治疗疼痛的方法和组合物的制作方法

专利名称：治疗疼痛的方法和组合物的制作方法
治疗疼痛的方法和组合物
相关申请
本申请请求2005年12月22日提交的美国临时申请顺序号 US60/753, 665和2006年6月29日提交的美国临时申请顺序号 US60/817， 892的优先权利益。将上述申请的说明书各自完整地引入本 文作为参考。
背景
存在各种介导通过细胞膜的离子流的离子通道蛋白。离子通道蛋 白的适当表达和功能是维持细胞功能，胞内通讯等所必需的。许多疾 病是膜电位错误调节或异常锔处理的结果。由于得知了离子通道在调 节细胞中膜电位和离子流中的关键重要性，所以鉴定可以促进或抑制 特定离子通道的活性剂作为研究工具和可能的治疗剂具有重大意义。
一种这类通道为瞬时型感受器电位Al (TRPA1)通道(ANKTM1)。 TRPA1为钩可透过通道，特别是非选择性钧可透过的阳离子通道。除 钙离子外，TRPA1通道还可透过其它阳离子，例如钠。因此，TRPAl 通道通过调节诸如钩和钠离子这类阳离子流调节膜电位。尽管诸如 TRPAl这类非选择性阳离子通道调节锔离子流等，但是它们在机制上 不同于电压控制钙通道。 一般而言，电压控制钩通道对通过膜的电位
水平或浓度快:i增加:相反，非选择性阳离子通道一般^信号转导控
制的，持续长久的，并且在离子浓度上产生的快速改变较小。这些机 制上的差异伴随电压控制和阳离子可透过通道中的结构差异。因此， 尽管许多不同的通道起调节各种细胞类型中的离子流和膜电位的作用 并且对大量刺激起反应，但是重要的是认识到不同类离子通道中的显 著结构，功能和机制差异。
因为离子通道错误调节通常与病理学情况相关，所以期望鉴定和
制备可以调节离子通道，包括TRPA1的一种或多种功能的化合物。这 类化合物具有各种体外和体内应用。
概述
实现细胞动态平衡的一个重要方面在于维持发育过程中不同细胞 类型中的适当离子浓度和对大量刺激物的反应。大量不同类型的离子 通道通过使离子通过质膜运动进入和离开细胞和通过细胞内细胞器使 离子运动通过膜起维持细胞动态平衡的作用所述的细胞内细胞器包 括，例如内质网，肌质网，线粒体和胞吞细胞器，包括内颗粒和溶酶 体。 一种这类离子通道为非选择性阳离子通道TRPA1。 TRPA1为阳离子 可透过的并且属于较大家族的TRP离子通道。
已经将TRP通道分类为至少6族TRPC(短)，TRPV(香草素)， T醒(长，melastatin) ， TRPP(多嚢蛋白)，T醒L(mucolipins)和 TRPA(ANKTM1)。可以基于序列同源性和功能相似性将TRPC族分成4 个亚族(TRPC1， TRPC4，5， TRPC3， 6， 7和TRPC2)。目前TRPV家族具有 6个成员。TRPV5和TRPV6比TRPV1, TRPV2， TRPV3或TRPV4更接近 于彼此相关。TRPA1最接近于与TRPV3相关并且比TRPV5和TRPV6更 接近于与TRPV1和TRPV2相关。TRPM家族具有8个成员。组成包括下 列基础成员T固l (Melastatin或LTRPC1) ， TRPM3 (KIAA1616或 LTRPC3) , TRPM7(TRP-PLIK， ChaK(l), LTRPC7) ， TRPM6 (ChaK2)， TRPM2(TRPC7或LTRPC2)， TRPM8 (Trp-p8或CMR1), TRPM5(Mtrl或 LTRPC5)和TRPM4 (FLJ20041或LTRPC4) 。 TRPA家族的唯一哺乳动物成 员为ANKTM1。TRPML家族由mucolipins组成，包括TRPML1 (mucolipins 1)， TRPML2 (mucolipins 2)和TRPML3 (mucolipin3) 。 TRPP家族由2 族通道组成预测具有6个跨膜结构域的那些和具有11个跨膜结构域 的那些。预测TRPP2(PKD2)， TRPP3(PKD2L1) ， TRPP5 (PKD2L2)均具有 6个跨膜结构域。认为TRPP1 (PKD1， PC1) ， PKD-REJ和PKD-1L1均具 有11个跨膜结构域。
TRP通道构成了涉及调节细胞动态平衡的大和重要类型通道。本 发明提供了调节至少一种TRP家族成员的方法和组合物。特别地，本 发明提供了用于拮抗TRPA1功能的方法和组合物。调节TRPA1功能提 供了调节细胞中钙动态平衡，钠动态平衡，细胞内钙水平，膜极化(静 息膜电位)和/或阳离子水平的方式。可以调节一种或多种TRPA1功能 的化合物用于许多方面，包括，但不限于维持4丐动态平衡；维持钠动 态平衡；调节胞内钙水平；调节膜极化(膜电位)；调节阳离子水平； 和/或治疗或预防与钓动态平衡，钠动态平衡，钙或钠生理紊乱或膜极 化/超极化(包括低兴奋性和超兴奋性)相关的疾病，病症或疾患，和/ 或治疗或预防与调节或错误调节TRPA1表达或功能相关的疾病，病症 或疾患。另外，本发明在某些实施方案中提供了拮抗TRPA1功能和一 种或多种另外的TRP通道功能中的方法和组合物。
本申请提供了可以调节TRPA1功能的合物。还提供了使用这些化 合物的方法。某些实施方案提供了调节细胞或动物的TRPA1功能的方 法，包括给予有效量的抑制TRPA1功能的化合物，其中该化合物抑制 TRPA1-介导的离子流。某些实施方案提供了调节细胞中TRPA1功能的 方法，包括对该细胞给予有效量的抑制TRPA1功能的化合物，其中该 化合物抑制TRPA1介导的外向电流。某些实施方案提供了调节细胞中 TRPA1功能的方法，包括对该细胞给予有效量的抑制TRPA1功能的化 合物，其中该化合物抑制TRPA1介导的内向电流。某些实施方案提供 了调节细胞中TRPA1功能的方法，包括对该细胞给予有效量的抑制 TRPA1功能的化合物，其中该化合物抑制TRPA1介导的内向和外向电 流。某些实施方案还提供了预防或治疗与受试者TRPA1功能相关的疾 病或疾患的方法，包括对该受试者给予治疗有效量的抑制TRPA1功能 的化合物，其中该化合物抑制TRPA1介导的内向电流。某些实施方案 还提供了预防或治疗与受试者TRPA1功能相关的疾病或疾患的方法， 包括对该受试者给予治疗有效量的抑制TRPA1功能的化合物，其中该 化合物抑制TRPA1介导的外向电流。某些实施方案还提供了预防或治 疗与受试者TRPA1功能相关的疾病或疾患的方法，包括对该受试者给
予治疗有效量的抑制TRPA1功能的化合物，其中该化合物抑制TRPA1 介导的内向和外向电流。某些实施方案提供了预防或治疗与受试者 TRPA1功能相关的疾病或疾患的方法，包括对该受试者给予治疗有效 量的抑制TRPA1功能的化合物，其中该化合物抑制TRPA1介导的离子 流。注意抑制特定的电流意旨化合物在体外或体内试验中抑制该电流 (例如，内向和/或外向)的能力。在体内或体外试验中抑制特定电流用 作特定化合物的特定功能活性的代表。
下列文章为有关TRPA1结构和功能的本领域技术状态中的典型 (Jordt等(20(H) Nature 427: 260-265; Bautista等，(2005) PNAS: 102 (34): 12248-12252)。将上述文章完整地引入作为参考。
本发明的一个方面涉及治疗或预防涉及TRPA1活化或降低的 TRPA1活性能减轻其严重性的疾患的方法，通过给予抑制TRPA1-介导 的电流和/或TRPAl-介导的离子流的TRPA1拮抗剂来进行。下文详细 描述了 TRPA1拮抗剂，它们具有测定的IO微摩尔或IO微摩尔以下，5 微摩尔或5微摩尔以下，2微摩尔或2微摩尔以下，l微摩尔或l微摩 尔以下，500纳摩尔或500纳摩尔以下，200纳摩尔或200纳摩尔以下， 100纳摩尔或100纳摩尔以下和甚至10納摩尔或10纳摩尔以下的 TRPA1的IC5。。在某些实施方案中，TRPA1拮抗剂以1微摩尔，或l微 摩尔以下，更以优选500纳摩尔或500纳摩尔以下，200纳摩尔或200 纳摩尔以下，100纳摩尔或100纳摩尔以下，25纳摩尔或25纳摩尔以 下和甚至IO纳摩尔或IO纳摩尔以下的IC5。抑制内向和外向TRPAl-介 导的电流之一或两者。在某些实施方案中，在以5微摩尔或5微摩尔 以下和甚至更优选1微摩尔或1微摩尔给药时，TRPA1拮抗剂抑制至 少95%的TRPAl-介导的电流或TRPAl-介导的离子流。
在某些实施方案中，主题TRPA1拮抗剂以低于其抑制TRPV5， TRPV6， NaV 1.2， TRPV1，线粒体单向转运体和hERG通道活性中的一
种或多种的ICs。至少一个数量级且甚至更优选低于其两个乃至三个数
量级的ICs。抑制TRPA1。
在某些实施方案中，主题TRPA1拮抗剂对抑制TRPA1活性的选择
性是对抑制TRPV5， TRPV6， NaV 1. 2， TRPV1，线粒体单向转运体或hERG 通道活性至少10， 20, 30, 40或50倍。换句话说，该拮抗剂抑制TRPA1 活性(TRPA1中一种或多种功能)的功效是上述通道中的一种或多种 10， 20， 30， 40或50倍。
在某些实施方案中，主题TRPA1拮抗剂以比其对AMPA受体的Ki 更有效至少一个数量级的ICs。抑制TRPA1。在某些实施方案中，主题 TRPA1拮抗剂以比其对AMPA受体的Ki更有效至少两个数量级或乃至 三个数量级或四个数量级的ICs。抑制TRPA1。在某些实施方案中，主 题TRPA1拮抗剂并非明显地结合AMPA受体。换句话说，主题拮抗剂以 特定的ICs。抑制TRPA1，并且在以该浓度给药时，该拮抗剂并非明显 地结合AMPA受体(例如，特异性和明显地结合AMPA受体)。在某些实 施方案中，本发明的化合物以比其对AMPA受体的Ki更有效的ICsq抑 制TRPAl-介导的电流。在这类实施方案中，主题TRPA1抑制剂减轻疼 痛的能力由此不依赖于结合和调节涉及接受神经性疼痛的(a-氨基 -3-羟基-5-甲基-4-异喁唑丙酸(AMPA)受体。
在某些实施方案中，TRPA1拮抗剂以低于其抑制TRPV1的ICs。至 少一个数量级的，甚至更优选两个或乃至低于其三个数量级的ICs。抑 制TRPA1。在某些实施方案中，基于具有大于IO微摩尔的TRPV1抑制 的ICs。选择对TRPA1比对TRPV1具有选择性的主题TRPA1拮抗剂。
在某些实施方案中，TRPA1拮抗剂以IO微摩尔或IO微摩尔以下 的ICs。抑制TRPV2， TRPV4， TRPV3和/或TRPM8中的一种或多种。
在某些实施方案中，TRPA1拮抗剂具有的使用所述化合物治疗所 述疾患的治疗指数(T. I.)为10或IO以上且甚至更优选具有的T. I.至 少为25， 50或乃至100。
在优选的实施方案中，TRPA1抑制剂具有TRPA1抑制的IC5。，在该 浓度下，它不会导致患者的QT间隔延长，也不会改变患者的温度调节。
在某些实施方案中，TRPA1抑制剂用于治疗或改善疼痛。可以使 用TRPA1抑制剂治疗的典型类型的疼痛包括，但不限于伤害性疼痛， 炎性疼痛和神经性疼痛。可以用TRPA1抑制剂治疗的疼痛可以为慢性
或急性的。
在某些实施方案中，TRPA1抑制剂用于治疗或改善失禁症状。
在某些实施方案中，TRPA1抑制剂为非镇静剂且几乎没有或无镇 静副作用。在某些其它实施方案中，TRPA1抑制剂可以以少于镇静疼 痛緩解剂的副作用用于治疗或改善疼痛。在TRPV3抑制剂的有效剂量 下基本上不存在的典型副作用包括眼球突出，僵直性昏厥，肠能动性 破坏和身体非损伤区域中的感觉抑制中的一种或多种。
在某些实施方案中，用于治疗本文披露的疾病或适应征中的任意 种的TRPAl抑制剂具有本文披露的结构或功能特征中的 一种或多种。
在某些实施方案中，本发明提供了治疗或预防涉及TRPA1活化的 疾患或降低的TRPA1活性能减轻其严重性的疾患的方法，包括给予有 效量的式I的化合物，或其盐，或该化合物或其盐的溶剂合物，水合 物，氧化代谢物或前体药物
其中
W表示0或S，优选S;
R每次出现时独立地表示H或低级烷基，优选H;
r表示取代或未被取代的烷基，或取代或未被取代的芳基； E表示羧酸(C02H)，酯或酰胺；且 Ar表示取代或未被取代的芳基环；且
其中所述的化合物以10微摩尔或10微摩尔以下的ICs。抑制 TRPA1。
在某些实施方案中，本发明提供了治疗或预防涉及TRPA1活化或 降低的TRPA1活性能减轻其严重性的疾患的方法，包括给予有效量的 式II的化合物，或其盐，或该化合物或其盐的溶剂合物，水合物，氧 化代谢物或前体药物
<formula>formula see original document page 29</formula>
其中n为1 - 3的整数；且 Rz表示取代基；且
其中所述的化合物以10微摩尔或10微摩尔以下的ICs。抑制 TRPA1。
在某些实施方案中，R2表示任选取代的烷基，任选取代的芳基， 任选取代的杂芳基，任选取代的芳烷基，任选取代的环烷基，任选取 代的杂环基或任选取代的杂芳烷基。
1
在某些实施方案中，当n-l时，R2不为 <formula>formula see original document page 29</formula>在 某些实施方案中，本发明提供了治疗或预防涉及TRPA1活化或降低的 TRPA1活性能减轻其严重性的疾患的方法，包括给予有效量的式III 的化合物，或其盐，或该化合物或其盐的溶剂合物，水合物，氧化代 谢物或前体药物<formula>formula see original document page 29</formula>其中
n为1-3的整数；且 R2表示取代基；且 其中所述的化合物以10微> TRPA1。
尔或10微摩尔以下的ICs。抑制
在某些实施方案中，R2表示任选取代的烷基，任选取代的芳基，
任选取代的杂芳基，任选取代的芳烷基，任选取代的环烷基，任选取 代的杂环基或任选取代的杂芳烷基。
在某些实施方案中，本发明提供了治疗或预防涉及TRPA1活化或 降低的TRPA1活性能减轻其严重性的疾患的方法，包括给予有效量的 式IV的化合物，或其盐，或该化合物或其盐的溶剂合物，水合物，氧 化代谢物或前体药物
其中
l每次出现时独立地表示H或低级烷基； R2的一次出现不存在且R2的一次出现为MmR3; R3表示取代或未被取代的芳基；
M每次出现时独立地表示取代或未被取代的亚甲基(例如用低级 烷基，氧代，羟基等取代)，
NR:， 0， S， S(0)或S(02)，优选进行选择，以便没有两个杂原子 是彼此连接的；且
m为0-10的整数；且
其中所述的化合物以IO微摩尔或其以下的ICs。抑制TRPAl介导的 电流。
在某些实施方案中，NUl3表示 x ，其中n为0-4的整 数；且
X为-C(-O)O-或-C(=0)NR4-，其中R4为H或低级烷基，优选 -C (=0)NH-。
本发明的一个方面提供了适用于人类患者或兽类应用的药物制 剂，其包含有效量的如上所示化合物中的任意种(例如式I，式II,式
in或式iv的化合物，或其盐，或该化合物或其盐的溶剂合物，水合
物，氧化代谢物或前体药物)和一种或多种药学上可接受的赋形剂。在
某些实施方案中，该药物制剂可以用于治疗或预防涉及TRPA1活化或 降低的TRPA1活性能减轻其严重性的疾患。在某些实施方案中，该药 物制剂具有适用于人类患者或兽类应用的足够低的热原活性。在某些 实施方案中，该药物制剂包含有效量的如上所示化合物中的任意种， 其中该化合物以IO微摩尔或IO微摩尔以下的ICs。抑制TRPA1 (例如， TRPAl-介导的电流和/或TRPAl-介导的离子流)。在某些实施方案中， 该化合物以5微摩尔或5微摩尔以下，2微摩尔或2微摩尔以下，1 微摩尔或1微摩尔以下的IC5。，或乃至500 nM或500 nM以下，250 nM 或250 nM以下，200 nM或200 nM以下，或乃至100 nM或100 nM以 下的ICs。抑制TRPA1。
在某些实施方案中，用于本发明方法或药物制剂的TRPA1抑制剂 选自表1-2中所示的化合物。在某些实施方案中，本发明关注表l-2 中所示任意化合物在本发明的任何方法或药物制剂中的应用。
本发明的TRPA1拮抗剂可以用作预防或治疗各种病症和疾患的组 成部分，所示的病症和疾患包括，但不限于急性和/或慢性痛，触摸敏 感性，灼伤，炎症，糖尿病性神经病，银屑病，湿疹，皮炎，疱疹后 神经痛(带状疱渗)，偏头痛，失禁，发热，热潮红，骨关节炎，口腔 粘膜炎，癌性痛，膀胱炎，与克罗恩病和肠易激综合征(IBS)相关的疼 痛，类风湿性关节炎，格-巴综合征(更熟知为灼热足综合征)，口灼伤 综合征(BMS)和咳嗽；或本发明的TRPA1拮抗剂可以用作促进或抑制患 者毛发生长的脱毛药。可以使用本发明TRPA1拮抗剂治疗的其它典型 疾病或疾患在本说明书中详细描述。本发明关注具有本说明书中提供 的任何结构的化合物在治疗或减轻本申请中披露的疾病或疾患的症状 中的应用。本发明进一步关注具有本说明书中提供的任何结构的化合 物在制备治疗或减轻本说明书中提供的任何疾病或疾患症状的药剂或 药物制剂中的应用。可以将用于治疗特定疾病或疾患的化合物配制成 可通过适合于特定疾病或疾患的途经给药。
可以单独或与其它治疗剂一起给予TRPA1拮抗剂。例如，将TRPA1
拮抗剂与抗炎药，抗痤疮药，抗皱紋药，抗瘢痕形成药，抗牛皮癣药， 抗增殖药，抗真菌药，抗病毒药，杀菌剂，抗偏头痛药，角质层分离 剂或毛发生长抑制剂中的 一种或多种共同给药。
可以通过局部，口服，透皮，直肠，阴道，非肠道，鼻内，目艮内，
静脉内，肌内，动脉内，鞘内，嚢内，B匡内，心内，皮内，腹膜内， 经气管，皮下，表皮下，关节内，嚢下，蛛网膜下，脊柱内，胸骨内 或通过吸入给予TRPA1拮抗剂。
在某些优选的实施方案中，通过局部给予TRPA1拮抗剂。 在某些优选的实施方案中，通过口服给予TRPA1拮抗剂。 在某些优选的实施方案中，通过非肠道给予TRPA1拮抗剂。 在某些优选的实施方案中，给予TRPA1拮抗剂以便预防，治疗或 緩解急性痛，慢性痛，触摸敏感性，瘙痒敏感性的体征和症状或作为 治疗灼伤，诸如，例如术后痛，癌性痛或神经性疼痛的组成部分。
在某些优选的实施方案中，给予TRPA1拮抗剂以便预防，治疗或 緩解偏头痛的体征和症状。
在某些优选的实施方案中，给予TRPA1拮抗剂以便预防，治疗或 緩解病症或疾患的体征和症状，所示的病症或疾患选自糖尿病性神经 病，炎症，银屑病，湿渗，皮炎，疱疹后神经痛(带状疱疹)，失禁， 尿失禁，发热，热潮红，胰腺炎，慢性区域性疼痛综合征，法布里 (Fabray，s)病和咳嗽。
在某些优选的实施方案中，给予TRPA1拮抗剂以便预防，治疗或 緩解骨关节炎的体征和症状。
在某些优选的实施方案中，给予TRPA1拮抗剂以便预防，治疗或 緩解类风湿性关节炎的体征和症状。
在某些优选的实施方案中，给予TRPA1拮抗剂以便预防，治疗或 緩解口腔粘膜炎的体征和症状。
在某些优选的实施方案中，给予TRPA1拮抗剂以便促进患者毛发 生长的缺失或抑制。
本发明的另一个方面涉及TRPA1拮抗剂，例如，以l微摩尔或l
微摩尔以下的I C5。抑制内向TRP Al -介导的电流的小分子活性剂在制备 预防，治疗或緩解患者的涉及TRPA1活化或降低的TRPA1活性能减轻 其严重性的疾病，病症或疾患症状的药剂中的应用。
本发明在另一个方面中涉及药物制剂，其包含以1微摩尔或1微 摩尔以下的I C5。抑制内向TRP A1 -介导的电流的活性剂和药学上可接受
的赋形剂或溶剂，其中以提供有效预防，治疗或緩解患者涉及TRPA1 活化或降低的TRPA1活性能减轻其严重性的疾病，病症或疾患症状的 用量的剂型提供该活性剂。在某些优选的实施方案中，该药物制剂不 会导致患者QT间隔延长。
在某些例证性实施方案中，所述的药物制剂包含以其低于其抑制 NaV 1.2功能，TRPV1功能，TRPV5功能，TRPV6功能，线粒体单向转 运体功能和HERG功能的ICs。至少一个数量级的ICs。抑制TRPA1-介导 的电流的活性剂和药学上可接受的赋形剂或溶剂，其中以提供有效预 防，治疗或緩解患者涉及TRPA1活化或降低的TRPA1活性能减轻其严 重性的疾病，病症或疾患症状的用量的剂型提供该活性剂，但不会导 致患者QT间隔延长。
在另一个例证性实施方案中，所述的药物制剂包含以l微摩尔或 l微摩尔以下的ICs。抑制TRPA1-介导的电流的活性剂和药学上可接受 的赋形剂或溶剂，其中以提供有效预防，治疗或緩解患者涉及TRPA1 活化或降低的TRPA1活性能减轻其严重性的疾病，病症或疾患症状的 用量的剂型提供该活性剂，该药物制剂不会导致患者QT间隔延长。
一种优选的制剂为用于降低皮肤或粘膜中TRPA1活性的局部用制 剂，它包含以l微摩尔或l微摩尔以下的ICs。抑制TRPAl-介导的电流 的活性剂。
另一种优选的制剂为可除去的贴剂或绷带，其包含(i)聚合物 基质；和(ii)以1微摩尔或1微摩尔以下的IC5。抑制TRPAl-介导的 电流的活性剂。
另一种例证性制剂为用于局部施用于动物受试者的皮肤剥脱组合 物，其包含局部用载体； 一种或多种皮肤剥脱组分，它们选自羧酸，
酮基酸，oc-羟基酸，p-羟基酸，维生素a酸类，过氧化物和有机醇类， 所述的一种或多种皮肤剥脱组分以至少约12%重量的总量包含并且能 够对所述受试者诱导皮肤刺激和进行皮肤剥脱；和以1微摩尔或1微 摩尔以下的ICs。抑制TRPA1-介导的电流的活性剂，在施用于皮肤时以 有效止痛，抗刺激和/或抗炎作用的用量提供该活性剂。
另一个实施方案为用于口服给药的镇咳组合物，其包含以l微摩 尔或l微摩尔以下的ICs。抑制两种TRPAl-介导的电流的活性剂和口服 可接受的基于水的液体或可溶于嘴中的固体形式的药用载体，该组合 物选自糖浆剂，酏剂，混悬液，喷雾剂，锭剂，咀嚼锭剂，粉末和咀 嚼片。这类镇咳组合物可以包括一种或多种另外的用于治疗咳嗽，过 敏反应或哮喘症状的活性剂，它们选自抗组胺药，5-脂氧合酶抑制 剂，白细胞三烯抑制剂，H3抑制剂，台-肾上腺素能受体激动剂，黄嘌 呤衍生物，a-肾上腺素能受体激动剂，肥大细胞稳定剂，祛痰药，NK1， NK2和NK3速激肽受体拮抗剂和GABAB激动剂。
另一个实施方案为可计量剂量的气溶胶配药器，包括用于肺部或 鼻部递送的气溶胶药物组合物，该组合物包含以l微摩尔或其以下的 ICs。抑制TRPA1介导的电流的活性剂。例如，它可以为计量剂量的吸 入器，干粉吸入器或空气喷射喷雾器。
另一个实施方案为用于眼部给药的眼用软骨或滴眼液。这类眼用 组合物可以用于治疗或緩解眼部疼痛，包括因眼部磨损或术后痛多种 的眼部疼痛。
本发明在另 一个方面中关注本发明的任何TRPA1抑制剂，包括具 有本文披露特征中的一种或多种的抑制剂可以用于抑制TRPA1功能， 例如TRPAl-介导的电流和/或TRPA1-介导的离子流。在某些实施方案 中，所述的化合物可以用于在体外，例如在培养细胞中抑制TRPA1介 导的电流。在某些实施方案中，所述的化合物可以用于在体内抑制 TRPA1介导的电流。在某些实施方案中，所述的化合物内向和外向 TRPAl-介导的电流。在某些实施方案中，所述的化合物在体外，例如 在培养细胞中抑制TRPA1介导的离子流。在某些实施方案中，所述的
化合物在体内抑制TRPA1介导的流量。
本发明关注具有上述或下述特征的任意组合和本文所述TRPA1拮 抗剂的结构或功能特征的任意组合的TRPA1拮抗剂的药物制剂和应 用。任何这类拮抗剂或制剂可以用于治疗本文所述的任何疾病或疾患。 任何这类拮抗剂或制剂可以用于抑制TRPA1功能，例如TRPAl-介导的 电流和/或TRPAl-介导的离子流。
附图详细描述
图la和lb概括了表示TRPA1拮抗剂在减轻緩激肽疼痛模型中的 疼痛症状中的功效的实验。
图2概括了表示TRPA1拮抗剂在减轻福尔马林疼痛模型中的疼痛 中的功效的实验。
图3a和3b概括了表示TRPA1拮抗剂在减轻角叉菜胶诱导的炎症 中的功效的实验。
图4概括了表示TRPA1拮抗剂在减轻CFA疼痛模型中的疼痛中的 功效的实验。图4中所示的结果还表明TRPA1拮抗剂的作用对受损的 爪而言是特异性的。
表的详细描述
表1提供了具有作为在膜片箝实验中评价的体外活性的典型式I 化合物。该表还包括表示各种测试化合物抑制TRPA1活性与其它离子 通道活性的比较的特异性的数据。在膜片箝中评价了对其它离子通道 的对比数据。
表2提供了具有作为在膜片箝实验中评价的体外活性的典型式H 化合物。该表还包括表示各种测试化合物抑制TRPA1活性与其它离子 通道活性的比较的特异性的数据。在膜片箝中评价了对其它离子通道 的对比数据。表现为以低于500 nM的ICs。抑制TRPA1介导的电流的化 合物中的至少两种以低于200 nM的ICs。抑制TRPA1介导的电流。表现 为以低于500 nM的ICs。抑制TRPA1介导的电流的化合物中的至少一种
以低于100 nM的ICs。抑制TRPA1介导的电流。 发明详述
细胞动态平衡是涉及离子流和膜电位调节等的调节系统的总和结 果。细胞动态平衡至少部分因离子通过质膜进入和离开细胞和通过胞 内细胞器膜在细胞内运动而实现，所述的胞内细胞器包括，例如内质 网，肌质网，线粒体和胞吞细胞器，包括内颗粒和溶酶体。
离子通过细胞膜的运动通过专门的蛋白质来进行。TRP通道为起
有助于调节离子流和膜电位功能的一大族非选择性阳离子通道。将 TRP通道亚分成6个亚族，包括TRPA(ANKTM1)家族。TRPA1为TRP通 道的TRPA类中的成员。
非选择性阳离子通道，诸如TRPA1调节通过细胞膜的钙和钠离子。 钠和钩流入导致细胞去极化。这增加了电压控制的离子通道达到活化 所需阈值的可能性。作为结果，非选择性阳离子通道活化可以增加电 兴奋性和增加电压依赖性事件的频率。电压依赖性事件包括，但不限 于神经元动作电位，心脏动作电位，平滑肌收缩，心肌收缩和骨駱肌 收缩。
非选择性阳离子通道，诸如TRPA1活化导致的钙流入还政变了胞 内游离4丐浓度。钓为细胞内遍在的第二信使分子。因此，胞内钙水平 的改变对信号转导和基因表达具有显著作用。因此，非选择性阳离子 通道，诸如TRPA1活化导致基因表达和细胞表型改变。基因表达事件 包括，但不限于编码细胞表面受体，离子通道和激酶的mRNAs产生。 这些基因表达的改变可以在该细胞中产生超兴奋性。TRPA1阻滞剂由 此还具有减轻或预防疼痛和/或减少膀胱活动过度的潜能。
TRPA1蛋白质为受体操作的在感觉神经元中表达的通道(例如，参 见Jordt等(2004) Nature 427: 260-265)，包括因存在于背根神经节， 三叉神经节和结节性神经节中的细胞体产生的那些(参见Jordt等 (2004) Nature 427: 260-265， Nagata等(2005) J. Neurosci 25(16) 4052-61)。此外，低水平的TRPA1信息可以在某些类型的成纤维细胞
中找到(参见Jaquemar等(1999) JBC 274 (11): 7325-33)。还报导了 TRPA1在膀胱中表达。刺激大量胞外受体，包括，但不限于G-蛋白偶 联受体或受体酪氨酸激酶足以活化TRPA1。
适用于本文提供的方法的TRPA1蛋白质包括，例如人(分别由 SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO: 4核苷酸序列编码的SEQ ID NO: 1和 SEQ ID NO: 3氨基酸序列)和鼠(由SEQ ID NO: 6核苷酸序列编码的 SEQ ID NO: 5氨基酸序列)。特定的TRPAl蛋白质还包括由可以在严 格条件下与TRPAl序列(参见SEQ ID NO: 2)杂交的cDMs编码的蛋白 质。
TRPAl为对芥子油起响应的离子通道。芥子油中的活性组分(异硫 氰酸烯丙酯)和大蒜中的活性组分(大蒜素)均能够活化TRPAl。其它刺 激物也能够活化TRPA1。据报导4 - 15 'C的严寒温度活化TRPAl (参见 Story等,(2003) Cell 112 (6): 819-829)。然而，这一发现有争论(参 见Jordt等(2004) Nature 427: 260-265; Nagata等(2005) J. Neurosci 25 (16): 4052-61)。此外，在对机械性刺激响应的低等动物中TRPAl 与TRP通道(即TRPN1，果蝇属(Drosophila) TRPAl)共有许多结构相 似性。
TRPAl在内耳的毛细胞上皮等組织中表达，并且斑马鱼和小鼠中 这种通道的破坏抑制毛细胞转导。因此，在本领域中提出了 TRPAl作 为用于机械敏感性脊推动物听觉转导通道的候选物(参见Corey等， (2004) Nature 432 (7018): 723-730)。如果这属实，那么可以提示 TRPAl阻滞剂可以导致听力损失且由此不具有任何作为治疗剂的实际 应用。然而，惊恐反应在TRPAl基因敲除小鼠中基本上未受损的观察 结果使得我们得出结论TRPAl拮抗剂不会损伤听觉且由此可以成为 合适的药物候选物。
调节TRPAl蛋白质功能提供了调节该动态平衡，钠动态平衡，膜 极化和/或胞内钙水平的方式，并且可以调节TRPAl功能的化合物在许 多方面是有用的，包括，但不限于维持钙动态平衡，调节胞内钙水平， 调节膜极化和治疗或预防与钙和/或钠动态平衡或生理紊乱相关的疾
病，病症或疾患。
在某些方面中，本发明提供了使用以低于IO微摩尔的ICs。抑制 TRPA1 -介导的电流和/或TRPA1 -介导的离子流的小分子治疗或改善疾 病和疾患的作用的方法。典型的合适的用于本发明任何方法的化合物 (例如，治疗本文披露的任何疾病或疾患)包括具有本文公开的结构或 功能特征中的一种或多种(例如，结构，特异性，功效，溶解性等)的 化合物。本发明关注具有本文所述功能或结构属性中的一种或多种的 任何TRPA1拮抗剂的应用。另外，本发明关注式I， II， III或IV的 TRPA1拮抗剂的应用和表1和2中提供的任何特定拮抗剂的应用。在 本申请的上下文中，如果特定的功能属性归因于TRPA1拮抗剂，那么 可以理解这类属性可以表征在结构上与式I， II， III或IV的化合物 相关或与之不同的TRPA1抑制剂。
在某些实施方案中，合适的化合物以低于IO微摩尔的ICs。抑制内 向和/或外向TRPA1介导的电流。在某些实施方案中，合适的化合物另 外地或可选择地以低于IO微摩尔的ICs。抑制TRPA1介导的离子流。例 如，可以在体外试验中计算IC5。。例如，可以一使用对电流的电生理学 测定，诸如标准膜片箝分析计算IC5。。还可以采用离子指示剂浓度或 流量的改变，诸如本文所述的钩流量法评价IC5。。
在某些实施方案中，本发明提供了治疗或预防涉及TRPA1活化或 降低的TRPA1活性能减轻其严重性的疾患的方法，包括给予有效量的 式I的化合物，或其盐，或该化合物或其盐的溶剂合物，水合物，氧 化代谢物或前体药物
<formula>formula see original document page 38</formula>(I)
其中
W表示0或S，优选S;
R每次出现时独立地表示H或低级烷基，优选H;
R'表示取代或未被取代的烷基或取代或未被取代的芳基； E表示羧酸(C(hH)，酯或酰胺；且 Ar表示取代或未被取代的芳基环；且
其中所述的化合物以10微摩尔或10微摩尔以下的ICs。抑制 TRPA1。
上述式中的化合物的实例包括<formula>formula see original document page 39</formula>
式I中化合物的另外实例如表1与其相应的体外数据中所示。 在某些实施方案中，本发明提供了治疗或预防涉及TRPA1活化或 降低的TRPA1活性能减轻其严重性的疾患的方法，包括给予有效量的 式II的化合物，或其盐，或该化合物或其盐的溶剂合物，水合物，氧 化代谢物或前体药物<formula>formula see original document page 39</formula>
其中n为1 - 3的整数；且 l表示取代基；且
其中所述的化合物以10微摩尔或10微摩尔以下的ICs。抑制 TRPA1。
在某些实施方案中，R2表示任选取代的烷基，任选取代的芳基， 任选取代的杂芳基，任选取代的芳烷基，任选取代的环烷基，任选取 代的杂环基或任选取代的杂芳烷基。
在某些实施方案中，当11=1时，R2不为
在某些实施方案中，式II的化合物对其TRPA1活性的选择性是对 其激肽原酶抑制活性10倍。
式II化合物的实例包括，但不限于化合物200-204， 206-243， 245-255， 257—282， 284-287， 289-290， 294-295， 298， 304-306, 308-310， 312-313， 316-317, 319, 321, 323, 325-326， 330， 332-333， 335， 337-341， 343-386， 389-390， 395-398和400-409，正如表2 与其体外数据中所示。
在某些实施方案中，本发明提供了治疗或预防涉及TRPA1活化或 降低的TRPA1活性能减轻其严重性的疾患的方法，包括给予有效量的 式III的化合物，或其盐，或该化合物或其盐的溶剂合物，水合物， 氧化代谢物或前体药物
其中
n为1 - 3的整数；且 R2表示取代基；且
其中所述的化合物以10微摩尔或10微摩尔以下的ICs。抑制 TRPA1。
在某些实施方案中，R2表示任选取代的烷基，任选取代的芳基， 任选取代的杂芳基，任选取代的芳烷基，任选取代的环烷基，任选取 代的杂环基或任选取代的杂芳烷基。
在某些实施方案中，本发明提供了治疗或预防涉及TRPA1活化或 降低的TRPA1活性能减轻其严重性的疾患的方法，包括给予有效量的
式IV的化合物，或其盐，或该化合物或其盐的溶剂合物，水合物，氧 化代谢物或前体药物
其中
Ri每次出现时独立地表示H或低级烷基；
R2的一次出现为不存在且R2的一次出现为MmR3;
R3表示取代或未被取代的芳基；
M每次出现时独立地表示取代或未被取代的亚曱基(例如用低级 烷基，氧代，羟基等取代)，NRi， 0， S， S(O)或S(O》，优选进行选择， 以便没有两个杂原子是彼此连接的；且
m为0-10的整数；且
其中所述的化合物以IO微摩尔或其以下的ICs。抑制TRPA1。 在某些实施方案中，NU3表示、x ，其中n为0-4的整数；
且
X为-C(-0)0-或-C(-O)NR广，其中R4为H或低级烷基，优选 -C (=0)NH-。
在某些实施方案中，式IV的化合物对其TRPA1活性的选择性是对 其激肽原酶抑制活性10-倍。
式IV化合物的实例包括，但不限于化合物200-202， 204， 207-210， 212-215, 217， 219-224, 226-229， 231， 236-238， 240， 245-254， 256-268， 273, 275-277， 280-286， 288， 290-306， 309-311, 313-316， 318-320， 322， 324-331， 333-334， 336-338， 342, 344-347， 350-351， 353-355， 358- 366， 371， 373-375， 377, 379-380和383-409，正 如表2与其体外数据中所示。
本发明的一个方面提供了适用于人类患者或兽类应用的药物制 剂，其包含有效量的如上所示化合物中的任意种(例如式I，式II，式
III或式IV的化合物，或其盐，或该化合物或其盐的溶剂合物，水合
物，氧化代谢物或前体药物)和一种或多种药学上可接受的赋形剂。在
某些实施方案中，该药物制剂可以用于治疗或预防涉及TRPA1活化或 降低的TRPA1活性能减轻其严重性的疾患。在某些实施方案中，该药 物制剂具有适用于人类患者或兽类应用的足够低的热原活性。在某些 实施方案中，该药物制剂包含有效量的如上所示化合物中的任意种， 其中该化合物以IO微摩尔或IO微摩尔以下的ICs。抑制TRPA1。在某 些实施方案中，所述的药物制剂包含该化合物，其以l微摩尔或l微 摩尔以下的IC5。，或乃至500 nM或500 nM以下，250 nM或250 nM 以下，200 nM或200 nM以下，或乃至100 nM或100 nM以下的IC50 抑制TRPA1。
在某些实施方案中，用于本发明方法或药物制剂的TRPA1抑制剂 选自表1-2中所示的化合物。在某些实施方案中，本发明关注表1-2 中所示任意化合物在本发明的任何方法或药物制剂中的应用。
本发明的一个方面提供了 TRPA1抑制剂在制备治疗或预防涉及 TRPA1活化或降低的TRPA1活性能减轻其严重性的疾患的药剂中的应 用，其中所述的TRPA1抑制剂由如上所示的任意化合物表示(例如式I, 式II，式III或式IV的化合物，或其盐，或该化合物或其盐的溶剂 合物，水合物，氧化代谢物或前体药物)。在某些实施方案中，所述的 化合物以低于IO微摩尔的ICs。抑制TRPA1介导的电流。
在上述式的某些实施方案中，取代的取代基可以被如下基团中的 一个或多个取代烷基，链烯基，炔基，环烷基，杂环基，芳基，杂 芳基，环烷基烷基，杂环基烷基，芳烷基或杂芳烷基，它们中任一自 身可以进一步被取代，或卣素，羟基，羰基(例如，酯，羧基或曱酰基)， 硫羰基(例如，硫酯，硫代羧酸酯或硫代甲酸酯)，酮，醛，氨基，酰 基氨基，酰氨基，脒基，氰基，硝基，叠氮基，磺酰基，亚砜基，硫 酸酯，磺酸酯，氨磺酰基，磺酰氨基和磷酰基。
表1和2中提供了典型化合物。表1中概括了对各种测试化合物 釆集的数据。表1提供了抑制TRPA1介导的电流的ICs。数据。表1还
提供了选择性数据，如果可利用，那么表明某些化合物还抑制其它离 子通道的程度。另外，注意到表1中表示的化合物具有不同程度的抑
制TRPA1的选择性。表2提供了抑制TRPA1介导的电流的ICs。数据。 表2还提供了选择性数据，如果可利用，那么表明某些化合物还抑制 其它离子通道的程度。注意到表2中表示的化合物中以500 nM或500 nM以下的ICs。抑制TRPA1介导的电流的至少两种以200 nM或200 nM 以下的IC5。抑制TRPA1介导的电流。此外，表2中表示的化合物中以 500 nM或500 nM以下的ICs。抑制TRPA1介导的电流的至少一种以100 nM或100 nM以下的ICs。抑制TRPA1介导的电流。另外，注意到表2 中表示的化合物对抑制TRPA1具有不同程度的选择性。
在某些实施方案中，本发明关注可以给予表1或2中所示的具体 化合物以便治疗本文披露的任何疾病或疾患。在某些实施方案中，在 给药前将所述的化合物配制成药物制剂。在某些实施方案中，用于本 发明方法或药物制剂的TRPA1抑制剂选自表1或2中所示的化合物。 在某些实施方案中，本发明关注如表1或2中所示的任意化合物在本 发明方法或药物制剂中的应用。
本文披露的具体化合物和结构式仅为典型的。类似地关注具有本 文所述功能或结构特征中的一种或多种的小分子TRPA1抑制剂的应 用。
上述任何结构的化合物可以用于制备治疗本文披露的任何疾病的 药剂。
上述任何结构的化合物可以用于体外或体内抑制TRPA1通道功能。
在某些实施方案中，包括任何上述结构的所用或功能部分的化合 物可以用于制备治疗本文披露的任何疾病的药剂。另外或可选择地， 这类化合物可以在体外或体内用于抑制TRPA1功能，诸如TRPAl-介导 的电5危的方法。
在某些实施方案中，用于本发明方法的TRPA1拮抗剂为并非氨基 糖甙的小分子。
在具体的实施方案中，为应用选择小分子TRPA1拮抗剂，因为它 对一种TRP同种型比对另一种更具有选择性，例如，对TRPA1的选择 性是对TRPC6, TRPV5, TRPV6， TRPM8， TRPV1, TRPV2， TRPV4和/或 TRPV3中的一种或多种IO倍且更优选至少20， 40， 50， 60, 70， 80 或至少100或乃至1000倍。在其它实施方案中，例如，差别越小，则 它抑制TRPA1比抑制TRPM8， TRPV1， TRPV2， TRPV3和/或TRPV4更强 烈，优选更强烈至少2倍，3倍，5倍或乃至10倍。例如，可以通过 比较I"值进行这类比较。
在具体的实施方案中，为应用选择小分子TRPA1拮抗剂，因为它 对一种TRPA1同种型比对其它非TRP离子通道更具有选择性，例如， 对TRPA1的选择性是对NaVl. 2， Cavl.2， Cav3. 1， HERG和/或线粒体 单向转运体中的一种或多种IO倍且更优选至少20， 40， 50, 60， 70， 80或至少IOO或乃至IOOO倍。在其它实施方案中，例如，差别越小， 则它抑制TRPA1比抑制NaVl. 2， Cavl.2， Cav3.1， HERG和/或线粒体 单向转运体更强烈，优选更强烈至少2倍，3倍，5倍或乃至10倍。 例如，可以通过比较ICs。值进行这类比较。
在某些实施方案中，选择TRPA1拮抗剂的化合物，以便对TRPA1 的选择性拮抗超过其它离子通道，例如，该化合物对TRPA1活性的调 节比它对NaV1.2， Cavl.2, Cav3. 1， HERG和/或线粒体单向转运体中 的一种或多种活性的调节更强烈至少一个数量级，优选更强烈至少两 个数量级，甚至更优选更强烈至少三个数量级。在某些实施方案中， 该化合物对TRPA1活性的调节比它对NaV1.2， Cavl.2， Cav3. 1， HERG 或线粒体单向转运体中的一种或多种活性的调节更强烈至少1.5个数 据级。例如，可以通过比较IC5。值进行这类比较。
类似地，在具体的实施方案中，为应用选择小分子，因为它缺乏 对一种或多种非TRPA1的靶标的显著活性。例如，该化合物可以具有 高于500 nM，高于1 pM或乃至高于10 (iM或100 ^tM的抑制TRPC6， TRPV5, TRPV6， Cavl. 2, Cav3. 1， NaVl. 2， HERG和线粒体单向转运体 中的一种或多种的IC5。。
在具体的实施方案中，为应用选择小分子，因为它对一种TRP同 种型比对其它更具有选择性，例如，对TRPAl的选择性是对TRPC6， TRPV5， TRPV6, TRPM8， TRPV1， HERG， NaVl. 2，线粒体单向转运体， TRPV3和/或TRPV4中的一种或多种的10倍且更优选至少100或乃至 IOOO倍。在其它实施方案中，例如，差别越小，则它抑制TRPA1比抑 制TRPM8, TRPV1和/或TRPV4更强烈，优选更强烈至少2倍，3倍，5 倍或乃至10倍。例如，可以通过比较ICs。值进行这类比较。
在某些实施方案中，为应用选择小分子，因为它拮抗TRPA1和 TRPM8， TRPH和/或TRPV3的功能。尽管这类化合物选择性拮抗两种 离子通道功能，但是IC5。值不需要相同。
在任意上述的某些实施方案中，可以选择小分子，因为它能够抑 制受体介导的(或冷/应激介导的)TRPA1活化。在某些实施方案中， TRPA1拮抗剂抑制受体介导的TRPA1活化和芥子油诱导的TRPA1活化。 在某些其它实施方案中，TRPA1拮抗剂抑制受体操纵的TRPA1活化， 但不会抑制芥子油诱导的TRPA1活化。在某些实施方案中，TRPA1拮 抗剂抑制芥子油诱导的TRPA1活化，但不会抑制冷介导的TRPA1活化。
在上述任意的某些实施方案中，可以选择小分子，因为它以小于 或等于1 |iM，或乃至小于或等于700, 600， 500, 400, 300， 250， 200或100 nM的ICs。抑制TRPA1功能。在其它实施方案中，选择小分 子，因为它以小于或等于75 nM，小于或等于50nM，或乃至小于或等 于25， 10， 5或lnM的ICs。抑制TRPA1功能。在上述任意的某些其它 实施方案中，所述的小分子以小于或等于IO微摩尔，或小于或等于5 微摩尔，或小于或等于2. 5微摩尔，或小于或等于1.5微摩尔的ICs。 抑制TRPA1功能。
在上述任意的某些实施方案中，可以基于抑制TRPA1功能的速率 选择化合物小分子。在一个实施方案中，化合物在少于5分钟，优选 少于4, 3或2分钟内抑制TRPA1功能。在另一个实施方案中，化合物 在少于约1分钟内抑制TRPA1功能。在另一个实施方案中，化合物少 于约30秒内抑制TRPA1功能。
在上述任意的某些实施方案中，TRPA1功能的小分子拮抗剂可以 抑制外向电流，内向电流或这些电流中的一种或多种的任意的组合。 抑制上述电流中的一种以上的化合物可以以具有相同或不同ICs。值进 行。在任意上述实施方案中，可以在体外或体内评价化合物抑制特定 电流的能力。可以将在体外或体内试验中抑制任意上述电流的化合物 表征为抑制TRPA1功能的化合物。所述的另一种方式，可以用本发明 化合物抑制的TRPA1的典型功能为TRPAl-介导的电流。另外或可选择 地，可以用本发明化合物抑制的TRPA1功能为TRPA1介导的离子流。
在任意上述或下列实施方案中，小分子的特征在于与其它离子通 道相比的某些活性水平(例如，某些化合物对抑制TRPA1的选择性且其 它化合物表现出对一种或多种其它离子特定的交叉反应性水平)。当小 分子的特征在于其对另一种离子通道的活性时，按照与定义TRPA1通 道功能类似的方式定义另一离子通道的功能或活性。因此，抑制另一 种离子通道的功能意旨，例如抑制另 一 离子通道介导的离子流或抑制 另一离子通道介导的电流。
在任意上述的某些实施方案中，抑制TRPA1功能意旨一种功能， 例如TRPA1介导的电流在存在有效量的化合物存在下比不存在该化合 物或比无效量化合物存在下下降50%以上。在某些其它实施方案中， 抑制TRPA1功能意旨一种功能，例如TRPA1介导的电流或TRPA1介导 的离子流在存在有效量的化合物存在下比不存在该化合物下下降至少 50%, 60%, 70%， 75%, 80%， 85%或90%。在其它实施方案中，抑制TRPA1 功能意旨一种功能，例如TRPA1介导的电流在存在有效量的化合物存 在下比不存在该化合物下下降至少92°/。， 95°/。， 97°/。， 98%, 99°/。或100%。
在任意上述的某些实施方案中，使用例如，膜片箝分析或标准钓 流量测定在体外测定ICs。值。用于基于钩流量的ICs。估计的典型体外 方法描述在实施例1。用于获得更确定ICs。测量值的描述在实施例2 中。可选择地，还可以计算电流或离子流的抑制％估计值并且用于评价 化合物作为抑制剂的功效。
不受理论约束，化合物可以通过共价结合或非共价结合到TRPA1
的部分上抑制TRPA1功能。可选择地，化合物可以例如，通过结合TRPAl 功能所必需的蛋白质或非蛋白质辅因子间接抑制TRPA1功能。本领域 技术人员易于理解抑制性化合物可以可逆或不可逆地结合TRPAl或其 辅因子。可逆结合TRPAl或其辅因子的化合物甚至可以在解离后持续 抑制TRPAl功能。
在任意上述的某些实施方案中，抑制TRPAl功能的化合物为小有 机分子或小无分子。典型的小分子包括，但不限于结合TRPAl通道和 抑制TRPAl通道的一种或多种功能的小分子。
在任意上述的某些实施方案中，TRPAl抑制剂用于治疗或改善疼 痛。可以使用TRPAl抑制剂治疗的典型疼痛类型包括，但不限于伤害 性疼痛，炎性疼痛和神经性疼痛。可以使用TRPAl抑制剂治疗的疼痛 可以为慢性或急性的。在本说明书的上下文中，详细讨论了特征至少 部分在于疼痛的各种疾患和疾病。本发明关注可以使用本文所述的任 何TRPAl抑制剂治疗与任意这些疾病或疾患相关的疼痛。可以将该抑 制剂配制成适合于指定给药途径的药物制剂。
在某些实施方案中，TRPAl抑制剂为非麻醉药并且几乎没有或无 麻醉副作用。在某些其它实施方案中，TRPAl抑制剂可以用于以低于 麻醉性疼痛緩解剂的副作用治疗或改善疼痛。在TRPAl抑制剂有效剂 量下基本上不存在的典型副作用包括眼球突出，僵直性昏厥，肠能动 性破坏和身体非损伤区域中的感觉抑制中的一种或多种。
在某些实施方案中，TRPAl抑制剂可以用于治疗失禁。在某些实 施方案中，TRPAl抑制剂用于通过降低神经支配膀胱的神经元活性而 减少膀胱活动过度。在某些实施方案中，失禁伴随疼痛。例如，附带 膀胱炎的失禁或附带损伤的失禁可能伴随疼痛。当失禁伴随疼痛时， 可以给予TRPAl抑制剂治疗失禁并且减轻疼痛。
可以单独使用或与其它药物活性剂联用主题TRPAl抑制剂。这类 其它药物活性剂的实例包括，但不限于抗炎药(例如，NSAIDS，緩激肽 受体拮抗剂，激素和自体有效物质，诸如皮质类固醇)，抗痤疮药(例 如维生素a酸类)，抗皱紋药，抗瘢痕形成药，抗失禁药(诸如Ml-受 体拮抗剂)，止吐药(诸如NK1拮抗剂)，抗牛皮癣药，抗酸药，抗增殖 药(例如，抗湿渗药，抗癌药)，抗真菌药，抗病毒药，防腐剂(例如抗 菌药)，局部麻醉药，抗偏头痛药，角质层分离剂，毛发生长刺激剂， 毛发生长抑制剂和用于治疗皮肤疾病或疾患的其它活性剂。某些活性 剂属于一种以上类型。
就任意上述实施方案而言，可以为通过适合于所治疗疾病或损伤 的途经配制TRPA1抑制剂。例如，可以将TRPA1抑制剂配制成，例如， 口服透皮，局部，腹膜内，静脉内，血管内，鞘内，心包内，心肌内， 皮下，直肠，阴道或尿道递送。此外，可以为通过装置递送配制TRPA1 抑制剂。典型装置包括，但不限于导管，金属丝，支架或其它管腔内 装置。其它典型递送装置还包括贴剂，绷带，护口器或牙具。
本发明关注任意上述TRPA1抑制剂的药物组合物。用药学上可接 受的载体配制典型药物组合物。
主题TRPA1抑制剂可以单独^使用或作为治疗方案的组成部分与适 合于所治疗特定疾病，疾患，损伤或病症的其它治疗，疗法或干预联 用。当作为治疗方案的组成部分时，本发明关注TRPA1抑制剂与下列 治疗方式中的一种或多种的联合应用给予非-TRPA1抑制剂药物，化 疗，放疗，顺势疗法，膳食，应激处理和手术。
在某些实施方案中，当单独或作为治疗方案的组成部分给药时， 本发明关注给予TRPA1抑制剂治疗特定的原发性疾病，损伤，病症或 疾患。另外地或可选择地，本发明关注给予TRPA1抑制剂治疗与疾病， 损伤，病症或疾患相关的疼痛。在其它实施方案中，本发明关注给予 TRPA1抑制剂治疗原发性疾病，损伤，病症或疾患的继发性症状。
本发明关注具有上述或下列特征的任意組合以及本文所述TRPA1 拮抗剂的结构或功能特征的任意组合的TRPA1拮抗剂的药物制剂和应 用。任何这类拮抗剂或制剂可以用于治疗本文所述的任何疾病或疾患。 另外，本发明关注任何这类拮抗剂或制剂在治疗本文所述的任何疾病 或疾患中的应用。另外，本发明关注任何这类拮抗剂或制剂在体外抑 制TRPA1介导的电流中的应用。还关注任意上述或下列方面和实施方
案的组合。例如，本发明关注可以配制用于适当给药途径的具有本文
概括的任何特定功效和特异性的TRPA1拮抗剂，并且可以用于治疗本 文详述的任何疾患或疾病。在某些实施方案中，本发明关注表1或2 中所列的任何TRPA1拮抗剂的药物制剂和应用。
在任意上述的某些实施方案中，用于本发明方法的TRPA1拮抗剂 化合物具有任意上述特性中的一种或多种(例如，IC5。，特异性，选择 性，活性，制剂等)。特别关注具有上述特性的任意组合的化合物和拮 抗剂化合物的应用。
定义为
术语"拮抗剂"和"抑制剂"可以互换使用意指降低或抑制离子通道 生物活性，诸如抑制离子通道TRPA1活性的活性剂。TRPA1抑制剂包 括具有本文披露的结构和/或功能特性的任意组合的抑制剂。
例如，TRPA1拮抗剂的"有效量"在本发明主题的抑制或治疗方法 方面意旨在作为所需剂量方案组成部分施用的制剂中引起期望临床或 功能效果的拮抗剂用量。不受理论约束，用于本发明方法的TRPA1拮 抗剂的有效量包括有效减少TRPA1通道的一种或多种体外或体内功能 的TRPA1拮抗剂用量。典型的功能包括，但不限于，膜极化(例如，可 以促进细胞超极化的拮抗剂)，离子流量，细胞内的离子浓度，外向电 流和内向电流。拮抗TRPA1功能的化合物包括拮抗TRPA1的体外或体 内功能活性的化合物。当特定的功能活性仅易于在体外试验中观察到 时，化合物在该体外试验中抑制TRPA1功能的能力用作该化合物活性 的合理替代者。在某些实施方案中，有效量为足以抑制TRPA1-介导的 电流的用量和/或足以抑制TRPA1介导的离子流的用量。
用于本发明方法的TRPA1抑制剂可以根据其对一种或多种其它离 子通道的它们的活性或缺乏活性表征。当涉及其它离子通道时，类似 地定义抑制这类其它离子通道的功能。例如，抑制离子通道或离子通 道活性意旨拮抗剂抑制其它离子通道的一种或多种功能活性。这类功 能包括特定离子通道，离子流量或膜极化介导的电流。术语"核酸"意旨核苷酸，即核糖核苷酸或脱氧核苷酸的聚合形式 或任一类核苷酸的修饰形式。该术语还应理解为包括由核苷酸类似物
制成的RM或DNA类似物作为等效物并且适合于所述的实施方案，单 链(诸如有义或反义)和双链多核苷酸。
术语"预防"为本领域公认的并且在涉及疾患时，诸如局部复发(例 如疼痛)，疾病诸如癌症，复杂综合征诸如心力衰竭或任何其它医学疾 患，为本领域充分理解的并且包括相对于不接受组合物的受试者而言 降低受试者医学疾患症状发作频率或延緩其发作的组合物。因此，预 防癌症包括，例如比不治疗对照群体减少接受预防性治疗的患者群体 中可检测到的癌症生长的数量，和/或延緩治疗群体比不治疗对照群体 可检测到的癌症生长的出现，例如，其数量具有统计学和/或临床意义。 预防感染包括，例如，减少治疗群体比不治疗对照群体的感染诊断数 量和/或延緩治疗群体比不治疗对照组群体的感染症状发作。预防疼痛 包括，例如，减小治疗群体比不治疗对照群体中受试者经历的疼痛感 觉的等级或可选择地延緩它们。
在本文中可以互换使用的术语"多肽"和术语"蛋白质"和"肽"意旨 氨基酸的聚合物。典型的多肽类包括基因产物，天然存在的蛋白质， 同源物，同源体，paralogs，片段和上述的其它等效物，变体和类似 物。
术语"前体药物"指定包括在生理条件下被转化成本发明治疗活性 剂的化合物。制备前体药物的常用方法在于包括被选择的在生理条件 下水解而展示出所需分子的部分。在其它实施方案中，前体药物被宿 主动物的酶活性转化。
术语"序列同 一性"意旨在对比窗内的序列相同(即对核酸基于核 苷酸与核苷酸，或对多肽类基于氨基酸与氨基酸)。术语"序列同一性 百分比"通过下列计算比较对比窗内的两种最佳序列对比序列，测定 两序列内出现的相同氨基酸的位置的数量而得到配对位置的数量，用 配对的位置数除以对比窗中位置总数并且将结果乘以100而得到序列 同一性百分比。计算序列同一性的方法为本领域技术人员公知的并且
进一步在下文中详细描述。
术语"小分子"意旨具有低于约2500 amu,优选低于约2000 amu， 甚至更优选低于约1500 amu，更优选低于约1000 amu或最优选低于 约750 amu分子量的化合物。
术语"严格条件"或"严格杂交条件"意旨促进两条互补多核苷酸链 之间特异性杂交而形成双链体的条件。可以将严格条件选为在确定离 子强度和pH下低于指定多核苷酸双链体热熔点(Tm)约5 'C。互补多 核苷酸链长及其GC含量将决定双链体的Tm和，并且由此获得期望杂 交特异性所必需的杂交条件。Tm为50°/ 的多核苷酸序列与完全配对互 补链杂交时的温度(在确定的离子强度和pH下)。在某些情况中，期望 增加基本上等于特定双链体的Tm的杂交条件的严格性。在某些实施方 案中，严格杂交条件包括在65'C下的0. 2X SSC的洗涤步骤。
术语"TRPA1"， "TRPA1蛋白质和"TRPA1通道"在本申请上下文中可 以互换使用。这些术语意旨包含SEQ IDNO: 1， SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 5中所示氨基酸序列或其等效多肽或功能性生物活性片段的离子 通道(例如多肽)。在某些实施方案中，该术语意旨包含SEQ IDNO: 1， SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 5中所示氨基酸序列，由其组成或基本上 由其组成的多肽。TRPA1包括多肽类，它们保持TRPA1功能并且包含 (i) SEQ ID NO: 1， SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 5中所示氨基酸序列 的全部或部分；(ii)具有1至约2， 3， 5， 7, 10， 15， 20， 30， 50, 75或75个以上保守氨基酸取代的SEQ ID NO: 1， SEQ ID NO: 3或SEQ IDNO: 5中所示氨基酸序列;(iii)70%, 75%, 80%， 90%, 95%, 96%, 97%， 98%或99%与SEQ ID NO: 1， SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 5相同 的氨基酸序列；和(iv)其功能性片段。本发明的多肽类还包括SEQ ID NO: 1， SEQ ID NO: 3或SEQ IDNO: 5的同源物，例如同源体和paralogs。
术语"TRPA1"还意旨编码本发明多肽的核酸，例如包含由或基本上 由SEQ ID NO: 2， SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 6中所示多核苷酸序 列组成的序列的核酸。本发明的核酸可以包含如下的全部或部分SEQ ID NO: 2， SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 6的核苷酸序列；至少70%，
75%, 80%， 90%， 95%， 96%， 97%， 98°/。或99%与SEQ ID NO: 2， SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 6相同的核苷酸序列；在严格条件下与SEQ ID NO: 2， SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 6杂交的核苷酸序列；编码与本发明 多肽类功能等效的多肽类的核苷酸序列；编码至少约70%, 75%， 80%, 85%， 90%， 95%, 98%， 99%与SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 5同源或相同的多肽类的核苷酸序列；编码具有本发明多肽活性并且 与SEQ ID NO: 1， SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 5具有至少约70%， 75°/。， 80%， 85%， 90%， 95%, 98%， 99%或99%以上同源性或相同的多肽类的 核苷酸序列；不同方面在于1至约2， 3， 5， 7， 10， 15， 20， 30， 50, 75或75个以上核苷酸取代，添加或缺失的核苷酸序列，诸如SEQ ID NO: 2， SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 6的等位基因变体；来源于SEQIDNO: 2， SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 6并且在进化上与之相关的核酸；和
由针对本发明所有上述和其它核酸而言的遗传密码简并性产生的补体 和核苷酸序列。本发明的核酸还包括同源物，例如，SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 6的同源体和paralogs，并且还包括为 在特定生物体(例如宿主细胞)中表达而密码优化的SEQIDNO: 2, SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 6的变体。尽管未明确描述，但是本领域技 术人员易于评价TRPA1是否意旨核酸或蛋白质。
术语"氧化代谢物"指定包括由母体化合物在正常生理条件下的代 谢产生的化合物。特别地，氧化代谢物因代谢过程中的氧化形成。例 如，石克醚基可以被氧化成相应的亚砜或砜。
本文所用的术语"溶剂合物"意旨通过溶剂化形成的化合物(例如， 通过溶剂分子与溶质分子或离子结合形成的化合物)。
本文所用的术语"水合物"意旨水与母体化合物结合形成的化合物。
术语"治疗"包括预防性和/或治疗性治疗。术语"预防性或治疗性" 治疗为公认的并且可对宿主给予本发明主题的组合物中的一种或多 种。如果在不需要情况(例如，宿主动物疾病或其它不需要的状态)的 临床表现前给药，那么治疗为预防性的(即防止宿主发生不需要的情
况)，而如果在不需要的情况表现后给药，那么治疗为治疗性的(即期 望减轻，改善或稳定存在的不需要的情况或其副作用)。
术语"化合物"和"活性剂"可以互换使用以便指本发明的抑制剂/ 拮抗剂。在某些实施方案中，化合物为小的有机或无机分子，例如，
它们具有低于7500 amu，优选低于5000 amu且甚至更优选低于2000， 1500， 1000或500 amu的分子量。小有机或无机分子的一类为非肽基 的，例如，包含2， l个或不含肽和/或糖键。在某些在其它实施方案 中，化合物为肽基试剂，诸如多肽类或抗体。在某些其它实施方案中， 化合物为蛋白质，例如抗体或适体。这类化合物可以结合并且抑制 TRPA1功能。在某些其它实施方案中，化合物为核酸，例如，TRPA1 反义寡核苷酸或TRPAl.RMi构建体。这类化合物可以抑制TRPA1表达， 由此抑制TRPA1活性。可以作为抑制剂起作用的其它典型化合物包括 核酶和肽片段。
术语"酰基"为公认的并且意旨由式烃基C(O)-，优选烷基C(O)-表示的基团。
术语"酰氨基"为公认的并且意旨可以由下式表示的部分
R9
其中R,如上述所定义且R'll表示氢，烷基，链烯基或-(CH2)m-R8， 其中m和R8如上述所定义。
本文的术语"脂族基团"意旨直链，支链或环状脂族烃基并且包括 饱和和不饱和脂族基团，诸如烷基，链烯基和炔基。
本文所用的术语"链烯基"意旨包含至少一个双键的脂族基团并且 指定包括"未被取代的链烯基"和"取代的链烯基"，后者意旨链烯基部 分在链烯基的一个或多个碳上具有取代氢的取代基。这类取代基可以 出现在包括或不包括一个或多个双键上的一个或多个碳上。此外，这 类取代基包括所有如下所述对烷基关注的那些取代基，但除外其中稳 定性被抑制的情况。例如，关注链烯基被烷基，碳环基，芳基，杂环 基或杂芳基中的一种或多种取代。
本文所用的术语"烷氧基"意旨如下所定义的带有与之结合的氧基 的烷基。有代表性的烷氧基包括甲氧基，乙氧基，丙氧基，叔丁氧基 等。"醚"为通过氧共价连接的两个烃。因此，给予醚烷基的该烷基取
代基为或类似烷氧基，诸如可以由-0-烷基，-0-链烯基，-o-炔基， -0-(CH2)m-R8之一表示，其中m和R8如上所述。
术语"烷基"意旨饱和脂族基团的基团，包括直链烷基，支链烷基。 环烷基(脂环族)，垸基-取代的环烷基和环烷基-取代的烷基。在优选 的实施方案中，直链或支链烷基在其骨架上带有30或30个以下碳原 子(例如，直链为CI-C30，支链为C3-C30)且更优选20或20个以下且 最优选10或10个以下。同样，优选的环烷基在其环结构上带有3-10 个碳原子并且更优选在其环结构上带有5， 6或7个碳。
此外，在本说明书，实施例和权利要求中的术语"烷基"(或"低级 烷基")指定包括"未被取代的烷基"和"取代的烷基"，后者意旨烷基在 烃骨架的一个或多个碳上具有取代氬的取代基的部分。这类取代基可 以包括，例如，g素，羟基，羰基(诸如羧基，烷氧羰基，甲酰基或酰 基)，硫羰基(诸如疏酯，硫代乙酸酯或硫代甲酸酯)，烷氧基，磷酰基， 磷酸酯，膦酸酯，亚膦酸酯，氨基，酰氨基，脒，亚胺，氰基，硝基， 叠氮基，硫氢基，烷硫基，硫酸酯，磺酸酯，氨磺酰基，磺酰氨基， 磺酰基，杂环基，芳烷基或芳族或杂芳族部分。本领域技术人员理解， 如果合适，在烃链上取代的部分自身可以被取代。例如，取代的烷基 的取代基可以包括氨基，叠氮基，亚氨基，酰氨基，磷酰基(包括膦酸 酯和亚膦酸酯)，磺酰基(包括硫酸酯，磺酰氨基，氨磺酰基和磺酸酯) 的取代和未被取代的形式和甲硅烷基以及醚类，烷硫基，羰基(包括酮 类，醛类，羧酸酯类和酯类)，-CF3， -CN等。典型的取代烷基如下所 述。环烷基可以进一步被烷基，链烯基，烷氧基，烷疏基，氨基烷基， 羰基-取代的烷基，-CF3， -CN等取代。
链烯基和炔基上可以进行类似的取代以便产生，例如，氨基链烯 基，氨基炔基，酰氨基链烯基，酰氨基炔基，亚氨基链烯基，亚氨基 炔基，硫代链烯基，硫代炔基，羰基-取代的链烯基或炔基。
除非碳的数量另有指定，否则本文使用的"低级烷基"意旨如上述
所定义，但在其骨架结构上具有1 - 10个碳，更优选1 - 6个碳原子的 烷基。同样，"低级链烯基"和"低级炔基"具有类似链长。在本申请的 上下文中，优选的烷基为低级烷基。在优选的实施方案中，本文指定 为烷基的取代基为低级烷基。
本文所用的术语"炔基"意旨包含至少一个三键的脂族基团并且指 定包括"未被取代的炔基"和"取代的炔基"，后者意旨在炔基的一个或 多个碳上具有取代氢的取代基的炔基部分。这类取代基可以出现在包 括或不包括在一个或多个三键的一个或多个碳上。此外，这类取代基 包括对如上所述烷基关注的所有那些取代基，但除外其中稳定性被抑 制的情况。例如，关注炔基被烷基，碳环基，芳基，杂环基或杂芳基 中的一个或多个取代。
术语"烷硫基"意旨如本文定义的带有与之结合的硫基团的烷基。 在优选的实施方案中，"烷硫基"部分由-S-烷基，-S-链烯基，-S-炔基 和-S-(CH2)m-Rs之一表示，其中m和Rs如上述所定义。有代表性的烷 硫基包括甲硫基，乙疏基等。
术语"胺"和"氨基"为公认的并且意旨未被取代和取代的胺类，例 如，可以由下式表示的部分
R R， 10
/Rio | +
—N\ 或 — —Rlc
其中R9， K。和R、。各自独立地表示氢，烷基，链烯基，-(CH丄-Rs 或R,和IU。与连接它们的N原子共同构成在环结构上带有4-8个原子 的杂环；Rs表示芳基，环烷基，环烯基，杂环或多环；和m为0或l -8的整数。在优选的实施方案中，仅Rs或R,。之一可以为羰基，例如 R9， Rw和氮彼此不构成二酰亚胺。在某些这类实施方案中，IU和Rw均 不通过羰基连接N，例如，所述的胺不为酰胺或二酰亚胺且所述的胺 优选为碱，例如，其共轭酸具有高于7的pKa。在甚至更优选的实施方 案中，R,和R,。(和任选的R、)各自独立地表示氢，烷基，链烯基或
-(CH上-Rs。因此，本文所用的术语"烷基胺"意旨如本文定义的具有与 之连接的取代或未被取代的烷基的胺基，即IU和H。中的至少一个为烷基。
术语"酰氨基"公认为氨基-取代的羰基并且包括可以由下式表示 的部分
其中R" !^。如上述所定义。酰胺的优选实施方案不包括可能不稳 定的二酰亚胺类。
本文所用的术语"芳烷基"意旨被芳基取代的烷基(例如芳族或杂 芳族基团)。
本文所用的术语"芳基"包括可以包括0-4个杂原子的5-， 6-和 7-元单-环芳族基团，例如，苯，吡咯，呋喃，噻吩，咪唑，喁唑，噻 唑，三唑，吡唑，吡啶，吡溱，哒"秦和嘧啶等。那些在环结构上具有 杂原子的芳基还可以称作"芳基杂环或"杂芳族化合物"。芳族环可以在 一个或多个位置上被这类如上所述的取代基取代，例如卣素，叠氮化 物，烷基，芳烷基，链烯基，炔基，环烷基，多环基，羟基，烷氧基， 氨基，硝基，硫氢基，亚氨基，酰氨基，磷酸酯，膦酸酯，亚膦酸酯， 羰基，羧基，甲硅烷基，醚，烷硫基，磺酰基，磺酰氨基，酮，醛， 酯，杂环基，芳族或杂芳族部分，_CF3， -CN等。术语"芳基"还包括带 有两个或多个环的多环系，其中两个或多个碳通常与两个相邻环连接 (这些环为"稠合环")，其中环中的至少一个为芳族的，例如，另一个 环可以为环烷基，环烯基，环炔基，芳基和/或杂环基。
本文所用的术语"碳环"意旨芳族或非-芳族环，其中环的各原子为碳。
术语"羰基"为公认的并且包括可以由下式表示的这类部分或其药 学上可接受的盐
其中X为键表示氧或硫，且Ru表示氢，烷基，链烯基，-(CH2) -R8， R、表示氢，烷基，链烯基或-(CH2)m-R8，其中m和Rs如上述所定义。 如果X为氧且Rn或R、不为氢，那么该式表示"酯"。如果X为氧且 Ru如上述所定义，那么该部分在本文中意旨羧基，且特别是当Rn为 氢时，该式表示"羧酸"。如果X为氧且R'n为氢，那么该式表示"甲酸 酯"。 一般而言，如果上述式的氧原子被疏取代，那么该式表示"硫代 羰基"。如果X为硫且IU或R、不为氩，那么该式表示"硫酯"。如果X 为硫且Rn为氢，那么该式表示"硫代羧酸"。如果X为硫且R'u为氩， 那么该式表示"巯基甲酸酯"。另一方面，如果X为键且Ru不为氢，那 么上述式表示"酮"基。如果X为键且Rn为氢，那么上述式表示"醛" 基。
术语"吸电子基团"意旨从连接吸电子基团的原子或原子基团上取 得电子密度的化学基团。取得电子密度包括通过诱导和通过离域/共振 效应取得。与芳族环连接的吸电子基团的实例包括全卣代烷基，诸如 三氟曱基，囟素，叠氮化物，含羰基的基团，诸如酰基，氰基和含亚 胺的基团。
本文所用的术语"酯"意旨基团-C(0)OR9,其中R'表示烃基。 本文所用的术语"卣素"意旨卣素且包括氯，氟，溴和碘。 本文所用的术语"杂芳烷基"意旨被杂芳基取代的烷基。 术语"杂环基"意旨3-至10-元环结构，更优选3-至7-元环，其环 结构包括l-4个杂原子。杂环还可以为多环。杂环基包括，例如，瘗 吩，噻蒽，呋喃，吡喃，异苯并吹喃，色烯，站吨，吩蓬嚙，吡咯， 咪唑，咪唑，异遂唑，异"恶唑，吡^，吡漆，嘧咬，峻"秦，p引漆，异 p引咮，丐l咮，p引唑，嘌呤，奮唤，异会啉，全啉，酞嚷，萘咬，奮惺 啉，喹唑啉，噌啉，蝶啶，呼唑，<+啉，菲啶，吖啶，嘧啶，菲咯啉， 吩溱，吩吡溱，吩噻溱，呋咱，吩噁唤，吡咯烷，氧戊环，硫戊环， 嚙唑，哌啶，哌溱，吗啉，内酯类，内酰胺类，诸如氮杂环丁酮类和
吡咯烷酮类，磺内酰胺类，磺内酯类等。杂环可以在一个或多个位置 上被如上所述这类取代基取代，例如为卣素，烷基，芳烷基，链烯基， 炔基，环烷基，鞋基，氨基，硝基，疏氢基，亚氨基，酰氨基，磷酸 酯，膦酸酯，亚膦酸酯，羰基，羧基，甲硅烷基，醚，烷硫基，磺酰
基，酮，醛，酯，杂环基，芳族或杂芳族部分，-CF3, -CN等。
术语"杂芳基"包括取代或未被取代的芳族单环结构，优选5-至 7-元环，更优选5-至6-元环，其环结构包括至少一个杂原子，优选l -4个杂原子，更优选1或2个杂原子。术语"杂芳基"还包括具有 两个或多个环的多环环系，其中两个或多个碳共用于两个相邻环，其 中环中的至少一个为杂芳族的，例如，另一个环可以为环烷基，环烯 基，环炔基，芳基，杂芳基和/或杂环基。杂芳基包括，例如，吡咯， 呋喃，漆汾，咪唑，噁唑，蓬唑，吡唑，吡吱，吡漆，峻漆和嘧啶等。 本文所用的术语"杂原子"意旨任意非碳或氢的元素的原子。优选 的杂原子为氮，氧和硫。
术语"杂环基"和"杂环(heterocycle )"意旨取代或未被取代的非 -芳族环结构，优选3-至10-元环，更优选3-至7-元环，其环结构包 括至少一个杂原子，优选1 - 4个杂原子，更优选1或2个杂原子。术 语"杂环基"和"杂环"还包括具有两个或多个环的多环环系，其中两个 或多个碳共用于两个相邻环，其中环中的至少一个为杂环，例如，另 一个环可以为环烷基，环烯基，环炔基，芳基，杂芳基和/或杂环基。 杂芳基包括，例如，哌啶，哌嗪，吡咯烷，吗啉，内酯类，内酰胺类 等。 本文所用的术语"杂环基烷基"意旨被杂环基取代的烷基。 本文所用的术语"烃基"意旨通过碳原子键合的不具有-O或-S取
代基并且一般具有至少一个碳-氢键和主要碳骨架，但可以任选包括杂 原子的基团。因此，如甲基，乙氧基乙基，2-吡啶基和三氟甲基这类 基团被视为用于本申请目的的烃基，但并非取代基，诸如乙酰基(在连 接碳上具有-O取代基)和乙氧基(通过氧而非碳连接)。烃基包括，但 不限于芳基，杂芳基，碳环，杂环，烷基，链烯基，炔基及其组合。
术语"低级"在与诸如酰基，酰氧基，烷基，链烯基，炔基或烷氧
基这类化学部分联用时意旨包括在取代基上存在io个或io个以下原
子，优选6个或6个以下原子的基团。"低级烷基"，例如，意旨包含 10或10个以下碳原子，优选6或6个以下碳原子的烷基。在某些实 施方案中，酰基，酰氧基，烷基，链烯基，炔基或烷氧基取代基分别 为低级酰基，低级酰氧基，低级烷基，低级链烯基，低级炔基或低级 烷氧基，无论它们是单独出现还是与其它取代基组合出现，诸如描述 中的羟基烷基和芳烷基(在此情况中，例如，在统计烷基取代基上的碳 原子时不统计芳基内的原子)。
本文所用的术语"硝基"意旨-N02;术语"卤素"表示-F, -Cl， -Br 或-I;术语"硫氬基"意旨-SH;术语"羟基"意旨-OH;且术语"磺酰基" 意旨-S0广。
术语"多环基"意旨两个或多个环(例如，环烷基，环链烯基，环炔 基，芳基和/或杂环基)，其中两个或多个碳共用于相邻环，例如，环 为"稠合环"。通过非相邻原子连接的环称作"桥连"环。多环的各环可 以被如上所述这类基团取代，例如为卣素，烷基，芳烷基，链烯基， 炔基，环烷基，羟基，氨基，硝基，硫氢基，亚氨基，酰氨基，磷酸 酯，膦酸酯，亚膦酸酯，羰基，羧基，曱硅烷基，醚，烷硫基，磺酰 基，酮，醛，酯，杂环基，芳族或杂芳族部分，-CF3， -CN等。
本文所用的术语"保护基"意旨防止反应官能基可能发生不需要的 化学转化的临时取代基。这类保护基的实例包括羧酸酯类醇的甲硅烷 基醚类以及分别为醛和酮的缩醛类和酮缩醇类。已经综述了保护基化 学领域(Greene, T. W. ; Wuts, P. G. M. Protective Groups in Organic Synthesis, 2nd ed. ; Wiley: New York, 1991)。
术语"取代的"意旨在骨架的一个或多个碳上具有取代氢的取代基 的部分。可以理解"取代"或"被取代"包括暗示条件为这类取代按照取 代原子和取代基的允许化合价且取代产生稳定的化合物，例如不会诸 如通过重排，环化，消去等自发进行转化。关注本文所用的术语"取代 的"包括所有有机化合物的允许的取代基。在一个宽范的方面中，允许
的取代基包括有机化合物的无环和环状支链和非支链碳环和杂环，芳 族和非-芳族取代基。允许的取代基可以为一种或多种并且对适当的有 机化合物而言可以相同或不同。就本发明的目的而言，杂原子，诸如 氮可以具有氢取代基和/或本文所述满足杂原子化合价的有机化合物 的任何允许的取代基。取代基可以包括本文所述的任何取代基，例如， 卣素，羟基，羰基(诸如羧基，烷氧羰基，甲酰基或酰基)，硫代羰基(诸 如硫酯，硫代乙酸酯或硫代甲酸酯)，烷氧基，磷酰基，磷酸酯，膦酸 酯，亚膦酸酯，氨基，酰氨基，脒，亚胺，氰基，硝基，叠氮基，硫 氬基，烷硫基，硫酸酯，磺酸酯，氨磺酰基，磺酰氨基，磺酰基，杂 环基，芳烷基或芳族或杂芳族部分。本领域技术人员可以理解，如果 合适，在烃链上取代的部分自身可以被取代。
可以理解"取代"或"被取代"包括暗示条件为这类取代按照取代原 子和取代基的允许化合价且取代产生稳定的化合物，例如不会诸如通 过重排，环化，消去等自发进行转化。
术语"氨磺酰基"为公认的并且包括可以由下式表示的部分
其中R9和R10如上述所定义。
语"硫酸酯"为公认的并且包括可以由下式表示的部分
<formula>formula see original document page 60</formula>
其中R41如上述所定义。
术语"磺酰氨基"为公认的并且包括可以由下式表示的部分:
其中R9和R'll如上述所定义。
术语"磺酸酯"公认的并且包括可以由下式表示的部分:
其中R41为电子对，氢，烷基，环烷基或芳基。
本文所用的术语"硫氧化物(sulfoxido)基"或"亚磺酰基"意旨可
以由下式表示的部 o
<formula>formula see original document page 61</formula>
其中R44选自氩，烷基，链烯基，炔基，环烷基，杂环基，芳烷 基或芳基。
本文所用的术语"硫酯"意旨基团-C(0)SR9或-SC(0)R9，其中R'表 示烃基。
本文所用的每种表达方式的定义，例如，烷基，m， n等在它在任 何结构上出现一次以上时指定与其在其它处相同结构上的定义独立。
术语三氟曱磺酸酯基，曱苯磺酰基，甲磺酰基和nonaflyl为公认 的并且分别意旨三氟甲磺酰基，甲苯磺酰基，甲磺酰基和九氟丁磺酰 基。术语三氟曱磺酸酯，曱苯磺酸酯，曱磺酰酯和nonaflate为公认的 并且分别意旨三氟甲磺酸酯，对甲苯磺酸酯，甲磺酸酯和九氟丁磺酸 酯官能基和包含所述基团的分子。
缩写Me， Et， Ph, Tf， Nf， Ts， Ms分别表示曱基，乙基，苯基， 三氟曱磺酰基，九氟丁磺酰基，甲苯磺酰基和曱磺酰基。有机化学普 通技术人员使用的缩写的更综合性清单出现在Journal of Organic Chemistry每巻的第一版中；该清单一般以表的形式列出，标题为 Standard List of Abbreviat ions。将在所述清单中包含的缩写和有 机化学普通技术人员使用的所有缩写引入本文作为参考。
本发明的某些化合物可以以特定的几何或立体异构体形式存在， 本发明关注所有这类化合物，包括顺式-和反式-异构体，R-和S-对映 体，非对映体，(d)-异构体，(l)-异构体，其外消旋混合物及其其它 混合物，因为属于本发明的范围。另外的不对称碳原子可以存在于取 代基，诸如烷基上。指定所有这类异构体及其混合物均包括在本发明
中。
制备基本上为异构体纯的化合物的方法为本领域公知的。例如， 如果需要本发明化合物的特定对映体，那么可以通过不对称合成或通 过使用手性助剂衍生制备它，其中分离所得非对映异构体混合物并且 裂解辅助基团而得到纯的所需对映体。可选择地，如果分子包含碱性 官能基，诸如氨基或酸性官能基，诸如羧基，那么可以使用适当的旋 光酸或碱形成非对映异构体盐，随后拆分通过分级结晶或本领域众所 周知色镨方式形成的非对映体，且随后回收纯的对映体。可选择地， 可以通过使用合成中间体与反应制备富含对映体的混合物和纯的对映 体化合物，所述的合成中间体为对映体纯的，所述的反应使得手性中 心上的立体化学不改变或导致其完全反转。用于反转或保留不改变的 特定立体中心的技术和用于拆分立体异构体混合物的那些技术为本领 域众所周知的并且充分属于本领域技术人员选择针对特定情况的适当
方法的能力范围。 一般参见F證iss等(eds.) ， Vogel's Encyclopedia of Practical Organic Chemistry 5th Ed， Longman Scientific and Technical Ud. , Essex, 1991, pp. 809- 816;和Heller， Acc. Chem. Res. 23: 128 (1990)。
所关注的上述化合物的等效物包括另外与之相当并且具有其相同 的一般特性(例如，抑制TRPA1活性的能力)的化合物，其中进行一种或 多种取代基的简单变化形式，它们不会对化合物的功效产生不良影响。 一般而言，可以通过在一般反应方案中例证的方法，例如，如下所述 的方法或其修改形式，使用易于利用的原料，试剂和常规的合成操作 制备本发明的化合物。在这些反应中，还能够利用自身公知，但本文 未提及的变化形式。
就本发明的目的而言，化学元素按照元素周期表CAS version, Handbook of Chemistry and Physics, 67th Ed. ， 1986-87 (内封) 鉴定。另外，就本发明的目的而言，关注术语"烃"包括具有至少一个 氢和一个碳原子的所有允许的化合物。在一个宽范的方面中，允许的 烃类包括无环和环状支链和非支链碳环和杂环，可以被取代或未被取代的芳族和非-芳族有机化合物。
本发明的化合物还可以包含非天然比例的构成这类化合物的原子 的一种或多种上的原子同位素。例如，可以使用放射性同位素，诸如，
例如氚(310，碘-125 (1251)或碳-14(140放射性标记化合物。指定本发 明化合物的所有同位素变化形式，无论是否未放射性的，均包括在本 发明范围内。
符号^ ，无论是作为键使用，还是展示出与键垂直均表示展示 部分与分子剩余部分，固相支持体等的连接点。
本发明的某些化合物可以以非溶剂化形式和溶剂化形式存在，包 括水化形式。 一般而言，溶剂化形式与非溶剂化形式等效并且包括在 本发明范围内。本发明的某些化合物可以以多晶型或非晶形形式存在。 一般而言，所有物理形式针对本发明关注的应用而言均为等效的并且 指定它们属于本发明的范围内。
其中取代基以其常规的从左到右的书写的化学式专门指定，它们 同样包括化学上相同的取代基，这些取代基可以由从右到左的结构书 写产生例如，还指定-CH20-描述-0CH广；还指定-NHS(0)f表示 -S (0)2HN-等。
术语"药学上可接受的盐"包括使用相对无毒性的酸或碱制备的活 性化合物的盐，这取决于在本文所述化合物上发现的特定的取代基。 当本发明的化合物包含相对所需的官能基时，可以通过使这类化合物 的中性形式接触足量的所需碱(可以是在净的或在合适的溶剂中)获 得碱加成的盐。药学上可接受的碱加成的盐的实例包括钠，钾，钓， 铵，有机氨基或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物包含相对碱性官 能基时，可以通过使这类化合物的中性形式接触足量的所需酸(可以 是在净的或在合适的溶剂中)获得酸加成的盐。药学上可接受的酸加 成的盐的实例包括那些来源于无机酸的盐和来源于相对无毒性的有机 酸的盐，所述的无机酸如盐酸，氬溴酸，硝酸，碳酸， 一氢碳酸，磷 酸， 一氢磷酸，二氢磷酸，硫酸， 一氢硫酸，氢碘酸或磷酸等，所述 的有机酸如乙酸，三氟乙酸，丙酸，异丁酸，马来酸，丙二酸，苯曱
酸，琥珀酸，辛二酸，富马酸，乳酸，扁桃酸，苯二甲酸，苯磺酸， 对-甲苯磺酸，柠檬酸，酒石酸，曱磺酸等。还包括氨基酸的盐，诸如 精氨酸盐等，和有机酸的盐，如葡糖醛酸或半乳糖醛酸等(例如，参见
Berge等，"Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science, 1977， 66, 1-19)。本发明的某些具体化合物包含碱性和酸 性官能基，它们能够使化合物转化成碱或酸加成的盐。
优选通过使所述的盐接触碱或酸并且按照常规方式分离母体化合 物再生化合物的中性形式。化合物的中性形式在某些物理特性方面不 同于各种盐形式，诸如在极性溶剂中的溶解性，但就本发明的目的而 言，这些盐在其它方面与化合物的母体形式等效。
术语"足够低的热原活性"在涉及药物制剂时意旨不含可能使该制 剂所给予的受试者产生不良反应(例如，刺激，发热，炎症，腹竭，呼 吸窘迫，内毒素休克等)的量的热原。例如，该术语意旨包括不含或基 本上不含内毒素，诸如，例如脂多糖(LPS)的制剂。
与TRPA1功能相关的疾病，病症或疾患
在某些实施方案中，本发明提供了抑制体外或体内TRPAl通道功能 的方法和组合物。典型功能包括，但不限于TRPAl-介导的电流。在某 些实施方案中，本发明提供了通过给予调节TRPAl蛋白质的水平和/或 活性的活性剂预防或这类疾病或病症或疾患的方法。在其它实施方案 中，该化合物选择性地抑制TRPAl蛋白质的表达水平和/或活性。换句 话说，在某些实施方案中，所述的化合物与一种或多种其它离子通道 活性相比优先抑制TR P A1蛋白质活性。
在预防或治疗本文提供的疾病和病症的方法的具体实施方案中， 所述的疾病或病症可以为例如，疼痛或接触敏感性，诸如与疾病或 病症相关的疼痛，例如，癌性痛；皮肤病或病症，例如4艮屑病和基底 细胞和鳞状细胞癌；神经变性疾病或病症，例如，阿尔茨海默病(AD)， 帕金森病，亨廷顿病，肌萎缩侧索硬化(ALS)和其它因创伤或其它损伤 导致的脑功能障碍，包括衰老，炎性疾病(例如，哞喘，慢性阻塞性肺
疾病，类风湿性关节炎，骨关节炎，炎症性肠病，肾小球肾炎，神经
炎症疾病，多发性硬化和免疫系统病症)；癌症(例如脂肪肉瘤)或其它 增殖性疾病，肾疾病和肝疾病；代谢紊乱，诸如糖尿病。其它疾病和 疾患包括术后痛，疱渗后遗神经痛，失禁和带状疱渗。
由于钙调节在许多细胞过程，包括细胞活化，基因表达，细胞运 输和凋亡性细胞死亡中起作用的重要作用，所以钙生理紊乱涉及许多 包4舌这类细力包活动的疾病和病症。这些疾病和病症包括皮趺病和病症； 神经和神经变性疾病和病症；与各种疾病，病症或疾患相关的发热； 失禁；炎性疾病和病症，诸如炎症性肠病和克罗恩病；呼吸性疾病和 病症；诸如慢性咳嗽，哮喘和慢性阻塞性肺疾病(C0PD);消化性病症， 诸如溃疡和酸反流；代谢病和障碍，包括肥胖和糖尿病；肝和肾疾病 和病症；恶性肺瘤，包4舌癌症；与老化相关的病症；和对疼痛和接触 过敏。
可以治疗的另外疾病或疾患包4舌ATP-相关疾病或病症，包括癫痫 症，认知，呕吐，疼痛(例如偏头痛)，哞喘，外周血管疾病，高血压 免疫和炎性疾患，肠易激综合征，膀胱炎，抑郁症，与衰老相关的变 性疾病，尿失禁，早泄，嚢性纤维化，糖尿病，避孕和不育症，和伤 口愈合(例如，参见Foresta等(1992) J. Biol. Chem. 257:19443-19447; Wang等(1990) Biochim. Biophys. Res. Commun. 166:251—258; Burnstock和Wi 11 iams ， (2000) J. Pharmacol. Exp. Ther. 295: 862-869;和Burnstock， Pharmacol Rev (2006) 58:58-86)。
本文所述的TRPA1抑制剂可以用于治疗4壬意上述或下列疾病或疾 患，包括治疗与任意上述或下来疾病或疾患相关的疼痛。当用于治疗 方法时，可以基于指定给药途径选择和配制抑制剂。抑制剂可以用于 治疗潜在的疾病或疾患或緩解所述疾病或疾患的症状。典型症状包括 与疾病或疾患相关的疼痛。
a.对疼痛和触纟莫的敏感性或疼痛-相关疾病或病症
本文提供的组合物和方法与预防或治疗疼痛或对疼痛和触摸敏感 相关。疼痛或对疼痛和触摸的敏感性可以涉及各种疾病，病症或疾患， 包括，但不限于糖尿病性神经病，乳腺痛，银屑病，湿疹，皮炎，烧 伤，疱渗后神经痛(带状疱疹)，伤害性疼痛，外周神经和中枢神经痛， 慢性痛，癌性和肿瘤痛，脊髓损伤，挤压伤和创伤诱导的疼痛，偏头 痛，脑血管和血管痛，镰状细胞病性疼痛，类风湿性关节炎性疼痛，
肌肉骨骼痛，包括治疗骨关节炎和类风湿性关节炎的征候和症状，口 面部和颜面痛，包括牙齿，暂时性下颌骨病症和癌症相关的疼痛，腰 部或骨盆痛，外科切口相关疼痛，炎性和非炎性疼痛，内脏痛，精神 性疼痛和软组织炎性痛，纤维肌痛-相关疼痛和反射性交感神经营养障 碍和因肾结石或尿道感染导致的疼痛。本发明的化合物和方法可以用
于治疗慢性以及急性痛。慢性或急性痛可以为损伤，衰老或疾病的结 果。
其它离子通道涉及疼痛的接受或传输。例如，已经认识到涉及将
疼痛信号从感觉传入神经细胞传输至中枢神经系统的突触传递中的N-型钩通道。已经证实某些特异性阻断N-型钙通道的天然存在的肽神经 毒素作为广泛动物疼痛模型，包括炎症和神经性疼痛模型中的极为有 效和有效的止痛药起作用。可利用的证据提示N-型钙通道阻滞剂至少 与阿片类物质同样有效，避免了许多典型阿片类物质的副作用(例如呼 吸抑制)且止痛作用并非经历耐受性的发生。
还证实5-a-诱导的神经类固醇诱导的有效外周止痛部分通过对 T-型0&2+通道的作用介导(Pathirathna等，Pain. 2005 Apr; 114 (3) : 429-43)。
还证实抗癫痫药和相对选择性T-类钙通道阻滞剂乙琥胺高度有效 地反转以常用细胞毒性剂紫杉醇或长春新碱导致的神经性疼痛 (Flatters和Bennett， Pain. 2004 May; 109 (1-2): 150-61)。
与电压控制的钩通道oc(2)-S蛋白质亚单位发生相互作用的新药 普瑞巴林可有效和安全地治疗糖尿病性神经病的疼痛(Richter等，J Pain. 2005 Apr; 6 (4): 253-60)。
上述内容证实接受或传输疼痛中涉及各种非-TRP通道。特别地， 上述内容证实疼痛中涉及各种钩通道。
本发明提供了治疗疼痛的方法，包括给予(i) TRPA1功能拮抗剂； (i i) TRPA1功能选择性拮抗剂和TRPV1和/或TRPV3功能选择性拮抗剂 的组合；或(iii)抑制TRPA1， TRPV1和TRPV3中的两种或多种的功能 的全-TRP抑制剂。
除TRPV家族成员外，其它TRP通道也涉及疼痛接受和/或感觉。例 如，某些TRPM通道，包括TRPM8涉及疼痛的接受和/或感觉。因此，在 某些实施方案中，本发明的方法包括通过给予下列药物治疗疼痛(i) 选择性TRPA1拮抗剂和选择性TRPM8拮抗剂的组合；(ii)选择性TRPA1 拮抗剂，选择性TRPM8拮抗剂和选择性TRPV1和/或TRPV3拮抗剂中的一 种或多种的组合；(iii)拮抗TRPA1和TRPM8功能的交叉TRP抑制剂； 或(iv)拮抗TRPAl， TRPM8和TRPV1和TRPV3中的一种或多种的功能的全 抑制剂。
不受理论约束，我们提出了TRPA1拮抗剂如何有助于减轻疼痛的一 种可能的机制。TRPA1拮抗剂可以导致细胞超极化。这可以导致神经元 发炎减轻和/或动作电位频率减少。此外，TRPA1抑制剂可以减少钙流 入受损细胞并且可以防止有时伴随损失的基因表达中的钙依赖性改 变。
b. 皮肤病或病症。
钙通过皮肤细胞质膜流入是参与皮肤表皮中细胞分化的关键信号 传导要素(Dotto， 1999 Crit Rev Oral Biol Med 10: 442-457)。调 节或调制钓进入途径和由此皮肤细胞生长的临界控制点可以治疗或预 防特征在于表皮增生的皮肤病或病症，即一种疾患，其中皮肤细胞增 殖过快且难以分化。这类疾病包括银屑病和基底和鳞状细胞癌。据估 计影响达7百万美国人的银屑病使得患病者有轻度到极度不适感，对继 发性感染的易感性增强和因受侵害区域的损害导致的心里影响 (Lebwohl和Ali, .2001 J Am Acad Dermatol 45: 487-498)。皮肤的 基底细胞癌(BCC)和鳞状细胞癌(SCC)代表了在每年在美国诊断的所有 癌症病例中的至少三分之一。每报导有1百万以上的新病例并且发病率 正在增加。尽管相对无侵害性，但是緩慢生长的癌症BCCs能够造成显著的局部组织破坏和受损。SCCs更具侵害性且由此代表了甚至更巨大
的并发症。此外，由于8oy。的损害发生在头颈部，而在肩部，背部或胸
部还占15。/。，所以皮肤的BCCs和SCCs对受侵害患者的外观和生活质量具 有显著影响。
许多皮肤病伴随痒(瘙痒)。瘙痒和疼痛共有许多机械相似性。两 者均与C-纤维活化相关，两者均因温度和炎症介体的增加而强化并且 两者均可以使用阿片类物质压制。降低神经元兴奋性，特别是C-纤维 的兴奋性可以緩解与透析皮炎，妊娠，毒物常春藤，过敏反应，干燥 皮肤，化疗和湿療相关的瘙痒。
c.神经或3申经变性疾病和病症
神经变性疾病和病症包括，但不限于阿尔茨海默病(AD)，帕金森 病，亨廷顿病，肌萎缩侧索硬化(ALS)和其它因创伤或其它损伤，包括 衰老导致的脑功能障碍。
与钙信号传导相关的机制可能在许多因脑损伤导致的神经变性疾 病和病症中改变。例如，来自具有AD的患者的成纤维细胞或T-淋巴细 胞与对照组相比具有连续展示出的从胞内储存中释放的Ca'+增加(Ito 等(1994) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 91 :534-538; Gibson等 (1996) Biochem. Biophys. ACTA 1316:71-77; Etchenberrigaray等 (1998) Neurobiology of Disease, 5: 37-45)。与这些观察结果一致， 已经证实与家族性AD(FAD)相关的早老素基因(PS1或PS2)中的突变增 加了 InsP3-介导的Ca"从内部储存中释放(Guo等(1996) Neuro Report, 8: 379-383 ; Leissring等(1999) J. Neurochemistry , 72:1061-1068 ; Leissring 等(1999) J. Biol. Chem. 274(46): 32535-32538 ;Leissring等(2000)J.Cell Biol. 149 (4): 793-797; Leissring等(2000) Pro" Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97 (15): 8590- 8593)。此外，据报导与AD中淀粉样蛋白形成状态淀粉 样蛋白S肽产生增加相关的PS1或PS2中的突变与胞内钙水平下降相关 (Yoo等(2000) Neuron, 27 (3) :561- 572)。
已经证实实验性外伤性脑损伤启动脑中Ca"浓度巨大紊乱，这可能
促成进一步的神经元损害。胞内Cah可以由许多不同的离子通道而升 高。进一步证实通道阻滞剂可以在急性创伤后期中给药时有益于治疗 神经运动功能障碍(Cheney等(2000) J. Neurotra職，17 (1): 83-91)。
d. 炎性疾病和病症
本文提供的组合物和方法还可以用于涉及治疗炎性疾病。这些疾 病包括，但不限于哞喘，慢性阻塞性肺疾病，类风湿性关节炎，骨关 节炎，炎症性肠病，慢性阻塞性肺疾病，神经炎症疾病，诸如多发性 硬化和免疫系统病症。
炎性介体活化中性白细胞(PMN)部分通过增加胞质钓浓度实现 ([Ca21》。特别认为某些钙通道介导的钙流入在PMN活化中起重要作 用。已经证实创伤增加PMN储存-操纵的钙流入(Hauser等(2000) J. Trauma Injury Infection and Critical Care 48(4) -592-598)， 并且因强化的储存操纵的钙流入导致的[Ca2+] i延长升高可以改变与趋 化因子偶联的刺激反应并且促成损伤后的PMN功能障碍。通过储存操纵 的《丐通道调节PMN [Ca1i由此可以用于调节PMN-介导的炎症和损伤， 休克或脓毒症后剩余的心血管功能(Hauser等(2001) J. Leukocyte Biology 69 (1):63-68)。
周围神经病，例如糖尿病性神经病为涉及神经元和炎性成分的特 定疾患。不受机械理论约束，本发明的TRPA1拮抗剂可以用于这类周围 神经病，包括，但不限于糖尿病性神经病。除在这类周围神经病中的 应用(例如，减轻炎症)外，本发明主题的抑制剂还可以用于减轻与周 围神经病相关的疼痛。
神经源性炎症通常在神经元超兴奋性导致引起炎症的肽类释放时 发生。这些肽类包括物质P和CGRP。阻断TRPA1可以降低神经元活性且 由此可以阻断神经源性炎症。
e. 癌症和其它增殖性疾病
本文提供的组合物和方法还可以涉及这类恶性胂瘤，包括，但不 限于来源于淋巴网状内皮细胞的恶性肿瘤，膀胱癌，乳腺癌，结肠癌， 子宫内膜癌，头颈癌，肺癌，黑素瘤，卵巢癌，前列腺癌和直肠癌，
还有上述皮肤癌。胞内钙水平可以在癌相比中的相比增殖中起重要作
用 (Weiss 等 (2001) International Journal of Cancer 92 (6): 877-882)。
此外，与癌症或与癌症这类相关的疼痛为慢性痛的重要原因。骨 癌，例如骨肉瘤特别被视为痛性的并且具有晚期骨癌的患者可能需要 镇静以便耐受强烈和持续性痛。因此，本发明的TRPAl拮抗剂代表了治 疗疼痛，例如与癌症或癌症治疗相关的疼痛的可能的重要治疗剂。
由于TRPA1在转化的相比中差别表达，所以TRPAl阻滞剂也可以影 响转化相比的增殖且由此为緩解疾病的有用方式(参见Jaquemar等 (1999) JBC 274 (11): 7325-33)。因此，TRPAl拮抗剂可以緩解癌性 痛的原因和症状。
癌症治疗不仅为痛性的，而且它们甚至可能对健康组织产生毒性。 某些化疗剂可以产生痛性神经病。因此，本发明的TRPAl拮抗剂代表了 治疗疼痛和/或与导致神经病的癌症治疗相关的炎症的可能的重要治 疗剂。
前列腺素的主要功能在于保护胃粘膜。在这种功能中包括调节在 人胃细胞中起细胞增殖中关键作用的胞内钙水平。因此，非类固醇抗 炎药(NSAIDs)抑制前列腺素可以抑制胃细胞中钩流入(Kokoska等 (1998) Surgery(St Louis) 124 (2): 429-437)。緩解炎症的NSAIDs还 最有效地产生最大的胃肠损害(Canadian Family Physician, January 1998， p. 101)。因此，在特异性细胞类型中的独立地调节钩通道的能 力可以有助于减轻抗炎疗法的这类副作用。另外或可选择地，给予本 发明的TRPAl抑制性化合物可以与NSAIDs联用，由此使用减少剂量的 NSAIDs促进疼痛緩解。
f.失禁
失禁为影响男性和女性的显著社会和医学难题。失禁有许多原因， 包括，但不限于年龄，妊娠，接触放射，手术，损伤，癌症，前列腺 扩大，前列腺增生和支撑尿道的膀胱或肌肉组织疾病。本发明关注治 疗因上述情况导致的失禁和未知原因的失禁或因焦虑，应激或抑郁症
导致的节欲。
本文提供的组合物和方法可以用于涉及治疗失禁。失禁的动物模 型通常与自发性动作电位频率增加和平滑肌细胞慢性去极化相关。证
据提示非-选择性阳离子电流可以导致这种去极化。由于TRPA1 mRNA 在神经支配膀胱的神经元中表达，所以阻断TRPA1可以有效地治失禁。 此外，通过刺激毒蕈碱性l型乙酰胆碱受体活化TRPAl(Ml,参见Jordt 等(2004) Nature 427: 260-265)。抗毒覃碱性药为未治疗诸如膀胱活 动过度这类疾患的众所周知的药物。因此，阻断M1受体的下游靶标的 TRPA1可以緩解这类疾患，而没有与毒覃碱性拮抗剂相关的副作用。
失禁可以由许多损伤，疾病和疾患中任意种导致。它们中的某些 可以导致明显的不适感和疼痛以及失禁和失禁自身的窘迫。例如，膀 胱炎为也可能导致失禁的痛性疾患。就导致失禁和疼痛的损伤或疾患 而言，TRPA1抑制剂可以用于治疗失禁并且緩解伴随的疼痛。
就TRPA1抑制剂用于治疗失禁的实施方案而言，本发明关注额外可 能的给药途径。例如，在某些实施方案中，可以通过导管或其它管腔 内装置的尿道或膀胱直接给予TRPA1抑制剂。然而，在其它实施方案中， 可以通过口服，静脉内，皮下等给予TRPA1抑制剂。
g. 温度调节
由于离子流对动脉张力和松弛的作用，所以本发明的主题的化合 物还可以用于影响热敏感性。此外，由于TRPA1通道为涉及冷刺激接受 和感觉的热反应性的热反应性通道，所以TRPA1拮抗剂可以用于调节通 常伴随疼痛的凉，冷和温度下降感觉。
h. 高血压
电压控制的钩通道阻滞剂属于最初研发用于治疗高血压的药物类 型。这类阻滞剂抑制钙运动入心脏和动脉的肌细胞。因为这些肌肉的 收缩需要钙，所以这类阻滞剂通过降低心脏收缩反应的力并且松弛动 脉肌肉壁来降血压。尽管TRPA1并非电压控制的钙通道，但是它仍然可 作为调节细胞和组织中钙平衡以及其它离子平衡的手段。因此，本发 明的TRP A1拮抗剂可以用于治疗高血压。本发明主题的化合物的额外应
用包括可以通过松弛血管肌壁完全或部分緩解的其它疾患。典型的疾 患包括头痛和偏头痛发作。
如上所述，拮抗TRPA1功能的化合物可以用于治疗许多疾病，损伤， 病症和疾患。在某些实施方案中，TRPA1抑制剂可以用于治疗疼痛。如 上所述，TRPA1抑制剂可以用于治疗因损伤或疾病导致的疼痛和作为治 疗结果经历的疼痛。典型类型的疼痛包括伤害性疼痛，炎性疼痛和神 经性疼痛。这类疼痛可以为慢性的或急性的。TRPA1抑制剂可以用于治 疗任意上述类型疼痛中的一种或多种。在某些实施方案中，TRPA1抑制 剂可以用于治疗伤害性疼痛。在某些其它实施方案中，TRPA1抑制剂可 以用于治疗炎性疼痛。在某些其它实施方案中，TRPA1抑制剂可以用于 治疗神经性疼痛。
如上所述，TRPA1抑制剂特别可以用于治疗与癌症，骨关节炎，类 风湿性关节炎，疱渗后神经痛，烧伤和其它上述适应征相关的疼痛。 为了进一步例证，可以使用本发明化合物所针对的额外典型适应征包 括口腔疼痛，法布里病，复杂性区域性疼痛综合征，胰腺炎和纤维肌 痛综合征。
法布里病
手和足中不明的疼痛主诉可以为出现的特征。这些症状称作肢端 感觉异常，因为它们反映出为该病频繁表现的周围神经病。这种疼痛 可以为发作性的和慢性的。急性发作与因接触极端的温度，应激，情 绪和/或疲劳引起。
纤维肌痛
纤维肌痛(FMS;纤维肌痛综合征)为泛发性肌肉骨骼痛和疲劳病 症。纤维肌痛的特征在于肌肉，韧带和腱中的疼痛。该疾患对女性的 影响超过男性并且在所有年龄的人中发生。总之，据估计FMS影响3-6。/。 的人群。
患者描述的与纤维肌痛相关的疼痛，为深度肌肉酸痛，搏动，急 痛和刺痛。疼痛有时包括强烈烧灼感。疼痛和僵硬通常在早晨或特定 肌群反复应用后恶化。
另外，从轻度到致残的不同水平的疲劳通常与纤维肌痛相关。纤
维肌痛的其它症状包括胃肠症状。在约40 - 70。/。的FMS患者中发生肠易 激综合征和IBS-类症状，诸如便秘，腹泻，频繁腹痛，腹部胀气和恶 心。酸反流或胃食管反流病(GERD)以类似频率发生。
FMS的另一种频繁和虚弱性症状为慢性头痛，包括偏头痛和和紧张 型头痛。约70。/。的FMS患者经历这类疼痛。另外，FMS患者通常发生在颚， 牙齿和口腔中产生疼痛的颞下颌关节功能紊乱综合征(也称作TMJ)。
TMJ还可以加剧疼痛。
FMS的其它常见症状包括，但不限于经前期综合征和痛性期；胸 痛；晨僵；认知或记忆缺陷；麻木和刺痛感；肌肉颤搐；膀胱过敏； 肿胀四肢感觉；皮肤敏感性；干眼和口干燥；头晕；和协调受损。另 外，患者通常对气味，噪音和亮光敏感。
FMS的原因仍然不明了。然而，该病的发作与感染(病毒或细菌性)， 类风湿性关节炎，狼疮和曱状腺功能减退相关。这些有趣铁可能的触 发器之间的相关性不明确。
FMS对患者的影响直接与疼痛和疲劳水平相关。疼痛可以如此严重 至干扰正常工作或家族功能作用。目前无法治愈FMS且最新的疗法主要 集中于改善睡眠(緩解疲劳)和治疗疼痛。本发明的化合物可以用于辅 助控制与FMS相关的疼痛。这类疼痛包括，但不限于颚，牙齿和口腔中 的口腔疼痛。这类疼痛还包括非口腔肌肉骨骼肌疼痛，因头痛导致的
疼痛和因胃肠症状导致的疼痛。
复杂性区域疼痛综合征(CRPS;也称作慢性区域性疼痛综合征)为 慢性疼痛疾患。CRPS在先称作反射性交感神经营养不良(RSD)。 CRPS 为影响皮肤，肌肉，关节和骨的慢性痛性和进行性神经疾患。该综合 征通常在受损四肢中发生，诸如断腿或术后。然而，许多病例仅涉及 小的损伤，诸如扭伤，且有时不能鉴定沉淀性损伤事件。CRPS涉及与 损伤严重性不成比例的连续强烈疼痛。疼痛随时间恶化而非改善。
尽管CRPS可以影响身体的各种区域，但是最常见的是影响臂，腿， 手或足。通常疼痛在肢体一部分中开始，并且随时间扩散以便包括整
个肢体乃至包括不同的肢体。典型特征包括在受损肢体或身体部分的 皮肤颜色和温度显著变化，伴随强烈烧灼感疼痛，皮肤敏感性，出汗 和肿胀。
一般而言，CRPS的特征为两类。I型在没有沉淀性神经损伤存在下 发生-不过，可以存在一定其它类型的沉淀性损伤。II型(在先称作皮 肤灼痛)在神经损伤后发生。这些类型仅为描述性的并且不与症状或预 后相关。
美国国立神经病和卒中研究所(The National Institute of Neurological Disorders and Strokes, NINDS)报告有2% - 5%的周围 神经损伤患者和12%-21%的身体一侧麻痹(偏瘫)患者发生作为并发症 的反射性交感神经营养障碍。The Reflex Sympathetic Dystrophy Syndrome Association of America (RSDSA)报告该疾患在骨折后有 1-2%的发生。
与CRPS发作相关的沉淀性事件包括如下脑损害，心脏病，心脏 病发作，感染，身体一侧麻痹(偏瘫)，放疗，反复运动病症(例如，腕 管综合征)，脊髓病症，手术和创伤(例如，骨折，枪伤，交通事故)。 然而，在10-20%的病例中不能发现沉淀性事件。注意在CRPS发作前发 生的损伤可能显著，也可能不显著。
CRPS的症状可能在三个阶段发展。急性阶段在前l-3个月过程中发 生并且可以包括灼痛，肿胀，对触摸的敏感性增加，受损区域中的毛 发增加和指曱生长，关节痛和颜色和温度改变。营养不良阶段可涉及 持续疼痛和胂胀。受影响的肢体通常感觉触摸凉并且看起来淡蓝色。
存在典型肌强直和消瘦(萎缩)以及早期骨损失(骨质疏松症)。这些症 状通常在发生所述病症后的3-6个月发生。在萎缩阶段过程中，皮肤变 凉和有光泽，发生肌强直增加和虛弱且症状可以扩散至另一肢体。
其它症状包括灼痛，对触摸极度敏感性，皮肤颜色改变(红色或 淡蓝色)，皮肤温度改变(热或冷)，关节痛，肿胀(水胂)，频繁感染， 肌强直，肌痉挛，颤动，虛弱，皮炎，湿療，出汗过多和偏头痛。TRPA1 抑制剂不仅可以用于治疗与CRPS相关的疼痛，而且可以緩解这些其它
症状中的许多，包括皮炎，湿渗和偏头痛。
具有CRPS的患者通常患有因疾病对生活质量的影响导致的抑郁症 和焦虑。
目前无法治愈CRPS且由此治疗的一般目的在于緩解痛性症状。医 生可以开据局部止痛药，抗抑郁药，皮质类固醇和用于緩解疼痛的阿 片类物质的处方。然而，在这一点上，无单一药物或药物组合产生持 续长效的症状改善。其它治疗可以包括物理疗法，交感神经阻滞，脊 髓刺激和鞘内药物泵以便通过脊髓递送阿片类物质和局部止痛药。
治疗目的在于控制疼痛并且尽可能地维持受侵害的肢体运动能 力。设计通常合并各种治疗方式的个体化的治疗计划。目前使用物理 疗法，药物，神经阻滞和心理支持。可以使用本发明的TRPA1抑制剂代 替目前的治疗方式中的一种或多种，或除目前治疗方式的一种或多种 外还使用本发明的TRPA1抑制剂。例如，TRPA1抑制剂可以用作目前药
物的可替代选择，但合并物理疗法。
TRPA1抑制剂提供了控制CRPS患者疼痛的可替代选择。TRPA1抑制 剂可以与任何目前用于治疗CRPS患者的药物联用。可选择地，TRPA1 抑制剂可以用作可选择的药物。
除药物疗法外，CRPS患者通常接受物理疗法。除物理疗法外还可 以使用TRPA1抑制剂。物理疗法对辅助保持受侵害的肢体关节活动度和 功能而言是重要的。例如使用TRPA1抑制剂适当控制疼痛不仅增加患者 的舒适感，而且有利于物理疗法的介入。
与用于控制CRPS患者疼痛的特定疗法组合无关，心理支持具有重 要意义。TRPA1抑制剂可以与心理支持联用。
本发明的TRPA1抑制剂可用于治疗CRPS。例如，本发明的TRPA1抑 制剂可以用于辅助緩解与CRPS相关的疼痛。TRPA1抑制剂可以单独使用 或作为辅助控制疼痛和与CRPS相关的其它症状的总体治疗方案的组成 部分使用。控制CRPS患者疼痛对维持有意义的生活质量而言是重要的。 此外，有效控制疼痛能够使患者参与物理疗法，以便辅助保持受侵害 肢体的运动能力和应用。
胰腺炎为胰腺的炎症。胰腺为胃后部的大腺体并且接近十二指肠。 一般而言，消化酶不会变为活性的，直到它们达到小肠，其中它们开 始消化食物。但如果这些酶在胰腺内部变为活性的，那么它们就开始" 消化"胰腺自身。
急性胰腺炎突发，持续短时间期限并且通常自我消退。慢性胰腺 炎不会自我消退并且导致緩慢的胰腺破坏。任一形式均可以导致严重 并发症，包括出血，组织损害和感染。
急性胰腺炎可以为严重的威胁生命的疾病，同时伴随许多并发症。
在美国每年发生约80, 000个病例并且这些病例中接近20%的特征为严 重性的。
尽管并非唯一的，但是急性胰腺炎通常由胆石或酒精滥用导致。 急性胰腺炎通常以上腹部中疼痛开始，可以持续几天。疼痛可能是重 度的并且可以变成持续不断的。疼痛可以局限于腹部或可以到达背部 和其它区域。有时并且对某些患者而言，疼痛为突发的和强烈的。其 它时间或对于其他患者而言，疼痛开始为轻度疼痛，在进餐后加剧。 具有急性胰腺炎的人通常看起来并且感觉极为痛苦。其它症状可以包 括腹部肿胀和触痛，恶心，呕吐，发热和疾脉。急性胰腺炎的严重病 例可以导致脱水和低血压并且甚至可能导致器官衰竭，内出血或死亡。
在急性胰腺炎发作过程中，淀粉酶和脂肪酶的血液水平通常增加 至少3倍。葡萄糖，钙，镁，钠，钾和碳酸氢根的血液水平也可能发生 变化。
目前的治疗取决于发作的严重性。 一般而言，设计治疗用于支持 重要身体功能，控制疼痛和预防并发症。尽管急性胰腺炎一般在几天 内消退，但是通常需要控制发作过程中的疼痛。TPRV3抑制剂可以用于 缓解与急性胰腺炎相关的疼痛。
慢性胰腺炎-如果对胰腺的损伤持续发生，那么可以形成慢性胰腺 炎。慢性胰腺炎在消化酶攻击和破坏胰腺和附近的组织时发生，导致 瘢痕形成和疼痛。慢性胰腺炎可以由酒精中毒或阻滞的，受损的或狭 窄的胰腺管导致。另外，遗传因素看起来影响该病，并且在某些病例
中尚无可鉴定的原因(所谓的特发性胰腺炎)。
具有慢性胰腺炎的大部分人具有腹痛。疼痛在进餐或饮水时可能 加剧，扩散至背部或变成持续不断并且可能致残。其它症状包括恶心， 呕吐，体重减轻和脂粪。
緩解疼痛为治疗慢性胰腺炎的第一步。 一旦疼痛得到控制，就考 虑实施高碳水化合物和低脂肪膳食计划。胰酶可以用于辅助补偿减少 的从受损胰腺中产生的酶。有时需要胰岛素或其它药物控制血糖。
尽管一般使用药物疗法控制疼痛，但是手术对緩解疼痛而言可能 是必要的。有必要实施手术以便排空扩大的胰腺管，乃至除去部分严 重受损的胰腺。
慢性胰腺炎经常伴有疼痛。例如，在约75%的酒精性慢性胰腺炎患 者，50%的迟发性特发性慢性胰腺炎患者和100%的早发性特发性慢性胰 腺炎患者中存在疼痛(DiMagno， 1999， Gastroenterology 116(5): 1252- 1257)。
少数具有疼痛的患者具有易于鉴定的损害，它们相对易于采用手 术或内窥镜方式治疗。在其他患者中，通常认为疼痛因不同原因导致， 包括胰内压升高，局部缺血和纤维化。然而，不受理论约束，这些现 象可能并非疼痛的主要原因，而疼痛可能因对神经束膜的损害和随后 的神经接触介体和炎症产物诱导的神经元致敏背景而产生。
由于有效控制疼痛对慢性胰腺炎患者的重要性，所以治疗痛性症 状的其它疗法是重要和有用的。TRPA1抑制剂可以用于控制与慢性胰腺 炎相关的疼痛。TRPA1抑制剂可以单独使用或作为控制具有慢性胰腺炎 的患者的总体治疗计划的组成部分使用。例如，可以将TRPA1抑制剂与 作为为控制具有慢性胰腺炎患者设计的治疗方案的组成部分的胰酶和 /或胰岛素一起给药。
口腔疼痛为可以使用本发明TRPAl抑制剂治疗的特定疼痛类型。术 语"口腔疼痛"意旨任何在口腔，咽喉，唇，齿龈，舌或颚中的疼痛。
该术语的使用与疼痛的原因和口腔疼痛是特定疾病，损伤或疾患的原 发症状还是继发症状无关。
口腔疼痛具有许多可能的原因。在某些实施方案中，口腔疼痛因 口腔，颚，牙齿，齿龈，咽喉，唇或舌损伤或疾病导致。在某些其它 实施方案中，口腔疼痛是主要侵害身体另一部分的损伤或疾病的后果。 在其它实施方案中，口腔疼痛是用于治疗口腔或身体另一部分损伤或
疾病的疗法的副作用。TRPA1抑制剂用于治疗口腔疼痛，与其原因无关。 所有疼痛均对患者的健康和良好的生命质量具有严重的负面影 响。然而，口腔疼痛可能对患者健康和生命质量具有特别严重性的影 响。特别地，口腔疼痛可以干扰合适的饮食和^L水。因此，具有口腔
疼痛的个体易于发生体重减轻，营养不良和脱水。在某些情况中，口 腔疼痛可以如此严重地干扰水化和营养，以至于需要静脉内，鼻胃或
其它人工支持(例如，管饲和/或水化)。另外，口腔疼痛可以干扰适当 的口腔卫生。口腔卫生不良可以进一步加剧口腔疼痛的许多原因，例 如，因感染或脓肿导致的口腔疼痛。
某些实施方案中，口腔疼痛因口腔中的溃疡，疡或其它损害导致。 例如，口腔疼痛可以由舌，齿龈，唇，咽喉或口腔中的其它组织的溃 疡，疡或其它损害导致。可选择地或另外，口腔疼痛可以由舌，齿龈， 唇，咽喉或口腔中的其它组织炎症导致。炎症可以伴随溃疡或其它损 害，或炎症可以在溃疡或其它损害形成前或没有溃疡或其它损害存在 下发生。
本发明关注通过经本文所述的任何给药途径给予TRPA1抑制剂治 疗口腔疼痛。在某些实施方案中，通过口服给予用于治疗口腔疼痛的 TRPA1抑制剂。优选口腔给予TRPA1抑制剂用于治疗口腔疼痛的制剂为 漱口药，凝胶，牙膏或其它糊剂，液体，锭剂，用拭子或结合护口器 或牙科装置。给药的制剂和特定方法取决于口腔疼痛的原因，患者的 总体健康状况和主要的医疗条件，疼痛的严重性和患者同时接受的其 它药物或疗法。医务人员容易地确定用于特定患者的最佳制剂。
下文提供的疾患指定例证可以导致口腔疼痛的不同病因的损伤和 疾病的范围。本发明关注给予本发明的TRPA1抑制剂治疗或预防口腔疼 痛。在某些实施方案中，可以口服给予本发明的化合物，例如作为凝
胶，糊剂，漱口药或其它口服制剂，以便有助于治疗或预防与4壬4可损 伤，疾病或疾患相关的口腔疼痛。与特定的制剂无关，本发明关注通 过例如直接施用于受侵害的口腔区域，冲洗整个口腔，用拭子，用注 射器或在护口器或其它牙科装置上的给药。
就这些疾患中的任意种而言，本发明关注单独给予TRPA1抑制剂或 将其与适合于特定损伤或疾患的一种或多种其它化合物或治疗方案联
合给予。
口腔粘膜炎
口腔粘膜炎，也称作口炎，为许多癌症治疗中的常见并发症。接 受全身化疗和/或局部放疗的患者通常发生口腔粘膜的极度疼痛的溃 疡。这种副作用并不限于患有头颈癌的患者，而是使侵害全部化疗患 者的约40%的虚弱'性副作用(Prevention and Treatment of Oral Mucositis in Cancer Patients, 1998, Best Practice: 2, l-6页)。
口腔粘膜炎为极度疼痛的。另外，口腔粘膜炎干扰癌症患者的适 当营养和水化。由于进行化疗和/或放疗的患者的已经受损的状态，所
以进一步干扰营养和水化可能严重地损害患者的健康。此外，这些溃 疡产生增加的感染风险。这种风险在免疫系统受损的患者中是特别严 重的。处于发生机会感染的特定风险中的患者的实例为治疗包括除去 一个或多个淋巴结的患者，预先接受为准备骨髓或干细胞移植而进行 的高剂量化疗的患者和具有潜在的免疫抑制病症(例如，HIV或肝炎) 的患者。 口疮
口疮，也称作口疮性溃疡(口疮)可以相对小和看不见。然而，它 们通常疼痛，持久和恼人。口疮为可以使进食和交谈不适的口腔中的 表浅溃疡。它们可以在舌，软上腭，面颊或唇内或齿龈基上出现。口 疮不同于感冒疮的方面在于它们出现在口腔的内部软组织上，但并非 接触传染的。相反，感冒疮几乎始终从唇上开始并且通常不会扩散至 口腔的软组织。此外，感冒疮由一种形式的疱瘆病毒导致，使得它们 具有极大的接触传染性。
研究人员一般认为应激或组织损伤可以导致口疮发疹。在某些情 况中，小的损伤，例如口腔内咬伤或食用粗糙的食物可以引起口疮。
其它原因可以包括(i)有缺陷的免疫系统功能；(ii)营养问题， 诸如维生素B-12，锌，叶酸或铁缺乏；(iii)胃肠道疾病；(iv)食 物过敏；或(v)月经周期。
口疮可以在任何年龄段上发生，但通常它们首先出现在IO- 40岁 之间。尽管口疮一般会自我消退，但是它们可以使人极为不适。牙科/ 牙脓肿
感染或腐败可以导致脓肺。脓肿可以具有严重的牙科和医学后果。 例如，牙脓肿导致的严重感染可以导致窦或全身感染。此外，脓肿可 以导致需要拔出一颗或多颗牙齿。拔牙可以因明显的龋齿或因为感染 过重而难以在有坏牙存在下完全治疗而是必需的。
与最终的结果无关，牙脓肿可以是极端疼痛的。不仅是不适感的 疼痛，而且可以干扰适当的营养和水化。减轻与牙脓肿相关的疼痛的 方法和组合物可以对其控制提供明显的有益性。
胃食管反流疾病
胃食管反流疾病或GERD在食管下括约肌(LES)无法适当闭合和胃 内容物渗漏回食道时发生。LES是作为食道与胃之间的阀门起作用的食 道下部的肌肉环。当反流的胃酸接触食道内层时，它在胸或咽喉中产 生烧灼感。这通常显示为胃灼热。反流的流体甚至可以在返回到口腔 这被尝到，即通常称作酸消化不良的感觉。
尽管偶然的胃灼热并不常见并且不一定表示GERD，但是每周发生 两次以上的胃灼热可能是GERD的征兆。除胃灼热和消化不良的不适感 外，GERD还可以导致其它严重的健康问题。例如，随时间的推移，酸 反流回咽喉可以导致口腔，齿龈，舌，咽喉或唇中的口疮，损害或溃 疡。这些损害可以产生明显的疼痛，可以干扰营养和水化并且可以使 人易受感染。
给予本发明的TRPA1抑制剂可以用于治疗因GERD造成的损吝产生 的口腔疼痛。TRPA1抑制剂可以作为治疗方案的组成部分，其中给予
T RP A1抑制剂以便有助于控制口腔损害的不适感，同时将其它活性剂或 治疗干预用于控制GERD。 龈口炎
龈口炎为涉及因病毒感染导致的口腔和齿龈上的溃疡的病症。龈 口炎的特征在于齿龈和粘膜炎症和多发性口腔溃疡。炎症和溃疡因病 毒感染，特别是那些导致常见儿童疾病的病毒感染，诸如疱渗病毒(感 冒疮和急性疱渗性口炎)和疱渗性口炎病毒(手足口病和疱渗性咽峡 炎)所致。这些病毒产生在齿龈组织(牙龈)，面颊内层(颊粘膜)或口腔 中的其它软组织上具有浅灰色或浅黄色基底和浅红色边缘的表浅溃 疡。尽管该疾患可以发生在任何年龄的患者中，但是特别在儿童中常 见。
因这些病毒导致的口腔溃疡可能极为疼痛。这些溃疡通常伴随发 热。大体上，该疾患可以持续几周才能消退。对龈口炎7>认的治疗集 中于减轻因口腔溃疡导致的疼痛。这对可能因其不适感而拒绝食物或 液体的儿童而言特别重要，由此使他们尤其易发生脱水。本发明的化 合物可以用于治疗于这些口腔溃疡相关的疼痛。
鵝口齊
鹅口疮是一般由因口腔粘膜中酵母真菌白色假丝酵母(Candida albicans)导致的真菌感染。严格地讲，鹅口疮仅为婴儿口腔中暂时 性的假丝酵母属(Candida)感染。然而，该术语一般应用指在儿童和 成年人口腔和咽喉中的真菌感染。
假丝酵母属存在于几乎半数群体的口腔中。例如，每位戴有补齿 的人存在假丝酵母属，但不一定患有任何疾病作用。 一般而言，假丝 酵母属不会产生问题，直到在口腔中存在化学改变，使得有利于假丝 酵母属的生长超过了一般栖息于口腔和咽喉中的其它微生物。足以允 许假丝酵母属生长的口腔化学改变可以作为服用抗生素或化疗剂的副 作用发生。患者的整体健康也可以影响口腔化学。HIV感染，糖尿病， 营养不良，老化和免疫缺陷为典型情况，它们可以转换口腔化学以便 足以允许口腔和咽喉中假丝酵母属过度生长。
除了 口腔化学改变之后，补齿不充分适合的人可能持续在其口腔 粘膜中发生破损。这些破损为口腔和唇中的假丝酵母属感染提供了机 会。
鹅口疮在口腔中产生白霜色或黄斑。这些斑点为轻度隆起的。如 果刮取这些斑点，那么它们趋向于出血。鵝口療可以极为不适并且可 能导致口腔和咽喉中的烧灼感。这种不适感可以干扰水化和营养。此 外，这种不适感可以干扰适当的口腔卫生，诸如刷牙和剔牙。
鵝口疮的标准治疗通过给予抗真菌药来进行。可以对口腔直接给 予这些活性剂，例如，吸入的软锭剂形式或在吞咽前在口腔中保持的 口服混悬液剂。实例包括制霉菌素(例如，制霉素口服混悬剂)，两性
霉素(例如，两性霉素B锭剂)或咪康唑(例如，达克宁口服凝胶)。除标 准抗真菌疗法外，还可以给予本发明的化合物以便控制与鹅口掩相关 的疼痛和不适感。 舌炎
舌炎为因炎症导致的舌异常。舌炎在舌的急性或慢性炎症存在时 发生。它导致舌肿胀和颜色改变。在舌表面上的指状突出物(乳头)消 失，使舌表现出平滑。舌炎有许多原因，包括，但不限于如下细菌 感染；病毒感染(包括口单纯疱渗)；损伤或创伤；接触刺激物(例如烟 草，酒精，热食物，香辛料调味品)；过敏反应；维生素或矿物缺乏(例 如，缺铁性贫血，恶性贫血和其它B-维生素缺乏)；或作为其它疾病或 病症的副作用。
舌炎的症状包括肿胀，酸痛和舌压痛。另外，舌通常改变外观， 变平滑和颜色暗红。作为肿胀和不适感的结果，舌炎通常使得咀嚼， 吞咽和说话困难。
治疗舌炎的典型疗法取决于炎症的主要原因。与可以给予的特定 的抗生素，抗炎药或抗病毒药以抗击舌炎的主要原因无关，可以给予 本发明的化合物以便减轻与舌炎相关的疼痛和不适感。减轻与舌炎相 关的疼痛在它干扰适当的营养和水化或在它干扰或阻止了适当的口腔 卫生时尤其是重要的。 皮肢病
口腔溃疡可以因任意许多皮肤病导致。例如，扁平苔癣，天疱疮， 类天疱疮和多形红斑可以导致口腔溃疡。这类口腔溃疡可以产生明显 的疼痛，而这种疼痛可以使用本发明的化合物治疗。
减轻疼痛可以辅助有利于愈合。这对具有发生口腔溃疡的天疱疮 和类天疱疮的患者而言尤其重要。这类患者易于免疫抑制并且由此可 能更易发生来自口腔中的损害的机会感染。
胃肠疾病
口腔溃疡可以因任意许多胃肠疾病导致。对适当的消化，胃酸和 其它消化性酸的控制和流动，运动性和排除产生干扰的疾患可以导致 口腔溃疡和其它损害。在某些情况中，口腔溃疡为酸或部分消化食物 反流入食道的结果。在其它情况中，口腔溃疡因呕吐所致。在其它情 况中，口腔溃疡因维生素缺乏，矿物缺乏或胃肠疾病继发的其它营养 缺乏而发生。在其它情况中，口腔溃疡为特征在于维胃肠疾病的复杂 病原的组成部分。
因胃肠疾病或作为胃肠疾病的组成部分产生的口腔溃疡可能极端 疼痛。它们可以破坏患者适当的营养和水化，该患者的胃肠疾病已经 对膳食产生了多种局限性。因此，减轻与这些口腔溃疡相关的不适感 和疼痛的方法和组合物为具有潜在胃肠疾患的患者提供了重要的有益 性。
可以导致炎症，损害或溃疡的典型胃肠疾患包括，但不限于克罗 恩病，溃疡性结肠炎，肠易激综合征，口炎性腹泻和疮渗样皮炎
(Dermatitis herpetiformis)。可以使用膳食，应激控制和药物控 制这些疾患的主要症状。本发明的TRPA1抑制剂可以用于辅助控制因任 意这些胃肠疾患导致的口腔炎症，损害或溃疡的疼痛和不适感。 类风湿病
几种类风湿病的后果在于口腔溃疡。例如，狼疮，贝切特综合征， Sweet综合征和莱特尔病可以导致口腔溃疡。这类口腔溃疡可以产生可 以使用本发明化合物治疗的明显口腔疼痛。
斯耶格伦综合征
口腔干燥为与斯耶格伦综合征相关的常见症状。口腔干燥因唾液 产生减少所致。唾液是防护和保护口腔和口腔功能的主要体液。尽管
唾液大部分为水，但是它还包含60种以上用于下列重要功能的物质 保护，润滑和清洁口腔粘膜；辅助咀嚼，吞咽和谈话；防止牙龈腐败； 防止口腔，牙齿和咽喉受到细菌，酵母和病毒感染；支持和有利于味觉。
由于唾液的重要功能，所以唾液分泌减少可以产生许多问题。如 果这种情况持续数月或数年，那么患者可能发生口腔并发症，诸如吞 咽困难，严重和进行性龋齿，口腔感染(特别是真菌)或它们的组合。 这些情况中的许多可以单独产生不适感，并且还可以产生口腔损害或溃疡。
可利用几种药物辅助增加具有口腔干燥的患者唾液分泌。毛果芸 香碱(Salagen )和西维美林(Evoxac )减轻了 口腔干燥症状并且增加 了唾液分泌。然而，这些药物不会预防龋齿或治疗与口腔干燥症状或 效应相关的口腔疼痛。本发明的化合物可以用于治疗与口腔干燥相关 的疼痛。
维生素或矿物缺乏
在某些情况中，维生素或矿物缺乏可以导致口腔中的溃疡或其它 溃疡。例如，维生素C缺乏可以导致特征为坏血病的口腔损害。维生素 Bl, B2， B6或B12缺乏也可以导致口腔损害。另外，锌，叶酸，铁，硒 或4丐缺乏可以导致口腔损害。
在某些实施方案中，维生素或矿物缺乏为导致口疮的诱发因素。 然而，维生素或矿物缺乏也可以产生其它类型的口腔溃疡和损害。与 损害的性质无关，本发明的化合物可以用于辅助控制相关疼痛。
过敏反应
过敏反应有时导致口疮和其它口腔损害。因过敏反应导致的口腔 损害在人口腔组织接触致病过敏原时更为可能。然而，过敏原与口腔 组织之间的接触不一定是产生口腔损害所需要的。可以导致口腔损害 的典型过敏原包括食物过敏原，诸如水果和蔬菜(例如，草莓，柠檬，
橙，菠萝，苹果，无花果，蕃茄)；贝类；巧克力；坚果；乳制品(例 如，奶和干酪)；谷物(例如，荞麦，小麦，燕麦，黑麦，大麦，谷物
中发现的谷蛋白)；添加剂(例如，肉桂醛(矫味剂)，苯甲酸(防腐剂)； 牙膏(例如，某些人对在某些牙骨和漱口液中发现的十二烷基硫酸钠敏 感)；非类固醇抗炎药(NSAID;某些人具有导致对作为对该类药物反应 的口疮敏感)。
其它典型疾患和损伤
上述仅为产生或导致炎症，损害，溃疡或其它口腔疼痛来源的疾 病和疾患的典型。在其它实施方案中，口腔疼痛因口腔，颚，唇，齿 龈或牙齿损伤所致。在其它实施方案中，口腔疼痛因口腔手术所致， 例如，癌症手术，拔牙或颚再塑。溃疡导致口腔溃疡和由此的口腔疼 痛的其它疾患包括，但不限于水痘(chickpox)，带状疱渗，传染性 单核细胞增多症，梅毒，肺结核，急性坏死性牙龈炎和口灼伤综合征。 另外，导致免疫系统受损的疾患使患者处于口腔炎症，损害或溃疡等 并发症风险中。HIV感染，AIDS和肝炎均为破坏免疫系统并且溃疡导致 口腔损害或溃疡的疾患。另外，服用免疫抑制剂的个体(例如，器官移 植接受者，骨髓接受者，千细胞接受者，具有自身免疫疾病的患者) 处于发生痛性口腔损害的风险增加。
本发明关注本发明的TRPA1抑制剂在治疗口腔疼痛中的应用-与潜 在原因无关。在某些实施方案中，可以通过口服给予治疗口腔疼痛的 TRPA1抑制剂，例如，作为糊剂，漱口液，凝胶或其它液体制剂。在某 些实施方案中，通过拭子，护口器或其它牙科装置给予糊剂，漱口液, 凝胶或其它液体制剂。在某些实施方案中，将所述的制剂通过局部施 用于口腔，但不摄入。例如，可以使用不吞咽的漱口剂。与制剂和给 药途径无关，本发明关注给予本发明主题的T R P A1抑制剂作为总体治疗 策略的组成部分，该策略还包括适合于导致口腔炎症，损害或溃疡的 特定疾病或疾患的疗法。
TRPA1抑制剂可用于治疗因任意前述损伤，疾病或疾患导致的口腔
疼痛。另外，申请人注意到本发明主题的TRPA1抑制剂还可以用于治疗 上述主要疾病和疾患自身。特别地，TRPA1抑制剂可以用于治疗炎症并 且由此用于治疗具有炎性成分的疾病或疾患，无论这些症状是自身在 口腔中表现还是在身体的其它部分表现，只要它们本身可以用本发明 主题的TRPA1抑制剂治疗。因此，本发明关注和认识到对某些疾患而言， 给予TRPA1抑制剂的治疗作用可以为双重的(i)减轻与疾病或疾患的 一种或多种症状相关的疼痛；和(ii)治疗主要症状或疾病。
疾病和损伤模型
拮抗TRPA1功能的化合物可以用于预防和治疗任意上述损伤，疾 病，病症或疾患。除这些化合物活性的体外测定外，易于在一种或导 致动物模型中测试其功效。作为实例，存在大量众所周知的动物模型。 可以选择一种或多种合适的动物模型(例如，就特定适应征而言适合 的)。
一般可以将疼痛分类为慢性痛和急性痛。这两类疼痛在期限和潜 在机制上不同。慢性痛不仅是持久的，而且一般性对使用目前可利用 的止痛药，非类固醇抗炎药和阿片类物质治疗不会有充分反应。
慢性痛的两个广泛的亚类为神经性疼痛和癌性痛。Wang和 Wang (2003) Advanced Drug Delivery Reviews 55: 949—965。神经 性疼痛意旨因中枢系统(例如，神经，脊髓，CNS， PNS)损害(例如，因 疾病，损伤，老化)导致的疼痛。与癌症相关的疼痛可以因肿瘤浸润， 神经压电，肿瘤分泌的物质或特定的治疗方案(例如，；改疗，化疗剂， 手术)导致。
通常还根据机制将疼痛分类为伤害性的，炎性的或神经性的。伤 害性疼痛为例如温度改变或极端，接触酸，接触化学试剂，接触力或 接触压力后经历的疼痛。痛性刺激的接受将冲动送至背根神经节。反 应一般为反射性反应(例如，射开刺激)和情绪反应的组合。炎症为免 疫系统对损伤或疾病的反应。作为对损伤或疾病的反应，补充免疫系 统的巨噬细胞，肥大细胞和其它细胞。这种细胞浸润与细胞因子和其
它因子(例如，组胺，5-羟色胺，緩激肽，前列腺素，ATP， H+,神经 生长因子，TNFa,内皮缩血管肽，白细胞介素)的释放一起可以导致 发热，肿胀和疼痛。炎症疼痛的目前治疗包括Cox2抑制剂和阿片类物 质。神经性疼痛意旨因神经系统(例如，神经，脊髓，CNS， PNS)损害(例 如，因疾病，损伤，老化)导致的疼痛。神经性疼痛的目前治疗包括三 环抗抑郁药，抗惊厥药，Na+通道阻滞剂，NMDA受体拮抗剂和阿片类物质。
存在大量用于研究疼痛的动物模型。各种模型均使用不同活性剂 或操作以便刺激由损伤，疾病或其它疾患导致的疼痛。 Blackburn-Munro (2004) Trends in Pharmacological Sciences 25: 299-305 (例如，参见表l)。然后可以观察受攻击的动物的行为特征。 易于通过在有与没有测试化合物或操作存在下受攻击动物的行为特征 来测试能减轻动物疼痛的化合物或操作。
用于研究慢性痛的典型行为试验包括自发性疼痛，异常性疼痛和 痛觉过敏试验。文献同上。为了评价自发性疼痛，可以观察姿势，步 态，防伤害性征兆(例如，舔爪，过度修饰，过度探查行为，受损身体 部分保护和自残)。为了测定引起的疼痛，可以在接触热(例如，热损 伤模型)后检验行为反应。
疼痛的典型动物模型包括，但不限于Chung模型，角叉菜胶诱发的 痛觉过敏模型，弗氏完全佐剂诱发的痛觉过敏模型，热损伤模型，福 尔马林模型和Bennett模型。神经性疼痛(无炎症)的Chung模型包括结 扎一条或多条脊神经。Chung等(2004) Methods Mol Med 99: 35-45; Kim和Chung(1992) Pain 50: 355-363。结扎脊神经导致动物的各种 行为改变，包括热痛觉过敏，冷异常性疼痛和进行性疼痛。可以对结
在下观察到的减少了这些结扎诱发的行为改变。
角叉菜胶诱发的痛觉过敏和弗氏完全佐剂(FCA)诱发的痛觉过敏 为炎性疼痛才莫型。Walker等(2003) Journal of Pharmacol Exp Ther 304: 56-62; McGaraughty等(2003) Br J Pharmacol 140: 1381 -1388;
Honore等(2005) J Pharmacol Exp Ther。可以对角叉菜胶或FCA攻击
在下观察到的减少了热痛觉过敏。此外，还可以在这些模型中评价化 合物拮抗TRPAl功能以便减轻冷和/或机械性超敏反应的能力。 一般而 言，认为角叉菜胶诱发的痛觉过敏模型模拟急性炎性疼痛，并且认为 CFA模型模拟慢性痛和慢性炎性疼痛。
Bennett模型使用延长的爪局部缺血反映慢性痛。Xanthos等 (2004) J Pain 5: Sl。这提供了慢性痛的动物模型，包括术后痛，复 杂性区域性疼痛综合征和反射性交感神经营养障碍。延长的局部缺血 诱导动物的行为改变，包括对机械刺激的痛觉过敏，对冷的敏感性， 疼痛行为(例如，摇动，舔和/或喜爪)和痛觉过度。可以对受攻击动物
察到;减少了任意或所有这些行为。可以在用于模拟术后痛的热损伤 或UV-灼伤模型中进行类似的实验。
偏头痛与明显的疼痛和不能完成正常工作相关。存在偏头痛的几 种模型，包括大鼠神经神经源性炎症模型(参见Buzzi等(1990) Br J Pharmacol; 99: 202—206)和Burstein才莫型(参见Strassman等，(1996) Nature 384: 560-564)。
神经性疼痛的其它模型包括基于脊髓损伤的中枢痛模型。慢性痛 通过诱导脊髓损伤，例如通过使重量落在脊髓手术暴露区上(例如落重 法模型)。脊髓损伤还可以通过粉碎或压迫脊髓，通过递送神经毒素， 使用光化学或通过切成对半来诱导。Wang和Wang(2003)。
神经性疼痛的其它模型包括周围神经损伤模型。术语周围神经病 包括各种疾病，疾患和损伤。本领域技术人员容易根据研究中的特定 疾患或疾病选择合适的模型。典型模型包括，但不限于神经瘤模型， Bennett模型,Seltzer模型，Chung模型(在L5或L5/L6上结扎)，坐骨 神经水冻神经松解术模型，下尾部主干切除术模型和坐骨神经炎性神 经炎模型。文献同上。
炎性疼痛的典型模型包括足底内緩激肽注射大鼠模型。简言之，
使用Hargreave仪评价动物的基线热敏感性。然后全身给予TRPA1阻滞 剂。随后将緩激肽注入爪并且使痛觉过敏发生。然后在接下来的几小 时内的多个时间点测定热逃逸潜伏期(Chuang等，2001; Vale等，2004)。 还可以利用与特定疾病相关的神经性疼痛的典型模型。糖尿病和 带状疱渗为通常伴随神经性疼痛的两种疾病。甚至在急性带状疱渗发 作后，某些患者仍然持续患有带状疱渗后神经痛并且经历持续数年的 持续性痛。可以在带状疱渗后神经痛模型(PHN)中研究由带状疱渗导致 的神经性疼痛和/或带状疱療后神经痛。可以在糖尿病小鼠模型以及糖 尿病性神经病的化学诱导的模型中研究糖尿病性神经病。Wang和 Wang (2003)。
如上所述，癌性痛可以具有任意许多原因且存在大量检验涉及例 如化疗剂或肿瘤浸润的癌性痛的动物模型。毒素相关的癌性痛的典型 模型包括长春新碱-诱导的周围神经病模型，泰素-诱导的周围神经病 模型和顺铂-诱导的周围神经病模型。Wang和Wang(2003)。由肺瘤浸润 导致的癌性痛的典型模型为癌症侵入疼痛模型(CIP)。文献同上。
原发性和转移性骨癌与巨痛相关。存在几种骨癌性痛的模型，包 括小鼠股骨癌性痛模型(FBC)，小鼠跟骨癌性痛模型(CBC)和大鼠胫骨 癌模型(TBC)。文献同上。
疼痛的其它模型为福尔马林模型。类似于角叉菜胶和CFA模型，福 尔马林模型包括将刺激物经真皮内或腹膜内注入动物。福尔马林注射 液，即37%的曱醛溶液为最常用的真皮内爪注射的试剂(福尔马林试 验)。将O. 5- 15%福尔马林的溶液(通常约3. 5%)注入前-或后爪背侧或 足面，在注射后的约60分钟产生了增加和减少强度的双相痛性反应。 典型反应包括举，舔，啮咬或摇动爪。这些反应被视为伤害性的。持 续3-5分钟的反应初期(也称作早期)可能是因伤害感受器的直接化学 刺激所致。随后是10-15分钟，在此过程中，动物几乎未展示出暗示 伤害感受的行为。该反应的第二期(也称作晚期)在福尔马林注射后约 15 - 2O分钟开始并且持续20-4O分钟，最初为伤害感受行为的次数和 频率升高，达到峰值，然后减少。这些伤害性感受行为的强度依赖于
所用福尔马林的浓度。第二期包括致敏期，在此过程中，炎症现象发 生。对福尔马林注射的反应性的两期使得福尔马林模型为研究伤害性 感受和急性炎性痛的合适的模型。在某些方面中，它还可以成为神经 性疼痛的模型。
除上述慢性痛的任意模型外，还可以在一种或多种急性痛模型中
测试拮抗TRPA1功能的化合物。Valenzano等(2005) Neuropharmacology 48: 658-672。与在慢性痛，急性痛或它们两者 的模型中测试化合物无关， 一般用例如小鼠，大鼠或豚鼠进行这些研 究(不过并非排它的)。另外，可以在提供体外疼痛测定的各种细胞系 中测试化合物。Wang和Wang(2003)。
许多寻求治疗疼痛的个体患有内脏痛。内脏痛的动物模型包括炎 性子宫疼痛的大鼠模型(Wesselmann等，(1997) Pain 73: 309-317)， 将芥子油注入胃肠道以便模拟肠易激综合征(Kimball等，(2005) Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol, 288 (6): G1266-73)，将芥子 油注入膀胱以便模拟膀胱活动过度或膀胱炎(Riazimand(2004) , BJU. 94: 158-163)。可以通过扭体，胃肠炎症或膀胱兴奋性下降评价TRPAl 化合物的有效性。
上述动物模型广泛地用于疼痛研究。下面提供了描述这些模型在 研究疼痛中的应用的额外典型参考热损伤模型(Jones和Sorkin， 1998 ， Brain Res 810: 93-99 ; Nozaki-Taguchi和Yaksh， 1998 ， Neuroscience Lett 254: 25_ 28; Jun和Yaksh, 1998， Anesth Analg 86: 348-354)，福尔马林模型(Yaksh等，2001， J Appl Physiol 90: 2386-2402),角叉菜胶-模型(Hargreaves等，1988， Pain 32: 77-88) 和CFA模型(Nagakura等，2003, J Pharmacol Exp Ther 306: 490-497)。
炎症通常为疼痛的重要促成因素。照此，有用的是鉴定作为抗炎 药起作用的化合物。减少神经活动的许多化合物也预防神经源性症。 为了直接测定炎症，可以使用器官充满度测量器评价大鼠爪体积。在 取基线测量值后，可以将角叉菜胶注入爪并且可以在用载体或药物治 疗的动物中在数小时内监测体积。减轻爪肿胀的药物被视为抗炎性的。
为了测试TRPAl拮抗剂在治疗咳嗽中的功效，可以容易地进行使用 有意识咳嗽豚鼠模型的实验。Tanaka和Maruyama(2003) Journal Pharmacol Sci 93: 465-470; McLeod等(2001) Br J Pharmacol 132: 1175-1178。简言之，豚鼠用作有用的咳嗽动物模型，因为不同于其它 啮齿动物如小鼠和大鼠，豚鼠确实咳嗽。此外，豚鼠咳嗽表现出在咳 嗽动物的姿态，行为和表现方面模拟人咳嗽。
为了诱导咳嗽，使有意识的豚鼠接触诱导剂，诸如柠檬酸或辣椒 辣素。通过对咳嗽次数进行计数测定动物反应。可以通过给予活性剂 并且评价该活性剂在减少接触柠檬酸，辣椒辣素或其它类似的咳嗽-诱导剂引起的咳嗽次数的能力来测定咳嗽抑制剂，例如抑制TRPA1的化 合物的有效性。按照这种方式，易于评价和鉴定用于治疗咳嗽的TRPAl 抑制剂。
其它咳嗽模型包括无意识的豚鼠模型。Rouget等(2004) Br J Pharmacol 141: 1077-1083。任一上述模型可以适用于能够咳嗽的其 它动物。能够咳嗽的其它典型动物包括猫和狗。
存在大量啮齿动物失禁模型。它们包括通过神经损害，尿道侵害 和炎症诱导的失禁模型。尿道侵害模型包括大鼠膀胱流出道梗阻模型 (Pandita ， RK和 Andersson KE. Effects of intravesical administration of the K+ channel opener, Z.D6169, in conscious rats with and without bladder outflow obstruction. J Urol 162: 943-948， 1999)。炎症模型包括将芥子油注入膀胱。
为了测试TRPA1抑制剂化合物在治疗失禁中的有效性，可以在手术 实施部分膀胱流出道梗阻(B00)后对大鼠给予不同浓度的化合物(例 如，低，中和高浓度)。可以将不同剂量的TRPAl抑制性化合物的功效 与仅给予赋形剂的对照组(假拟对照组)进行比较。可以进一步将功效 与给予阳性对照，诸如阿托品的大鼠进行比较。预计阿托品减少BOO 模型中部分膀胱流出道梗阻后的膀胱活动过度。注意在B00模型中测试 化合物时，可以对膀胱或尿道直接给予化合物(例如，通过导管)或全 身(例如，口服，静脉内，腹膜内等)给予化合物。
如上所述，TRPA1抑制剂可以用于治疗与胰腺炎相关的疼痛症状。 可以在一种或多种动物模型中测试TRPA1抑制剂在胰腺炎疼痛控制中 的功效。可以在一般的疼痛动物模型中测试抑制剂，例如炎性疼痛或 内脏痛模型。可选择地或另外，可以在特别模拟伴随疼痛的胰腺炎或 其它胰腺损伤的动物模型中测试TRPA1抑制剂。
近期描述了胰腺疼痛的几种大鼠模型(Lu， 2003， Anesthesiology 98 (3): 734-740; Winston等，2003, Journal of Pain 4 (6): 329-337)。 Lu等通过在大鼠中全身递送dibutylin dichloride诱发胰腺炎。大鼠 在7天期限过程中表现出腹部von Frey丝刺激后退缩情况增加和热刺 激后退缩潜伏期下降。在这些动物诱导的疼痛状态的特征还在于物质P 在脊髓中的水平增加(Lu等，2003)。为了测试TRPA1抑制剂在该模型中 的功效，可以在递送dibutylin dichloride后或与之同时给予TRPA1 抑制剂。可以对对照组动物给予载体或公知的疼痛緩解剂。可以测定 疼痛指标。可以通过比较在接受TRPA1抑制剂的动物中观察到的疼痛指 标与不接受TRPA1抑制剂的动物的疼痛指标来评价TRPA1抑制剂的功 效。另外，可以将TRPA1抑制剂的功效与公知疼痛药物的功效比较。
还通过用全身L-精氨酸给药诱发胰腺炎证实了 von Frey丝测试作 为测定伤害行为的方式的功效(Winston等，2003)。可以类似地通过在 全身L-精氨酸给药诱发胰腺炎后测试TRPA1抑制剂的功效。
Lu等还描述了使用在清醒和自由活动的大鼠中通过内在导管对胰 腺进行急性伤害性刺激的胰腺疼痛的直接行为测定。这些测定包括套 笼交配，铜养和后肢伸展作为对胰腺内緩激肽输注的反应。鞘内给予 D-APV (NMDA受体拮抗剂)或单独的吗啡部分减轻了这种模型中的内脏 痛行为。两者的联合用药将疼痛行为降至基线。可以类似地在该系统 中测试TRP A1抑制剂的功效。
任意上述动物模型可以用于评价TRPA 1抑制剂在治疗与胰腺炎相 关的疼痛中的功效。将该功效与无治疗的组或安慰剂对照组比较。另 外或可选择地，可以与 一种或多种公知疼痛緩解药物比较评价功效。
疼痛治疗的优化
本发明的TRPA1抑制剂可以用于治疗各种损伤，疾病，疾患和病症。 TRPA1抑制剂的 一个重要治疗应用在于治疗疼痛。正如疼痛为明显且有 时虚弱性症状的损伤，疾患和疾病的广泛实例例证的，用于治疗疼痛 的改进方法和组合物为大量患者提供了重大的有益性。这类方法和组 合物有可能改善患有不同范围损伤，疾病和疾患的患者的护理质量和 生活质量。本申请关注抑制TRPA1的化合物可以用于治疗任意上述损 伤，疾患或疾病。
治疗疼痛的重要问题在于如何控制疼痛，同时减轻使用许多止痛 药的副作用。例如，尽管许多阿片类物质和其它麻醉品有效地减轻疼 痛，但是患者通常在服用这些药物的同时不能驾车，工作或精力集中。 因此，尽管阿片类物质，诸如吗啡或dilaudin适合于短期应用或在住 院期间应用，但是它们对长期应用而言不是最佳的。另外，阿片类物 质和其它麻醉品会形成习惯并且患者一般发生对这些药物的耐药性。 阿片类物质和其它麻醉品的这些特征使得它们对疼痛控制而言尚未达 到最佳。
本发明提供了体外和体内应用的TRP A1抑制剂。本发明还提供了包 含抑制TRP A1活性的特定类型化合物的组合物和药物组合物。在某些实 施方案中，本发明主题的TRPA1抑制剂为选择性的。换句话说，在某些 实施方案中，该化合物对TRPA1活性的抑制优选超过了对其它离子通道 活性的抑制。在某些实施方案中，该化合物对TRPA1活性的抑制优选超 过了对TRPV1， TRPV2， TRPV3， TRPV4和/或TRPM8活性的抑制。在某些 其它实施方案中，选择该化合物是因为它与涉及疼痛的一种或多种其 它TRP通道发生交叉反应。例如，在某些实施方案中，该化合物抑制 TRPA1活性并且还抑制TRPV1， TRPV2， TRPV3, TRPV4和TRPM8中的一种 或多种的活性。
联合疗法
本发明的另一个方面提供了联合疗法，其中将一种或多种其它治
疗剂与TRPA1调节剂一起给予。这类联合疗法可以通过同时，依次或单 独给予治疗中的各成分来进行。
在某些实施方案中，将本发明的化合物与止痛药联合给予。合适 的止痛药包括，但不限于阿片类物质，糖皮质类固醇，非类固醇抗炎 药，萘基烷酮类，昔康类，对-氨基苯酚衍生物，丙酸类，丙酸衍生物， 水杨酸盐，灭酸酯类，灭酸酯衍生物，吡唑类和吡唑衍生物。这类止 痛化合物的实例包括，但不限于可待因，氢可酮，氢吗啡酮，左啡诺 (levorpharnol )，吗啡，羟考酮，羟吗啡酮，布托啡诺，地佐辛， 纳布啡，喷他佐辛，依托度酸，吲咮美辛，舒林酸，托美丁，萘丁美 酮，吡罗昔康，对乙酰氨基酚，非诺洛芬，氟比洛芬，布洛芬，酮洛 芬，萘普生，双氯芬酸，奥沙普秦，阿司匹林，二氟尼柳，曱氯芬那 酸，曱芬那酸，泼尼松龙和地塞米松。优选的止痛药为非类固醇抗炎 药和阿片类物质(优选吗啡)。
在某些实施方案中，将本发明的化合物与非类固醇抗炎药共同给 予。合适的非类固醇抗炎化合物包括，但不限于吡罗昔康，双氯芬酸， 依托度酸，巧l咮美辛，酮咯酸(ketoralac),奥沙普秦，托美丁，萘 普生，氟比洛芬，非诺洛芬，酮洛芬，布洛芬，曱灭酸，舒林酸，阿 扎丙宗，保泰松，阿司匹林，塞来考昔和罗非昔布。
在某些实施方案中，将本发明的化合物与抗病毒药共同给予。合 适的抗病毒药包括，但不限于金刚烷胺，阿昔洛韦，西多福韦，地昔 洛韦，脱氧阿昔洛韦，泛昔洛韦，膦甲酸(foscamet)，更昔洛韦， 喷昔洛韦，叠氮尿苷，anasmycin，金刚烷胺，溴乙烯基脱氧尿苷 (bromovinyldeoxusidine ) ， 氯乙烯基脱氧尿香 (chlorovinyldeoxusidine)， 阿糖胞脊(cytarbine)，去羟肌苷， 脱氧野尻霉素，双脱氧胞二磷胆碱，双脱氧肌苷，双脱氧核苷，依度 尿苷(edoxuidine)，恩韦將，非西他滨，膦曱酸，非阿尿苷，氟胸 苷，氟尿苷，金丝桃素，干扰素，白细胞介素，羟乙基磺酸盐，奈韦 拉平，喷他脒，利巴韦林，金刚乙胺，司他夫定(stavirdine )， sargramostin，舒拉明，天花粉蛋白，三溴胸苷，三氯胸苷，阿糖腺
苷，齐多夫定(zidoviridine )，扎昔他宾3-叠氮基-3-脱氧胸苷，2' ， 3' -双脱氧腺苷(ddA)， 2'， 3'-双脱氧鸟苷(ddG) , 2、3'-双脱氧胞苷 (ddC)， 2'，3'-双脱氧胸苷(ddT)， 2'3'-双脱氧-双脱氧胸苷(d4T)， 2'-脱氧-3'-硫杂-胞嘧啶(3TG或lamivudime) ， 2' ， 3'-双脱氧-2'-氟 腺苷，2'， 3'-双脱氧-2'-氟肌苷，2'， 3'-双脱氧-2'-氟胸苷，2'，3'-双脱氧-2'-氟胞嘧啶，2、 3'-双脱氧-2', 3'-双脱氢-2'-氟胸苷 (Fd4T)， 2'3'-双脱氧-2'-p-氟腺苷(F-ddA)， 2。'-双脱氧-2'-p-氟 -肌苷(F-ddl)和2'， 3'-双脱氧-2'-l3-氟胞嘧啶(F-ddC)，磷酸一甲酸 三钠，三氟胸苷，3'叠氮基-3'胸苷(AZT)，双脱氧肌苷(ddl)和碘苷。 在某些实施方案中，将本发明的化合物与抗菌药共同给予。合适 的抗菌药包括，但不限于化合物盐酸金刚烷胺(amanfadine hydrochloride) ， ^L酸金冈寸坑胺(amanfadine sulfate),阿米卡 星，硫酸阿米卡星，氨基糖甙类(amoglycosides)，阿莫西林，氨千 西林，amsamycins，杆菌肽，p-内酰胺类，杀念珠菌素，巻曲霉素， 羧千西林，头孢氨节，头孢噻啶，头孢漆吩，头孢唑林，头孢匹林， 头孢拉定，头孢来星，chilomphenicols，氯己定，葡糖酸氯己定 (chloshexidine gluconate ),盐酸氯己定，氯鬼星，chlorquiraldol, 金霉素，盐酸金霉素，环丙沙星，多肽菌素，克林霉素，盐酸克林霉 素，克霉唑，氯唑西林，地美环素，diclosxacillin， 二多典会啉，多 西环素，乙胺丁醇，盐酸乙胺丁醇，红霉素，依托红霉素，硬脂酸红 霉素(erhmycin stearate)，法尼醇，氟氯西林，庆大霉素，疏酸庆 大霉素，短杆菌肽，giseofulvin，卣普罗近，haloquinol，六氯酚， iminocylcline，氯碘羟喹，卡那霉素，硫酸卡那霉素，林可霉素， lineomycin， lineomycin hydrochloride, 大环内酉旨类，曱氯环素, 美他环素，盐酸美他环素，methenine，马尿酸乌洛托品，扁桃酸乌洛 托品，曱氧西林，metonidazole，咪康唑，盐酸咪康峻，米诺环素， 盐酸米诺环素，莫匹罗星，萘夫西林，新霉素，硫酸新霉素，奈替米 星，硫酸奈替米星，呋喃西林，诺氟沙星，制霉菌素，制霉菌素，竹 桃霉素，orcephalosporins，苯峻西林，oxyteacline，盐酸土霉素，
对氯间二甲酚，巴龙霉素，硫酸巴龙霉素，青霉素类，青霉素G,青霉 素V，喷他脒，盐酸喷他脒，非奈西林，多黏菌素类，喹诺酮类，硫酸 链霉素，四环素，妥布霉素，托萘酯，三氯生，trifampin,利福霉素， 罗利环素，大观霉素，螺旋霉素，struptomycin,磺胺，四环素类， 四环素，妥布霉素，石克酸妥布霉素，triclocarbon，三氯生，甲氧苄 啶-磺胺曱喁唑，泰洛星，万古霉素和yrothricin。
在某些实施方案中，将本发明的化合物与咳嗽抑制剂，减充血剂 或祛痰药共同给予。
与本发明主题TRPAl抑制剂共同给予的维生素a酸类(例如，其中 TRPAl抑制剂可以用于减轻维甲酸类的疼痛和/或炎症效应)的实例包 括，但不限于化合物，诸如维甲酸(顺式和反式)，视黄醇，阿达帕 林，维生素A和他扎罗汀。维生素a酸类用于治疗痤疮，银屑病，酒渣 鼻，皱紋和皮肤癌和癌前体，诸如黑素瘤和光化性角化病。
类似地，可以与本发明主题TRPA1抑制剂联用的角质层分离剂包括 过氧化苯甲酰，a羟基酸，果酸，乙醇酸，水杨酸，壬二酸，三氯乙 酸，乳酸和吡罗克酮。
本发明主题的TRPA1抑制剂还可以与脱毛药(毛发脱失) 一起给予。
本发明主题的TRPA1抑制剂可以与抗痤疮药，抗-湿渗药和抗牛皮 痺药(anti-psoratic agents) —起〗吏用。特别用于治疗痤齊的化合 物包括壬二酸(具有抗痤疮特性的脂族二元酸)，地蒽酚(具有抗真菌和 抗牛皮癣特性的二酚类化合物)和马索罗酚(去甲二氢愈创木酸，具有 抗氧化特性的四酚类化合物，还用于治疗光化性角化病)及其类似物 (诸如奥斯贝木酚素6，氧代奥斯贝木酚素6， 4'-0-甲基-7，7'-二氧代 奥斯贝木酚素6，肉豆蔻木酚素，去甲基二氢愈创木酸，3, 3'，4-三幾 基-4'-甲氧基木酚素，Saururenin， 4-羟基-3， 3'， 4'-三甲氧基木酚素 和异安五脂素)。抗-湿渗药包括吡美莫司和他克莫司。适用于本发明 的抗牛皮瘅活性剂包括维生素a酸类(包括维甲酸的异构体和衍生物以 及其它结合维甲酸受体的其它化合物，诸如维曱酸，阿维a， 13-顺式-维甲酸(异维a酸)，9-顺式-维甲酸，生育酚-维曱酸酯(维曱酸的生育
酚酯(反式-或顺式-))，阿维a酯，莫维A胺，1-(13-顺式-视黄酰氧 基)-2-丙酮，1-(13-顺式-视黄酰氧基)-3-癸酰氧基-2-丙酮，1,3-双 -(13-顺式-视黄酰氧基)-2-丙酮，2- (13-顺式-视黄酰氧基)-乙酰苯， 13-顺式-视黄酰氧基曱基-2， 2-二曱丙酸酯，2-(13-顺式-视黄酰氧 基)-n-甲基-乙酰胺，1- (13-顺式-视黄酰氧基)-3-羟基-2-丙酮， 1 - ( 13-顺式-视黄酰氧基)-2， 3-二油酰基丙酮，13-顺式-视黄酸琥珀酰 亚胺酯，阿达帕林和他扎罗汀)，水杨酸(一铵盐)，地蒽酚，6-阿扎尿 苷，维生素D衍生物(包括，但不限于罗盖全(Roche Laboratories)， EB 1089 (24a，26a，27a-三高-22，24-二烯—la，25-(OH)广D3) , KH 1060 (20-表-22-氧杂-24a， 26a, 27a-三高-la， 25-(OH)2-D3) ， MC 1288， GS 1558， CB 1093， 1， 25-(0H) 2-16-烯-D3， 1， 25-(0H) 2-16-烯-23-炔 -D3和25-(OH) 2-16-烯-23-炔-D3 ，22-氧杂骨化三醇； la-(OH)D5 (UniversityofIllinois) ， ZK161422 和 ZK 157202 (Institute of Medical Chemistry—Schering AG),阿法骨化 醇，骨化二醇，卡泊三醇(卡泊三烯)，马沙骨化三醇，胆骨化醇，度 骨化醇，麦角沉钙醇，.氟骨三醇，来沙骨化醇，马沙骨化醇，帕立骨 化醇，司骨化醇，西奥骨化醇，他卡西醇，卡泊三烯，骨化三醇和披 露在美国专利5， 994, 332中的其它类似物)，焦没食子酚和他卡西醇。
本发明主题的TRPA1抑制剂还可以与维生素及其衍生物一起给药， 包括维生素A，抗坏血酸(维生素C)， ot-生育酚(维生素E)， 7-脱氢胆 甾醇(维生素D)，维生素K， a-硫辛酸，脂溶性抗氧化剂等。
本发明主题的TRPA1抑制剂还可以与皮肤防护剂，诸如尿嚢素和七 叶苷联用。
在某些实施方案中，可以共同给予本发明的两种或多种化合物。 当共同给予本发明的两种或多种化合物时，两种或多种化合物可以具 有类似的选择特性和功能活性，或两种或多种化合物可以具有不同的 选择特性和功能活性。作为实例，两种或多种化合物在拮抗TRPA1功能
方面的选择性超过对TRPV1， TRPV5和TRPV6约10， 100或1000倍(例如， 两种或多种化合物具有类似的选择特性)并且可以以类似的IC50进一
步抑制TRPA1功能(例如，类似的功能活性)。可选择地，两种或多种化 合物之一可以选择性地抑制TRPA1，而两种或多种化合物中的另一种抑 制TRPA1和TRPV1 (例如，两种或多种化合物具有不同的选择特性)。关 注给予本发明具有类似或不同特性的两种或多种化合物的组合给药。
在某些实施方案中，可以将本发明的化合物与一种或多种拮抗不 同通道功能的其它化合物共同给予。作为实例，可以将本发明的化合 物与一种或多种拮抗TRPV1， TRPM8和/或TRPV3的化合物共同给予。拮 抗TRPV1， TPRM8或TRPV3的化合物可对TRPV1， TRPM8或TRPV3具有选择 性(例如抑制TRPV1或TRPV3比抑制TRPA1强10， IOO或IOOO倍以上)。可 选择地，拮抗TRPV 1或TRPV3的化合物可以与其它TRP通道发生交叉反 应。
在某些其它实施方案中，可以将本发明的化合物与一种或多种适 合于所治疗特定损伤，疾病，疾患或病症的额外的活性剂或治疗方案 共同给予。
药物组合物
尽管可以单独给予本发明的化合物，但是优选作为药物制剂(组合 物)的形式给予该化合物。可以为任何用于人或兽药应用的便利给药方 式配制本发明的化合物。在某些实施方案中，包括在药物制剂中的化 合物可以为活性成分自身或可以为例如能够在生理环境中转化成活性 化合物的前体药物。
与选择的给药途径无关，通过诸如如下所述的或本领域技术人员 公知的其它常规方法将可以以合适的水合物形式使用的本发明化合物 和/或本发明的药物组合物配制成药学上可接受的剂型。
因此，本发明的另一个方面提供了药学上可接受的组合物，其包 含与上述一种或多种药学上可接受的载体(添加剂)和/或稀释剂一起 配制的治疗有效量的一种或多种化合物。如下文详细描述的，可以专 门将本发明的药物组合物配制成固体或液体给药剂型，包括适合于如 下给药的那些剂型(1) 口服给药，例如，兽用顿服药(水或非水溶液
或混悬液)，片剂，大丸剂，粉末，颗粒，施用于舌的糊剂；(2)非肠 道给药，例如，通过皮下，肌内或静脉内注射，例如，为无菌溶液或 混悬液；(3)局部施用，例如，为施用于皮肤的霜剂，软青剂或喷雾 剂；(4)通过阴道内或通过直肠内，例如，为阴道环，霜剂或泡沫； 或(5)用于吸入。然而，在某些实施方案中，可以将本发明主题的化 合物简单溶于或悬浮于无菌水中。在某些实施方案中，药物制剂为无
热原的，即不会升高患者体温。
本文所用的术语"治疗有效量"意旨有效产生一定期望的治疗作用 的化合物，物质或包含本发明化合物的组合物的用量，该用量通过在 至少动物细胞亚群中抑制TRPA1功能并由此阻断在治疗细胞中起作用 的生物学后果而有效地产生某种期望的治疗效果，具有可应用于任何 医疗的合理的有益性/风险度之比。
本文所用的术语"全身给药"，"通过全身给药"，"外周给药"和" 通过外周给药"意旨以非直接进入中枢神经系统的方式给予化合物，药 物或其它物质，使得它进入患者系统且由此进行代谢和其它类似过程， 例如，皮下给药。
术语"药学上可接受的"在本文中使用时意旨那些在合理的医学判 断范围内适用于接触人和动物组织，但没有过度的毒性，刺激性，过 敏反应或其它问题或并发症的那些化合物，物质，组合物和/或剂型， 它们与合理的有益性/风险度匹配。
本文所用的术语"药学上可接受的载体"意旨药学上可接受的物 质，组合物或载体，诸如液体或固体填充剂，稀释剂，赋形剂，溶剂 或包嚢材料，它们涉及将本发明主题的拮抗剂从身体的一个器官或部 分携带或转运至身体的另一个器官或部分。每种载体必需是"可接受的 "，其含义为与制剂中的其它组分相容并且对患者无害。可以用作药学 上可接受的载体的物质的某些实例包括(1)糖类，诸如乳糖，葡萄 糖和蔗糖；(2)淀粉，诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其 衍生物，诸如羧甲基纤维素钠，乙基纤维素和乙酸纤维素；(4)西黄 蓍胶粉；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石粉；(8)赋形剂，诸如可可
脂和栓剂蜡；(9)油，诸如花生油，棉子油，红花油，芝麻油，橄榄
油，玉米油和大豆油；(10) 二醇类，诸如丙二醇；(11)多元醇类， 诸如甘油，山梨醇，甘露糖醇和聚乙二醇；(12)酯类，诸如油酸乙酯 和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)緩冲剂，诸如氢氧化镁和氢氧化铝； (15)藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格液；(19)乙 醇；(20)磷酸盐緩沖溶液；和(21)其它药物制剂中使用的无毒性相 容性物质。
如上所述，本发明化合物的某些实施方案可以包含碱性官能基， 诸如氨基或烷基氨基，且由此能够与药学上可接受的酸形成药学上可 接受的盐。在这方面术语"药学上可接受的盐"意旨本发明化合物的相 对无毒性的无机和有机酸加成盐。可以在本发明化合物最终的分离和 纯化过程中原位制备，或通过单独地使本发明纯化的化合物以其游离 碱形式与合适的有机或无机酸反应并且分离由此形成的盐来制备。有 代表性的盐包括氩溴酸盐，盐酸盐，疏酸盐，疏酸氢盐，磷酸盐，硝 酸盐，乙酸盐，戊酸盐，油酸盐，棕榈酸盐，硬脂酸盐，月桂酸盐， 苯甲酸盐，乳酸盐，磷酸盐，甲苯磺酸盐，柠檬酸盐，马来酸盐，富 马酸盐，琥珀酸盐，酒石酸盐，萘甲酸盐，曱磺酸盐，葡戾酸盐，乳 糖醛酸盐和月桂基磺酸盐等(例如，参见Berge等(1977) "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci. 66:1-19)。
本发明主题化合物的药学上可接受的盐包括这些化合物的常规无 毒性盐或季铵盐，例如来自无毒性的有机或无机酸。例如，这类常规 的无毒性盐包括那些来源于无机酸，诸如盐酸，氢溴酸盐，硫酸，氨 基磺酸，磷酸，硝酸等的盐；和由有机酸制备的盐，所述的有机酸诸 如乙酸，丙酸，琥珀酸，乙醇酸，硬脂酸，乳酸，苹果酸，酒石酸， 柠檬酸，抗坏血酸，棕榈酸，马来酸，羟基马来酸，苯乙酸，谷氨酸， 苯曱酸，水杨酸，磺胺酸，2-乙酰氧基苯甲酸，富马酸，甲苯磺酸， 甲磺酸，乙二磺酸，草酸，异硫羰酸等.
在其它情况中，本发明的化合物可以包含一个或多个酸性官能基， 且由此能够与药学上可接受的碱形成药学上可接受的盐。术语"药学上
可接受的盐"在这些情况中意旨本发明的相对无毒性的无机和有机碱 加成盐。同样可以在本发明化合物最终的分离和纯化过程中原位制备， 或单独地通过使纯化的化合物以其游离酸形式与合适的碱，诸如药学 上可接受的金属阳离子的氢氧化物，碳酸盐或碳酸氢盐，与氨或与药 学上可接受的有机的伯，仲或叔胺反应并且分离由此形成的盐来制备。 有代表性的碱金属或碱土金属盐包括锂，钠，钾，钙，镁和铝盐等。 用于形成碱加成盐的有代表性的有机胺类包括乙胺，二乙胺，乙二胺，
乙醇胺，二乙醇胺，哌噪等(例如，参见Berge等，上文)。
湿润剂，乳化剂和润滑剂，诸如十二烷基硫酸钠和硬脂酸镁以及 着色剂，释放剂，包衣剂，甜味剂，矫味剂和香味剂，防腐剂和抗氧 化剂也可以存在于组合物中。
药学上可接受的抗氧化剂的实例包括(1)水溶性抗氧化剂，诸如 抗坏血酸，盐酸半胱氨酸，硫酸氢钠，焦亚硫酸钠，亚硫酸钠等；(2) 油溶性抗氧化剂，诸如棕榈酸抗坏血酸酯，丁羟茴醚(BHA)， 丁羟曱苯 (BHT)，卵磷脂，掊酸丙酯，a生育酚等；和(3)金属螯合剂，诸如柠 檬酸，乙二胺四乙酸(EDTA),山梨醇，酒石酸，磷酸等。
本发明的制剂包括那些适合于口服，鼻部，局部(包括口含和舌 下)，直肠，阴道和/或非肠道给药的制剂。可以便利地将制剂制成单 位剂型并且可以通过制药领域众所周知的任意方法制备。可以与载体 物质合并产生单一剂型的活性组分的量根据所治疗宿主，具体给药方 式的不同而改变。可以与载体物质合并而产生单一剂型的活性组分的 量一般为该化合物产生治疗作用的量。 一般而言，在100%中，该量在 约1%-约99%分活性组分，优选约5%-约70%，最优选约10%-约30%。
制备这些制剂或组合物的方法包括将本发明的化合物与载体和任 选的一种或多种辅助组分混合的步骤。 一般而言，通过均勻和紧密混 合本发明化合物与液体载体或固体细粉载体或它们两者且然后如果必 要使产物成形来制备制剂。
适合于口服给药的本发明制剂可以为胶嚢，扁嚢剂，丸剂，片剂， 锭剂(使用矫味基质，通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)，粉末，颗粒，
或为在含水或非水液体中的溶液或混悬液，或为水包油型或油包氷型 液体乳剂，或为酏剂或糖浆剂，或为软锭剂(使用惰性基质，诸如明胶 和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶)和/或为漱口剂等，它们各自包含预定量 的本发明化合物作为活性组分。还可以将本发明的化合物作为大丸剂， 药糖剂或糊剂给药。
在本发明用于口服给药的固体剂型(胶嚢，片剂，丸剂，锭剂，粉 末，颗粒等)中，将活性组分与一种或多种药学上可接受的载体混合，
所述载体诸如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或任意如下成分(l)填充剂或 增容剂，诸如淀粉，乳糖，蔗糖，葡萄糖，甘露糖醇和/或硅酸；(2)粘 合剂，诸如，例如，羧曱基纤维素，藻酸盐，明胶，聚乙烯吡咯烷酮， 蔗糖和/或阿拉伯胶；(3)保湿剂，诸如甘油；(4)崩解剂，诸如琼 脂，碳酸钩，马铃薯或木薯淀粉，藻酸，某些硅酸盐和碳酸钠；(5)溶 解阻滞剂，诸如石蜡；(6)吸收促进剂，诸如季铵化合物；(7)湿润 剂，诸如，例如鯨蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(8)吸收剂，诸如高岭土 和皂粘土； (9)润滑剂，诸如滑石粉，硬脂酸钙，硬脂酸镁，固体聚 乙二醇，十二烷基硫酸钠及其混合物；和(IO)着色剂。就胶嚢，片剂 和丸剂而言，药物组合物还可以包含緩沖剂。相似类型的固体组合物 也可以用作软胶嚢和硬胶嚢中的填充剂，其中使用诸如乳糖(lactose) 或乳糖(milk sugars)以及高分子量聚乙二醇等作为赋形剂。
可以通过制备片剂，任选地使用 一种或多种辅助组分压制或模制。 可以使用粘合剂(例如，明胶或羟丙基曱基纤维素)，润滑剂，惰性稀 释剂，防腐剂，崩解剂(例如，羟基乙酸淀粉钠或交联羧曱基纤维素钠)， 表面活性剂或分散剂制备压制片。可以通过在合适的机器中模制用惰 性液体稀释剂湿润的粉状化合物混合物制备模制片。
可以任选给本发明的药物组合物的片剂和其它固体剂型，诸如锭 剂，胶嚢，丸剂和颗粒刻痕或制备为具有包衣和外壳，诸如肠溶衣和 其它药物制剂领域众所周知的包衣。还可以使用提供期望的释放特性 的例如不同比例的羟丙基曱基纤维素，其它聚合物基质，脂质体和/ 或微球将它们配制成其中的活性组分緩释或控释。例如，通过经保留
细菌的滤器过滤或通过以无菌固体组合物形式掺入灭菌剂给它们灭 菌，其中所述的固体组合物可以在使用前即刻溶于无菌水或某些其它 无菌可注射介质。这些组合物还可以任选包含遮光剂并且可以为这类 组合物，它们仅或优选在胃肠道的某些部分中任选以延迟方式释放活 性组分。可以使用的包埋組合物的实例包括聚合物物质和蜡。如果合
适，还可以使用上述赋形剂中的一种或多种使活性组分^:嚢化。
用于本发明化合物口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳 剂，微乳，溶液，混悬液，糖浆剂和酏剂。除活性组分外，液体剂型 可以包含本领域中常用的惰性稀释剂，诸如，例如，水或其它溶剂， 增溶剂和乳化剂，诸如乙醇，异丙醇，碳酸乙酯，乙酸乙酯，苄醇， 苯曱酸千酯，丙二醇，1,3-丁二醇，油(特别是棉子油，花生油，玉米 油，胚油，橄榄油，荒麻油和芝麻油)，甘油，四氢呋喃醇，聚乙二醇 和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯类、及其混合物。
除惰性稀释剂外，口服组合物还可以包括佐剂，诸如湿润剂，乳
化剂和悬浮剂，甜味剂，矫味剂，着色剂，香味剂和防腐剂。
除活性化合物外，混悬液还可以包含悬浮剂，例如，乙氧基化异 十八烷醇，聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨糖醇酯类，微晶纤维素，偏氢 氧化铝，皂粘土，琼脂和黄蓍胶及其混合物。
公知固醇类，诸如胆固醇与环糊精形成复合物。因此，在优选的 实施方案中，如果抑制剂为甾类生物碱，那么可以使用环糊精配制它， 诸如a-， P-和y-环糊精，二曱基-p环糊精和2-羟丙基-p-环糊精。
可以将本发明的直肠，阴道或尿道给药的药物组合物制剂制成栓 剂，可以通过将本发明的 一种或多种化合物与 一种或多种合适的无刺 激性赋形剂或载体混合来制备所述栓剂，所述的无刺激性赋形剂或载 体例如为可可脂，聚乙二醇，栓剂蜡或水杨酸酯，并且该栓剂在室温 下为固体，而在体温下为液体且由此在直肠或阴道腔中熔化并且释放 活性化合物。
可选择地或另外，可以配制通过导管，支架，金属线或其它管腔 内装置递送的组合物。通过这类装置递送尤其用于递送至膀胱，尿道，
输尿管，直肠或肠。
适合于阴道给药的本发明制剂还包括阴道环，棉塞，霜剂，凝胶， 糊剂，泡沫或喷雾剂，它们包含诸如本领域公知为合适的这类载体。
用于本发明化合物局部或透皮给药的剂型包括粉末，喷雾剂，软 膏剂，糊剂，霜剂，洗剂，凝胶，溶液，贴剂和吸入剂。可以在无菌 条件下将活性化合物与药学上可接受的载体和任意所需的防腐剂，緩 冲剂或抛射剂混合。
软膏剂，糊剂，霜剂和凝胶除包含本发明的活性化合物外，还可 以包含赋形剂，诸如动物和植物脂肪，油，蜡，石蜡，淀粉，黄蓍胶， 纤维素衍生物，聚乙二醇，硅氧烷类，皂粘土，硅酸，滑石粉和氧化 锌，或其混合物。
粉末和喷雾剂除包含本发明的化合物外，还可以包含赋形剂，诸 如乳糖，滑石粉，硅酸，氢氧化铝，硅酸钙和聚酰胺粉末，或这些物 质的混合物。喷雾剂还可以包含常用抛射剂，诸如氯氟烃类和挥发性 的未被取代的烃类，诸如丁烷和丙烷。
透皮贴剂具有将本发明化合物以受控方式递送至身体的附加优 点。可以通过将化合物溶于或分散于适当的介质制备这类剂型。吸收 促进剂也可以用于增加化合物流过皮肤。可以通过提供速率控制膜或 将化合物分散于聚合物基质或凝胶中控制这类流量的速率。
还将眼用制剂，眼用软骨剂，粉末，溶液等关注为本发明的范围。
本文所用的术语"非肠道给药"和"通过非肠道给药"意旨非肠道和 局部给药的，通常通过注射的给药方式，并且包括，但不限于静脉内， 肌内，动脉内，鞘内，嚢内，眶内，目匡内，心内，真皮内，腹膜内， 经气管，皮下，表皮下，关节内，嚢下，蛛网膜下，脊柱内和胸骨内 注射和输注。
本发明适合于非肠道给药的药物组合物包含本发明的一种或多种 化合物与一种或多种药学上可接受的无菌等渗水或非水溶液，分散液， 混悬液或乳剂或恰在使用前再溶解成无菌可注射溶液或分散液的无菌 粉末，它们可以包含抗氧化剂，緩冲剂，制菌剂，使制剂与指定接受
者血流等渗的溶质或悬浮剂或增稠剂。
可以用于本发明药物组合物的合适的水和非水载体的实例包括 水，乙醇，多元醇类(诸如甘油，丙二醇，聚乙二醇等)及其混合物， 植物油，诸如橄榄油和可注射的有机酯类，诸如油酸乙酯。例如，可 以通过使用包衣材料，诸如卵磷脂，就分散体而言通过维持所需的粒 度和通过使用表面活性剂维持适当的流动性。
这些组合物还可以包含佐剂，诸如防腐剂，湿润剂，乳化剂和分 散剂。可以通过包含各种抗菌剂和抗真菌剂，例如，对羟基苯曱酸酯， 三氯叔丁醇，苯酚，山梨酸等确保预防微生物的作用。还需要在组合 物中包括等渗剂，诸如糖类，氯化钠等。此外，可以通过包含延緩吸 收的试剂，诸如单硬脂酸铝和明胶使可注射药物剂型的吸收延长。
在某些情况中，为了延长药物释放，需要减緩药物从皮下或肌内 注射中吸收。可以通过使用具有难溶于水的晶体或非晶形物质的液体 混悬液达到这一目的。然后药物的吸收速率可以取决于其溶出速率， 由此可以依赖于晶体粒度和晶型。可选择地，可以通过将药物溶于或 悬浮于油媒介物中使非肠道给药的药物延緩吸收。
通过在生物可降解聚合物，诸如聚丙交酯-聚乙交酯中形成本发明 主题化合物的微嚢基质制备可注射的长效剂型。根据药物与聚合物之 比和所用特定聚合物的性质的不同，可以控制药物释放速率。其它生 物可降解的聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。还通过将药物
俘获在与身体组织相容的脂质体或微乳内制备长效可注射制剂。
当将本发明的化合物作为药物给予人和动物时，可以将它们本身
给予或作为包含例如O. 1 - 99. 5°/。(更优选0. 5 - 90%)的活性组分与药学 上可接受的载体的药物组合物给予。
优选通过制备包含有效量活性组分的合适的饲料预混合物并且将 该预混合物掺入最终的定量饲料中将本发明的化合物添加到动物飼料 中。
可选择地，可以在饲料中掺入包含活性组分的中间体浓缩物或饲 料添加剂。可以制备这类塑料预混合物和最终的定量饲料的方式描述
在参考书中(诸如"Applied Animal Nutrition", W. H. Freedman and
CO.， San Francisco, U.S.A., 1969或"Livestock Feeds and Feeding"
0 and B books, Corvallis， Ore., U.S.A., 1977)。
还可以通过可再填充的或生物可降解装置提供导入方法。进年来
已经研发并且在体内测试了用于控释药物的各种緩释聚合物装置，包
括蛋白质生物药剂。各种生物相容性聚合物(包括水凝胶)，包括生物 可降解和不可降解的聚合物可以用于形成在特定靶点持续释放化合物
的植入物。
活性组分在本发明药物组合物中的实际剂量水平可以改变，以便 获得对于特定患者，组合物和给药方式有效实现期望的治疗反应而对 患者无毒性的活性组分用量。
选择的剂量水平取决于各种因素，包括所用本发明特定化合物或 其酯，盐或酰胺的活性，给药途径，给药时间，所用特定化合物的排 泄速率，治疗期限，与所用特定化合物联用的其它药物，化合物和/ 或物质，所治疗患者的年龄，性别，体重，状况， 一般健康情况和在 先的医疗史等医学领域众所周知的因素。
具有本领域普通技能的临床医师或兽医能够容易地确定并且开据 有效量的所需药物组合物处方。例如，临床医师或兽医可以以低于获 得期望治疗作用所需的水平开始使用药物组合物中所用本发明化合物 的剂量，并且逐步增加剂量，直到获得期望的作用。
一般而言，本发明化合物的合适的每日剂量为有效产生治疗作用 的最低剂量的化合物用量。这类有效剂量一般取决于上述因素。 一般 而言，针对患者的本发明化合物的静脉内，脑室内和皮下剂量为约 0. 0001 -约IOO mg/千克体重/天。
如果需要，可以将活性化合物的有效日剂量在全天以适当的间隔 分别给予两次，三次，四次，五次，六次或6六次以上的亚剂量，任选 以单位剂型的形式。
接受该治疗的患者为有此需要的任何动物，包括灵长类特别是人，
和其它哺乳动物，诸如马，牛，猪和绵羊；和一般的家禽和宠物。
可以将本发明的化合物照此给予或作为与药学上可接受的载体和 /或无菌载体的混合物给予，并且还可以与其它抗微生物剂 一起给予， 诸如青霉素类，头孢菌素类，氨基糖苷类和糖肽类。联合疗法由此包 括依次，同时和分别给予活性化合物，按照这类方式首先给予的药物 在给予随后疗法时仍然可检测到。
本发明关注本发明主题的化合物在任意上述药物组合物和制剂中 的制剂。此外，本发明关注通过任意上述给药途径给药。本领域技术 人员可以基于所治疗的疾患和所治疗患者的总体健康状况，年龄和大 小选择适当的制剂和给药途径。
核酸和氨基酸组合物
本发明在另一个方面中提供了包含特定的TRPA1多肽类和核酸，由 其组成或主要由其组成的組合物和药物组合物。例如，可以在药物筛
TRPA1在细胞，组织或生物体中的表达或活性。本文所用的术语"分离 的"在用于指核酸和多肽组合物时意旨以非它们实际在天然状态下存 在的状态下存在的核酸或多肽类。换句话说，该术语用于表示将蛋白 质与内源性发现的与其在一起的其它蛋白质和细胞成分以一定水平分 离。分离的在本文上下文中使用时不一定意旨以纯化形式提供蛋白质 或核酸。另外，术语"分离的"不一定指从生物体中分离多肽或核酸。 而该术语还包括重组产生的核酸和多肽类。
在某些实施方案中，本发明提供了分离的多肽，其包括SEQ ID N0: l中表示的氨基酸序列，由其組成或主要由其组成。这类多肽可以包括 相同序列或可以包括一种，两种或三种保守取代，添加或缺失。在某 些其它实施方案中，本发明提供了由包含SEQ ID NO: 2中表示的核苷 酸序列，由其组成或主要由其组成的核酸序列或由因遗传密码简并性 而与SEQ ID NO: 2不同的核苷酸序列编码的分离的多肽。
在某些其它实施方案中，本发明提供了包含SEQ ID NO: 2中表示 的核苷酸序列，由其组成或主要由其组成或包含因遗传密码简并性而 与SEQIDN0: 2不同的核苷酸序列的分离的核酸。在其它实施方案中， 本发明提供了包含一核苷酸序列，由其组成或主要由其组成的分离的 核酸，所述的核普酸序列编码包含SEQ ID No. l中表示的氨基酸序列 的多肽。
在其它实施方案中，本发明提供了表达栽体，它在原核细胞和真 核细胞中的至少一种中复制。该表达载体包含任意上述TRPA1核酸。类 似地提供了包含这些表达载体的细胞，这些细胞表达由表达的核酸编 码的TRPA1蛋白质。在某些实施方案中，表达的多肽保持了TRPA1的一 种或多种功能。例如，包含该表达载体的细胞表达TRPA1并且介导电流 和/或离子流(例如，TRPAl-介导的电流)。还提供了生产多肽的方法。 该方法包括在合适的细胞培养基中培养上述细胞之一 (例如，表达 TRPA1多肽的细胞)以表达所述多肽。
在某些实施方案中，使用所述的表达载体瞬时转染细胞并且该细 胞瞬时表达TRPA1蛋白质。在某些其它实施方案中，使用所述的表达载 体稳定转染所述细胞并且建立表达TRPA1的稳定细胞系。在某些实施方 案中，包含所述表达栽体的细胞无法内源性表达TRPA1蛋白质(例如， 细胞在没有表达载体存在下不表达可检测水平的TRPA1蛋白质).在其 它实施方案中，包含所述表达载体的细胞内源性表达TRPA1蛋白质。
在某些实施方案中，表达TRPA1的细胞，例如，操纵以包含TRPA1 表达载体的细胞可以用于筛选试验，以便鉴定调节TRPA1介导的电流的 化合物。合适的细胞包括，但不限于原核细胞和真核细胞。典型的真 核生物包括脊推动物和无脊稚动物。典型的真核生物包括，但不限于 人，小鼠，大鼠，猫，狗，家兔，绵羊，牛，马，山羊，非人的灵长 类，蛙，蟾蜍，鱼，小鸡，苍蝇，蠕虫和酵母。典型的原核生物包括 细菌。涉及当"细胞"时，应理解意旨在至少一种细胞中(例如，单一细 胞或细胞培养物)筛选。将细胞制成混悬液或使其粘附生长。可以使用 任何发育时间和组织的细胞。典型的细胞包括胚胎细胞，幼体细胞， 青少年细胞，胎儿细胞和成年人细胞。典型的细胞和细胞系可以来源 于任何组织或细胞类型。在某些实施方案中，这些细胞为感觉神经元
或结状神经节。细胞包括初级细胞和转化的细胞系。
在某些实施方案中，如上所述，本发明关注包含如本文提供的
TRPA1蛋白质编码序列的表达载体。"载体"为复制子，诸如质粒，噬菌 体或粘粒，另一种DM片段可以与之结合。术语"栽体"意旨能够转运与 其连接的另一种核酸的核酸分子。 一种类型的载体为附加体，其为能 够在染色体外复制的核酸。还可以使用能够自主复制和/或自动表达与 它们连接的核酸的载体。能够指导可操作地与之连接的基因表达的载 体在本文中称作"表达载体"。 一般而言，在重组DNA技术中应用的表达 载体通常为"质粒"形式，它一般涉及其载体形式不结合染色体的环状 双链DNA环区。然而，本发明指定包括这类表达载体的其它形式，它们 具有等效的功能且今后为本领域中公知的。
DNA或核酸"编码序列"为在适当调节序列控制下时在体内转录和 翻译成多肽的DNA序列。编码的边界由5'(氨基)末端的起始密码子和 3'(羧基)末端上的翻译终止密码子决定。本发明的编码序列可以包括， 但不限于来自真核生物mRNA的cDNA，来自真核生物(例如哺乳动物)DNA 的基因组DNA序列和合成DNA序列。聚腺普酸化信号和转录终止序列可 以位于该编码序列的3'上。
核酸或DNA调节序列或调节元件为转录和翻译控制序列，诸如启动 子，增强子，聚腺苷酸化信号和终止子，它们提供和/或调节宿主细胞 中编码序列的表达。指导某些实施方案的真核细胞离子通道和可检测
择。调节序歹'j的实例描迷在Goeddel， Gene Expression Technology: Methods in Enzymology(Academic Press, San Diego, CA(1990))中。 例如，任何控制DM序列表达的各种表达控制序列在可操作地与之连接 时可以用于这些载体以表达编码离子通道和可检测标记的DNA序列。这 类有用的表达控制序列包括例如，SV40的早期和晚期启动子，p2微 管蛋白，腺病毒或巨细胞病毒立即早期启动子，lac系统，trp系统， TAC或TRC系统，表达由T7 RNA聚合酶指导的T7启动子，3-磷酸甘油酸 酯激酶或其它糖酵解酶的启动子，酸性磷酸酶启动子，例如，Pho5和
酵母a-交配因子和已知控制原核或真核细胞或其病毒中的基因表达 的其它序列的启动子，和各种组合。应理解表达载体的设计可以取决 于诸如转化的宿主细胞的选择这类因素。此外，还应考虑载体的拷贝 数，控制该拷贝数的能力和该载体编码的任何其它蛋白质，诸如抗生 素标记的表达。
本发明关注可以驱动原核或真核细胞中TRPA1蛋白质表达的任何 启动子的应用。本文所用的术语"启动子"意旨调节选择的DM序列表达 的DNA序列，所述选择的DNA序列可操作地与启动子连接并且影响选择 的DNA序列在细胞中的表达。"启动子"一般为能够结合细胞中RNA聚合 酶并且启动编码序列转录的DNA调节元件。例如，启动子序列可以通过 与其3'末端结合转录起始位点并且向上游延伸(5'方向)以便包括启动
高于背景的可检测水平的转录所必需的最小数量的碱基或元件。在启 动子序列中可以发现转录起始位点和负责结合RNA聚合酶的蛋白质结
合结构域。真核启动子通常，但并非始终包含"TATA"箱和"CAAT"箱。
各种启动子，包括诱导型启动子可以用于驱动本发明的各种载体。
术语"启动子"还包括原核和/或真核启动子和启动子元件。本文所 用的术语"启动子"包括"细胞特异性"启动子，即仅在特异性细l包(例 如，特异性组织细胞)中影响选择的DNA序列表达的启动子。该术语还 覆盖所谓的"易漏"启动子，它们调节选择的DNA主要在一种组织中的表 达，并且也在其它组织中产生表达。该术语还包括非组织特异性启动 子和组成型表达或为诱导型的启动子(即可以控制表达水平)。
如上所述并且在某些实施方案中，本发明关注包含TRPA1核酸序列 并且能够表达TRPA1蛋白质的表达载体。当在细胞中表达时，这些载体 表达TRPA1蛋白质，优选功能性蛋白质。功能性TRPA1蛋白质介导电流 和/或离子流和/或膜电位。
达。例如，可以使用蛋白质印迹分析，免疫细胞化学或免疫组织化学 证实蛋白质表达。另外或可选择地，可以使用，例如评价离子流的钙 成像分析或评价电流的电生理学方法(例如，膜片箝分析)检测TRPA1 功能。
合成方案和活性拮抗剂的鉴定 组合文库
具有不同有代表性类型的取代基的本发明化合物，特别是变体库
适合于组合化学和其它平行合成方案(例如，参见PCT W0 94/08051)。 结果为可以在高流通量测定法中快速筛选相关化合物的大文库，例如 上述化合物的各种文库，以便鉴定潜在的TRPA1激动剂或拮抗剂前导化 合物，并且精制前导化合物的特异性，毒性和/或细胞毒性-动力学特 性。例如，TRPA1生物化学测定，诸如本文披露的那些可以用于筛选具 有对TRP A1的激动剂活性或拮抗剂活性的那些化合物文库。
只作为例证，用于本发明目的的组合文库为化学上相关的化合物 的混合物，可以针对所需的特性将它们一起筛选。在单一反应中制备 许多相关化合物明显减少并且简化了需要进行的筛选过程的数量。可 以通过常规方法进行使得物理特性的筛选。
可以在文库中生成各种不同水平的多样性。例如，用于组合反应
的底物芳基在核芳基部分方面可以不同，例如，在环结构方面可以各 种各样和/或可以在其它取代基方面改变。
可以利用本领域中产生小有机分子如本发明主题的化合物的组合 文库的各种技术。例如，参见Blondelle等(1995) Trends Anal. Chem. 14:83; Affymax的美国专利5， 359， 115和5， 362， 899; Ellman的美国专 利5， 288， 514; Sti 11等的PCT公开号W0 94/08051; ArQule的美国专利 5， 736， 412和5， 712， 171; Chen等(1994) JACS 116: 2661; Kerr等(1993) JACS 115: 252; PCT公开号W092/10092， WO93/09668和WO91/07087; 和Lerner等PCT公开号W093/20242)。因此，可以合成相当于约100-1， 000， OOO或更多本发明主题化合物的多变体(diversomers)的各种 文库并且针对特定的活性或特性进行筛选。
对上迷和相关途径的许多改变能够合成广泛不同的化合物文库， 可以将它们作为TRP A1抑制剂或激动剂测试。
实施例
实施例1:高流通量筛选测定
本测定法依赖于可诱导地表达TRPA1通道的细胞中通道活化后检 测的胞内Ca2+浓度([Ca21 J升高。使用栽入细胞且此后指示[Ca2+] i的荧 光Ca2+指示剂定量Ca"升高。TRPA1通道的活化之后发生Ca"流入。将 抑制[Ca2+]i升高的化合物视为用于进一步研究的选中物(hits)。
用TRPA1构建体(特别是编码具有SEQ ID NO: 1中所示氨基酸序 列的TRPA1蛋白质的构建体)稳定转染商购HEK293/TREx品系 (Invitrogen)，并且通过常规的钙成像筛选，以便在使用1 ng/ml四 环素刺激后找到具有TRPA1表达的克隆。将这些细胞维持在补充了 100 pg/ml潮霉素的制造商推荐的生长培养基中，以便促进TRPA1构建体 保留。在生长至近汇合后，以 25，000个细胞/孔的密度在有1 pg/ml 四环素存在下的384孔CellBind平板(Corning)中铺板，并且使其生 长20-30小时。得到几乎汇合的单层。然后给细胞加载Ca"染料将 Fura-2/AM或Fluo4/AM加入到各孔中至终浓度分别为2 )iM或1 joM 并且在室温下分别孵育80分钟或60分钟。然后通过在急剧拍打的同 时倒置平板从细胞中除去上清液，然后向各孔中加入40 pL Hank平 衡盐溶液(HBSS; 0. 185 g/1 D-葡萄糖，0. 9767 g/1 MgS04 (无水)，0.4 g/1 KC1， 0.06 g/1 KH2P04(无水)，0.35 g/1 NaHC03， 8.0 g/1 NaCl 和0. 04788 g/1肘2肝04(无水);pH 7.4)。在用于从加载回收的 1小 时后， <吏用Hamamatsu FDSS 6000系统测定细胞，该系统允许可选择 地在340 nM和380 nM处照射以便进行Fura-2实验或在485 nM下照 射以便进行Fluo4实验。以0.2 Hz的速率获得结构。在测定过程中， 连续涡旋平板，在添加每种试剂后使用移液管在孔中混合。为了进行 筛选测定，在收集短(4个结构)基线后将13 |LiL稀释储备溶液(在50 下)加入到各孔中2分钟。然后将13 nL 37. 5 nM AITC(异硫氰酸烯丙 西旨)加入到各孔中，实现各化合物的终浓度为10pM和AITC为7. 5^iM。 在添加AITC后收集数据 3分钟，其中荧光强度(就Fluo4而言)和
F340/F38Q之比(就Fura-2而言)与[Ca2+] i成正比。阴性对照由接触 AITC，但不接触化合物的HEK293/TREx TRPA1细月包组成。阳性对照通 常为接触AITC，但不接触化合物的HEK293/TREx("亲代")细胞，而有 时还使用正常，但不接触AITC或化合物的HEK/293 TRExTRPAl细胞。 这些对照组确定了篩选窗并且将"选中物"定义为将荧光反应抑制至少 40%的那些化合物。测定定义为"选中物"的化合物的IC5。值。将基于 Fluo4细胞的荧光测定法用于测定在有不同药物浓度存在下的胞内 Ca"浓度。测试浓度为40 |iM， 20 ^iM， 10 )iM， 5 |iM， 2. 5 (^M， 1. 25 和O. 625jLiM。在所有浓度下一式三份测试化合物。标准软件用于拟合
ICs。曲线。
另外或可选择地，可以将效率表示为在有(指定浓度化合物)存在 下与没有化合物存在下或与对照化合物相比的抑制％。例如，将效率表 示为在有与没有化合物存在下相比的离子流抑制％。
实施例2:膜片箝实验
膜片箝实验允许检测通过上迷细胞系中的TRPA1通道的电流。为 了能够记录稳定水平下的电流和防止其它实验室观察到的"衰减"，有 必要使用穿孔的膜片技术，其防止细胞质与移液管溶液发生透析。在 正常全细胞膜片箝记录中，使玻璃电极接触单一细胞并且用细胞膜建 立高电阻(gigaohm)密封物。然后使膜破碎以便获得全细胞结构，从而 能够使用与电极连接的放大器控制细胞膜电压并且测定通过膜的电 流，并且用移液管溶液替代细胞质。相反，在穿孔的膜片方式中，有 抗生素两性霉素存在于移液管溶液中并且在获得密封物后几分钟过程 内扩散接触细胞。两性霉素在移液管下的膜中形成离子可透过的孔， 从而能够通过某些离子，但保持大部分天然胞质成分。灌流系统能够 控制胞外溶液，包括添加的电流阻滞剂和活化剂。通过添加5pMAITC 到该溶液中活化电流。
将TRPA1细胞诱导20-48小时，从生长平板中取出并且以低密度 在玻璃盖玻片上再铺板(以便实现良好的单细胞物理分离)以便测^_ 。
在某些情况中，使细胞在玻璃盖玻片上以低密度生长过夜。在具有-40 mV保持电位的全细胞方式中进行膜片箝记录。每隔5秒将电压从-120 等变至+100 mV，期限为400 ms。在-80 mV和+80 mV下将引起的电流 定量。内部溶液由140 mM天冬氨酸铯，10 mM EGTA， 2. 2 mM CaCl2， 2.08 inM MgCL和10 mM HEPES， pH 7.2组成并且在实验前即刻加入 50nM计算的游离Ca"和60mg/ml两性霉素。外部溶液由150mMNaCl， 4.5mMKCl， 3 mM MgCh， 10 mM HEPES， 10mM谷氨酰胺，lmM EGTA， pH 7. 4组成。在添加AITC时，仅在表达TRPA1的细胞，但不在亲代 HEK293 TREx细胞中诱导TRPA1电流。除去AITC刺激物导致大部分电 流消失。测试可能的阻滞剂在连续有AITC存在下阻断内向和外向电流 的能力。
通过测试5 )LiM和500 nM的每种化合物评估化合物的IC5。。当5 |liM 化合物未表现出阻断时，将ICs评估为〉10 joM。当5 jnM化合物表现 出50%或50%以下的阻断时，ICs。可以达到5-10 ^M的ICs。近似评估值。 类似地评估了 500 nM-5 ^M的化合物的IC5。。在多个浓度下重新测试 在500 nM下具有50%或50%以上阻断的化合物并且通过标准方程拟合 每次时的阻断％以便使用5-6点浓度/相应实验精确测定IC5。。除所示 的外，还从膜片箝实验值获得了表1和2中所示的ICs。值。
实施例3.其它筛选测定
尽管使用实施例1和2中所述的测定法鉴定了本文提供的典型 TRPA1抑制剂，但是其它基于细胞的测定法可以用于鉴定和/或表征 TRPA1抑制剂。 一种这类测定法描述在2005年3月11日提交的美国 申请顺序号US11/078，188中，将该文献的内容完整地引入本文作为参 考。可以在申请号11/078, 188中所述的原核细胞系统中表达TRPA1 蛋白质，并且可以将该系统用于筛选调节TRPA1蛋白质活性的化合物。 可选择地，可以在原核细胞系统中表达非TRPA1的离子通道，并且可 以将该系统用于评价鉴定的TRPA1抑制剂在其它离子通道方面的活性 i普。
可以以高流通量方式进行为鉴定和/或表征抑制TRPA1活性的化 合物而进行的任何测定，或可以将其按照小规模进行以便检验单个的 化合物或少量化合物。另外，可以如下进行任何这些测定(i)作为 初步测定以便鉴定抑制TRPA1功能的化合物；(ii)作为二次测定以便 评价化合物在其对其它离子通道活性方面的特异性；(Hi)作为用于 药物化学程序中的测定以便优化受试化合物。
实施例4: TRPA1抑制剂的血浆水平
化合物200在37。C下的大鼠血浆中保持稳定^:l小时。
在单一静脉内推注剂量0. 9mg/kg，腹膜内剂量12mg/kg(混悬液) 和口服剂量12 mg/kg(混悬液)之后，通过HPLC/MS/MS，测定雄性 Sprague-Dawley大鼠中的化合物200血浆水平。
对于静脉内给药，用30。/。w/vCAPTIS0L配制化合物200溶液，目 标浓度为0.25 mg/mL，作为通过有意识的大鼠尾部以4 mL/kg剂量体 积的快速推注(2-3秒)给药。
对于腹膜内给药，将化合物200配制成在CMC(羧甲基纤维素)中 的均匀混悬液，目标浓度为lmg/mL并且以10mL/kg的剂量体积给药。
对于口服给药，将化合物200配制成在CMC(羧甲基纤维素)中的 均匀混悬液，目标浓度为1 mg/mL，以管饲法对有意识的禁食 Sprague-Dawley大鼠给药，剂量体积为10 mL/kg。
半衰期，血浆清除率和分布体积的估计值分别为32分钟，27 mL/kg/分钟和1276 mL/kg。在禁食大鼠中给予混悬液后的生物利用度 估计值为~8%。血浆-浓度-时间曲线图提示，化合物200被快速吸收， 正如通过45分钟后出现Cmax的观察结果所突出显示的。
在以12 mg/kg腹膜内给药后(15 - 60分钟)并且还在以12 mg/kg 口服给予后(45分钟)观察到与对TRPA1的ICw类似的血浆水平(lOOO nM = 355 ng/mL)。
制备制剂形式的TRPA1抑制剂并且通过几种不同给药途径给药。 这表明可以以许多方式配制TRPA1抑制剂并且它们适合于最有效地治
疗特定的疾病或损伤。这些特性与对大鼠给予TRPA1抑制剂后观察到 的最少副作用的组合表明，TRPA1抑制剂具有合适的药物和药物候选 物特征。
实施例5: TRPAl拮抗剂在失禁模型中的测试
为了测试TRPAl抑制剂化合物(化合物200)在治疗失禁中的有效 性，在以手术方式使膀胱部分出口阻塞(BOO)后对大鼠给予不同浓度的 化合物[例如，低浓度(2. 2微摩尔)，中浓度(6. 6微摩尔)和高浓度(2 0 微摩尔浓度)]。将不同剂量的TRPAl抑制剂性化合物的功效与单独给 予赋形剂的对照组(伪对照组)功效进行比较。还将功效与给予阳性对 照如阿托品的大鼠进行比较。阿托品并非TRPAl抑制剂，但它确实减 少了 BOO模型中部分膀胱出口阻塞后的膀胱过度活动。
在这些研究中4吏用雌性Sprague Dawley大鼠。大鼠进行手术部分 膀胱出口阻塞(BOO)或假拟手术。BOO(或假拟)手术后5周，以手术方 式将膀胱内导管植入膀胱半球以便进行尿流动力学检查。导管植入后 1周(BOO或假拟手术后6周)开始尿流动力学检查。使膀胱导管与压力 传感器的一个出口连接并且使该压力传感器的另一个出口与注射泵连 接。金属丝底的动物笼下的分析天平测定了在连续膀胱测压过程中排 泄的尿量。将单一膀胱内压图(CMG)定义为单一充盈-排泄循环过程中 的膀胱压力，输注体积和排泄体积的同时记录值。
在假拟阻塞和BOO动物中测试每种浓度的TRPAl抑制剂(化合物 200)。还测试了给予载体的动物。实验由至少20CMG个循环组成。简 言之，将等渗盐水(O. 9%)以175 ul/分钟(10. 5ml/小时)的速率输注入 膀胱。在盐水输注后，以175 ul/分钟输注拮抗剂化合物。
就每个CMG周期而言，评价下列参数输注体积(每个CMG循环输 注的盐水或药物量)；排泄体积(每个CMG循环动物排泄的尿量)；最小 压力(充盈过程中的最小压力)；阈值压(在膀胱压力开始快速升高时排 尿前的压力)；平均压力(在充盈过程中和阈值前的平均压力)；最大压 力；排尿间隔(两次依次排泄过程之间的时间)；尿流量指数。
这些实验证实TRPA1抑制剂被膀胱阻塞的动物所耐受。另外，这 些实验证实TRPA1抑制剂降低了失禁BOO模型中膀胱压力阈值和最大 膀胱压力。这些作用为特异性的并且在单独给予载体后未观察到。
实施例6: TRPA1拮抗剂在緩激肽诱导的疼痛模型中的测试 如上所述，緩激肽模型涉及足底内注射5 ng/jiL緩激肽溶液。注 射緩激肽溶液一般导致快速致敏。通过评价作为对由改进的 Hargreaves仪器递送的轻度热刺激物反应的注射爪的热逃逸潜伏期 测定致敏作用。


图1 a和1 b概括了在緩激肽模型中测试化合物2 00后获得的数据。 本研究检验了 200mg/kg， 50mg/kg和12. 5mg/kg腹膜内化合物200对 緩激肽诱导的触觉异常性疼痛的镇痛作用。
雄性Holtzmann大鼠在緩激肽注射前30分钟接受给予的TRPA1 抑制剂或载体(O. 5%曱基纤维素)。通过腹膜内(IP)注射抑制剂或载体。 对接受TRPA1抑制剂的动物给予12. 5 mg/kg, 50 mg/kg或200 mg/kg 剂量。在递送的TRPA1抑制剂的每个浓度下以及载体下评价8只动物。 给予药物或载体后30分钟，在右后爪中递送30ug/10(^L剂量的緩激 肽。
在整个研究过程中，在每次观察期限过程中进行一般行为评价。 观察结果包括触觉异常性疼痛(通过施加于体表的轻度触摸诱导的发 声/躁动)，自发发声，体表撕咬和咀嚼，后肢放置和步进反射丧失， 后肢承重丧失和正向反射丧失。另外，评价和测定机械性异常性疼痛。 图la和lb中提供的结果基于对机械性异常性疼痛的测量值。
緩激肽产生了引起退缩行为所需的触觉阈值的显著降低。这种异 常性疼痛持续达240分钟。以达200mg/kg的剂量IP递送TRPA1抑制 剂预治疗表现出对緩激肽注射后机械性阈值的剂量依赖性作用，它持 续约60分钟。然而同时未注意到行为参数的改变并且仅在给予最高剂 量的8只大鼠中的3只中观察到了轻度的镇静作用。
在大鼠足底内的緩激肽产生了显著性长期持续的触觉异常性疼
痛。这些研究证实TRPA1抑制剂产生了异常性疼痛的剂量依赖性降低。 此外，该药物减轻了疼痛症状约60分钟。这些实验证实TRPA1抑制剂 有效减轻緩激肽疼痛模型中的疼痛症状(例如，机械性异常性疼痛)。
实施例7: TRPA1拮抗剂在福尔马林疼痛模型中的测试 如上所述，福尔马林模型涉及透皮或通过腹膜内注射福尔马林溶 液。注射福尔马林溶液激活了 二相反应且由此提供了伤害性和炎性疼 痛方式。福尔马林模型用于评价典型TRPA1抑制剂在治疗疼痛中的有 效性。
图2概括了化合物200在福尔马林模型中测试后获得的数据。简 言之，遵循下列方案。雄性Holtzmann大鼠接受足底内注射50pL 2% 福尔马林。通过检测注射的后爪上放置的小金属条的运动的自动化传 感器检测爪的退缩。在注射福尔马林前约15分钟给予药物或载体。通 过在早期(注射福尔马林后约5分钟)，晚期(注射福尔马林后约30分 钟)和介入疼痛免除期过程中计数每分钟的退缩次数测定动物对注射 刺激物的反应。在图2中，每一数据组(早期和晚期)的最右侧棒形 图表示单独给予载体，且最左棒形图表示给予加巴喷丁。给予的TRPA1 抑制性化合物的最高浓度为与描绘加巴喷丁给药相邻的棒形图，而给 予的TRPA1抑制性化合物的最低浓度为与描绘给予载体相邻的棒形 图。
将典型实验结果概括在图2中。在接受不同剂量的TRPA1抑制剂 (化合物200),加巴喷丁或载体对照的动物中注射福尔马林后测定每 分钟退缩次数，即动物经历的疼痛和不适的量度。给予TRPA1抑制剂 基本上减少了早期和晚期过程中每分钟退缩的次数。这些结果表明 TRPA1抑制剂减少了福尔马林模型中疼痛的两个时期。TRPA1抑制剂在 伤害性和炎性疼痛模型的两个时期中的功效支持了 TRPA1抑制剂在治 疗严重性疼痛，包括慢性和急性痛中的应用。
实施例8:TRPA1拮抗剂在急性炎性疼痛的角叉菜胶模型中的测
试
如上所述，角叉菜胶模型为急性炎性疼痛模型。照此，它可以用 于评价在緩解炎症导致的疼痛，例如因关节炎导致的疼痛中的有效性。
图3概括了化合物200在角叉菜胶模型中测试后获得的数据。简 言之，使用Hargreaves仪器预测试首次用于实验的大鼠对热刺激的敏 感性。第二天，在测试前约4.5小时将100 jiL X-角叉菜胶注入右后 爪的足底表面。测试前30-60分钟给大鼠经腹膜内注射载体或药物(化 合物200或双氯芬酸以便评价IP给予TRPA1抑制剂的功效)。
在本研究中，给予的药物为TRPA1抑制剂或非类固醇抗炎药双氯 芬酸。在给予角叉菜胶和药物或载体对照后，测量爪体积并且用于评 价减轻的炎症。
图3概括了这些实验的结果。就每种"药物"(TRPA1或双氯芬酸) 或载体而言，显示了给药剂量(以mg/kg计)和给药途径(IP)。图3a 和3b中概括的结果表明TRPA1抑制剂减小了爪体积(例如减轻的炎 症) 炎症减轻与给予双氯芬酸后观察到的结果类似。
图3中概括的结果表明TRPA1抑制剂减轻了角叉茱胶模型中的炎 症。这种炎症的减轻可能伴随因炎症导致的疼痛的同时减轻。TRPA1 抑制剂在这种炎性疼痛模型中的功效支持了 TRPA1抑制剂在治疗炎症 和炎性疼痛，例如因关节炎导致的炎性疼痛中的应用。
注意到在本研究中，测定了爪体积的改变。给予TRPA1抑制剂后 观察到的体积减小(例如，炎症减轻)可能伴随相应的与炎症相关的疼 痛或不适感的减轻。可选择地或另外，可以直接评价疼痛指数。简言 之，遵循上述概括的方案并且在注射角叉菜胶和药物或载体对照后， 可以测定热逃逸潜伏期。将数据表示为记录的爪退缩潜伏期(PWLs)， 以秒计)。
实施例9: TRPA1拮抗剂在炎性疼痛的CFA模型中的测试 如上所述，完全弗氏佐剂(CFA)模型为炎性疼痛模型。照此，它可 以用于评价在緩解炎症导致的疼痛，例如因关节炎和其它炎性疾患导
致的疼痛中的有效性。
图4概括了化合物200在CFA模型中测试后获得的数据。使用 Hargreaves仪器预测试首次用于实验的大鼠对热刺激的敏感性。第二 天，将100 |iL完全弗氏佐剂(CFA)注入右后爪的足底表面。2天后， 在早晨再次预先测试大鼠。在下午，给大鼠注射载体对照或药物(TRPAl 抑制剂200或非类固醇抗炎药双氯芬酸)。经腹膜内注射药物或载体并 且在45分钟后通过将热源施加于注射和未注射CFA的后爪并且测定退
缩潜伏期来测试大鼠的痛觉过敏。
图4概括了这些实验的结果，它们表明这种TRPA1抑制剂减轻了 炎性疼痛的CFA模型中的疼痛。特别地，TRPA1抑制剂减轻了这种炎 性疼痛模型中的热痛觉过敏。这种TRPA1抑制剂的功效优于双氯芬酸 (非类固醇抗炎药)。另外，这些实验显示，TRPA1抑制剂减轻了受伤 害爪的疼痛，而不干扰正常的感觉。这一结果通过对未受侵害的对照 爪(非发炎的)的分析得以证实。
TRPA1抑制剂在这种炎性疼痛模型中的功效支持了 TRPA1抑制剂 在治疗炎性疼痛，例如，因关节炎导致的疼痛中的应用。测试的TRPA1 抑制剂表现出在没有毒性和不使正常感觉迟緩的情况下减轻疼痛。另 外，测试的TRPA1抑制剂以与非类固醇抗炎药类似或比它更大的功效 减轻了疼痛。由于观察到非类固醇抗炎化合物的副作用，所以TRPA1 抑制剂可以在不出现可利用的止痛药的副作用的情况下减轻疼痛。
实施例10: TRPA1拮抗剂在疼痛热损伤模型的测试 热损伤模型用于评价典型TRPA1抑制剂在治疗伤害性疼痛中的有 效性。
简言之，可以使用下列方案。使用Hargreaves型仪器测试雄性 Holtzman大鼠(约300克)的热逃逸。在轻度麻醉下，将热损伤(52t: 下45秒)施加于一个足后部。在损伤前和损伤后30， 60， 80和120 分钟测试动物的受损和未受损爪的热逃逸潜伏期。在基线测量后和热 损伤前约15-20分钟给予药物(TRPA1抑制剂)或载体(O. 5%甲基纤维
素)。除逃逸潜伏期测定外，在整个实验过程中进行行为观察。
实施例11: TRPA1拮抗剂在神经性疼痛的Chung模型的测试 简言之，通过连接L4/5神经根准备雄性SpragueDawley大鼠(约 175克)。5-8天后，使用VonFrey毛测试动物异常性疼痛。使用"上-下"(up-down)法评估阈值。给予药物或载体并且在接下来的4小时 内定期测试动物。
实施例12:本发明化合物的合成
2-(1， 3-二甲基-2， 6-二氧代-l， 2, 3， 6-四氢嘌呤-7-基)-N-(4-异 丙基苯基)乙酰胺(200)
在0'C下向茶碱-7-乙酸(IOI, 32. 5 g， 0. 136mol)在无水DMF(400 mL)中的混悬液中加入DIPEA(54 mL， 0. 31 mol)。加入纯净苯胺(102， 20. 4mL， 0. 143mol),随后添加DMAP (19. 2 g, 0. 16 mol)和EDCI (30. 1 g, 0.16mol)。将该反应混合物在18小时内温至室温，然后在40-43 。C下搅拌1.5天。用CH2Cl2(1.8L)稀释该反应混合物，用&0(0. 7L)， 10%柠檬酸(0.5 L)， NaHC03(饱和，0. 6 L)，盐水洗涤，用Na2S04干燥 盐并且在真空中浓缩且从乙酸乙酯/己烷中重结晶而得到化合物 200 (41%， 19.8 g): MS(APCI) m/z: 356.2 [M+H]+。对C18H21N503的计 算值C, 60.83; H， 5.96; N， 19.71;测定值C， 60.53; H， 5.97; N， 19.76。
通过使用EDCI的偶联制备酰胺类的一般操作A
向茶碱-7-乙酸(2 mmol) ， DMAP(2腿o1),取代的苯乙胺(2 mmol) 和DIPEA(4 mmol)在DMF(20 mL)中的混合物中加入EDCI (2 mmol)。将 该反应混合物加热至401C并且搅拌过夜。在真空中浓缩该溶液并且将
残余物溶于EtOAc(lOO mL),用H20，柠檬酸(10%), NaHC03(饱和)和 盐水洗涤，用Na2S0,干燥并且在真空中浓缩。通过硅胶快速色镨法纯 化粗产物，用MeOH/EtOAc (1~8%)洗脱。
N-[2-(4-氯苯基)-乙基]-2-(1， 3-二甲基-2， 6-二氧代-1， 2, 3， 6-四氢-嘌呤-7-基)-乙酰胺(268):<formula>formula see original document page 122</formula>
通过一般操作A由101 (500 mg，2. 1 mmol)和103 (292 pL，2. 1 mmol) 制备化合物268 (107 mg, 14%)。 MS(APCI): m/z 376 [M+H]+。
2-(1， 3-二曱基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氢-嘌呤-7-基)-N-(2-对 - 曱苯基-乙基) - 乙酰胺(400):
101 104 柳
通过一般操作A由101 (503 mg，2. 1 mmol)和104 (308 jiL，2. 1 mmol) 制备化合物400 (99 mg， 13%)。 MS(APCI): m/z 356 [M+H]+。
通过酰基氯制备酰胺类一般操作B
在冰-水浴中冷却茶碱-7-乙酸(2 ramol)在CHC13(15 mL)和 MeCN(15 mL)中的混悬液。然后滴加草酰氯(2. 2 mmol)。然后加入催化 的DMF(~25 ^L)。将该混合物在室温下搅拌过夜。然后用水-水浴冷 却该溶液且一次加入DMAP(2. 5 mmol)。滴加取4戈的苯乙胺并且将该反 应混合物在室温下搅拌过夜。在用CHCl3(50mL)稀释后，混合物用H20， 柠檬酸(在1120中10%), NaHC03(饱和)洗涤，用Na2S04干燥并且在真
中浓缩。通过硅胶快速色i普法纯化粗产物，用MeOH/EtOAc (1~8%)洗脱<
N- [2- (3， 4- 二氯苯基) - 乙基]-2- (1， 3- 二甲基-2， 6- 二氧代 1， 2， 3， 6-四氢-嘌呤-7-基)_乙酰胺(396):
<formula>formula see original document page 123</formula>
通过一般操作B由101 (506 mg，2. 1 mmol)和106 (320 |uL，2. 1 mmol) 制备化合物396 (490 mg， 56%)。 MS (APCI): m/z 410 [M+H]+。
N-[2-(4-二曱氨基苯基)-乙基]-2-(l， 3-二曱基-2， 6-二氧代 -l， 2， 3， 6-四氢嘌呤-7-基)-乙酰胺(397):
通过一般操作B由101 (507 mg， 2. 1 mmol)和107 (350 pL， ~2. 2 mmol)制备化合物397 (610 mg， 75%)。 MS(APCI): m/z 385 [M+H]+。
2-(1， 3- 二甲基-2， 6- 二氧代-1， 2， 3， 6-四氢嘌呤-7-基)-N- [2- (4-甲氧基-苯基)-乙基]-乙酰胺(261)<formula>formula see original document page 124</formula>
通过一般操作B由101 (1. 01 g,4. 2 mmol)和108 (630 pL,4. 3 mmol) 制备化合物261 (820 mg， 52%)。 MS(APCI): m/z 372 [M+H]+。
2-(l， 3- 二甲基-2， 6- 二氧代-1， 2， 3， 6-四氢噤呤-7-基)-N- [ 3- (4-甲氧基-苯基)-丙基]-乙酰胺(4 01):
<formula>formula see original document page 124</formula>
通过一般操作B由101 (506 mg, 2. 1 mmol)和109 (360 pL， ~2. 1 mmol)制备化合物401 (495 mg, 60%)。 MS(APCI): m/z 386 [M+H]+。 对(:19}123&04的计算值:C， 59.21; H， 6.01; N， 18.17;测定值C， 59. 37; H， 6. 06; N， 18. 18。
2-(l, 3- 二甲基-2， 6- 二氧代-1， 2， 3， 6-四氢嘌呤-7-基)-N- [2- (3-曱基-苯基)-乙基]-乙酰胺(407):
OH
CHCI^CH3CN O
DMAP
407
通过一般操作B由101 (508 mg, 2. 1 ramol)和110 (290 pL, 2. 1. mmol)制备化合物407 (494 mg， 65%)。 MS(APCI): m/z 356 [M+H]+。 对d8HnN力3的计算值:C, 60. 83; H, 5. 96; N， 19. 71;测定值C， 61. 09: H， 6. 03; N， 19. 76。
2- (1， 3- 二甲基-2， 6- 二氧代-1， 2， 3， 6-四氢嘌呤-7-基)-N- [2- (3-曱氧基-苯基) -乙基]乙酰胺(408):
通过一般操作B由101 (502 g， 2. 1 mmol)和111 (310 |uL, 2. 1隱l) 制备化合物4Q8 (462 mg, 59%) 。 MS (APCI): m/z 372 [M+H]+。对C18H21N504 的计算值C， 58.21; H, 5.70; N， 18.86;测定值C, 57.95; H, 5. 78; N， 18. 61。
N-[2-(4-氰基苯基)- 乙基]-2-(l，3-二曱基-2，6-二氧代 2,3， 6-四氢-嘌呤-7-基)-乙酰胺(409) <formula>formula see original document page 126</formula>2-(4-溴苯基)乙基氨基甲酸叔丁酯(113)
向预冷却的112(2.0 g， 10 mmol)在THF(IO mL)中的0。C溶液中 滴加(Boc)20(2. 2 g, 10 mmol)。将该反应混合物在室温下搅拌过夜。 将其在真空中浓缩而得到113(3 g， 100°/。)，为白色固体，将其不经进 一步纯化用于下一步。
2-(4-氰基苯基)乙基氨基曱酸叔丁酯(114)
在&环境中将化合物113 (530 mg, 1. 8 mmol)溶于干,(17 mL)。 加入Zn(CN)2(416 mg, 3.6 mmol)和Pd (PPh3) 4 (200 mg， 0.18 mmol)。 搅拌该反应混合物并且在樣"皮仪器(CEM Discover )中在150。C下加热 20分钟且然后在真空中浓缩该反应混合物。通过硅胶快速色镨法纯化 残余物，用EtOAc/己烷(20-80%)洗脱而得到114 (540 mg， 31%),为 白色固体。MS(APCI,负)m/z 245 [M-H]+。
4-氰基苯乙胺(115)
将化合物114 (308 mg， 1.25 mmol)溶于DCM(4 mL)并且在冰-水 浴中冷却该溶液。然后加入TFA(3. 5 mL)并且将该混合物在室温下搅 拌15分钟。在真空中浓缩该反应混合物并且将残余物溶于EtOAc(50 mL)。用LC03(饱和，3x)，盐水洗涤该溶液，干燥并且浓缩而得到 115(175 mg， 95%),为淡黄色油状物。MS(APCI): m/z 147 [M+H]+。
N-[2-(4-氰基苯基) - 乙基]-2-(1，3-二曱基-2，6-二氧代 -l, 2， 3， 6-四氢-嘌呤-7-基)乙酰胺(409)
按照一般操作B由101 (300 mg，l. 3 mmol)和115(175 mg，l. 2 mmol) 制备化合物409 (93 mg， 21%)。 MS(APCI): m/z 367 [M+H] +。对 C18H18N6O3.0. 04EtOAc.0. 1H20的计算值C， 58.68; H， 5.02; N， 22.61; 测定值C， 58.75; H， 5.01; N， 22.46。
N- (2-甲氧基苯乙基)-2- (1， 3-二甲基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四 氢噤呤-7-基)乙酰胺(403):
<formula>formula see original document page 127</formula>
在&环境中将化合物101 (600 mg， 2.5 mmol)与HATU(1.14 g， 3.0 mmol)在20 mL DMF中混合并且在室温下搅拌20分钟。然后加入 化合物116 (0. 36 mL， 2. 5 mmol)。将所得混合物搅拌过夜且然后加入 乙酸乙酯(100 mL)。用水(3 x 80 mL)和盐水(80 mL)洗涤所得溶液并 且用Na2S0,干燥。在干燥过程中形成一定固体沉淀，加入甲醇(10mL) 以便溶解该沉淀且然后过滤该溶液。在真空中浓缩滤液并且通过40 g 硅胶快速色i普法纯化固体残余物，用EtOAc/己烷作为洗脱剂。将纯化 的产物与乙醚(25mL)—起研磨并且过滤而得到403，为白色固体(224 mg， 24%)。 MS(APCI): m/z 372 [M+H]+。对C18H21N504的计算值:C， 58.21; H， 5.70; N， 18.86;测定值C， 58.26; H， 5. 73; N， 18.74。
N-(2-氟苯乙基)-2-(1， 3-二甲基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氢噪
呤-7-基)乙酰胺(404)<formula>formula see original document page 127</formula>在&环境中将化合物101 (600 mg, 2.5 mmol)与HATU(1.14 g， 3. 0 mmol)在20 mL DMF中混合并且在室温下搅拌20分钟。加入化合
物117 (Q. 33 mL， 2. 5 mmol)。将所得混合物搅拌过夜。加入EtOAc (100 mL)并且用水(3 x 80 mL)和盐水(80 mL)洗涤所得溶液，用Na2S04干燥 并且过滤。在真空中浓缩滤液并且通过40 g硅胶快速色镨法纯化固体 残余物，用EtOAc/己烷洗脱。将纯化的产物与乙醚(30 mL)—起研磨 并且过滤而得到404，为白色固体(281mg， 31°/。)。 MS(APCI): m/z 360 [M+H]+。对C17H18FN504 .0. 3H20的计算值C， 55. 98; H, 5. 14; N， 19. 20; 测定值C, 55.87; H, 5.07; N， 19.13。
N-(2-氯苯乙基)-2-(1， 3-二甲基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氢噤 呤-7-基)乙酰胺(405)
<formula>formula see original document page 128</formula>
在&环境中将化合物101 (600 mg， 2.5 mmol)与HATU(1.14 g， 3.0 mmol)在20 mL DMF中混合并且在室温下搅拌20分钟。加入化合 物118 (Q. 35 mL， 2， 5 mmol)。将所得混合物搅拌过夜。加入Et0Ac (100 mL)并且用水(3 x 80 mL)和盐水(80 mL)洗涤所得溶液，用Na2S(^干燥 并且过滤。在真空中浓缩滤液并且通过40 g硅胶快速色语法纯化固体 残余物，用EtOAc/己烷洗脱。将纯化的产物与MeOH(15 mL)—起研磨 并且过滤而得到405，为白色固体(270 mg， 28%)。 MS(APCI): m/z 376 [M+H]+。对(:171118(:1&03的计算值C， 54.33; H， 4.83; N， 18.64; Cl, 9.43;测定值C， 54.57; H, 4.80; N3 18.66; Cl， 9.52。
N- (2-甲基苯乙基)-2- (1， 3-二甲基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-嘌呤-7-基)乙酰胺(406):
四氢
<formula>formula see original document page 128</formula>
在N2环境中将化合物101 (600 mg, 2.5 mmol)与HATU(1.14 g， 3. 0 mmol)在20 mL DMF中混合并且在室温下搅拌20分钟。加入化合 物119 (338 mg， 2.5 mmol)。将所得混合物搅拌过夜。加入乙酸乙酯 (100 mL)并且用水(3 x 80 mL)和盐水(80 mL)洗涤所得溶液，用Na2S04 干燥并且过滤。在真空中浓缩滤液并且通过40 g硅胶快速色镨法纯化 固体残余物，用EtOAc/己烷洗脱。将纯化的产物与乙醚(3t) mL)—起 研磨并且过滤而得到406，为白色固体(290 mg， 32%)。 MS (APCI): m/z 356 [M+H]+。对(:1811211^03的计算值C， 60.83; H， 5.96; N， 19.71; 测定值C， 60. 85; H， 6.01; N， 19.74。
N- (4-异丙基苯基)-2- (l-曱基-2, 6-二氧代-1， 2， 3， 6-四氢嘌呤 -7-基)乙酰胺(391)
(l-甲基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氢-嘌呤-7-基)-乙酸乙酯 (121)
向1-曱基黄嘌呤(120, lg， 6. 01 mmol)在DMF中的溶液加入碳酸 钾(O. 91 g， 6.6 mmol)并且将该反应混合物加热至90 。C且搅拌1小 时。然后在45分钟内向反应中滴加ClCH2COOEt(0. 36 g, 3.0 mmol) 在DMF中的溶液。在搅拌另外的15分钟后，将该反应体系冷却至室温 并且倾入水冷的1N HC1(50 ml)。然后用氯仿(50 x 2 ml)萃取该反应 体系。用水(IOO mL)洗涤合并的有机层，用Na2SO^干燥并且在真空中 浓缩。向所得固体中加入在己烷中的30 %二氯甲烷(400 mL)并且将所 得混合物搅拌15分钟且过滤而得到化合物121,为黄色固体(0.6 g，40%)。 MS(APCI): m/z 253.32 [M+H]+。
(l-甲基-2， 6-二氧代-1， 2， 3， 6-四氢-嘌呤-7-基-乙酸(122) 将酯121(0.6 g， 2.4 mmol)溶于2N HC1 (25 mL)并且回流2小时。 将该反应混合物冷却至O'C且然后温至rt。过滤沉淀，用乙醚'冼，涤并 且干燥而得到白色固体122 (0. 23， 45 %)。MS(APCI):m/z 224. 2 [M+H]+。
N-(4-异丙基苯基)-2-(l-曱基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氢嘌呤 -7-基)乙酰胺(391)
向0 。C的酸122(0.2 g， 0.89 mmol)在氯仿(35 mL)中的溶液中 加入草酰氯(O. 67 g， 5.3 mmol)和催化量的DMF。将该反应体系在室 温下搅拌2小时且然后在真空中浓缩。将所得物质溶于CHCl3(30mL)， 冷却至(TC并且加入4-异丙基苯胺并且将该反应体系搅^半过夜，同时 温至rt。用CHC13(50 mL)稀释该反应混合物并且用1 N HC1 (50 mL) 洗涤。用水(75mL)洗涤合并的有机层，用Na2S(h干燥，在真空中浓缩 并且通过珪胶快速色i普法纯化粗产物，用EtOAc/己烷和EtOAc/MeOH 洗脱而得到391 (0. 089g， 33%)，为白色固体。MS(APCI): m/z 342.3 [M+H]+。对C17H19N5Or0. 28 H20的计算值C， 58.94; H， 5.69; N， 20.22; 测定值C, 58.94; H， 5.67; N， 19.78。
2- (1， 3-二曱基-2， 6-二氧代-1， 2， 3， 6-四氢嘌呤-7-基)一N- (4-异 丙基苯基)-2-甲基丙酰胺(387):
<formula>formula see original document page 130</formula>2-(1， 3-二甲基-2， 6-二氧代-l， 2， 3, 6-四氢嘌呤-7-基)-2-甲基 丙酸乙酯(123)
向茶碱(101， 2g， 11. 10mmol)在DMF中的溶液中加入碳酸钾(1. 84 g， 13.32 mmol)并且将该反应体系加热至90 "C且搅拌1小时。然后 在10分钟内滴加在DMF中的2-溴异丁酸乙酯(2. 59 g， 13. 32 mmol)。 将所得反应混合物在90。C下搅拌16小时。将该反应体现冷却至rt, 倾入水冷的IN HC1 (50 ml)并且用氯仿(100 x 2 ml)萃取。用水(100 mL) 洗涤合并的有机层，用Na2S0,干燥并且在真空中浓缩。获得粗的123, 为淡黄色固体(l.l g， 34%)。 MS(APCI): m/z 295.5 [M+H]+，并且不 进一步纯化下一步。
2-(1， 3-二甲基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氢-嘌呤-7-基)-2-甲基 丙酸(124)
将酯123(1 g， 3.39 minol)溶于2N HC1 (25 mL)并且将该反应体 系回流30小时。将该反应体系冷却至O TC且然后温至rt。过滤所得 沉淀，用乙醚洗涤且干燥至得到124，为白色固体(O. 55, 55.5 %)。 MS(APCI): m/z 267.4 [M+H〗+。
2-(1, 3-二甲基-2， 6-二氧代-l， 2, 3， 6-四氢-嘌呤-7-基)N-(4-异 丙基-苯基)-异丁酰胺(387)
在0 "C下向酸124(0. 2 g， 0.75 mmol)在CHC13 (30 mL)中的溶液 中加入草酰氯(O. 57 g, 4.5 mmol)和催化量的DMF。将所得溶液在室 温下搅拌2小时并且在真空中浓缩且然后再溶于CHC1"将该混合物冷 却至0'C且然后加入4-异丙基苯胺并且将该反应混合物搅拌过夜，同 时温至rt。用CHC13(30 mL)稀释该反应混合物并且用1 N HC1(50 mL) 洗涤。用水(75mL)洗涤合并的有机层，用Na2S04干燥并且在真空中浓 缩且通过硅胶快速色i瞽法纯化津且产物，用EtOAc/己烷和EtOAc / MeOH 洗脱而得到387，为白色固体(O. 19g， 58.8%)。 MS(APCI): m/z 384. 3 [M+H]+。对0;2。112^03的计算值C， 62.65; H， 6.57; N， 18.26;测定
值C， 62. 40; H, 6. 51; N， 18. 15。
N-(4-异丙基苯基)-2-(3-曱基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氢嘌呤 -7-基)乙酰胺(388):
<formula>formula see original document page 132</formula>
在0 。C下向酸125(0. 5 g, 2. 23 mmol)在CHCh(50 mL)中的溶液 中加入草酰氯(l. 69 g， 13. 3mmol)和催化量的DMF。将所得溶液在rt 下搅拌2小时，在真空中浓缩且再溶于CHC13。将该溶液冷却至(TC且 然后加入4-异丙基苯胺并且将该反应混合物搅拌过夜，同时温至rt。 用CHC13(30 mL)稀释该反应混合物并且用1 N HC1(50 raL)洗涤。用水 (75 iriL)洗涤合并的有机层，用Na2S04干燥并且在真空中浓缩且通过硅 胶快速色镨法纯化粗产物，用EtOAc/己烷和EtOAc / MeOH洗脱而得 到388,为白色固体(0.23g, 31 %)。 MS(APCI): m/z 342.2 [M+H〗+。 对C17H19N3O3.0. 4 H20的计算值:C， 58.58; H， 5.73; N， 20.09;测定 值C, 58. 72; H， 5. 63; N, 19. 80。
N-(4-环戊基苯基)-2-(3-曱基-2，6-二氧代-1，2， 3，6-四氢嘌呤 -7-基)乙酰胺(394) ， N- (4-环戊基苯基)-2- (1， 3-二曱基-2， 6-二氧代 -1，2，3，6-四氢嘌呤-7-基)乙酰胺(395)和N-(2-环戊基苯 基)-2- (1， 3- 二曱基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氢嘌呤-7-基)乙酰胺 (398):<formula>formula see original document page 132</formula>
1- 环戊基-2-硝基苯(127a)和l-环戊基-4-硝基苯(127b) 向在IO 。C下搅拌的环戊基苯126(5g, 34. 2)在乙酐(50 mL)中的
溶液中滴加70%硝酸(2. 99 g， 34. 2mmo1)。将该黄色均匀混合物在IO 。C下搅拌l小时。然后将该反应体系倾入水，用冷的浓NaOH中和并且 用乙醚萃取几次。将乙醚层合并并且用过量的碳酸钾水溶液(IOO mL) 洗涤，用Na2S(h千燥并且在真空中浓缩而得到化合物127a和127b的 混合物(6. 4 g)。将该混合物不经进一步纯化用于随后的步骤。
2- 环戊基苯胺(128a)和4-环戊基苯胺(128b)
向粗产物127a和127b(2. 5g)在EtOH(100mL)中的溶液中加入10 % Pd/C(0. 9 g， 3.5 mol %)并且将该反应体系在氢气嚢下搅拌3小时。 然后通过C盐过滤该反应体系，在真空中浓缩并且通过硅胶快速色i普 法纯化粗产物，用EtOAc/己烷洗脱而得到邻位-化合物128a(0. 5 g， 23.8%)。 MS(APCI): m/z 162. 3 ([M+H]+)和对位-化合128b (1 g， 47.6 %)。 MS(APCI): m/z 162.3 [M+H]+。
N-(4-环戊基苯基)-2-(3-甲基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氳嘌呤 -7-基)乙酰胺(394)
在0 。C下向酸129(2.1 mmol)在CHC13(10 mL)和CH3CN(10 mL)中 的溶液中加入草酰氯(12. 6 mmol)和催化量的DMF。将所得溶液在rt 下搅拌2小时，在真空中浓缩。奸残余物再溶于CHCl3并且冷却至0 。C。向该溶液中加入环戊胺128a并且将该反应体系在rt下搅拌过夜。 然后用CHC13(30 mL)稀释该反应体系并且用1 N HC1 (50 mL)洗涤。用 水(75mL)洗涤合并的有机层，用Na2S0,干燥并且在真空中浓缩。通过 硅胶快速色语法纯化产物，用EtOAc/己烷和EtOAc/MeOH洗脱而得到 394，为淡黄色固体(22 %)。 mp: 295-300 。C 。 MS(APCI): m/z 368.2 [M+H]+。对C19H21N5O3.0. 45 H20的计算值C， 60, 77; H， 5. 88; N， 18. 65; 测定值C， 61. 07; H， 5. 85; N， 18. 23。
N-(4-环戊基苯基)-2-(1， 3-二甲基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氩 嘌呤-7-基)乙酰胺(395)和N-(2-环戊基苯基)-2-(1， 3-二甲基-2，6-二氧代-1， 2， 3， 6-四氢嘌呤-7-基)乙酰胺(398)
在0 'C下向酸130(2. 1 mmol)在CHC13(10 mL)和CH3CN(10 mL)中 的溶液中加入草酰氟(12.6 mmol)和催化量的DMF。将所得溶液在rt 下搅拌2小时并且在真空中浓缩。将残余物再溶于CHCh并且冷却至0 。C。向该溶液中加入环戊胺128b并且将该反应体系在rt下搅拌过夜。 然后用CHC13(30 mL)稀释该反应体系并且用1 N HC1 (50 mL)洗涤。用 水(75 mL)洗涤合并的有机层，用Na2S04干燥并且在真空中浓缩。通过 硅胶快速色语法纯化产物，用EtOAc/己烷和EtOAc/MeOH洗脱而得到 395(31 %)，为淡红色固体，Mp: 260—262 'C 。 MS (APCI): m/z 382.2 [M+H]+，对C2QH23N5O3.0. 1H20+0. 15 EtOAc的计算值C， 62. 41; H， 6. 20; N， 17.67;测定值C， 62.47; H， 6.20; N， 17.38;和398 (63%)，为 淡棕色固体，Mp: 201-202 °C ， MS(APCI): m/z 382.2 [M+H]+，对的 计算值C2QH23N503: C， 62.98; H, 6,08; N， 18.36;测定值C， 62.94; H， 6. 10; N, 18. 33。
N-(4-异丙基苯基)-N-甲基-2-(1-甲基-2， 6-二氧代-1， 2， 3， 6-四 氢嘌呤-7-基)乙酰胺(392):
O八N, N 120(COCl)a, CHCIa CHaCN H DMF
在O'C下向酸120 (0. 25 g， 1. 11画l)在CHCl3(20mL)和CH3CN(20 mL)中的溶液中加入草酰氯(O. 84 g, 6.69 mmol)和催化量的DMF。将 所得溶液在rt下搅拌2小时并且在真空中浓缩。将残余物再溶解于 CHCh并将所得溶液冷却到(TC。向该混合物中加入N-甲基-4-异丙基 苯胺(O. 29g， 2 mmol)并且将该反应体现搅拌过夜，同时温至rt。然 后用CHCh(30 mL)稀释该反应体系并且用1 N HC1(50 mL)洗涤。用水 (75mL)洗涤合并的有机层，用Na2S04干燥并且在真空中浓缩。通过硅
胶快速色谦法纯化产物，用EtOAc/己烷和EtOAc/MeOH洗脱而得到 392 (0. 2g， 51 °/。)，为淡棕色固体，mp: 271-273 T. MS(APCI): m/z 356.2 [M+H]+,对C18H21N5O3.0. 35H20的计算值:C， 59.77; H， 6.05; N, 19.36;测定值C， 59.77; H， 6.07; N， 19.29。
2- (1， 3-二甲基-2, 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氢嘌呤-7-基)-N- (4-异 丙基苯基)-N-曱基乙酰胺(393):
在0 。C下向酸101 (0. 5 g， 2, 1 inmol)在CHC13(30 niL)和CH3CN(30 mL)中的溶液中加入草酰氯(l. 59 g， 12.6 mmol)和催化量的DMF。将 所得溶液在rt下搅拌2小时并且在真空中浓缩。将所得残余物再溶于 CHCl3并且冷却至0'C。向该混合物中加入N-甲基-4-异丙基苯胺(O. 78 g， 5.2 mmol)并且将该反应体系搅拌过夜，同时温至rt。然后用 CHCl3(30mL)稀释该反应体系并且用1 N HC1 (50 mL)洗涤。用水(75mL) 洗涤合并的有机层，用Na2S04干燥并且在真空中浓缩。通过硅胶快速 色镨法纯化产物，用EtOAc/己烷和Et0Ac/Me0H洗脱而得到393,为淡 黄色固体(0. 65g， 84.4%), mp: 231-233 。C. MS(APCI): m/z 370.2 [M+H]+，对C19H23N5O3.0. 1H20的计算值C， 61.47; H， 6.30; N， 18.87; 测定值C， 61.28; H， 6.19; N， 18.57。
2-(2， 6-二氧代-1， 2, 3， 6-四氢嘌呤-7-基)-N-(4-异丙基苯基)乙 酰胺(399 ):<formula>formula see original document page 136</formula>
(2， 6-二氧代-1， 2， 3， 6-四氢-嘌呤-7-基)-乙酸(131)
将黄嘌呤(4. 8 g， 31.5 mmol)悬浮于水和2 M氢氧化钠(50 mL) 中并且将所得混悬液搅拌30分钟。然后加入氯乙酸(3g， 31.5mmo1)。 将所得溶液回流5小时，冷却至室温并且搅拌过夜。过滤沉淀且然后 用12 M HCl酸化该水溶液(pH 3)。过滤所得沉淀且然后用热EtOH洗 涤，且随后用热己烷洗涤而得到131和132粗产物的混合物。向这些 粗产物中加入水(65 mL)并且将所得混合物回流30分钟。将该溶液进 行热滤并且收集沉淀。然后用热乙醇和己烷洗涤沉淀而得到131，为 白色固体(O. 9g， 13. 4 %)。
2-(2， 6-二氧代-1， 2， 3， 6-四氢-嘌呤-7-基)-N- (4-异丙基-苯 基)-乙酰胺(399)
向O'C的酸131(0.05 g， 0.23 mmol)在DMF/DMS0(1: 1 ， 10 mL) 中的溶液中加入HATU(O. 13g, 0.35 mmol)。将该反应混合物温至rt 并且搅拌另外的15分钟。然后将该反应体系冷却回G"C并且加入4-异丙基苯胺(0.042 g， 0.31 mmol)。然后将该反应体系在室温下搅拌 过夜。蒸发DMF并且加入水。用乙酸乙酯洗涤获得的沉淀且然后溶于 乙醇并且回流20分钟。热滤该溶液并且在真空中浓缩而得到399，为 白色固体(O. 025 g， 32.4%)。 mp: 320-325 。C 。 MS (APCI): m/z 326. 1 [M-H]+，对d6H"Ns0r0. 41120的计算值C， 57.44; H， 5.36; N， 20. 93; 测定值C， 57.43; H， 5.40; N， 20. 68。
2- (1， 3- 二曱基-2， 6- 二氧代-1， 2， 3， 6-四氢嘌呤-7-基)-N-(4-(2-羟基丙-2-基)苯基)乙酰胺(402):
(E) -1- ((4-溴苯基)二氮烯基)吡咯烷(134) 向O'C的4-溴苯胺(133, 10 g， 58.1 mmol)在浓HC1(11.7 mL) 中的溶液中滴加NaN02(4 g， 57.9 mmol)在H20(5 mL)中的溶液。然后 在添加后在O'C下将该反应体系搅拌另外的IO分钟。向吡咯烷(4.54 g, 63. 9 mmol)在1M KOH(50 mL)中的溶液中一次加入所得重氮盐。将 反应体系在0-10。C搅拌30min。然后过滤所得沉淀并且从无水乙醇(50 mL)中重结晶而得到化合物134(6. 8g， 46.2%),为淡黄色晶体。
2- (4-氨基苯基)丙-2-醇(135)
向-78。C的化合物134(lg， 3. 95 mmol)在乙醚(20 mL)中的溶液中 加入仲-BjiLi(在己烷中，1.4M, 0.62g， 9.67 mmol)。将所得溶液在 -78 。C下搅拌30分钟，随后在-78"C下滴加丙酮(0.91 g， 15. 81 mmol)。 将该反应混合物温至室温下过夜。使该反应混合物在水与乙醚之间分 配，并且将各层分开。用乙醚再萃取水层。合并醚层并且在真空中浓 缩而得到粗的135 (0.33 s， 55.9 %)，将其不经进一步纯化用于下一 步。
2-(1， 3- 二甲基-2， 6- 二氧代-1， 2， 3， 6-四氢-嘌呤-7-基)-N- [4- (1-羟基-l-曱基-乙基)-苯基]-乙酰胺(402)
向O'C的酸101(0.32 g， 1.34 mmol)在DMF/DMS0 (1: 1 ， 20 mL) 中的溶液中加入HATU(O. 0. 76g， 2. Olmmol)。然后将该反应体系在室 温下搅拌另外的15分钟。将该溶液冷却至0。C并且加入胺135 (0. 30 g， 2. Olramol)。然后将该反应体现在rt下搅拌过夜。在真空中浓缩DMF 并且将水加入到该反应体系中。用EtOAc萃取水层。然后再用水洗涤 乙酸乙酯层并且在真空中浓缩有机层。通过硅胶快速色诿法纯化产物， 用EtOAc/己烷和EtOAc/MeOH洗脱而得到402，为纯的淡棕色半固体 (0. 086 g， 17. 5%) 。MS(APCI): m/z 372. 2 [M-H]+，对C18H21N5O4.0. 35EtOAc 的计算值C， 57.93; H， 5.96; N, 17.41;测定值C， 58.36; H， 6.14; N， 16.96。
参考文献的引入
将本文提及的所有公开文献和专利完整地引入本文作为参考，就 如同将公开文献或专利各自特别和分别引入本文作为参考相同。
等效方案
本领域技术人员公认或能够不使用超过常规的实验确定许多与本 文所述本发明的具体实施方案等效的方案。指定这类等效方案包括在 下列权利要求中。
权利要求
1. 调节细胞中的TRPA1功能的方法，包括对该细胞给予有效量的小分子，该小分子以低于10微摩尔的IC50抑制TRPA1介导的电流，由此调节细胞中的TRPA1功能。
2. 预防、治疗或緩解与TRPA1功能相关或降低的TRPA1活性能减 轻严重性的疾病或病症的症状的方法，包括对有此需要的受试者给予 以低于IO微摩尔的ICs。抑制TRPA1功能的治疗有效量的小分子。
3. 权利要求2所迷的方法，其中所述的TRPA1功能为内向TRPA1-介导的电流，并且其中所述的小分子以低于IO微摩尔的IC5。抑制所述 的内向TRPA1-介导的电流。
4. 权利要求2所述的方法，其中所述的TRPA1功能为外向TRPA1-介导的电流，并且其中所述的小分子以低于IO微摩尔的IC5。抑制所述 的外向TRPAl-介导的电流。
5. 权利要求2所述的方法，其中所述的TRPA1功能为TRPA1-介 导的电流，并且其中所述的小分子以低于IO微摩尔的ICs。抑制所述的 TRPA1-介导的电流。
6. 权利要求2所述的方法，其中所述的TRPA1功能为TRPA1-介 导的离子流，并且其中所述的小分子以低于IO微摩尔的ICs。抑制所述 的TRPAl-介导的离子流。
7. 权利要求5所述的方法，其中所述的小分子以低于5微摩尔的 ICs。抑制所述的TRPAl-介导的电流。
8. 权利要求5所述的方法，其中所述的小分子以低于l微摩尔的 ICs。抑制所述的TRPAl-介导的电流。
9. 权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述的小分子对 TRPA1功能的抑制至少IO倍强于对线粒体单向转运体功能的抑制。
10. 权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述的小分子对 TRPA1功能的抑制至少10倍强于对NaV 1.2功能的抑制。
11. 权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述的小分子对 TRPA1功能的抑制至少10倍强于对TRPV3功能的抑制。
12. 权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述的小分子以大 于IO微摩尔的ICs。抑制HERG介导的电流。
13. 权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述的小分子以大 于IO微摩尔的IC5。抑制TRPV3介导的电流。
14. 权利要求1-13中任一项所述的方法，其中在以10微摩尔浓 度给药时，所述的小分子基本上不会抑制TRPV1介导的电流。
15. 权利要求1-14中任一项所述的方法，其中在以10微摩尔浓 度给药时，所述的小分子基本上不会抑制HERG介导的电流。
16. 权利要求1-15中任一项所述的方法，其中在以10微摩尔浓 度给药时，所述的小分子基本上不会抑制TRPV3介导的电流。
17. 权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述的小分子以低 于其抑制TRPV5功能，TRPV6功能，TRPC6功能，线粒体单向转运体功 能，NaV1.2， CaV1.2功能，CaV3. 1功能和HERG功能中的一种或多种 的ICs。至少一个数量级的ICs。抑制TRPA1功能。
18. 权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述的小分子以该 小分子抑制TRPV1， TRPV2， TRPV3, TRPV4或TRPM8中的至少一种或多 种的ICs。的至少一半的ICs。抑制TRPA1功能。
19. 权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所迷的小分子以该 小分子抑制TRPV5功能，TRPV6功能，TRPC6功能，线粒体单向转运体 功能，CaV 1.2功能，CaV 3. 1功能，NaV 1. 2和HERG功能中的至少 一种或多种的ICs。的至少一半的ICs。抑制TRPA1功能。
20. 权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所迷的小分子结合 TRPA1。
21. 权利要求1-20中任一项所述的方法，其中将所述的小分子提 供给细胞并且所述的细胞为感觉神经元。
22. 权利要求21所述的方法，其中所迷的感觉神经元存在于背根 神经节，三叉神经节或结节神经节中。
23. 权利要求2-22中任一项所述的方法，用于预防，治疗或緩解 疼痛或对触摸敏感症状。
24. 权利要求23所述的方法，其中所述的疼痛为口腔痛。
25. 权利要求2-23中任一项所述的方法，其中所述的小分子具有 抑制TRPA1的IC5。，并且以该浓度给药时，所述的小分子不会在患者 中产生QT间隔延长。
26. 权利要求23所述的方法，其中所述的疼痛为术后痛，癌性痛， 神经性疼痛或颞下颌痛。
27. 权利要求2-23中任一项所述的方法，用于预防、治疗或緩解 炎症症状。
28. 权利要求2-23中任一项所述的方法，用于预防、治疗或緩解 膀胱炎或肠易激综合征症状。
29. 权利要求2-23中任一项所述的方法，用于预防、治疗或緩解 选自糖尿病性神经病，银屑病，湿渗，皮炎，疱渗后神经痛(带状疱渗)， 偏头痛，失禁，发热，热潮红，骨关节炎，胰腺炎，慢性区域性疼痛 综合征，类风湿性关节炎和咳嗽的病症或疾患的症状。
30. 权利要求2-23中任一项所述的方法，用于预防、治疗或緩解 失禁症状。
31. 权利要求30所述的方法，其中所述的失禁完全或部分因妊 娠，前列腺扩大或前列腺增生所致。
32. 权利要求1-31中任一项所述的方法，其中将所迷的小分子与 抗炎药，抗痤疳药，抗皱紋药，抗瘢痕形成药，抗牛皮痺药，抗增殖 药，抗真菌药，抗病毒药，杀菌剂，抗偏头痛药，角质层分离剂或毛 发生长抑制剂中的一种或多种共同给药。
33. 权利要求1-32中任一项所述的方法，其中将所述的小分子与 TRPV1抑制剂，TRPV3抑制剂，TRPV4抑制剂或TRPM8抑制剂中的一种 或多种共同给药。
34. 权利要求1-33中任一项所述的方法，其中通过全身或局部给 予所述的小分子。
35. 权利要求1-33中任一项所述的方法，其中通过口服给予所述 的小分子。
36. 权利要求1-35中任一项所述的方法，其中TRPA1功能为 TRPAl-介导的电流。
37. 权利要求1-35中任一项所述的方法，其中TRPA1功能为 TRPAl-介导的离子流。
38. 治疗或预防涉及TRPA1活化或降低的TRPA1活性能减轻严重 性的疾患的方法，包括给予有效量的式I的化合物或其盐，或该化合 物或其盐的溶剂合物、水合物、氧化代谢物或前体药物其中W表示0或S,优选S;R每次出现时独立地表示H或低级烷基，优选H; IT表示取代或未被取代的烷基、或取代或未被取代的芳基； E表示羧酸(C02H)，酯或酰胺；且 Ar表示取代或未被取代的芳基环；且其中所述的化合物以低于10微摩尔的ICs。抑制TRPA1介导的电
39.治疗或预防涉及TRPA1活化或降低的TRPA1活性能减轻严重 性的疾患的方法，包括给予有效量的式II的化合物或其盐，或该化合 物或其盐的溶剂合物，水合物，氧化代谢物或前体药物 其中n为l-3的整数；且 R2表示取代基；且其中所述的化合物以低于1Q微摩尔的ICs。抑制TRPA1介导的电
40. 权利要求39所述的方法，其中R2表示任选取代的烷基，任 选取代的芳基，任选取代的杂芳基，任选取代的芳烷基，任选取代的 环烷基，任选取代的杂环基或任选取代的杂芳烷基。
41. 治疗或预防涉及TRPA1活化或降低的TRPA1活性能减轻严重 性的疾患的方法，包括给予有效量的式III的化合物或其盐，或该化 合物或其盐的溶剂合物、水合物、氧化代谢物或前体药物其中n为l-3的整数；且 l表示取代基；且其中所述的化合物以低于IO;微摩尔的ICs。抑制TRPA1介导的电
42.治疗或预防涉及TRPA1活化或降低的TRPA1活性能减轻严重 性的疾患的方法，包括给予有效量的式IV的化合物或其盐，或该化合 物或其盐的溶剂合物、水合物、氧化代谢物或前体药物其中Id每次出现时独立地表示H或低级烷基; R2的一次出现不存在且R2的一次出现为MmR3; R3表示取代或未被取代的芳基；M每次出现时独立地表示取代或未被取代的亚曱基，NR,， 0， S， S(0)或S(02)，优选进行选择，以便没有两个杂原子是彼此连接的；且 m为0-10的整数；且其中所述的化合物以低于10微摩尔的ICs。抑制TRPA1介导的电流。
43. 权利要求38-42中任一项所述的方法，其中所述的TRPA1介 导的电流为内向TRPAl介导的电流，且其中所述的化合物以低于10 微摩尔的ICs。抑制所述的内向TRPAl介导的电流。
44. 权利要求38-42中任一项所述的方法，其中所述的TRPAl-介 导的电流为外向TRPAl介导的电流，且其中所述的化合物以低于10 微摩尔的ICs。抑制所述的外向TRPAl-介导的电流。
45. 权利要求38-42中任一项所述的方法，其中所述的化合物还 以低于IO微摩尔的ICs。抑制TRPAl-介导的离子流。
46. 权利要求38-42中任一项所述的方法，其中所述的化合物以 低于5微摩尔的ICs。抑制所述的TRPAl-介导的电流。
47. 权利要求46所述的方法，其中所述的化合物以低于l微摩尔 的ICs。抑制所述的TRPA1-介导的电流。
48. 权利要求38-47中任一项所述的方法，其中所述的化合物对 所述的TRPA1介导的电流的抑制至少IO倍强于对线粒体单向转运体功 能的抑制。
49. 权利要求38-48中任一项所述的方法，其中所述的化合物对 所述的TRPA1介导的电流的抑制至少10倍强于对NaV 1. 2功能的抑制。
50. 权利要求38-49中任一项所述的方法，其中所述的化合物对 所述的TRPA1介导的电流的抑制至少IO倍强于对TRPVI功能的抑制。
51. 权利要求38-50中任一项所述的方法，其中所述的化合物对 所述的TRPA1介导的电流的抑制至少10倍强于对HBRG功能的抑制。
52. 权利要求38-51中任一项所述的方法，其中所述的化合物以 大于IO微摩尔的ICs。抑制HERG介导的电流。
53. 权利要求38-52中任一项所述的方法，其中所述的化合物以 大于IO微摩尔的ICw抑制所述的TRPV3介导的电流。
54. 权利要求38-53中任一项所述的方法，其中化合物在以10 微摩尔浓度给药时基本上不会抑制HERG介导的电流。
55. 权利要求38-54中任一项所述的方法，其中所迷的化合物在 以IO微摩尔浓度给药时基本上不会抑制TRPV3介导的电流。
56. 权利要求38-55中任一项所述的方法，其中所迷的化合物以 低于其抑制TRPV5功能，TRPV6功能，TRPC6功能，线粒体单向转运体 功能，NaV1.2， CaV1.2功能，CaV3. 1功能和HERG功能中的一种或多 种的ICs。至少一个数量级的IC5。抑制TRPA1介导的电流。
57. 权利要求38-56中任一项所述的方法，其中所述的化合物以 该化合物抑制TRPV1介导的电流，TRPV2介导的电流，TRPV3介导的电 流，TRPV4介导的电流或TRPM8介导的电流中的一种或多种的ICs。的 至少一半的ICs。抑制TRPA1介导的电流。
58. 权利要求38-57中任一项所述的方法，其中所述的化合物以 该化合物抑制TRPV5功能，TRPV6功能，TRPC6功能，线粒体单向转运 体功能，CaV1.2功能，CaV 3. l功能，NaVl. 2和HERG功能中的一种 或多种的ICs。的至少一半的ICs。抑制TRPA1介导的电流。
59. 权利要求38-58中任一项所述的方法，其中所述的化合物结 合TRPA1。
60. 权利要求38-59中任一项所述的方法，用于预防、治疗或緩 解疼痛或触摸敏感症状。
61. 权利要求60所述的方法，其中所述的疼痛为口腔痛。
62. 权利要求38-61中任一项所述的方法，其中所述的化合物具 有抑制TRPA1介导的电流的IC5Q，并且当以该浓度给药时，所述的化 合物不会在患者中产生QT间隔延长。
63. 权利要求60所述的方法，其中所迷的疼痛为术后痛，癌性痛， 神经性疼痛或颞下颌痛。
64. 权利要求38-62中任一项所述的方法，用于预防、治疗或緩 解炎症症状。
65. 权利要求38-62中任一项所述的方法，用于预防、治疗或緩 解膀胱炎或肠易激综合征症状。
66. 权利要求38-62中任一项所述的方法，用于预防、治疗或緩 解选自糖尿病性神经病，银屑病，湿渗，皮炎，疱渗后神经痛(带状疱 瘆)，偏头痛，失禁，发热，热潮红，骨关节炎，胰腺炎，慢性区域性 疼痛综合征，类风湿性关节炎和咳嗽的病症或疾患的症状。
67. 权利要求38-62中任一项所述的方法，用于预防、治疗或緩 解失禁症状。
68. 权利要求67所述的方法，其中所述的失禁完全或部分因妊 娠，前列腺扩大或前列腺增生所致。
69. 治疗疼痛的方法，包括向有此需要的患者给予有效量的式I 的化合物或其盐，或该化合物或其盐的溶剂合物、水合物、氧化代谢 物或前体药物其中W表示0或S，优选S;R每次出现时独立地表示H或低级烷基，优选H; R'表示取代或未被取代的烷基，或取代或未被取代的芳基； E表示羧酸(C02H),酯或酰胺；且 Ar表示取代或未被取代的芳基环；且其中所述的化合物以低于IO微摩尔的IC5o抑制TRPA1介导的电
70.治疗疼痛的方法，包括向有此需要的患者给予有效量的式II 的化合物或其盐，或该化合物或其盐的溶剂合物、水合物、氧化代谢 物或前体药物:其中n为l-3的整数；且 R2表示取代基；且其中所述的化合物以低于10微摩尔的ICs。抑制TRPA1介导的电流。
71. 权利要求70所述的方法，其中R2表示任选取代的烷基，任 选取代的芳基，任选取代的杂芳基，任选取代的芳烷基，任选取代的 环烷基，任选取代的杂环基或任选取代的杂芳烷基。
72. 治疗疼痛的方法，包括给予所需要的受试者有效量的式III 的化合物或其盐，或该化合物或其盐的溶剂合物、水合物、氧化代谢 物或前体药物其中n为1 - 3的整数；且 R2表示取代基；且其中所述的化合物以低于10微摩尔的ICs。抑制TRPA1介导的电流。
73.治疗疼痛的方法，包括给予所需要的受试者有效量的式IV 的化合物或其盐；或该化合物或其盐的溶剂合物、水合物、氧化代谢 物或前体药物:其中R:每次出现时独立地表示H或低级烷基； R2的一次出现不存在且Rz的一次出现为MraR3; R3表示取代或未被取代的芳基；M每次出现时独立地表示取代或未被取代的亚甲基，NR" 0， S， S(0)或S(02)，优选进行选择，以便没有两个杂原子是彼此连接的；且 m为0-10的整数；且其中所述的化合物以低于1Q微摩尔的IC5。抑制TRPA1介导的电
74.治疗失禁的方法，包括给予所需要的受试者有效量的式I的 化合物或其盐，或该化合物或其盐的溶剂合物、水合物、氧化代谢物 或前体药物其中W表示0或S,优选S;R每次出现时独立地表示.H或低级烷基，优选H;R'表示取代或未被取代的烷基或取代或未被取代的芳基； E表示羧酸(C02H)，酯或酰胺；且 Ar表示取代或未被取代的芳基环；且其中所述的化合物以低于10微摩尔的ICs。抑制TRPA1介导的电
75.治疗失禁的方法，包括给予所需要的受试者有效量的式II 的化合物或其盐，或该化合物或其盐的溶剂合物、水合物、氧化代谢物或前体药物其中n为1 - 3的整数；且 l表示取代基；且其中所述的化合物以低于10微摩尔的ICs。抑制TRPA1介导的电
76. 权利要求75所述的方法，其中R2表示任选取代的烷基，任 选取代的芳基，任选取代的杂芳基，任选取代的芳烷基，任选取代的 环烷基，任选取代的杂环基或任选取代的杂芳烷基。
77. 治疗失禁的方法，包括给予所需要的受试者有效量的式III 的化合物或其盐，或该化合物或其盐的溶剂合物、水合物、氧化代谢 物或前体药物其中n为1-3的整数；且 R2表示取代基；且其中所述的化合物以低于IO微摩尔的ICs。抑制TRPA1介导的电
78.治疗失禁的方法，包括给予所需要的受试者有效量的式IV 的化合物或其盐，或该化合物或其盐的溶剂合物、水合物、氧化代谢物或前体药物其中Ri每次出现时独立地表示H或低级烷基； R2的一次出现不存在且R2的一次出现为MR3; R3表示取代或未被取代的芳基；M每次出现时独立地表示取代或未被取代的亚曱基，NR!， 0， S， S(0)或S(02)，优选进行选择，以便没有两个杂原子是彼此连接的；且 m为0-10的整数；且其中所述的化合物以低于10微摩尔的ICs。抑制TRPA1介导的电
79.适用于人类患者或兽类应用的药物组合物，用于治疗或预防 涉及TRPA1活化或降低的TRPA1活性能减轻严重性的疾患，该药物组 合物包含有效量的式I的化合物或其盐，或该化合物或其盐的溶剂合 物、水合物、氧化代谢物或前体药物其中W表示0或S，优选S;R每次出现时独立地表示H或低级烷基，优选H; R'表示取代或未被取代的烷基或取代或未被取代的芳基; E表示羧酸(C02H)，酯或酰胺；且 Ar表示取代或未被取代的芳基环；且 其中所述的化合物以低于10微摩尔的ICs。抑制TRPA1介导的电流。
80.适用于人类患者或兽类应用的药物组合物，用于治疗或预防 涉及TRPA1活化或降低的TRPA1活性能减轻严重性的疾患，该药物组 合物包含有效量的式II的化合物或其盐，或该化合物或其盐的溶剂合 物、水合物、氧化代谢物或前体药物其中n为l-3的整数；且 R2表示取代基；且其中所述的化合物以低于10微摩尔的ICs。抑制TRPA1介导的电流。
81.适用于人类患者或兽类应用的药物组合物，用于治疗或预防 涉及TRPA1活化或降低的TRPA1活性能减轻严重性的疾患，该药物组 合物包含有效量的式III的化合物或其盐，或该化合物或其盐的溶剂 合物、水合物、氧化代谢物或前体药物O其中n为l-3的整数；且 Rs表示取代基；且其中所述的化合物以低于10微摩尔的ICs。抑制TRPA1介导的电
82.适用于人类患者或兽类应用的药物组合物，用于治疗或预防 涉及TRPA1活化或降低的TRPA1活性能减轻严重性的疾患，该药物组 合物包含有效量的式IV的化合物或其盐或该化合物，或其盐的溶剂合 物、水合物、氧化代谢物或前体药物Ri每次出现时独立地表示H或低级烷基； R2的一次出现不存在且R2的一次出现为MmR3; R3表示取代或未被取代的芳基；M每次出现时独立地表示取代或未被取代的亚甲基，NRi， 0， S， S(O)或S(O》，优选进行选择，以便没有两个杂原子是彼此连接的；且 m为0-10的整数；且其中所述的化合物以低于IO微摩尔的ICs。抑制TRPA1介导的电
83. TRPA1抑制剂在制备用于治疗或预防涉及TRPA1活化或降低 的TRPA1活性能减轻严重性的疾患的药剂中的应用，其中所述的TRPA1 抑制剂以式II或其盐，或该化合物或其盐的溶剂合物、水合物、氧化 代谢物或前体药物表示其中其中 n为13的整数；且 l表示取代基；且其中所述的化合物以低于10微摩尔的ICs。抑制TRPA1介导的电流o
84. 权利要求83所述的应用，其中R2表示任选取代的烷基，任 选取代的芳基，任选取代的杂芳基，任选取代的芳烷基，任选取代的 环烷基，任选取代的杂环基或任选取代的杂芳烷基。
85. 药物制剂，包含以低于IO微摩尔的ICs。抑制TRPA1介导的 电流的小分子；和药学上可接受的赋形剂或溶剂，其中以提供有效预 防、治疗或緩解在某些部分上依赖于患者TRPA1活性的疾病、病症或 疾患症状的用量的剂型提供活性剂，但该活性剂不会导致QT间隔延 长。
86. 以低于10微摩尔的IC5。抑制TRPA1介导的电流的小分子活性 剂在制备用于预防、治疗或緩解在某些部分上依赖于患者TRPA1活性 的疾病、病症或疾患症状的药剂中的应用。
87. 小分子活性剂在制备用于预防、治疗或緩解在某些部分上依赖 于患者TRPA1活性的疾病、病症或疾患症状的药剂中的应用，所述的 小分子活性剂以低于抑制TRPV5功能、TRPV6功能、线粒体单向转运 体功能、Cav2. l功能、CaV3. l功能、NaVl. 2功能和HERG功能中的一 种或多种的ICs。的至少一个数量级的ICs。抑制TRPA1介导的电流。
88. 小分子活性剂在制备用于预防、治疗或緩解在某些部分上依赖 于患者TRPA1活性的疾病、病症或疾患症状的药剂中的应用，所述的 小分子活性剂以IO微摩尔或IO微摩尔以下的ICs。抑制芥子油诱导的 TRPA1介导的电流。
89. 权利要求83-84或86-88中任一项的应用，用于制备预防、 治疗或緩解疼痛，触摸敏感性，炎症，失禁，发热，热潮红，膀胱炎, 肠易激综合征和/或咳嗽症状的药剂。
90. 权利要求89所述的应用，其中所述的疼痛为癌性痛。
91. 权利要求83-84或86-88中任一项的应用，用于制备抑制增 殖，由此预防、治疗或緩解癌症症状的药剂。
92. 权利要求91所述的应用，其中所述的癌症为脂肪肉瘤。
93. 权利要求83-84或86-92中任一项所述的应用，其中所述的 活性剂结合TRPA1。
94. 权利要求83-84或86-88中任一项的应用，用于制备预防、 治疗或緩解失禁症状的药剂。
95. 用于口服给药的镇咳组合物，包含以低于10微摩尔的IC5。 抑制TRPA1介导的电流的活性剂和基于水的液体或在口腔中可溶解的 固体形式的口服可接受的药用载体，该组合物选自糖浆剂，酏剂，混 悬液，喷雾剂，锭剂，咀嚼锭剂，粉末和咀嚼片。
96. 权利要求95所述的镇咳组合物，其中除所述的活性剂外，该 组合物还包括一种或多种用于治疗咳嗽、过敏反应或哞喘症状的另外 活性剂，这些活性剂选自抗组胺药，5-脂氧合酶抑制剂，白细胞三 烯抑制剂，H3抑制剂，p-肾上腺素能受体激动剂，黄嘌呤衍生物，oc-肾上腺素能受体激动剂，肥大细胞稳定剂，祛痰药，NK1， NK2和NK3 速激肽受体拮抗剂和GABAB激动剂。
97. 可计量剂量的气溶胶配药器，包括用于肺部或鼻部递送的气 溶胶药物组合物，该组合物包含以低于IO微摩尔的ICs。抑制TRPA1介 导的电流的活性剂。
98. 权利要求95所述的组合物，其包含在可计量剂量的吸入器、 千粉吸入器或空气喷射喷雾器中。
99. TRPA1抑制剂在制备用于治疗或预防疼痛的药剂中的应用， 其中所述的TRPA1抑制剂为以式I表示的化合物或其盐，或该化合物 或其盐的溶剂合物、水合物、氧化代谢物或前体药物其中W表示0或S，优选S; R每次出现时独立地表示H或低级烷基，优选H;r表示取代或未被取代的烷基或取代或未被取代的芳基；E表示羧酸(C02H)，酯或酰胺；且 Ar表示取代或未被取代的芳基环；且其中所述的化合物以低于10微摩尔的I C5。抑制TRPA1介导的电流 或TRPA1介导的离子流。
100. TRP A1抑制剂在制备用于治疗或预防疼痛的药剂中的应用， 其中所述的TRPAl抑制剂为以式II表示的化合物或其盐，或该化合物 或其盐的溶剂合物、水合物、氧化代谢物或前体药物其中n为1-3的整数；且 R2表示取代基；且其中所述的化合物以低于IO微摩尔的IC5。抑制TRPAl介导的电流 或TRPA1介导的离子流。
101. 权利要求100所述的应用，其中R2表示任选取代的烷基， 任选取代的芳基，任选取代的杂芳基，任选取代的芳烷基，任选取代 的环烷基，任选取代的杂环基或任选取代的杂芳烷基。
102. TRP A1抑制剂在制备用于治疗或预防疼痛的药剂中的应用， 其中所述的TRPA1抑制剂为以式III表示的化合物或其盐，或该化合 物或其盐的溶剂合物、水合物、氧化代谢物或前体药物 其中n为l-3的整数；且 R2表示取代基；且其中所述的化合物以低于10微摩尔的IC5Q抑制TRPA1介导的电流 或TRPA1介导的离子流。
103. TRPA1抑制剂在制备用于治疗或预防疼痛的药剂中的应用， 其中所述的TRPAl抑制剂为以式IV表示的化合物或其盐，或该化合物 或其盐的溶剂合物、水合物、氧化代谢物或前体药物其中K每次出现时独立地表示H或低级烷基；R2的一次出现不存在且R2的一次出现为MmR3;R3表示取代或未被取代的芳基；M每次出现时独立地表示取代或未被取代的亚曱基，NK， 0, S， S(O)或S(O》，优选进行选择，以便没有两个杂原子是彼此连接的；且 m为0-10的整数；且其中所述的化合物以低于10微摩尔的I C5o抑制TRPA1介导的电流 或TRPAl介导的离子流。
104. T R P A1抑制剂在制备用于治疗或预防失禁的药剂中的应用， 其中所述的TRPAl抑制剂为以式I表示的化合物或其盐，或该化合物 或其盐的溶剂合物、水合物、氧化代谢物或前体药物 其中W表示0或S，优选S;R每次出现时独立地表示H或低级烷基，优选H;IT表示取代或未被取代的烷基或取代或未被取代的芳基；E表示羧酸(C02H)，酯或酰胺；且Ar表示取代或未被取代的芳基环；且其中所述的化合物以低于IO微摩尔的ICs。抑制TRPA1介导的电流 或TRPA1介导的离子流。
105. T R P A1抑制剂在制备用于治疗或预防失禁的药剂中的应用， 其中所述的TRPA1抑制剂为以式II表示的化合物或其盐，或该化合物 或其盐的溶剂合物、水合物、氧化代谢物或前体药物(")其中n为1-3的整数；且 l表示取代基；且其中所述的化合物以低于10微摩尔的ICs。抑制TRPA1介导的电流 或TRPA1介导的离子流。
106. 权利要求105所述的应用，其中R2表示任选取代的烷基， 任选取代的芳基，任选取代的杂芳基，任选取代的芳烷基，任选取代 的环烷基，任选取代的杂环基或任选取代的杂芳烷基。
107. TRPA1抑制剂在制备用于治疗或预防失禁的药剂中的应用， 其中所述的TRPA1抑制剂为以式III表示的化合物或其盐，或该化合 物或其盐的溶剂合物、水合物、氧化代谢物或前体药物其中n为1-3的整数；且 l表示取代基；且其中所述的化合物以低于10微摩尔的I C5o抑制TRPA1介导的电流 或TRPA1介导的离子流。
108. TRPAl抑制剂在制备用于治疗或预防失禁的药剂中的应用， 其中所述的TRPAl抑制剂为以式IV表示的化合物或其盐或该化合物， 或其盐的溶剂合物、水合物、氧化代谢物或前体药物Ri每次出现时独立地表示H或低级烷基；R2的一次出现不存在且R2的一次出现为MmR3;R3表示取代或未被取代的芳基；M每次出现时独立地表示取代或未被取代的亚甲基，NRi， 0， S， S(O)或S(O》，优选进行选择，以便没有两个杂原子是彼此连接的；且 m为0-10的整数；且其中所述的化合物以低于10微摩尔的I C5。抑制TRP A1介导的电流 或TRPAl介导的离子流。
109. 分离的多肽，包含SEQ ID NO: l中所示的氨基酸序列。
110. 由包含SEQIDNO: 2中所示核苷酸序列的核酸序列编码的其中 分离的多肽。
111. 包含SEQIDNO: 2中所示核苷酸序列的分离的核酸。
112. 包含核普酸序列的分离的核酸，所述的核苷酸序列编码包含 SEQ ID NO: 1中所示氨基酸序列的多肽。
113. 表达载体，其在原核细胞或真核细胞中的至少一种中复制， 该载体包含权利要求111或112所述的核酸。
114. 细胞，包含权利要求113所述的表达载体并且表达所述的多肽。
115. 生产多肽的方法，包括在细胞培养基中培养权利要求114所 述的细胞以便表达所述的多肽。
全文摘要
本申请涉及用于治疗疼痛，失禁和其它病症的化合物和方法。
文档编号C07K14/705GK101384261SQ200680053268
公开日2009年3月11日 申请日期2006年12月22日 优先权日2005年12月22日
发明者C·范戈, C·麦克纳马拉, J·A·崇, J·曼德尔-布瑞姆, M·M·莫兰, 甄晓光 申请人:海德拉生物科学公司