专利名称：：康普瑞汀a-4磷酸酯二钠盐的制备方法
技术领域：
：本发明涉及康普瑞汀CombretastatinA-4磷酸酯二钠盐的制备方法。人类以及哺乳动物的一个主要死亡原因是肿瘤疾病。肿瘤的一个显著特征就是非正常增殖。不论正常细胞或者肿瘤细胞，其形成、代谢机分化增殖都离不开微血管，而研究显示肿瘤细胞中血管内皮细胞增殖速度远大于正常细胞，因此血管抑制因子能较特异地抑制肿瘤血管。目前，肿瘤血管抑制剂也是抗肿瘤药物研究的一个热点领域。康普瑞汀A-4(CA4)最早来源于非洲柳树(Combretumcaffrum,Cmbretaceae)提取物(Pettit，G.R.，etal.;Experientia,1989,45,209)。该化合物能明显抑制微管蛋白的聚合，从而抑制微血管。作用于肿瘤细胞可以抑制肿瘤细胞微循环，达到抑制肿瘤生长的目的。但康普瑞汀A-4水溶性极差，不能直接作为药物使用。后发现将康普瑞汀A-4经磷酸化后制成磷酸酯二钠盐，其水溶性较好，抗肿瘤活性大为提高。康普瑞汀A-4磷酸酯二钠盐(CA4P)，化学名称为3，4,5，4，一四甲氧基一顺式一二苯乙烯一3，一0—磷酸二钠，结构式如下目前，由康普瑞汀A-4(CA4)制备康普瑞汀A-4磷酸酯二钠盐(CA4P)文献报道有以下几种方法<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>1.用亚磷酸二苄酯与CA4反应，随后在三甲基氯硅烷和碘化钠存在下脱去苄基。该方法要使用毒性高且危害环境的四氯化碳作为溶剂，同时脱去苄基时要使用价格较贵的硅垸试剂和碘化钠，不利于工业化大生产(GB2403949)。2.用二—(2,2,2—三氯乙基)磷酰基化合物与CA4反应，再用锌/醋酸还原。该方法中使用的二一(2,2，2—三氯乙基)磷酰基化合物价格昂贵，且反应条件苛刻，不宜工业化大生产。
背景技术：
：3.用氧氯化磷或者氧溴化磷与CA4反应，再碱水解得到CA4P。该方法虽然操作简单，但氧氯化磷或者氧溴化磷活性高，因此反应副产物较多，成品收率较低且质量难以控制。4.申请号200510057001.0，发明名称康布瑞汀化合物的制备方法。公开的制备方法为先制备磷酰二卤，再与CA4反应得到磷酸二酯，再经水解、成盐得到CA4P。该方法所用磷酰化试剂需额外制备，且制备时需要高真空蒸馏，操作繁琐不便，磷酰化反应时间较长，反应过程中温度要变化，且由于磷酰二卤有两个活性位置，导致磷酰化产物纯度不好，需进一步精制才能用于下步反应，导致整个工艺成本较高。5.PCT/US01/22403，公开了康布瑞汀化合物的制备方法。将CA4溶解于乙腈中，通氩气，加入DMAP，二_(2，2，2-三氯乙基)氯代磷酸酯常温下反应，20min后加入三乙胺，常温反应，30分钟TLC确认反应完全。加入铜/锌混合物，加热到4(TC，30分钟后，分批加入2，4一戊二酮，1.5小时后降温至室温。反应混合物过滤，乙腈洗两次，滤液中加入水，在冰浴上冷却，析出固体，加入Dowex离子交换树脂，撤去冰浴，混合物变为橙色均相，过滤除去树脂，滤液蒸干除去绝大部分乙腈，残余物溶解于乙醇中，滴加50%氢氧化钠溶液至pH1214，搅拌30分钟，过滤，固体用50ml乙醇洗涤。将粗品CA4P，溶解于甲醇水混合溶液中，过滤，加热到354(TC维持1小时，降温至30'C，加入丙酮，冷却至室温，搅拌2小时，再加入丙酮，搅拌1216小时，次日过滤，滤饼用丙酮/水洗涤两次，再用丙酮洗，产品于40'C真空干燥。该方法纯化过程繁锁。上述专利采用的是CA4同二一(2，2，2-三氯乙基)氯代磷酸酯，其化学性质活泼，造成反应产物不易控制，得率很低，且将CA4P粗品在PH值为12-14，化学性质极不稳定，也会造成产率降低；同时也造成后续的纯化方法繁杂，采用离子交换树脂进行分离纯化，使成本大大增加，更不利于工业化大生产。上述专利申请除了采用(2，2,2-三氯乙基)夕卜，还提到采用四溴化碳磷酸二苯基进行反应，其纯化方式同样繁琐，不便于工业化大生产操作。
发明内容本发明的技术方案是提供了一种新的CA4P的制备方法。本发明提供了康普瑞汀CombretastatinA-4磷酸酯二钠盐的制备方法，它是按下述合成路线进行合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>1其中-X为氯或溴；R^与R2为叔丁基、三苯基甲基、2-氰基乙基、苄基、苯基、4-硝基苯基、2-硝基苯基、4-硝基苄基、2-硝基节基，R,与R2为相同或不同取代基。进一步优选地，所述的Ri与R2为叔丁基。具体地，它包括如下步骤(1)将CombretastatinA-4溶于非质子溶剂中，在除酸剂和DMAP存在下，滴加二烃氧基磷酰氯的溶液，滴加温度为20-40°C，滴加完毕，于相同温度反应0.52小时，加水终止反应后用非极性有机溶剂萃取出产物，蒸干后得到CombretastatinA-4的石粦酸酯III;(2)将CombretastatinA-4的磷酸酯(III)溶解于有机溶剂中，脱除R,和R2，再在甲醇中与NaOH成盐，加入丙酮析晶，过滤干燥后得到CA4P二钠盐(1)。其中，a步骤所述的二烃氧基磷酰氯中烃基包括脂肪族烃基叔丁基、三苯基甲基、2-氰基乙基、苄基、4-硝基苄基或2-硝基节基；芳香族烃基苯基、4-硝基苯基。进一步优选地，所述的烃基为叔丁基或节基。a步骤所述的非极性有机溶剂为二氯甲烷、l，l-二氯乙烷、1，2-二氯乙烷、三氯甲垸、甲苯、正己烷、环己垸、甲酸乙酯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、磷酸三甲酯、磷酸三乙酯、乙醚或异丙醚。所述的非极性有机溶剂不与水互溶，但能溶解产物。其中，a步骤所述的非质子溶剂为丙酮、四氢呋喃、乙腈、二氯甲烷、1,1-二氯乙烷、1,2-二氯乙烷、三氯甲院、甲苯、正己烷、环己烷、甲酸乙酯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、磷酸三甲酯、磷酸三乙酯、乙醚或异丙醚。其中，a步骤所述的除酸剂为杂环胺、三烷基胺或无机碱。所述的三烷基胺为二异丙基乙胺。其中，b步骤所述的有机溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、三氯甲垸、二异丙醚、叔丁基甲基醚、乙酸乙酯或乙酸丁酯。所述b步骤脱除&和R2保护基团的方法为(1)R,与R2为叔丁基、三苯基甲基时，用酸水解法脱除；(2)R、与R2为2-氰基乙基取代烷基时，用碱水解法脱除；(3)R,与112为苯基、4-硝基苯基、2-硝基苯基、4-硝基苄基或2-硝基苄基时，用金属还原或者催化氢化法脱除。其中，所述的a、b步骤在氮气或惰性气体中操作。该方法以二烷氧基磷酰卤为磷酰化试剂，所用的磷酰化试剂廉价易得，同时在反应中加入催化剂DMAP，使反应条件温和，反应温度恒定不变，反应时间短，操作简单，磷酰化中间体不需纯化，产品收率高、质量好，易于工业化生产。反应的条件温和，反应温度恒定不变，反应时间短，操作简单，磷酰化中间体不需纯化，产品收率高、质量好，易于工业化生产。以下通过实施例对本发明作进一步说明，需要注意的是以下实施例所涉及的反应条件和原料目的在于对本发明作更好的说明，而不是对本发明的限制。具体实施方式实施例l温度和反应时间的考察根据文献报道，常规的CA4P合成反应均是在低温下进行，且反应耗时长，不利于有效的控制反应进程，本实验是对反应的时间和温度进行了全面的考证，如下氮气保护下，将CA43.16g(0.01mol)、4-N,N-二甲基吡啶0.06g(0.0005mol)以及二异丙基乙胺1.42g(0.011mol)溶解于20ml二氯甲垸中，不同温度下滴加二-(叔丁氧基)-磷酰氯2.51g(O.Ollmol)以及lOml二氯甲烷的溶液。滴加完毕后，保持该温度搅拌反应，用薄层色谱监控反应进程，至原料点消失，将反应液倾入50ml冰水中，分出有机层，水层再用20ml二氯甲垸萃取一次，合并有机层，水洗，干燥，蒸干得到CA4-二-(叔丁氧基)-磷酸酯，不同温度下的反应时间和反应收率见下表<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>由以上数据可以确定204(TC是最佳反应温度，反应时间不超过1个小时。实施例2康普瑞汀CombretastatinA-4磷酸酯二钠盐的制备在氮气保护下，将CA43.16g(O.Olmol)、4-N，N-二甲基吡啶0.06g(0.0005mol)以及二异丙基乙胺1.42g(O.Ollmol)溶解于20ml二氯甲垸中，于20°C，滴加二-(叔丁氧基)-磷酰氯2.51g(0.011mol)以及10ml二氯甲垸的溶液。滴加完毕后，保持该温度搅拌反应，用薄层色谱监控反应进程，至原料点消失，反应时间为0.5小时，将反应液倾入50ml冰水中，分出有机层，水层再用20ml二氯甲垸萃取一次，合并有机层，水洗，干燥，蒸干得到收率为94%油状物CA4-二-(叔丁氧基)-磷酸酯4.77g，并将其投入50ml已预先通干燥氯化氢至饱和的甲醇中，室温搅拌反应24小时，减压蒸干溶剂，将残余物溶解于50ml二氯甲烷中，水洗至中性，无水硫酸钠干燥，蒸干，残余物溶解于25ml甲醇中，搅拌下滴加NaOH-甲醇溶液至PH8—10，搅拌1小时，缓慢滴加丙酮200ml，过滤，丙酮洗涤固体，减压干燥，得白色粉末状产品3.64g，收率82.7%。本发明人通过对大量的二烃氧基磷酰氯试剂进行全面的研究，意外地发现，在制备CA4P盐类物质的制备过程中，CA4与二-(叔丁氧基)-磷酰氯能够在20-4(TC发生反应，不易产生副反应且反应条件简单易于控制，同时粗品得率达到80%以上；在对粗品的提取精致过程中也不需要采用离子交换法等复杂的方法，而是通过干燥氯化氢至饱和的甲醇就可以得到纯品，且得率一般都在70%以上，甚至可以达到90%以上。实施例3康普瑞汀CombretastatinA-4磷酸酯二钠盐的制备在氮气保护下，将CA43.16g(O.Olmol)、4-N，N-二甲基吡啶0.06g(0.0005mol)以及二异丙基乙胺1.42g(O.Ollmol)溶解于20ml二氯甲烷中，于30°C，滴加二-(2-氰基乙氧基)-磷酰氯2.45g(0.Ollmol)以及10ml二氯甲烷的溶液。滴加完毕后，保持该温度搅拌反应，用薄层色谱监控反应进程，至原料点消失，反应时间为0.8小时，将反应液倾入50ml冰水中，分出有机层，水层再用20ml二氯甲烷萃取一次，合并有机层，水洗，干燥，蒸干得到收率为93%油状物CA4-二-(2-氯乙氧基)-磷酸酯5.14g，将其投入25ml甲醇中，搅拌下滴加NaOH-甲醇溶液至PH8—10，搅拌1小时，缓慢滴加丙酮200ml，过滤，丙酮洗涤固体，减压干燥，得白色粉末状产品3.43g，收率78%。实施例4康普瑞汀CombretastatinA-4磷酸酯二钠盐的制备在氮气保护下，将CA43.16g(O.Olmol)、4-N,N-二甲基吡啶0.06g(0.0005mol)以及二异丙基乙胺L42g(O.Ollmol)溶解于20ml二氯甲烷中，于20°C，滴加二-(苄氧基)-磷酰氯2.92g(O.Ollmol)以及10ml二氯甲烷的溶液。保持该温度搅拌反应，用薄层色谱监控反应进程，至原料点消失，反应时间为l小时，将反应液倾入50ml冰水中，分出有机层，水层再用20ml二氯甲烷萃取一次，合并有机层，水洗，干燥，蒸干得到收率为96%油状物CA4-二-(苄氧基)-磷酸酯5.20g，将其投入25ml甲醇中，加入10%Pd/C0.04g，室温下通氢气常压搅拌反应24小时，过滤除去催化剂，搅拌下滴加NaOH-甲醇溶液至PH8—10，搅拌1小时，缓慢滴加丙酮200ml，过滤，丙酮洗涤固体，减压干燥，得白色粉末状产品3.54g，收率80.5%。实施例5康普瑞汀CombretastatinA-4磷酸酯二钠盐的制备在氮气保护下，将CA43.16g(O.Olmol)、4-N,N-二甲基吡啶0.06g(0.0005mol)以及二异丙基乙胺1.42g(0.011mol)溶解于20ml磷酸三甲酯中，于25°C，滴加二-(苯氧基)-磷酰氯3.11g(0.011mol)以及10ml磷酸三甲酯的溶液。保持该温度搅拌反应，用薄层色谱监控反应进程，至原料点消失，反应时间为0.8小时，将反应液倾入50ml冰水中，分出有机层，水层再用20ml磷酸三甲酯萃取一次，合并有机层，水洗，干燥，蒸干得到收率为90X油状物CA4-二-(苯氧基)-磷酸酯5.56g，将其投入25ml乙醇中，加入10%Pd/C0.04g，室温下通氢气常压搅拌反应24小时，过滤除去催化剂，搅拌下滴加NaOH-甲醇溶液至PH8-10，搅拌1小时，缓慢滴加丙酮200ml，过滤，丙酮洗涤固体，减压干燥，得白色粉末状产品3.18g，收率72.3%。实施例6康普瑞汀CombretastatinA-4磷酸酯二钠盐的制备在氮气保护下，将CA43.16g(O.Olmol)、4-N,N-二甲基吡啶0.06g(0.0005mol)以及二异丙基乙胺1.42g(O.Ollmol)溶解于20ml三氯甲烷中，于20°C，滴加二-(三苯基甲氧基)-磷酰氯6.61g(O.Ollmol)以及10ml三氯甲垸的溶液。滴加完毕后，保持该温度搅拌反应，用薄层色谱监控反应进程，至原料点消失，反应时间为0.5小时，将反应液倾入50ml冰水中，分出有机层，水层再用20ml三氯甲烷萃取一次，合并有机层，水洗，干燥，蒸干得到收率为89%油状物CA4-二-(三苯基甲氧基)-磷酸酯8.62g，并将其投入50ml已预先通干燥氯化氢至饱和的甲醇中，室温搅拌反应24小时，减压蒸干溶剂，将残余物溶解于50ml二氯甲烷中，水洗至中性，无水硫酸钠干燥，蒸干，残余物溶解于25ml甲醇中，搅拌下滴加NaOH-甲醇溶液至PH8—10，搅拌1小时，缓慢滴加丙酮200ml，过滤，丙酮洗涤固体，减压干燥，得白色粉末状产品3.06g，收率69.5%。实施例7康普瑞汀CombretastatinA-4磷酸酯二钠盐的制备在氮气保护下，将CA43.16g(O.Olmol)、4-N,N-二甲基吡啶0.06g(0.0005mol)以及二异丙基乙胺1.42g(0.01lmol)溶解于20ml磷酸三甲酯中，于25°C，滴加二-(2-硝基苯氧基)-磷酰氯3.94§(0.0110101)以及10ml磷酸三甲酯的溶液。保持该温度搅拌反应，用薄层色谱监控反应进程，至原料点消失，反应时间为l小时，将反应液倾入50ml冰水中，分出有机层，水层再用20ml磷酸三甲酯萃取一次，合并有机层，水洗，干燥，蒸干得到收率为90%油状物CA4-二-(苯氧基)-磷酸酯6.32g，将其投入25ml乙醇中，加入10%Pd/C0.04g，室温下通氢气常压搅拌反应24小时，过滤除去催化剂，搅拌下滴加NaOH-甲醇溶液至PH8—10，搅拌1小时，缓慢滴加丙酮200ml，过滤，丙酮洗涤固体，减压干燥，得白色粉末状产品3.26g，收率74.1。Z。权利要求1、康普瑞汀CombretastatinA-4磷酸酯二钠盐的制备方法，它是按下述合成路线进行合成其特征在于所述的X为氯或溴；R1与R2为叔丁基、三苯基甲基、2-氰基乙基、苯基、4-硝基苯基、苄基、4-硝基苄基或2-硝基苄基，R1与R2为相同或不同取代基。2、根据权利要求1所述的方法，其特征在于它包括如下步骤a、将CombretastatinA-4溶于非质子溶剂中，在除酸剂和DMAP存在下，滴加二烃氧基磷酰氯的溶液，滴加温度为20—4(TC，滴加完毕，于相同温度反应0.51小时，加水终止反应后用非极性有机溶剂萃取出产物，蒸干后得到CombretastatinA-4的磷酸酯III;b、将CombretastatinA-4的磷酸酯III溶解于有机溶剂中，脱除&和R2，再在甲醇中与NaOH成盐，加入丙酮析晶，过滤干燥后得到CA4P二钠盐I。3、根据权利要求2所述的方法，其特征在于a步骤所述的二烃氧基磷酰氯中烃基为叔丁基、三苯基甲基、2-氰基乙基、苄基、苯基、4-硝基苯基、4-硝基苄基或2-硝基苄基。4、根据权利要求3所述的方法，其特征在于a步骤所述的二烃氧基磷酰氯中烃基为叔丁基或苄基。5、根据权利要求2所述的方法，其特征在于a步骤所述的非质子溶剂为丙酮、四氢呋喃、乙腈、二氯甲烷、1,1-二氯乙烷、1，2-二氯乙烷、三氯甲垸、甲苯、正己烷、环己烷、甲酸乙酯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、磷酸三甲酯、磷酸三乙酯、乙醚或异丙醚。6、根据权利要求2所述的方法，其特征在于a步骤所述的除酸剂为杂环胺、三烷基胺或无机碱。7、根据权利要求2所述的方法，其特征在于a步骤所述的非极性有机溶剂为二氯甲垸、1,1-二氯乙垸、1,2-二氯乙垸、三氯甲烷、甲苯、正己烷、环己烷、甲酸乙酯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、磷酸三甲酯、磷酸三乙酯、乙醚或异丙醚。8、根据权利要求2所述的方法，其特征在于b步骤所述的有机溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、二异丙醚、叔丁基甲基醚、乙酸乙酯或乙酸丁酯。9、根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述b步骤脱除R,和R2保护基团的方法为(1)Ri与R2为叔丁基、三苯基甲基时，用酸水解法脱除；(2)R,与R2为2-氰基乙基取代垸基时，用碱水解法脱除；(3)R,与R2为苯基、4-硝基苯基、苄基、4-硝基苄基或2-硝基苄基时，用金属还原或者催化氢化法脱除。10、根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述的a、b步骤在氮气或惰性气体中操作。全文摘要本发明提供了康普瑞汀CombretastatinA-4磷酸酯二钠盐的制备方法，它是按右述合成路线进行合成其中，所述的X为氯或溴；R<sub>1</sub>与R<sub>2</sub>为叔丁基、三苯基甲基、2-氰基乙基、苄基、苯基、4-硝基苯基、4-硝基苄基、2-硝基苄基，R<sub>1</sub>与R<sub>2</sub>为相同或不同取代基。该方法以二烷氧基磷酰卤为磷酰化试剂，所用的磷酰化试剂廉价易得，同时在反应中加入催化剂DMAP，使反应条件温和，反应温度恒定不变，反应时间短，操作简单，磷酰化中间体不需纯化，产品收率高、质量好，易于工业化生产。文档编号C07F9/12GK101220054SQ20081005710公开日2008年7月16日申请日期2008年1月29日优先权日2008年1月29日发明者伟周,曾裕建,李好雨,邓建彬,陈春会,鹏黎申请人:成都恒基医药科技有限公司