专利名称：β－榄香烯氨基酸或羧酸衍生物及制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的β-榄香烯氨基酸或羧酸衍生物及其制备方法，涉及合成所述β-榄香烯氨基酸或羧酸衍生物的中间体及其制备方法，并涉及所述β-榄香烯氨基酸或羧酸衍生物的应用。
背景技术：
从姜科植物温郁金(Curcuma wenyujin Y.H.Chen et C.Ling)，又称温莪术的挥发油中，分离出的β-榄香烯是我国自行开发研制的广谱抗肿瘤药物榄香烯乳的主要成分(郭永沺，吴秀英，陈玉仁.温莪术挥发油中榄香烯的分离鉴定[J].中药通报，1983，8(30)31-33)。β-榄香烯对肿瘤细胞有较高的选择性，无骨髓抑制作用，无明显的肝、肾毒性，具有选择性抑制肿瘤细胞增殖和提高免疫功能的“双重效应”，在临床上对多种肿瘤有确切疗效，呈广谱的抗肿瘤特点(Wang XW.Elemene[J].Drugs Fut，1998，23，(3)266-270.[3]钱军.抗癌新药-榄香烯的药理及临床.[J].中国肿瘤临床，1996，23(6)453-455；陈剑群，吴克俭.注射液对恶性肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群的影响[J].中国肿瘤临床，1996，23(4)299-301)。目前榄香烯乳作为二线抗癌药物应用于临床，其抗癌作用比5-氟尿嘧啶、顺铂等弱，对某些实体瘤疗效不明显。而且榄香烯水溶性差，临床使用的剂型只有乳剂，稳定性较差，静脉注射给药有明显的血管刺激性，难以到达作用部位，限制了它的临床应用。在前期研究中也曾发现一些β-榄香烯含氮、含氧衍生物的抗癌活性和水溶性均较β-榄香烯强(程宝国，胡皆汉，董金华.榄香烯含氮衍生物及其用作抗癌药物[P].中国CN1066444C.2001，5，30；程宝国，胡皆汉，董金华，等.榄香烯羟基类衍生物及其用作抗癌药物[P].中国CN 1052716C.200，5，24)。细胞有丝分裂在G1期对氨基酸等营养物质的需求最大，肿瘤细胞由于快速增殖，使其对氨基酸等营养物质的需求远远大于正常细胞。而β-榄香烯诱导肿瘤细胞凋亡正是通过作用于肿瘤细胞G0/G1期，阻碍肿瘤细胞从S期进入G2、M期，达到抑制肿瘤细胞生长的目的(邹丽娟，李杰，于丽敏，等.β-榄香烯抗癌作用与诱发肿瘤凋亡的研究[J].大连医科大学学报，1998，20(2)9-12)。因此我们设想通过将β-榄香烯与氨基酸结合，使其能选择性地作用于肿瘤细胞的氨基酸转运系统，从而增强β-榄香烯对肿瘤细胞G0/G1期的作用。同时在药物结构中引入氨基酸结构片段也可增强水溶性。
发明内容
本发明的目的是提供一种β-榄香烯氨基酸或羧酸衍生物及制备方法和用途及其制备方法。它是在β-榄香烯的结构中引入含有氨基和(或)羧基的结构片段，合成一些水溶性较好，抗肿瘤活性较β-榄香烯强的衍生物，并对其进行了抗癌活性筛选。通过对此类化合物构效关系进行探讨，寻找结构新颖、水溶性好、活性高的β-榄香烯氨基酸或羧酸衍生物，并提供其制备方法；应用于抗癌药物领域，创制β-榄香烯类抗癌新药。
本发明提供β-榄香烯氨基酸或羧酸衍生物结构如下式III 其中R代表C2-C20各种α-，β-，γ-氨基酸基，以式IIIa方式。
或C2-C20各种α-，β-，γ-氨基酸甲酯基，以式IIIb方式。
或C2-C20各种α-，β-，γ-氨基酸基，或C1-C20各种酰氧基以式IIIc方式。
其中环己烷骨架有三个手性中心。
优选地，本发明提供有式III的β-榄香烯氨基酸或羧酸衍生物，其中R代表各种DL，D，L构型氨基酸基以式IIIa方式。如甘氨酸基，丙氨酸基，苯丙氨酸氨基，蛋氨酸基，亮氨酸基，异亮氨酸基，脯氨酸基，色氨酸基，谷氨酸基，丝氨酸基，半胱氨酸基，胱氨酸基，苏氨酸基，颉氨酸基，酪氨酸基，天门冬氨酸基，精氨酸基，赖氨酸基。
R代表各种DL，D，L构型氨基酸甲酯基以式IIIb方式。如甘氨酸甲酯基，丙氨酸甲酯基，苯丙氨酸甲酯基，蛋氨酸甲酯基，亮氨酸甲酯基，异亮氨酸甲酯基，脯氨酸甲酯基，色氨酸甲酯基，谷氨酸甲酯基，丝氨酸甲酯基，半胱氨酸甲酯基，胱氨酸甲酯基，苏氨酸甲酯基，颉氨酸甲酯基，酪氨酸甲酯基，天门冬氨酸甲酯基，精氨酸甲酯基，赖氨酸甲酯基。
R代表各种DL，D，L构型氨基酸基以式IIIc方式。如甘氨酸基，丙氨酸基，苯丙氨酸氨基，蛋氨酸基，亮氨酸基，异亮氨酸基，脯氨酸基，色氨酸基，谷氨酸基，丝氨酸基，半胱氨酸基，胱氨酸基，苏氨酸基，颉氨酸基，酪氨酸基，天门冬氨酸基，精氨酸基，赖氨酸基；或C1-C10各种酰氧基。
其中环己烷骨架有三个手性中心。
更优选地，本发明提供有式III的β-榄香烯氨基酸或羧酸衍生物，其中R代表各种DL，D，L构型氨基酸基以式IIIa方式。如甘氨酸基，丙氨酸基，苯丙氨酸氨基，蛋氨酸基，亮氨酸基，异亮氨酸基，脯氨酸基，色氨酸基，谷氨酸基。
R代表各种DL，D，L构型氨基酸甲酯基以式IIIb方式。如甘氨酸甲酯基，丙氨酸甲酯基，苯丙氨酸甲酯基，蛋氨酸甲酯基，亮氨酸甲酯基，异亮氨酸甲酯基，脯氨酸甲酯基，色氨酸甲酯基，谷氨酸甲酯基。
R代表各种DL，D，L构型氨基酸基以式IIIc方式。如甘氨酸基，丙氨酸基，苯丙氨酸氨基，蛋氨酸基，亮氨酸基，异亮氨酸基，脯氨酸基，色氨酸基，谷氨酸基；或3-羧基丙酰氧基，3-羧基-2-丙烯酰氧基。
其中环己烷骨架有三个手性中心。
本发明提供了含上述β-榄香烯氨基酸或羧酸衍生物“药用盐”指常规的酸加成盐或碱加成盐，其保留了式III的生物有效性和特性，且与合适的非毒性有机酸或无机酸或有机碱或无机碱成的盐。如盐酸，氢溴酸，氢碘酸，硫酸，磷酸，硝酸，乙酸，酒石酸，水杨酸，甲磺酸，丁二酸，柠檬酸，苹果酸，乳酸，富马酸，马来酸等。碱加成盐包括衍生于钠、钾、铵的盐。在本发明中，本发明化合物特别优选的药用盐为盐酸盐、马来酸盐、钠盐、钾盐。
本发明提供了含上述β-榄香烯氨基酸或羧酸衍生物和药学上可被接受的赋形剂的药物组合物。
本发明所述β-榄香烯氨基酸或羧酸衍生物或组合物可以用于制备各种抗肿瘤的药物。
特别是本发明提供了本发明的β-榄香烯氨基酸或羧酸酸衍生物在制备各种抗肿瘤的药物中的用途。
本发明另外提供了上述β-榄香烯氨基酸或羧酸衍生物的制备方法，其特征在于通过氯代β-榄香烯中间体式II与氨基酸或羧酸反应得到相应的含氮衍生物。
本发明中提供了用于合成β-榄香烯氨基酸或羧酸衍生物的合成路线如下
本发明上述β-榄香烯氨基酸或羧酸衍生物制备过程中所用溶剂为常用溶剂；如乙醇、乙酸乙酯，石油醚、N，N-二甲基甲酰胺，二氯甲烷等。
本发明的优点是所描述的β-榄香烯氨基酸或羧酸衍生物，是为改善β-榄香烯的水溶性和提高抗癌活性，而在其分子中引入氨基酸等含有氨基或羧基的基团所合成的化合物，这些衍生物可能具有更强的生理活性和较大极性，其氨基或羧基便于和酸或碱成盐来达到改善水溶性的目的。
具体实施例方式实施例1 氯代β-榄香烯中间体 和 的制备在装有机械搅拌器的三颈瓶中加入β-榄香烯51.0g(0.25mol)，冰醋酸35mL(0.61mol)，用冰水浴冷却至5℃左右，在搅拌下自恒压滴液漏斗滴加180mL(1.41mol/L，0.254mol)次氯酸钠溶液，约4h滴加完毕，继续反应1h。然后将反应液转移至1L的分液漏斗中，用50mL石油醚(60-90℃)萃取两次，合并有机相，水洗至中性，无水硫酸钠干燥。浓缩，得52.5g浅黄绿色油状物，经硅胶柱层析分离，得单氯代榄香烯即13-氯-β-榄香烯和14-氯-β-榄香烯的混合物20.5g。
实施例2 氨基酸甲酯盐酸盐的制备通法在装有干燥管和尾气吸收装置的100mL三颈瓶中，加入22mmol氨基酸、15mL干燥甲醇，室温搅拌下快速通入干燥的氯化氢气体，至氨基酸完全溶解后，再在加热回流状态下继续通氯化氢2h，浓缩，得白色固体。用1∶3甲醇-乙醚混合溶剂重结晶。
实施例3 β-榄香烯氨基酸甲酯衍生物的制备通法将10mmol胺，单氯代β-榄香烯5mmol，三乙胺10mmol溶于5mL N，N-二甲基甲酰胺中，回流8-20h。滤出生成的三乙胺盐酸盐针状结晶，滤液加入10mL水，用石油醚-乙醚萃取4次，萃取液干燥浓缩，用硅胶制备薄层分离。
实施例4 的合成以甘氨酸为原料，按实施例2氨基酸甲酯盐酸盐的制备通法制备甘氨酸甲酯盐酸盐，再按实施例3β-榄香烯氨基酸甲酯衍生物的制备通法制备。MS(m/z)292(M+1)；1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.00(3H，s)，1.42-1.74(9H，m)，1.99-2.01(2H，m)，3.24(2H，s)，3.40(2H，s)，3.73(3H，s)，4.58-4.96(6H，m)，5.77-5.86(1H，dd)实施例5 的合成以DL-丙氨酸为原料，按实施例2氨基酸甲酯盐酸盐的制备通法制备丙氨酸甲酯盐酸盐，再按实施例3β-榄香烯氨基酸甲酯衍生物的制备通法制备。MS(m/z)306(M+1)；1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.99(3H，s)，1.31(3H，d)，1.45-1.74(9H，m)，2.00(2H，m)，3.12(1H，d)，3.23(1H，d)，3.36(1H，q)，3.73(3H，s)，4.58-4.96(6H，m)，5.77-5.86(1H，dd)实施例6 的合成以DL-苯丙氨酸为原料，按实施例2氨基酸甲酯盐酸盐的制备通法制备苯丙氨酸甲酯盐酸盐，再按实施例3β-榄香烯氨基酸甲酯衍生物的制备通法制备。MS(m/z)382(M+1)；1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.94(3H，s)，1.34-1.61(6H，m)，1.70(3H，s)，1.87-1.91(2H，m)，2.90-2.97(2H，dd)，3.03(1H，d)，3.28(1H，d)，3.51(1H，t)，3.67(3H，s)，4.56-4.91(6H，m)，5.74-5.84(1H，dd)，7.12-7.25(2H，m)，7.26-7.31(3H，m)实施例7 的合成以DL-色氨酸为原料，按实施例2氨基酸甲酯盐酸盐的制备通法制备色氨酸甲酯盐酸盐，再按实施例3β-榄香烯氨基酸甲酯衍生物的制备通法制备。EI-MS m/z420(M+)；1H-NMR(CDCl3)δ0.93(3H，s)，1.22-1.53(6H，m)，1.61-1.87(5H，m)，3.05-3.27(4H，m)，3.60-3.66(1H，m)，3.66(3H，s)，4.53-4.92(6H，m)，5.76(1H，dd)，7.02-7.62(5H，m)实施例8 的合成以L-亮氨酸为原料，按实施例2氨基酸甲酯盐酸盐的制备通法制备亮氨酸甲酯盐酸盐，再按实施例3β-榄香烯氨基酸甲酯衍生物的制备通法制备。EI-MS m/z347(M+)；1H-NMR(CDCl3)δ0.99(9H，s)，1.13-2.13(14H，m)，3.84(6H，brs)，4.57-5.30(6H，m)，5.82(1H，m)实施例9 的合成以L-异亮氨酸为原料，按实施例2氨基酸甲酯盐酸盐的制备通法制备异亮氨酸甲酯盐酸盐，再按实施例3β-榄香烯氨基酸甲酯衍生物的制备通法制备。ESI-MS m/z348(M+1)；1H-NMR(CDCl3).δ0.90(6H，m)，1.00(3H，s)，1.45-1.74(12H，m)，2.03(2H，m)，3.00-3.25(3H，m)，3.72(3H，s)，4.58-4.97(6H，m)，5.82(1H，dd)实施例10 的合成以DL-蛋氨酸为原料，按实施例2氨基酸甲酯盐酸盐的制备通法制备蛋氨酸甲酯盐酸盐，再按实施例3β-榄香烯氨基酸甲酯衍生物的制备通法制备。ESI-MS m/z366(M+1)；1H-NMR(CDCl3)δ0.98(3H，s)，1.44-1.98(13H，m)，2.10(3H，s)，2.60(2H，t)，2.94-3.10(2H，m)，3.35(1H，m)，3.70(3H，s)，4.58-4.95(6H，m)，5.82(1H，dd)实施例11 的合成以L-脯氨酸为原料，按实施例2氨基酸甲酯盐酸盐的制备通法制备脯氨酸甲酯盐酸盐，再按实施例3β-榄香烯氨基酸甲酯衍生物的制备通法制备。EI-MS m/z331(M+)；1H-NMR(CDCl3)δ1.00(3H，s)，1.25-2.10(17H，m)，3.02(3H，m)，3.69(3H，s)，4.15-4.92(6H，m)，5.80(1H，m)实施例12 的合成以L-谷氨酸为原料，按实施例2氨基酸甲酯盐酸盐的制备通法制备谷氨酸甲酯盐酸盐，再按实施例3β-榄香烯氨基酸甲酯衍生物的制备通法制备。ESI-MS m/z402(M+K)；1H-NMR(CDCl3)δ0.99(3H，s)，1.44-1.74(7H，m)，1.97-2.53(8H，m)，3.38(1H，d)3.75(3H，s)，4.13(1H，dd)，4.50(1H，d)，4.59-4.98(6H，m)，5.80(1H，dd)实施例13 β-榄香烯氨基酸衍生物的制备制备通法将β-榄香烯氨基酸甲酯衍生物按摩尔比1∶4的比例加入10％NaOH水溶液和2mL丙酮，在50-60℃下搅拌5-6小时后，用2M盐酸调pH5-6即析出固体，过滤得β-榄香烯氨基酸衍生物。
实施例14 的合成以实施例4的产品为原料，按实施例13β-榄香烯氨基酸衍生物的制备通法制备。ESI-MS m/z278(M+1)，300(M+Na)；1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.98(3H，s)，1.25-1.56(6H，m)，1.69(3H，s)，2.03(2H，m)，3.49(2H，s)，3.64(2H，s)，4.56-5.84(6H，m)，5.75-5.84(1H，dd)实施例15 的合成以实施例5的产品为原料，按实施例13β-榄香烯氨基酸衍生物的制备通法制备。ESI-MS m/z292(M+1)，314(M+Na)；1H-NMR(DMSO)δ(ppm)0.94(3H，d)，1.25(3H，d)，1.35-1.58(6H，m)，1.70(3H，d)，1.99(1H，m)，2.20(1H，m)，3.17-3.40(3H，m)，4.58-5.21(6H，m)，5.77-5.87(1H，dd)实施例16 的合成以实施例6的产品为原料，按实施例13β-榄香烯氨基酸衍生物的制备通法制备。ESI-MS m/z368(M+1)，390(M+Na)；1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)0.92(3H，m)，1.25-6.17(6H，m)，1.85(1H，m)，1.87(3H，s)，1.95(1H，m)，3.25(5H，m)，4.53-4.99(6H，m)，5.78(1H，dd)，7.32(5H，s)实施例17 的合成以实施例7的产品为原料，按实施例13β-榄香烯氨基酸衍生物的制备通法制备。EI-MS m/z394(M+)；1H-NMR(CDCl3)δ0.90(3H，s)，1.42-1.91(11H，m)，3.00(1H，m)，3.38-3.50(2H，m)，4.00(2H，m)，4.60-5.37(6H，m)，5.76-5.90(1H，dd)，7.06-7.55(5H，m)实施例18 的合成以实施例8的产品为原料，按实施例13β-榄香烯氨基酸衍生物的制备通法制备。EI-MS m/z333(M+)；1H-NMR(CDCl3)，δ9.01(3H，s)，0.97(6H，s)，1.16-1.60(6H，m)，1.62-1.82(6H，m)1.99(2H，m)，3.35-3.60(3H，m)，4.56-5.39(6H，m)，5.72(1H，dd)实施例19 的合成以实施例9的产品为原料，按实施例13β-榄香烯氨基酸衍生物的制备通法制备。ESI-MS m/z334(M+1)；1H-NMR(CDCl3)δ0.90(3H，s)，0.99(6H，s)，1.45-1.70(11H，m)，2.01(3H，brs)，3.30-3.56(3H，m)，4.57-5.20(6H，m)，5.79(1H，m)
实施例20 N-叔丁氧酰基氨基酸的制备通法将4mmol氨基酸、0.7mL(4.8mmol)三乙胺、7mLDMF，搅拌，加热至45℃，滴加1.9g(8.8mmol)(BOC)2O(二碳酸二叔丁基酯)，维持此温度搅拌至氨基酸完全溶解，室温继续反应0.5-1h。加入10mL蒸馏水和10mL乙酸乙酯，分离有机相和水相，有机相用蒸馏水(10mL×5)萃取，合并水相，用6mol/L的盐酸调pH值至3。再用乙酸乙酯(10mL×4)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，得淡黄色油状物。
实施例21 [(N-叔丁氧酰基)-氨基酸]-(β-榄香烯-13-基)酯的制备通法将β-榄香烯单氯代物(2.5mmol)，N-叔丁氧酰基氨基酸(5mmol)，三乙胺1.4mL(10mol)、10mLDMF，油浴90℃反应。冷却后，加入10mL蒸馏水和10mL乙酸乙酯，分离有机相和水相，水相用乙酸乙酯(10mL×4)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经柱层析和薄层层析分离，得棕色油状物。
实施例22 氨基酸-(β-榄香烯-13-基)酯的制备通法将实施例21的产物，加入氯化氢的乙酸乙酯溶液15mL(2.5mol/L)的，于45℃搅拌反应24h至原料点消失。冷却，用3mol/L的碳酸钠水溶液调节pH值至8，分离有机相和水相，水相用乙酸乙酯(10mL×4)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩，经柱层析分离，得黄色油状物。再向其中边搅拌边缓缓滴饱和的氯化氢乙醚溶液，至pH值为6，白色沉淀析出，过滤，洗涤，得白色粉末状盐酸炎。
实施例23 以DL-色氨酸为原料，实施例20N-叔丁氧酰基氨基酸的制备通法制得N-叔丁氧酰基色氨酸，再按照实施例21的制备通法制备[(N-叔丁氧酰基)-氨基酸]-(β-榄香烯-13-基)酯，然后按照实施例22氨基酸-β-榄香烯基-13-酯的制备通法，脱去保护基BOC，制得色氨酸-β-榄香烯基-13-酯。MS m/z406(M+)，1H-NMR(CDCl3)δ0.99(3H，s)，1.45-1.70(9H，m)，1.97(2H，m)，3.39(2H，m)，4.02(1H，brs)，4.46(2H，s)，4.59-5.01(6H，m)，5.80(1H，dd)，7.00-7.38(5H，m)实施例24 的合成以L-亮氨酸为原料，按照实施例23步骤进行制备。EI-MS m/z86(100)，304(5)，288(2)，203(8)；1H-NMR(CDCl3)δ0.92-0.96(6H，t)，1.01(3H，s)，1.44-1.74(12H，m)，1.98-2.03(2H，m)，3.51(1H，dd)，4.58-5.06(8H，m)，5.82(1H，dd)实施例25 的合成以L-异氨胺酸为原料，按照实施例23步骤进行制备。ES I-MS m/z355[M-H+Na]+，203；1H-NMR(CDCl3)δ0.92-0.96(6H，m)，1.01(3H，s)，1.47-1.74(12H，m)，1.98-2.03(2H，m)，3.51(1H，dd)，4.59-5.06(8H，m)，5.82(1H，dd)实施例26 的合成以DL-蛋氨酸为原料，按照实施例23步骤进行制备。EI-MS m/z352(M+1)；1H-NMR(CDCl3)δ1.01(3H，s)，1.48-1.71(11H，m)，2.2-2.10(2H，m)，2.11(3H，s)，2.64(2H，t)，3.64(1H，dd)，4.59-5.06(8H，m)，5.82(1H，dd)实施例27 的合成以DL-丙氨酸为原料，按照实施例23步骤进行制备。EI-MS m/z276(1)，262(9)，203(2)，44(100)；1H-NMR(CDCl3)δ1.01(3H，s)，1.34-1.70(12H，m)，1.98-2.03(2H，m)，3.61(1H，dd)，4.59-5.07(8H，m)，5.74-5.86(1H，m)实施例28 的合成以DL-苯丙氨酸为原料，按照实施例23步骤进行制备。EI-MS m/z368(M+1)；1H-NMR(CDCl3)δ1.02(3H，s)，1.50-1.75(9H，m)，1.99-2.04(2H，m)，2.91-3.11(2H，m)，3.76-3.80(1H，m)，4.60-5.82(8H，m)，5.81(1H，dd)，7.20-7.32(5H，m)实施例29 的合成将丁二酸10mmol，三乙胺10mmol，单氯代β-榄香烯5mmol，溶于5mLN，N-二甲基甲酰胺中，回流8-20h。滤出生成的三乙胺盐酸盐针状结晶，滤液加入10mL水，用石油醚-乙醚萃取4次，萃取液干燥浓缩，用硅胶制备薄层分离。于丙酮中与碳酸钠成钠盐。EI-MS m/z343(M+Na)；H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.00(3H，s，-CH3)，1.47-1.68(6H，m)，1.70(3H，s)，1.98-2.04(2H，m)，2.68(4H，s)，4.51-5.00(8H，m)，5.77-5.86(1H，dd)实施例30 的合成以马来酸为原料，按照实施例29方法制备及成钠盐。EI-MS m/z317(M-1)；1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)1.01(3H，s)，1.48-1.75(9H，m)，1.99-2.18(2H，m)，4.59-5.18(8H，m)，5.77-5.87(1H，dd)，6.88(1H，d)，7.00(1H，d)。
下述实施例为本发明的抗癌药理活性实验，也可以选择其它种类的癌细胞进行实验下面的实施例并不限制本发明。
实施例31用SRB法测定了目标化合物对三种人癌细胞的增殖抑制作用。取对数生长期的Hela、SGC-7901、HL-60三种人癌细胞以4×104cell/mL接种于96孔板内。在37℃、5％CO2的饱和湿度培养箱中培养12h，加药处理48h后，浮游细胞HL-60需每孔加入50μL4℃预冷的80％TCA，使其终浓度为16％；贴壁细胞则需每孔加入50μL4℃预冷的50％TCA，使其终浓度为10％。4℃冰箱固定细胞1h后，加入0.4％SRB，50μL/well，室温染色30min。最后加入10mMTris碱，150μL/well，在微量振荡器上振荡15min，直至染料全部溶解，利用酶标仪在540nm处测每孔溶液的吸光度值(OD值)，减去空白孔吸光度值。按以下公式计算药物对肿瘤细胞体外增殖的抑制率(Inhibition Rate，IR％)IR％＝(1-ODsample/ODcontrol)×100％用ICP1.0.0软件计算药物的半数抑制浓度(IC50)。
用上述方法测定了实施例中的25个化合物对三种人癌细胞HL-60、Hela、SGC-7901细胞的增殖抑制作用，计算药物的半数抑制浓度(IC50)如表1所示。其中大部分化合物活性高于先导化合物β-榄香烯(III)，这一结果说明通过在β-榄香烯结构中引入氨基酸或有机酸结构，可以增强β-榄香烯的体外抗癌活性。
表1 目标化合物对癌细胞的半数抑制浓度(IC50)
权利要求
1.β-榄香烯氨基酸或羧酸衍生物，其特征在于所述衍生物结构如下式III 其中R代表C2-C20各种α-，β-，γ-氨基酸基；C1-C20各种酰氧基；其中环己烷骨架有三个手性中心。
2.根据权利要求1所述β-榄香烯氨基酸或羧酸衍生物，其特征在于其中R代表各种DL-构型，D-构型，L-构型氨基酸基，甘氨酸基，丙氨酸基，苯丙氨酸基，蛋氨酸基，亮氨酸基，异亮氨酸基，脯氨酸基，色氨酸基，谷氨酸基，丝氨酸基，半胱氨酸基，胱氨酸基，苏氨酸基，颉氨酸基，酪氨酸基，天门冬氨酸基，精氨酸基，赖氨酸基；C1-C10各种酰氧基；其中环己烷骨架有三个手性中心。
3.根据权利要求1或2所述β-榄香烯氨基酸或羧酸衍生物，其特征在于其中R代表各种DL，D，L构型氨基酸基，甘氨酸基，丙氨酸基，苯丙氨酸基，蛋氨酸基，亮氨酸基，异亮氨酸基，脯氨酸基，色氨酸基，谷氨酸基，3-羧基丙酰氧基，3-羧基-2-丙烯酰氧基；其中环己烷骨架有三个手性中心。
4.一种如权利要求1所述β-榄香烯氨基酸或羧酸衍生物的制备方法，其特征在于通过氯代β-榄香烯中间体式(II)与氨基酸或羧酸反应得到相应的β-榄香烯氨基酸衍生物，β-榄香烯氨基酸或羧酸衍生物制备过程中所用溶剂为常用溶剂，乙醇、乙酸乙酯，石油醚、N，N-二甲基甲酰胺，二氯甲烷， 合成β-榄香烯氨基酸或羧酸衍生物的合成路线如下 所谓氨基酸为甘氨酸，丙氨酸，苯丙氨酸，蛋氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，脯氨酸，色氨酸，谷氨酸，所谓羧酸为琥珀酸，马来酸，富马酸、苹果酸；其中环己烷骨架有三个手性中心。
5.β-榄香烯氨基酸或羧酸衍生物“药用盐”，其特征在于指常规的酸加成盐或碱加成盐，其保留了式III的生物有效性和特性，且与合适的非毒性有机酸或无机酸或有机碱或无机碱成的盐。
6.一种β-榄香烯氨基酸或羧酸衍生物的组合物，其特征在于该组合物是由β-榄香烯氨基酸或羧酸衍生物和药学上可被接受的赋形剂组成的。
7.β-榄香烯氨基酸或羧酸衍生物的用途，其特征在于所述的β-榄香烯氨基酸或羧酸衍生物在制备抗癌药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种β－榄香烯氨基酸或羧酸衍生物，它提供了β－榄香烯氨基酸或羧酸衍生物及制备方法和用途及其制备，其衍生物结构如式III。其中R代表C2－C20各种α－，β－，γ－氨基酸基；C1－C20各种酰氧基；其中环己烷骨架有三个手性中心。该衍生物是为改善β－榄香烯的水溶性和提高抗癌活性，而在其分子中引入氨基酸等含有氨基或羧基的基团所合成的化合物，该衍生物具有更强的生理活性和较大极性，达到改善水溶性的目的。
文档编号C07C69/00GK1844084SQ20061008162
公开日2006年10月11日 申请日期2006年5月10日 优先权日2006年5月10日
发明者黄金华, 徐莉英, 王敏伟 申请人:沈阳药科大学