Thr Thr Ser Phe Ala Glu Ser Cys Lys Pro15 10 15Val Gln Gln Pro Ser Ala Phe Gly Ser Met Lys Val Ser Arg Asp Lys20 25 30
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340 345 350Gly Arg Asp Thr Pro Ala Leu Phe Asn Phe Thr Thr Gln Glu Leu Ser355 360 365Ser Asn Pro Pro Leu Ala Thr Ile Leu Ile Pro Pro His Ala Arg Ile370 375 380Gln Ala Ala Ala Ser Thr Pro Thr Asn Ala Thr Ala Ala Ser Asp Ala385 390 395 400Asn Thr Gly Asp Arg Gly Gln Thr Asn Asn Ala Ala Ser Ala Ser Ala405 410 415Ser Asn Ser Thr420<210>2<211>1260<212>DNA<213>人<400>2atg tca ggg cgg ccc aga acc acc tcc ttt gcg gag agc tgc aag ccg 48Met Ser Gly Arg Pro Arg Thr Thr Ser Phe Ala Glu Ser Cys Lys Pro15 10 15gtg cag cag cct tca gct ttt ggc agc atg aaa gtt agc aga gac aag 96Val Gln Gln Pro Ser Ala Phe Gly Ser Met Lys Val Ser Arg Asp Lys
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cac tat agt cga gcc aaa cag acg ctc cct gtg att tat gtc aag ttg 480His Tyr Ser Arg Ala Lys Gln Thr Leu Pro Val Ile Tyr Val Lys Leu145 150 155 160tat atg tat cag ctg ttc cga agt tta gcc tat atc cat tcc ttt gga 528Tyr Met Tyr Gln Leu Phe Arg Ser Leu Ala Tyr Ile His Ser Phe Gly165 170 175atc tgc cat cgg gat att aaa ccg cag aac ctc ttg ttg gat cct gat 576Ile Cys His Arg Asp Ile Lys Pro Gln Asn Leu Leu Leu Asp Pro Asp180 185 190act gct gta tta aaa ctc tgt gac ttt gga agt gca aag cag ctg gtc 624Thr Ala Val Leu Lys Leu Cys Asp Phe Gly Ser Ala Lys Gln Leu Val195 200 205cga gga gaa ccc aat gtt tcg tat atc tgt tct cgg tac tat agg gca 672Arg Gly Glu Pro Asn Val Ser Tyr Ile Cys Ser Arg Tyr Tyr Arg Ala210 215 220cca gag ttg atc ttt gga gcc act gat tat acc tct agt ata gat gta 720Pro Glu Leu Ile Phe Gly Ala Thr Asp Tyr Thr Ser Ser Ile Asp Val225 230 235 240tgg tct gct ggc tgt gtg ttg gct gag ctg tta cta gga caa cca ata 768Trp Ser Ala Gly Cys Val Leu Ala Glu Leu Leu Leu Gly Gln Pro Ile245 250 255
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35 40 45Thr Lys Ala Lys Val Thr Gly Asp Glu Trp Gly Asp Asn Tyr Phe Leu50 55 60Val Gly Pro Tyr Thr Glu Gln Gly Val Arg Thr Gln Val Glu Leu Leu65 70 7580Glu Ala Pro Thr Pro Ala Leu Lys Arg Thr Leu Asp Ser Met Asn Ser85 90 95Lys Gly Cys Lys Val Tyr Phe Gly Arg Trp Leu Ile Glu Gly Gly Pro100 105 110Leu Val Val Leu Leu Asp Val Gly Ala Ser Ala Trp Ala Leu Glu Arg115 120 125Trp Lys Gly Glu Leu Trp Asp Ile Cys Asn Ile Gly Val Pro Trp Tyr130 135 140Asp Arg Glu Ala Asn Asp Ala Val Leu Phe Gly Phe Leu Thr Thr Trp145 150 155 160Phe Leu Gly Glu Phe Leu Ala Gln Ser Glu Glu Lys Pro His Val Val165 170 175Ala His Phe His Glu Trp Leu Ala Gly Val Gly Leu Cys Leu Cys Arg180 185 190
Ala Arg Arg Leu Pro Val Ala Thr Ile Phe Thr Thr His Ala Thr Leu195 200 205Leu Gly Arg Tyr Leu Cys Ala Gly Ala Val Asp Phe Tyr Asn Asn Leu210 215 220Glu Asn Phe Asn Val Asp Lys Glu Ala Gly Glu Arg Gln Ile Tyr His225 230 235 240Arg Tyr Cys Met Glu Arg Ala Ala Ala His Cys Ala His Val Phe Thr245 250 255Thr Val Ser Gln Ile Thr Ala Ile Glu Ala Gln His Leu Leu Lys Arg260 265 270Lys Pro Asp Ile Val Thr Pro Asn Gly Leu Asn Val Lys Lys Phe Ser275 280 285Ala Met His Glu Phe Gln Asn Leu His Ala Gln Ser Lys Ala Arg Ile290 295 300Gln Glu Phe Val Arg Gly His Phe Tyr Gly His Leu Asp Phe Asn Leu305 310 315 320Asp Lys Thr Leu Tyr Phe Phe Ile Ala Gly Arg Tyr Glu Phe Ser Asn325 330 335Lys Gly Ala Asp Val Phe Leu Glu Ala Leu Ala Arg Leu Asn Tyr Leu340 345 350
Leu Arg Val Asn Gly Ser Glu Gln Thr Val Val Ala Phe Phe Ile Met355 360 365Pro Ala Arg Thr Asn Asn Phe Asn Val Glu Thr Leu Lys Gly Gln Ala370 375 380Val Arg Lys Gln Leu Trp Asp Thr Ala Asn Thr Val Lys Glu Lys Phe385 390 395 400Gly Arg Lys Leu Tyr Glu Ser Leu Leu Val Gly Ser Leu Pro Asp Met405 410 415Asn Lys Met Leu Asp Lys Glu Asp Phe Thr Met Met Lys Arg Ala Ile420 425 430Phe Ala Thr Gln Arg Gln Ser Phe Pro Pro Val Cys Thr His Asn Met435 440 445Leu Asp Asp Ser Ser Asp Pro Ile Leu Thr Thr Ile Arg Arg Ile Gly450 455 460Leu Phe Asn Ser Ser Ala Asp Arg Val Lys Val Ile Phe His Pro Glu465 470 475 480Phe Leu Ser Ser Thr Ser Pro Leu Leu Pro Val Asp Tyr Glu Glu Phe485 490 495Val Arg Gly Cys His Leu Gly Val Phe Pro Ser Tyr Tyr Glu Pro Trp
500 505 510Gly Tyr Thr Pro Ala Glu Cys Thr Val Met Gly Ile Pro Ser Ile Ser515 520 525Thr Asn Leu Ser Gly Phe Gly Cys Phe Met Glu Glu His Ile Ala Asp530 535 540Pro Ser Ala Tyr Gly Ile Tyr Ile Leu Asp Arg Arg Phe Arg Ser Leu545 550 555 560Asp Asp Ser Cys Ser Gln Leu Thr Ser Phe Leu Tyr Ser Phe Cys Gln565 570 575Gln Ser Arg Arg Gln Arg Ile Ile Gln Arg Asn Arg Thr Glu Arg Leu580 585 590Ser Asp Leu Leu Asp Trp Lys Tyr Leu Gly Arg Tyr Tyr Met Ser Ala595 600 605Arg His Met Ala Leu Ser Lys Ala Phe Pro Glu His Phe Thr Tyr Glu610 615 620Pro Asn Glu Ala Asp Ala Ala Gln Gly Tyr Arg Tyr Pro Arg Pro Ala625 630 635 640Ser Val Pro Pro Ser Pro Ser Leu Ser Arg His Ser Ser Pro His Gln645 650 655
Ser Glu Asp Glu Glu Asp Pro Arg Asn Gly Pro Leu Glu Glu Asp Gly660 665 670Glu Arg Tyr Asp Glu Asp Glu Glu Ala Ala Lys Asp Arg Arg Asn Ile675 680 685Arg Ala Pro Glu Trp Pro Arg Arg Ala Ser Cys Thr Ser Ser Thr Ser690 695 700Gly Arg Lys Arg Asn Ser Val Asp Thr Ala Thr Ser Ser Ser Leu Ser705 710 715 720Thr Pro Ser Glu Pro Leu Ser Pro Thr Ser Ser Leu Gly Glu Glu Arg725 730 735Asn<210>4<211>2211<212>DNA<213>人<400>4atg cct tta aac cgc act ttg tcc atg tcc tca ctg cca gga ctg gag 48Met Pro Leu Asn Arg Thr Leu Ser Met Ser Ser Leu Pro Gly Leu Glu1 5 1015gac tgg gag gat gaa ttc gac ctg gag aac gca gtg ctc ttc gaa gtg 96Asp Trp Glu Asp Glu Phe Asp Leu Glu Asn Ala Val Leu Phe Glu Val
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act gtg tcc cag atc acc gcc atc gag gca cag cac ttg ctc aag agg 816Thr Val Ser Gln Ile Thr Ala Ile Glu Ala Gln His Leu Leu Lys Arg260 265 270aaa cca gat att gtg acc ccc aat ggg ctg aat gtg aag aag ttt tct 864Lys Pro Asp Ile Val Thr Pro Asn Gly Leu Asn Val Lys Lys Phe Ser275 280 285gcc atg cat gag ttc cag aac ctc cat gct cag agc aag gct cga atc 912Ala Met His Glu Phe Gln Asn Leu His Ala Gln Ser Lys Ala Arg Ile290 295 300cag gag ttt gtg cgg ggc cat ttt tat ggg cat ctg gac ttc aac ttg 960Gln Glu Phe Val Arg Gly His Phe Tyr Gly His Leu Asp Phe Asn Leu305 310 315 320gac aag acc tta tac ttc ttt atc gcc ggc cgc tat gag ttc tcc aac 1008Asp Lys Thr Leu Tyr Phe Phe Ile Ala Gly Arg Tyr Glu Phe Ser Asn325 330 335aag ggt gct gac gtc ttt ctg gag gca ttg gct cgg ctc aac tat ctg 1056Lys Gly Ala Asp Val Phe Leu Glu Ala Leu Ala Arg Leu Asn Tyr Leu340 345 350ctc aga gtg aac ggc agc gag cag aca gtg gtt gcc ttc ttc atc atg 1104Leu Arg Val Asn Gly Ser Glu Gln Thr Val Val Ala Phe Phe Ile Met355 360 365cca gcg cgg acc aac aat ttc aac gtg gaa acc ctc aaa ggc caa gct 1152
Pro Ala Arg Thr Asn Asn Phe Asn Val Glu Thr Leu Lys Gly Gln Ala370 375 380gtg cgc aaa cag ctt tgg gac acg gcc aac acg gtg aag gaa aag ttc 1200Val Arg Lys Gln Leu Trp Asp Thr Ala Asn Thr Val Lys Glu Lys Phe385 390 395 400ggg agg aag ctt tat gaa tcc tta ctg gtt ggg agc ctt ccc gac atg 1248Gly Arg Lys Leu Tyr Glu Ser Leu Leu Val Gly Ser Leu Pro Asp Met405 410 415aac aag atg ctg gat aag gaa gac ttc act atg atg aag aga gcc atc 1296Asn Lys Met Leu Asp Lys Glu Asp Phe Thr Met Met Lys Arg Ala Ile420 425 430ttt gca acg cag cgg cag tct ttc ccc cct gtg tgc acc cac aat atg 1344Phe Ala Thr Gln Arg Gln Ser Phe Pro Pro Val Cys Thr His Asn Met435 440 445ctg gat gac tcc tca gac ccc atc ctg acc acc atc cgc cga atc ggc 1392Leu Asp Asp Ser Ser Asp Pro Ile Leu Thr Thr Ile Arg Arg Ile Gly450 455 460ctc ttc aat agc agt gcc gac agg gtg aag gtg att ttc cac ccg gag 1440Leu Phe Asn Ser Ser Ala Asp Arg Val Lys Val Ile Phe His Pro Glu465 470 475 480ttc ctc tcc tcc aca agc ccc ctg ctc cct gtg gac tat gag gag ttt 1488Phe Leu Ser Ser Thr Ser Pro Leu Leu Pro Val Asp Tyr Glu Glu Phe
485 490 495gtc cgt ggc tgt cac ctt gga gtc ttc ccc tcc tac tat gag cct tgg 1536Val Arg Gly Cys His Leu Gly Val Phe Pro Ser Tyr Tyr Glu Pro Trp500 505 510ggc tac aca ccg gct gag tgc acg gtt atg gga atc ccc agt atc tcc 1584Gly Tyr Thr Pro Ala Glu Cys Thr Val Met Gly Ile Pro Ser Ile Ser515 520 525acc aat ctc tcc ggc ttc ggc tgc ttc atg gag gaa cac atc gca gac 1632Thr Asn Leu Ser Gly Phe Gly Cys Phe Met Glu Glu His Ile Ala Asp530 535 540ccc tca gct tac ggt atc tac att ctt gac cgg cgg ttc cgc agc ctg 1680Pro Ser Ala Tyr Gly Ile Tyr Ile Leu Asp Arg Arg Phe Arg Ser Leu545 550 555 560gat gat tcc tgc tcg cag ctc acc tcc ttc ctc tac agt ttc tgt cag 1728Asp Asp Ser Cys Ser Gln Leu Thr Ser Phe Leu Tyr Ser Phe Cys Gln565 570 575cag agc cgg cgg cag cgt atc atc cag cgg aac cgc acg gag cgc ctc 1776Gln Ser Arg Arg Gln Arg Ile Ile Gln Arg Asn Arg Thr Glu Arg Leu580 585 590tcc gac ctt ctg gac tgg aaa tac cta ggc cgg tac tat atg tct gcg 1824Ser Asp Leu Leu Asp Trp Lys Tyr Leu Gly Arg Tyr Tyr Met Ser Ala595 600 605
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acc ccg agc gag ccc ctc agc ccc acc agc tcc ctg ggc gag gag cgt 2208Thr Pro Ser Glu Pro Leu Ser Pro Thr Ser Ser Leu Gly Glu Glu Arg725 730 735aac2211Asn<210>5<211>60<212>PRT<213>人工序列<223>人工序列的说明合成PRT<400>5Tyr Arg Arg Ala Ala Val Pro Pro Ser Pro Ser Leu Ser Arg His Ser1 510 15Ser Pro His Gln Ser Glu Asp Glu Glu Glu25<210>6<211>24<212>DNA<213>人工序列<223>人工序列的说明合成DNA
<400>6agggtatgat aaccgggaga tcgt 24<210>7<211>24<212>DNA<213>人工序列<223>人工序列的说明合成DNA<400>7gggccatata gttccacaaa ggca 24<210>8<211>24<212>DNA<213>人工序列<223>人工序列的说明合成DNA<400>8caaaaggcac tggaactcgc aatg 24<210>9<211>24<212>DNA<213>人工序列<223>人工序列的说明合成DNA
<400>9ttcttggcaa cggcaacaaa ccac 24<210>10<211>24<212>DNA<213>人工序列<223>人工序列的说明合成DNA<400>10ggtgaatcga gaagagccat catg 24<210>11<211>24<212>DNA<213>人工序列<223>人工序列的说明合成DNA<400>11ttcaggtaga gttggaggct gatg 24<210>12<211>25<212>DNA<213>人工序列
<223>人工序列的说明合成DNA<400>12gaagaacttt cctgatggcc accag 25<210>13<211>25<212>DNA<213>人工序列<223>人工序列的说明合成DNA<400>13ctggtggcca tcaggaaagt tcttc 25<210>14<211>21<212>RNA<213>人工序列<223>人工序列的说明合成RNA<400>14gucaguuaca cagacacuat t 21<210>15<211>21<212>RNA<213>人工序列
<223>人工序列的说明合成RNA<400>15uagugucugu guaacugact t 21<210>16<211>21<212>RNA<213>人工序列<223>人工序列的说明合成RNA<400>16gucuagccua uauccauuct t 21<210>17<211>21<212>RNA<213>人工序列<223>人工序列的说明合成RNA<400>17gaauggauau aggcuagact t 2权利要求
1.含有抑制糖原合成酶激酶-3(下文简称GSK-3)活性的物质作为有效成分的神经再生药。
2.如权利要求1所述的药物，其中，神经再生药是神经疾病的治疗药。
3.如权利要求2所述的药物，其中，神经疾病是选自帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、唐氏症、脑血管障碍、脑中风，脊髓损伤、享丁顿氏舞蹈病、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、癫痫、焦虑性障碍、综合失调症、抑郁症和躁郁症中的任一种神经疾病。
4.如权利要求1～3中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3活性的物质是锂或其药理学上允许的盐。
5.如权利要求1～3中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3活性的物质为双吲哚基马来酰亚胺衍生物、3-芳基-4-吲哚基马来酰亚胺衍生物、吲哚并咔唑衍生物、吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮衍生物或者靛玉红衍生物或者它们的药理学上允许的盐。
6.如权利要求1～3中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3活性的物质为由式(I)表示的化合物、由式(II)表示的化合物或者由式(III)表示的化合物或者它们药理学上允许的盐 [式中，n和m相同或不同，表示1～3的整数；R1、R3和R4相同或不同，表示氢原子、取代或非取代的低级烷基、取代或非取代的低级链烯基、-COR6(式中，R6表示氢原子、取代或非取代的低级烷基、取代或非取代的低级链烯基、取代或非取代的芳基或者取代或非取代的环烷基)、-COOR7(式中，R7表示氢原子、取代或非取代的低级烷基、取代或非取代的芳基或者取代或非取代的环烷基)或者-OR8(式中，R8表示氢原子、取代或非取代的低级烷基、取代或非取代的芳基或者取代或非取代的环烷基)；R2和R5相同或不同，表示氢原子、取代或非取代的低级烷基、取代或非取代的低级链烯基、取代或非取代的低级烷氧基、取代或非取代的低级烷氧基羰基、取代或非取代的芳基、羧基、卤素、羟基、硝基、氨基或者单或二低级烷基氨基，当n和m分别为2或3时，各自的R2和R5可以相同或不同]； (式中，na、ma、R1A、R2A、R3A和R5A分别与前述n、m、R1、R2、R3和R5的含义相同)； [式中，nb、mb、R1B、R2B和R5B分别与前述n、m、R1、R2和R5的含义相同，R3B和R4B相同或不同，表示氢原子、取代或非取代的低级烷基、取代或非取代的低级链烯基、-COR6(式中，R6与前述的含义相同)、-COOR7(式中，R7与前述的含义相同)或者-OR8(式中，R8与前述的含义相同)，或者R3B与R4B一起，形成 (式中，k表示1或2，X表示CH2、NH、氧原子或硫原子，R9表示羟基、羧基、氨基甲酰基或低级烷氧基羰基)]。
7.如权利要求1～3中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3活性的物质为由式(Ia)表示的化合物或其药理学上允许的盐 (式中，R2a表示氢原子、低级烷氧基、低级烷氧基羰基、芳基或硝基，R3a和R4a相同或不同，表示取代或非取代的低级烷基)。
8.如权利要求1～3中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3活性的物质为由式(IIa)表示的化合物或其药理学上允许的盐 (式中，ma与前述的含义相同，R3Aa表示取代或非取代的低级烷基，R5Aa表示卤素)。
9.如权利要求1～3中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3活性的物质为由式(IIIa)表示的化合物或其药理学上允许的盐 (式中，R9与前述的含义相同)。
10.如权利要求1～3中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3活性的物质为选自3，4-双(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-(1-甲基吲哚-3-基)-4-(1-丙基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-氰基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-氨基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-羧基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-氨基甲酰基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-氨基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基-5-丙氧基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-羟基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基-5-苯基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-氨基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基-5-苯基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-羟基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基-5-甲氧基羰基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-羟基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基-5-硝基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-(1-甲基吲哚-3-基)-4-[1-(3-羟基丙基)-5-硝基吲哚-3-基]-1H-吡咯-2，5-二酮、3-(2-氯苯基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-(2，4-二氯苯基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-(2-氯苯基)-4-[1-(3-羟基丙基)吲哚-3-基]-1H-吡咯-2，5-二酮、4-[1-(3-氨基丙基)吲哚-3-基]-3-(2-氯苯基)-1H-吡咯-2，5-二酮以及 中的化合物或其药理学上允许的盐。
11.如权利要求1～3中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3的物质为由式(IV)表示的化合物或其药理学上允许的盐 [式中，A为通过单键或双键于右侧键合的氧或硫；R10选自氢原子、芳基、低级脂肪族取代基，特别是烷基和低级烷基酯；R11～R14分别选自烷氧基、氨基、酰基、脂肪族取代基，特别是烷基、链烯基和炔基取代基、脂肪族醇、特别是烷基醇、脂肪族腈、特别是烷基腈、氰基、硝基、羧基、卤素、氢原子、羟基、亚氨基以及α，β不饱和酮；R15～R18分别选自脂肪族取代基，特别是烷基、链烯基和炔基取代基，特别是低级脂肪族取代基、脂肪族醇、特别是烷基醇、烷氧基、酰基、氰基、硝基、环氧基、卤代烷基、卤素、氢原子以及羟基；R19选自脂肪族基团，特别是低级烷基、脂肪族醇、特别是烷基醇、羧酸、和氢]。
12.如权利要求1～3中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3的物质为选自7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氯-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、11-氯-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、10-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、8-溴-6，11-二氢-噻吩并[3′，2′2，3氮杂并[4，5-b]吲哚-5(4H)-酮、9-溴-7，12-二氢-4-甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-4-羟基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-4-甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2，3-二甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2，3-二羟基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-2，3-二甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-2，3-二甲氧基-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-溴-7，12-二氢-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-硫酮、9-溴-5，12-双-(叔丁氧基羰基)-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-12-(叔丁氧基羰基)-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-5，7-双-(叔丁氧基羰基)-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-5，7，12-三-(叔丁氧基羰基)-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-5-甲氧基羰基甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-12-甲氧基羰基甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-12-(2-羟基乙基)-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2，9-二溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、8，10-二氯-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氰基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-5-甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、5-苄基-9-溴-7，12-二氢-5-甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-12-甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-12-乙基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-12-(2-丙烯基)-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-9-甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-9-甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氟-7，12-二氢-12-(2-丙烯基)-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、11-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2-(甲基亚氨基胺)-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2-(羧酸)-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-10-羟基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-11-羟基甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-4-羟基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-2，3-二羟基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2，3-二甲氧基-9-硝基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氰基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2，3-二甲氧基-9-氰基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-硝基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、3-(6-氧代-9-三氟甲基-5，6，7，12-四氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-2-基)丙腈、2-溴-9-硝基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、3-(6-氧代-9-三氟甲基-5，6，7，12-四氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-2-基)丙烯腈、2-(3-羟基-1-丙炔基)-9-三氟甲基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-碘-9-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-(3-氧代-1-丁烯基)-9-三氟甲基-7，12-四氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、8-氯-6，11-二氢-噻吩并[3′，2′2，3]氮杂并[4，5-b]吲哚-5(4H)-酮、2-碘-9-三氟甲基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-吡啶并[3′，2′4，5]吡咯并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、11-甲基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-[2-(1-羟基环己基)乙炔基]-9-三氟甲基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-氰基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-碘-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、11-乙基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、8-甲基-6，11-二氢-噻吩并[3′，2′2，3]氮杂并[4，5-b]吲哚-5(4H)-酮以及3-(6-氧代-9-三氟甲基-5，6，7，12-四氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-2-基)丙烯酸甲酯中的化合物或其药理学上允许的盐。
13.如权利要求1～3中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3的物质为选自9-氰基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2，3-二甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-溴-7，12-二氢-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-2，3-二甲氧基-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2，9-二溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氯-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、8-溴-6，11-二氢-噻吩并[3′，2′2，3]氮杂并[4，5-b]吲哚-5(4H)-酮、7，12-二氢-9-甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、10-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、11-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、11-氯-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氟-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-甲基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-硫酮、8，10-二氯-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-12-(2-羟基乙基)-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2，3-二羟基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-2，3-二甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-12-甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-5-甲氧基羰基甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮和7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮中的化合物或其药理学上允许的盐。
14.如权利要求1～3中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3的物质为选自9-氰基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2，3-二甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-溴-7，12-二氢-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-2，3-二甲氧基-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2，9-二溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氯-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、8-溴-6，11-二氢-噻吩并[3′，2′2，3]氮杂并[4，5-b]吲哚-5(4H)-酮和7，12-二氢-9-甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮中的化合物或其药理学上允许的盐。
15.如权利要求1～3中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3的物质为9-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮或其药理学上允许的盐。
16.如权利要求1～3中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3的物质为由式(V)表示的化合物或者它们的药理学上允许的盐 [式中，可以相同或不同的R20和R25表示氢原子；卤素；羟基；亚甲基羟基；直链或支链的C1～C18-烷基或烷氧基或亚甲基烷氧基；根据需要含有1个或多个杂原子、具有3～7个碳原子的环烷基；根据需要具有1个或多个杂原子的取代或非取代的芳基、芳烷基或芳氧基；各自相互独立地在直链或支链的烷基中具有1～6个碳原子的单、二或三烷基甲硅烷基；各自相互独立地具有取代或非取代芳基的单、二或三芳基甲硅烷基；三氟甲基；-COM；-COOM；或者-CH2COOM基(此处，M表示氢原子、如有必要被羟基和/或氨基的1个或多个取代的直链或支链的C1～C18烷基、或者如有必要具有1个或多个杂原子、可以被1个或多个卤素、烷基或烷氧基取代的芳基)；-NR30R31基(此处，可以相同或不同的R30和R31表示氢原子、在必要时还被1个或多个的羟基和/或氨基取代的C1～C18直链或支链烷基、取代或非取代、如有必要含有1个或多个杂原子的芳基)；酰基；-CH2-NR30R31亚甲基氨基(此处，R30和R31具有前述的含义)；如有必要可在苯环上具有1个或多个杂原子的苄基；如有必要具有1个或多个杂原子、具有碳原子3～7个的亚甲基环烷基；作为酰胺基的、与氮原子结合的生理性氨基酸基；糖苷表示选自单糖或二糖的O-糖苷或N-糖苷；或者表示亚甲基磺酸酯基；可以相同或不同的R21、R22、R23、R24、R26、R27、R28和R29表示氢原子；卤素；羟基；亚硝基；硝基；烷氧基；如有必要被1个或多个羟基和/或氨基取代的直链或支链的C1～C18烷基；如有必要具有1个或多个杂原子的取代或非取代的芳基；如有必要具有1个或多个杂原子的取代或非取代芳烷基；如有必要具有1个或多个杂原子的取代或非取代芳氧基；如有必要具有1个或多个杂原子的取代或非取代的亚甲基芳氧基；如有必要含有1个或多个杂原子、具有3～7个碳原子的环烷基；如有必要含有1个或多个杂原子、具有3～7个碳原子的亚甲基环烷基；三氟甲基；-COM；-COOM；或者CH2COOM基(此处，M表示氢原子、如有必要另外被羟基和/或氨基的1个或多个还被取代的直链或支链的C1～C18烷基、或者如有必要具有1个或多个杂原子、可以被1个或多个卤素原子、烷基或烷氧基取代的芳基)；-NR30R31基(此处，可以相同或不同的R30和R31表示氢原子、如有必要另外还被1个或多个羟基和/或氨基取代的直链或支链C1～C18烷基、取代或非取代、如有必要含有1个或多个杂原子的芳基、酰基；或者形成一种具有氮原子，如有必要含有1个或多个杂原子并具有3～7个碳原子的环烷基的一部分)；-CONR30R31基(此处，R30和R31具有前述的含义)；羟基氨基；磷酸酯基；膦酸酯基；硫酸酯基；磺酸酯基；磺酰胺基；-SO2NR30R31基(此处，R30和R31具有前述的含义)；-N＝N-R32偶氮基(此处，R32表示在必要时被1个或多个羧基、磷酰基或磺酸酯基取代的芳香族基团或者糖苷选自单糖或二糖的O-糖苷或N-糖苷基团)；R20和R24以及R25和R29分别在一起形成相互独立的如有必要可各自具有被取代的1～4个CH2基的环；可以相同或不同的Y和Z表示氧；硫；硒；碲的原子；NR33基(此处，R33表示氢原子、如有必要被1个或多个羧基、磷酰基或磺酸酯基取代的直链或支链C1～C18烷基、如有必要含有1个或多个杂原子的取代或非取代的芳基、芳烷基或磺酸酯基)；或者-NOR33(此处，R33基具有前述的含义)]。
17.如权利要求1～3中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3的物质为选自靛玉红、5-碘-靛玉红、5-溴-靛玉红、5-氯-靛玉红、5-氟-靛玉红、5-甲基-靛玉红、5-硝基-靛玉红、5-SO3H-靛玉红、5’-溴-靛玉红、5-5’-二溴-靛玉红和5’-溴-靛玉红5-磺酸中的化合物或其药理学上允许的盐。
18.如权利要求1～3中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3的物质为选自靛玉红-3’-单肟、5-碘-靛玉红-3’-单肟和5-SO3Na-靛玉红-3’-单肟中的化合物或其药理学上允许的盐。
19.如权利要求1～3中任一项所述的药物，其中，抑制GSK-3的物质为靛玉红-3’-单肟或其药理学上允许的盐。
20.一种含有抑制GSK-3活性的物质作为有效成分的神经干细胞的神经元再生促进剂。
21.如权利要求20所述的神经元再生促进剂，其中，抑制GSK-3活性的物质为锂或其药理学上允许的盐。
22.如权利要求20所述的神经元再生促进剂，其中，抑制GSK-3活性的物质为双吲哚基马来酰亚胺衍生物、3-芳基-4-吲哚基马来酰亚胺衍生物、吲哚并咔唑衍生物、吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮衍生物或者靛玉红衍生物或者它们的药理学上允许的盐。
23.如权利要求20所述的神经元再生促进剂，其中，抑制GSK-3活性的物质为由式(I)表示的化合物、由式(II)表示的化合物或者由式(III)表示的化合物或者它们的药理学上允许的盐 [式中，n和m相同或不同，表示1～3的整数；R1、R3和R4相同或不同，表示氢原子、取代或非取代的低级烷基、取代或非取代的低级链烯基、-COR6(式中，R6表示氢原子、取代或非取代的低级烷基、取代或非取代的低级链烯基、取代或非取代的芳基或者取代或非取代的环烷基)、-COOR7(式中，R7表示氢原子、取代或非取代的低级烷基、取代或非取代的芳基或者取代或非取代的环烷基)或者-OR8(式中，R8表示氢原子、取代或非取代的低级烷基、取代或非取代的芳基或者取代或非取代的环烷基)；R2和R5相同或不同，表示氢原子、取代或非取代的低级烷基、取代或非取代的低级链烯基、取代或非取代的低级烷氧基、取代或非取代的低级烷氧基羰基、取代或非取代的芳基、羧基、卤素、羟基、硝基、氨基或者单或二低级烷基氨基，当n和m分别为2或3时，各自的R2和R5可以相同或不同]； (式中，na、ma、R1A、R2A、R3A和R5A分别与前述n、m、R1、R2、R3和R5的含义相同)； [式中，nb、mb、R1B、R2B和R5B分别与前述n、m、R1、R2和R5的含义相同；R3B和R4B相同或不同，表示氢原子、取代或非取代的低级烷基、取代或非取代的低级链烯基、-COR6(式中，R6与前述的含义相同)、-COOR7(式中，R7与前述的含义相同)或者-OR8(式中，R8与前述的含义相同)，或者R3B与R4B一起形成 (式中，k表示1或2；X表示CH2、NH、氧原子或硫原子；R9表示羟基、羧基、氨基甲酰基或低级烷氧基羰基)]。
24.如权利要求20所述的神经元再生促进剂，其中，抑制GSK-3活性的物质为由式(Ia)表示的化合物或其药理学上允许的盐 (式中，R2a表示氢原子、低级烷氧基、低级烷氧基羰基、芳基或硝基；R3a和R4a相同或不同，表示取代或非取代的低级烷基)。
25.如权利要求20所述的神经元再生促进剂，其中，抑制GSK-3活性的物质为由式(IIa)表示的化合物或其药理学上允许的盐 (式中，ma与前述的含义相同；R3Aa表示取代或非取代的低级烷基；R5Aa表示卤素)。
26.如权利要求20所述的神经元再生促进剂，其中，抑制GSK-3活性的物质为由式(IIIa)表示的化合物或其药理学上允许的盐 (式中，R9与前述的含义相同)。
27.如权利要求20所述的神经元再生促进剂，其中，抑制GSK-3活性的物质为选自3，4-双(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-(1-甲基吲哚-3-基)-4-(1-丙基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-氰基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-氨基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-羧基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-氨基甲酰基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-氨基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基-5-丙氧基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-羟基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基-5-苯基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-氨基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基-5-苯基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-羟基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基-5-甲氧基羰基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-[1-(3-羟基丙基)吲哚-3-基]-4-(1-甲基-5-硝基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-(1-甲基吲哚-3-基)-4-[1-(3-羟基丙基)-5-硝基吲哚-3-基]-1H-吡咯-2，5-二酮、3-(2-氯苯基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-(2，4-二氯苯基)-4-(1-甲基吲哚-3-基)-1H-吡咯-2，5-二酮、3-(2-氯苯基)-4-[1-(3-羟基丙基)吲哚-3-基]-1H-吡咯-2，5-二酮、4-[1-(3-氨基丙基)吲哚-3-基]-3-(2-氯苯基)-1H-吡咯-2，5-二酮以及 中的化合物或其药理学上允许的盐。
28.如权利要求20所述的神经元再生促进剂，其中，抑制GSK-3的物质为由式(IV)表示的化合物或其药理学上允许的盐 [式中，A为通过单键或双键于右侧键合的氧或硫；R10选自氢原子、芳基、低级脂肪族取代基、特别是烷基或低级烷基酯；R11～R14分别选自烷氧基、氨基、酰基、脂肪族取代基、特别是烷基、链烯基和炔基取代基、脂肪族醇，特别是烷基醇、脂肪族腈、特别是烷基腈、氰基、硝基、羧基、卤素、氢原子、羟基、亚氨基以及α，β不饱和酮；R15～R18分别选自脂肪族取代基、特别是烷基、链烯基和炔基取代基、特别是低级脂肪族取代基、脂肪族醇、特别是烷基醇、烷氧基、酰基、氰基、硝基、环氧基、卤代烷基、卤素、氢原子以及羟基；R19选自脂肪族的基团、特别是低级烷基、脂肪族醇、特别是烷基醇、羧酸、以及氢]。
29.如权利要求20所述的神经元再生促进剂，其为选自7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氯-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、11-氯-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、10-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、8-溴-6，11-二氢-噻吩并[3′，2′2，3氮杂并[4，5-b]吲哚-5(4H)-酮、9-溴-7，12-二氢-4-甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-4-羟基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-4-甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2，3-二甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2，3-二羟基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-2，3-二甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-2，3-二甲氧基-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-溴-7，12-二氢-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-硫酮、9-溴-5，12-双-(叔丁氧基羰基)-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-12-(叔丁氧基羰基)-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-5，7-双-(叔丁氧基羰基)-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-5，7，12-三-(叔丁氧基羰基)-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-5-甲氧基羰基甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-12-甲氧基羰基甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-12-(2-羟基乙基)-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2，9-二溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、8，10-二氯-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氰基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-5-甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、5-苄基-9-溴-7，12-二氢-5-甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-12-甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-12-乙基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-12-(2-丙烯基)-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-9-甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-9-甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氟-7，12-二氢-12-(2-丙烯基)-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、11-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2-(甲基亚氨基胺)-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2-(羧酸)-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-10-羟基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-11-羟基甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-4-羟基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-2，3-二羟基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2，3-二甲氧基-9-硝基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氰基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2，3-二甲氧基-9-氰基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-硝基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、3-(6-氧代-9-三氟甲基-5，6，7，12-四氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-2-基)丙腈、2-溴-9-硝基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、3-(6-氧代-9-三氟甲基-5，6，7，12-四氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-2-基)丙烯腈、2-(3-羟基-1-丙炔基)-9-三氟甲基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-碘-9-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-(3-氧代-1-丁烯基)-9-三氟甲基-7，12-四氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、8-氯-6，11-二氢-噻吩并[3′，2′2，3]氮杂并[4，5-b]吲哚-5(4H)-酮、2-碘-9-三氟甲基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-吡啶并[3′，2′4，5]吡咯并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、11-甲基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-[2-(1-羟基环己基)乙炔基]-9-三氟甲基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-氰基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-碘-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、11-乙基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、8-甲基-6，11-二氢-噻吩并[3′，2′2，3]氮杂并[4，5-b]吲哚-5(4H)-酮以及3-(6-氧代-9-三氟甲基-5，6，7，12-四氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-2-基)丙烯酸甲酯中的化合物或其药理学上允许的盐。
30.如权利要求20所述的神经元再生促进剂，其为选自9-氰基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2，3-二甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-溴-7，12-二氢-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-2，3-二甲氧基-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2，9-二溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氯-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、8-溴-6，11-二氢-噻吩并[3′，2′2，3]氮杂并[4，5-b]吲哚-5(4H)-酮、7，12-二氢-9-甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、10-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、11-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、11-氯-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氟-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-甲基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-硫酮、8，10-二氯-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-12-(2-羟基乙基)-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2，3-二羟基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-2，3-二甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-12-甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-5-甲氧基羰基甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮以及7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮中的化合物或其药理学上允许的盐。
31.如权利要求20所述的神经元再生促进剂，其为选自9-氰基-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-溴-7，12-二氢-2，3-二甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2-溴-7，12-二氢-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-2，3-二甲氧基-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、2，9-二溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、7，12-二氢-9-三氟甲基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、9-氯-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮、8-溴-6，11-二氢-噻吩并[3′，2′2，3]氮杂并[4，5-b]吲哚-5(4H)-酮以及7，12-二氢-9-甲氧基-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮中的化合物或其药理学上允许的盐。
32.如权利要求20所述的神经元再生促进剂，其中，抑制GSK-3的物质为9-溴-7，12-二氢-吲哚并[3，2-d][1]苯并氮杂-6(5H)-酮或其药理学上允许的盐。
33.如权利要求20所述的神经元再生促进剂，其中，抑制GSK-3的物质为由式(V)表示的化合物或其药理学上允许的盐 [式中，可以相同或不同的R20和R25表示氢原子；卤素；羟基；亚甲基羟基；直链或支链的C1～C18-烷基或烷氧基或亚甲基烷氧基；根据需要含有1个或多个杂原子、具有3～7个-碳原子的环烷基；根据需要具有1个或多个杂原子的取代或非取代的芳基、芳烷基或芳氧基；各自相互独立地在直链或支链的烷基中具有1～6个碳原子的单、二或三烷基甲硅烷基；各自相互独立地具有取代或非取代芳基的单-、二-或三芳基甲硅烷基；三氟甲基；-COM；-COOM；或者-CH2COOM基(此处，M表示氢原子、如有必要被羟基和/或氨基的1个或多个取代的直链或支链的C1～C18-烷基、或者如有必要具有1个或多个杂原子、可以被1个或多个卤素、烷基或烷氧基取代的芳基)；-NR30R31基(此处，可以相同或不同的R30和R31表示氢原子、在必要时还被1个或多个羟基和/或氨基取代的C1～C18直链或支链烷基、取代或非取代的、如有必要含有1个或多个杂原子的芳基)；酰基；-CH2-NR30R31亚甲基氨基(此处，R30和R31具有前述的含义)；如有必要可在苯环上具有1个或多个杂原子的苄基；如有必要具有1个或多个杂原子、具有3～7个碳原子的亚甲基环烷基；作为酰胺基的、与氮原子键合的生理性氨基酸基；糖苷选自单糖或二糖的O-糖苷或N-糖苷；或者亚甲基磺酸酯基；可以相同或不同的R21、R22、R23、R24、R26、R27、R28和R29表示氢原子；卤素；羟基；亚硝基；硝基；烷氧基；如有必要被1个或多个羟基和/或氨基取代的直链或支链的C1～C18烷基；如有必要具有1个或多个杂原子的取代或非取代的芳基；如有必要具有1个或多个杂原子的取代或非取代芳烷基；如有必要具有1个或多个杂原子的取代或非取代芳氧基；如有必要具有1个或多个杂原子的取代或非取代亚甲基芳氧基；如有必要含有1个或多个杂原子、具有3～7个碳原子的环烷基；如有必要含有1个或多个杂原子、具有3～7个碳原子的亚甲基环烷基；三氟甲基；-COM；-COOM；或者CH2COOM基(此处，M表示氢原子、必要时也被1个或多个羟基和/或氨基取代的直链或支链的C1～C18-烷基、或者如有必要具有1个或多个杂原子、可以被1个或多个卤素原子、烷基或烷氧基取代的芳基)；-NR30R31基(此处，可以相同或不同的R30和R31表示氢原子、必要时还被1个或多个羟基和/或氨基取代的直链或支链C1～C18烷基、取代或非取代的、如有必要含有1个或多个杂原子的芳基、酰基，或者形成一种具有氮原子，如有必要含有1个或多个的杂原子并具有3～7个碳原子的环烷基的一部分)；-CONR30R31基(此处，R30和R31具有前述的含义)；羟基氨基；磷酸酯基；膦酸酯基；硫酸酯基；磺酸酯基；磺酰胺基；-SO2NR30R31基(此处，R30和R31具有前述的含义)；-N＝N-R32偶氮基(此处，R32表示在必要时被1个或多个羧基、磷酰基或磺酸酯基取代的芳香族基或者糖苷选自单糖或二糖的O-糖苷或N-糖苷基)；R20和R24以及R25和R29一起形成相互独立的如有必要可各自具有被取代的1～4个CH2基的环；可以相同或不同的Y和Z表示氧；硫；硒；碲的原子；NR33基(此处，R33表示氢原子、如有必要被1个或多个羧基、磷酰基或磺酸酯基取代的直链或支链C1～C18烷基、如有必要含有1个或多个杂原子的取代或非取代的芳基、芳烷基或磺酸酯基)；或者-NOR33(此处，R33基具有前述的含义)]。
34.如权利要求20所述的神经元再生促进剂，其中，抑制GSK-3的物质为选自靛玉红、5-碘-靛玉红、5-溴-靛玉红、5-氯-靛玉红、5-氟-靛玉红、5-甲基-靛玉红、5-硝基-靛玉红、5-SO3H-靛玉红、5’-溴-靛玉红、5-5’-二溴-靛玉红以及5’-溴-靛玉红5-磺酸中的化合物或其药理学上允许的盐。
35.如权利要求20所述的神经元再生促进剂，其中，抑制GSK-3的物质为选自靛玉红-3’-单肟、5-碘-靛玉红-3’-单肟以及5-SO3Na-靛玉红-3’-单肟中的化合物或其药理学上允许的盐。
36.如权利要求20所述的神经元再生促进剂，其中，抑制GSK-3的物质为靛玉红-3’-单肟或其药理学上允许的盐。
37.在权利要求20～36中任一项所述的神经元再生促进剂存在的情况下，培养神经干细胞得到的神经元。
38.一种神经元的制造方法，其特征在于，在权利要求20～36中任一项所述的神经元再生促进剂存在的情况下，培养神经干细胞使神经元再生，从培养物中收集神经元。
39.一种神经再生方法，其特征在于，投与抑制GSK-3的物质。
40.抑制GSK-3的物质在神经再生药制造中的应用。
41.抑制GSK-3的物质在神经干细胞的神经元再生促进剂的制造中的应用。
全文摘要
本发明的目的是提供神经再生药、神经干细胞的神经元再生促进剂、通过在该神经元再生促进剂的存在下培养神经干细胞而获得的神经元以及该神经元的制造方法。为了达到该目的，本发明提供了一种含有抑制糖原合成酶激酶－3活性的物质作为有效成分的神经再生药、含有该物质作为有效成分的神经干细胞的神经元再生促进剂、通过在该神经元再生促进剂的存在下培养神经干细胞而获得的神经元以及该神经元的制造方法。本发明的药物可作为帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、唐氏症、脑血管障碍、脑中风，脊髓损伤、亨丁顿氏舞蹈病、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、癫痫、焦虑性障碍、综合失调症、抑郁症、躁郁症等的神经疾病治疗药使用。
文档编号C07D403/04GK1774265SQ20048001038
公开日2006年5月17日 申请日期2004年4月16日 优先权日2003年4月18日
发明者森下刚, 樱田一洋, 铃木惠子, 池田俊一 申请人:协和发酵工业株式会社