2-色氨酰-β-四氢咔啉-3-甲酰基氨基酸苄酯及其制备方法和应用的制作方法

专利名称：：2-色氨酰-β-四氢咔啉-3-甲酰基氨基酸苄酯及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及氨基酸衍生物，尤其涉及具有抗肿瘤活性的2-色氨酰-P-四氢咔啉-3-甲酰基氨基酸苄酯及其制备方法，本发明还进一步涉及它们作为抗肿瘤的应用，属于生物医药领域。
背景技术：
：恶性肿瘤是一种严重威胁人类健康的常见病和多发病，人类因恶性肿瘤而引起的死亡率是所有疾病死亡率的第二位，仅次于心脑血管疾病。肿瘤的治疗方法有手术治疗，放射治疗和药物治疗(化学治疗)。目前，化学治疗仍然是临床治疗肿瘤的主要手段。寻找抗肿瘤药物是新药研究的热点之一。发明人认识到，将P-四氢咔啉羧酸和L-色氨酸偶联后再羧基端引入氨基酸可能产生抗肿瘤作用。按照这种构想，发明人提出本发明。
发明内容本发明目的之一是提供一类具有抗肿瘤活性的化合物；本发明目的之二是提供一种制备上述具有抗肿瘤活性化合物的方法。本发明上述目的是通过以下技术方案来实现的具有抗肿瘤活性的通式I化合物通式I式中AA选自缬氨酸残基、天冬氨酸-Y-苄酯、谷氨酰胺残基、NW-苄氧羰基赖氨酸残基、亮氨酸残基、丙氨酸残基、色氨酸残基、O-苄基丝氨酸残基、苯丙氨酸残基、异亮氨酸残基、甘氨酸残基、组氨酸残基、蛋氨酸残基、谷氨酸-S-苄酯、天冬酰胺残基、脯氨酸残基、对甲氧基节基半胱氨酸、硝基精氨酸、苏氨酸残基或酪氨酸残基。一种制备上述通式I化合物的方法，该方法包括(1)(在NaOH、(Boc)20和二氧六环存在下)将色氨酸转变为Boc-色氨酸；(2)(在稀H2S04和甲醛的存在下)将色氨酸转变为(5-四氢咔啉-3-羧酸；(3)(在多聚磷酸和苄醇存在下加热)将(3-四氢咔啉-3-羧酸转变为p-四氢咔啉-3-羧酸节酯；(4)(在对甲苯磺酸、节醇和环己垸存在下)将氨基酸转变为氨基酸苄酯；(5)(在DCC和HoBt存在下)将Boc-色氨酸与(3-四氢咔啉-3-羧酸苄酯缩合制备2-(Boc-色氨酰)-卩-四氢咔啉-3-羧酸苄酯；(6)(用？(1/(:催化)将2-(800色氨酰)-卩-四氢咔啉-3-羧酸苄酯氢解制备2-(80(>色氨酰)-卩-四氢咔啉-3-羧酸；(7)(在DCC、HoBt存在下)将2-(Boc-色氨酰)-p-四氢咔啉-3-羧酸和氨基酸苄酯縮合制备2-(800-色氨酰)+四氢咔啉-3-甲酰氨基酸苄酯；(8)(在HOAc、氯化氢和乙酸乙酯存在下)将2-(Boc-色氨酰)-卩-四氢咔啉-3-甲酰氨基酸苄酯脱去Boc,即得。其中，步骤(4)中所述的氨基酸苄酯选自缬氨酸苄酯、天冬氨酸双苄酯、谷氨酰胺苄酯、(N"-苄氧羰基)赖氨酸苄酯、亮氨酸苄酯、丙氨酸苄酯、色氨酸苄酯、0-苄基丝氨酸苄酯、异亮氨酸苄酯、苯丙氨酸节酯、甘氨酸苄酯、组胺酸苄酯、蛋氨酸苄酯、谷氦酸双苄酯、天冬酰胺苄酯、脯氨酸苄酯、对甲氧基苄基半胱氨酸苄酯、硝基精氨酸苄酯、酪氨酸苄酯或苏氨酸苄酯。本发明的又一目的是提供一种治疗肿瘤的药用组合物，该药用组合物由治疗上有效剂量的本发明通式I化合物与药学上可接受的赋型剂或者辅加剂组成，即将有效量的本发明通式I化合物与药学上可接受的载体或稀释剂配合后，按本领域常规的制剂方法将其制备成任意一种适宜的药物组合物。通常该组合物适合于口服给药和注射给药，也适合其他的给药方法。该组合物可以是片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、锭剂、栓剂，或口服液等液体制剂形式。根据不同的给药方法，本发明药物组合物可以含有O.1%-99%重量，优选10-60%重量的本发明化合物。本发明在肿瘤细胞模型和小鼠S咖肉瘤模型上评价了通式I化合物(2a-t)的抗肿瘤活性，实验结果表明，本发明通式l化合物具有优秀的抗肿瘤活性，可作为抗肿瘤剂应用。图l本发明通式I化合物的结构式。图2本发明通式I化合物的合成路线图；2a-t的中AA选自缬氨酸、天冬氨酸-Y-苄酯、谷氨酰胺、N"-苄氧羰基赖氨酸、亮氨酸、丙氨酸、色氨酸、0-苄基丝氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、甘氨酸、组氨酸、蛋氨酸、谷氨酸-s-苄酯、天冬酰胺、脯氨酸、对甲氧基苄基半胱氨酸、硝基精氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基.具体实施例方式为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。实施例l制备Boc-L-色氨酸冰浴下将4.1g(2mo1)L-色氨酸溶于10mlNaOH水溶液(2N)，往该溶液中加4.9g(2.2mmo1)(Boc)20与5m11，4-二氧六环的溶液，反应化合物搅拌并不断减压抽去反应过程中生成的C02。约需48小时后TLC检测到反应完成，减压除去l，4-二氧六环，残留无先用饱和KHS04水溶液调pH2，然后用乙酸乙酯萃取三次，合并的乙酸乙酯层用饱和NaCl水溶液洗三次后用无水NaS04干燥过夜，过滤，滤也减压浓縮得到的无色固体用乙酸乙酯-石油醚重结晶。收率85%。实施例2制备L-氨基酸苄脂将20mmolL-氨基酸和30ml苯甲醇在100ml圆底烧瓶中搅拌使溶解。然后加3.78g(22md)对甲苯磺酸，9(TC搅拌。用环己烷共沸带出反应过程中生成的水。24小时后TLC检测原料点基本消失，停止加热，冷却，冰浴搅拌下加入大量乙醚，析出氨基酸苄酯对甲苯磺酸盐。产率在86%-96%之间。依此通法合成了缬氨酸苄酯对甲苯磺酸盐、天冬氨酸双苄酯对甲苯磺酸盐、N"-苄氧羰基赖氨酸苄酯对甲苯磺酸盐、亮氨酸苄酯对甲苯磺酸盐、丙氨酸苄酯对甲苯磺酸盐、色氨酸苄酯对甲苯磺酸盐、O-苄基丝氮酸节酯对甲苯磺酸盐、苯丙氨酸苄酯对甲苯磺酸盐、异亮氨酸苄酯对甲苯磺酸盐、甘氨酸苄酯对甲苯磺酸盐、组氨酸苄酯对甲苯磺酸盐、蛋氨酸节酯对甲苯磺酸盐、谷氨酸双苄酯对甲苯磺酸盐、脯氨酸苄酯对甲苯磺酸盐、苏氨酸苄酯对甲苯磺酸盐和酪氨酸苄酯对甲苯磺酸盐等L-氨基酸的节酯的对甲苯磺酸盐。实施例3制备p-四氢昨啉-3-羧酸往含400ml水的500ml圆底烧瓶中缓慢加入0.2ml浓硫酸并摇匀。得到的稀硫酸溶液与5.0g(24.5mmol)L-色氨酸搅拌至L-色氨酸完全溶解。往得到的溶液中加入10ml甲醛(35%),搅拌10min后析出大量固体，TLC板检测L-色氨酸消失，停止搅拌。往反应液中缓慢滴入8ml氨水，调pH7。反应混合物静置6h,减压滤出生成的沉淀,用水冲洗5次，滤餅干燥得4.9g(95%)目标化合物，为浅黄色固体。ESI(m/z)217[M+H]+.实施例4制备P-四氢咔啉-3-羧酸苄酯取2g多聚磷酸加热搅拌使之溶于20ml苄醇(加热温度不高于5(TC)，待完全溶解后加入lgp-四氢昨啉-3-羧酸，升温至8(TC搅拌，反应液由黄绿色逐渐变棕色，12小时后TLC检测原料点消失。反应混合物冷却后加入50ml乙醚和70ml水强力搅拌过夜，有大量黄色固体析出。过滤,得到的黄色块状固体用乙醚和水反复洗得到粉末状浅黄色咔啉羧酸苄酯磷酸盐1.3g。将该磷酸盐混悬于乙酸乙酯和水的混合液中，冰浴下滴加三乙胺溶液至反应液中无不溶颗粒且反应液透明。继续搅拌12h后，分出乙酸乙酯层并用5%碳酸氢钠水溶液洗涤6次、饱和氯化钠水溶液洗涤3次,分出的乙酸乙酯层用无水硫酸钠固体干燥、过滤、滤液减压浓縮，残留物重结晶得0.9g(67%)标题化合物，为浅黄白色粉末。ESI(m/e)307[M+H]+。实施例5制备Boc-色氨酰-p-四氢咔啉-3-羧酸苄酯(1A)将3.6g(11.8mmol)Boc-L-色氨酸溶于35ml无水四氢呋喃(THF)，冰浴下往里加1.4g(14.2mmo1)N-羟基苯并三唑(HOBt)和2.1g(14.2mmo1)二环己基羰二亚胺(DCC)和15ml无水四氢呋喃(THF)的溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液。往该溶液中加入2.3g(9.5mmol)p-四氢咔啉-3-羧酸苄酯与6ml无水四氢呋喃(THF)并用N-甲基吗啉调pH-9的溶液。得到的混合溶液室温反应24小时。TLC(展开剂CHCl3:MeOH=10:1)显示(3-四氢咔啉-3-羧酸苄酯消失。停止反应，滤除二环己基脲(DCU)，滤液减压浓縮至干。残留物用乙酸乙酯溶解，乙酸乙酯溶液分别用饱和NaHC03水溶液，5XKHS04水溶液，饱和NaCl水溶液洗5次。分出的乙酸乙酯溶液用无水Na2S04干燥过夜。滤除Na2S04，滤液减压浓縮，得到4.98g(86%)标题化合物，为无色固体。Mp115-117°C;ESI(m/e)550[M+H]+;[tt]D20=24.30(cl.0，甲醇)；！H-NMR(DMSO-d6,500MHz)S=l0.97(s,lH),10.86(d,J=15Hz,1H),7.57(t，J=10Hz，1H),7.48(d,J=10Hz,1H),7.39(m,4H),7.20(m,4H)，6.65(d,J=5Hz,1H),5.05(s,2H),4.31(s,2H),3.47(s,2H),2.98(d,J=5Hz,2H),1.34(s,3H)."C-NMR(DMSO-d6,75MHz)5=206.91,170.82，155.86,136.55,136.16，129.68,128.69,127.79,127.55,126.65,119.19,111.49,110.19,78.66,66.64,55.20,33.82，31.13,28.58;IR:3356.14，3307.92,2974.23,1735.93，1708.93,1678.71,1527.62,1452.40,1420.54,1363.67,1309.67，1244.09,1168.86,734.88。实施例6制备Boc-色氨酰-p-四氢咔啉-3-羧酸(IB)先将1.5g(2.52mmoDBoc-色氨酰-(3-四氢咔啉-3-羧酸苄酯溶于20ml乙醇，再加入300mgPd/C(20%),搅拌下减压排出反应瓶中的空气，通入氢气置换，反复置换3次后，通氢气室温搅拌24小时，TLC(展开剂CHC13:MeOH二10:1+1滴冰醋酸)显示Boc-色氨酰-l3-四氢咔啉-3-羧酸苄酯消失。停止反应，滤除Pd/C，滤渣用无水乙醇冲洗三次，滤液减压浓縮，得l.lg(80%)标题化合物。IR3396.64,2976.16,2850.79,1705.07,1643.35,1642.06,1510.26,1429.90,1454.33，1392.61,1367.33,1247.94,1234.44,1166.93,742.59。实施例7Boc-色氨酰-p-四氢咔啉-3-甲酰氨基酸苄酯的制备通法将1.2g(2.4mmo1)Boc-色氨酰-(3-四氢咔啉-3-羧酸溶于15ml无水四氢呋喃(THF)，冰浴下往里加600mg(2.5mmo1)N-羟基苯并三唑(HOBt)、800mg(2.5mmo1)二环己基羰二亚胺(DCC)和10ml无水四氢呋喃(THF)的溶液。反应混合物冰浴搅拌20分钟，得对应的活泼酯溶液。往该溶液中加入2.4mmo1氨基酸苄酯与2ml的N-甲基吗啉先及6ml无水四氢呋喃(THF)并用NMM调pH9的溶液。得到的混溶液室温反应过夜。TLC(展开剂CHCl3:MeOH二10:1)显示氨基酸苄酯消失。停止反应，滤除二环己基脲(DCU),滤液减压浓縮至干。残留物用乙酸乙酯溶解，乙酸乙酯溶液分别用饱和NaHC03水溶液，5XKHS04水溶液，饱和NaCl水溶液洗5次。分出的乙酸乙酯溶液用无水Na2S04干燥过夜。滤除Na2S04，滤液减压浓縮，残留物经硅胶柱层析纯化。实施例8Boc-色氨酰-p-四氢咔啉-3-甲酰基-缬氨酸苄酯(la)的数据1.17g(62.42%)。Mp114-115。C;ESI(m/e)364[M+H]+;[otD20=-114.20(cl.O,甲醇);iH-NMR(DMSO-d6,500MHz)S=10.87(d,J=10Hz,lH),8.33(t,J=5Hz,lH),7.635(d,J=5Hz,1H),7.51(d，J=10Hz，1H),7.41(m,4H),7.21(m,4H),4.95(s,1H),4.33(m,4H)，4.18(m,2H),4.03(t,IH)，3.305(d，J=5Hz,1H),3.14(m,2H)，1.38(s,3H),0.83(s,3H).13C-NMR(DMSO-d6,75MHz)5=171.60,170.17,155.80,136.57,129.86,128.89,127.86,127.62,121.11，118.83，111.51,110.20，78.52,66.00,56.31,55.35,30.90,30.50,28.59,18.23;IR3402.43,3307.92,2966.52,1735.93,1680.00，1643.35,1498.69,1454.33,1390.68,1367.53,1366.67,1307.74,1234.44,1163.08,740.67。实施例9Boc-色氨酰-P-四氢咔啉-3-甲酰基-天冬氨酸双苄酯(lb)的数据1.06g(63.8%).Mp102-104°C;ESI(m/e)364[M+H]+;[<t]D20=7.36(c1.0，甲醇)；！H-NMR(DMSO-d6,500MHz)S=10.90(s,IH),10.87(s，IH),8.65(d,J=5Hz，IH),8.485(d,J=5Hz，IH),7.65(d,J=10Hz,IH),7.515(d,J=10Hz,IH),7.37(m,5H),7.18(m,4H)，5.74(d,J=10Hz,2H),4.98(m，2H),4.12(s,IH),3.36(s,IH),3.14(m,2H),1.36(s，4H).13C-NMR(DMSO-d6，75MHz)S=173.11,171.10,170.08，156.32,136.72,136.62，136.09,130.10,129.18,128.05，127.63,126.83,121.11，119.04,111.36，110.72，109.30，79.28,66.70,55.29,52.31,49.50,36.04,28.57,23.40;IR3388.93,3307.92，2954.95,2922.16,1746.65,1683.86,1641.42,1489.05,1456.26,1373.32,1338.60,1282.66,1247.94,1234.44,1163.08,740.67。实施例10Boc-色氨酰-p-四氢咔啉-3-甲酰基-谷氨酰胺苄酯(lc)的数据0.87g(73.8%)。Mp154.5-157.0oC;ESI(m/e)721[M+H]+;[a]D20=39.23(cl.O,甲醇)；iH-NMR(DMSO-d6,500MHz)S=10.84(dd,J=15Hz,J=10Hz,IH),8.33(s,lH),7.63(m,5H),7.31(m,4H),5.62(q,J=5Hz,JN5Hz，2H),5.10(q,J=15Hz，J=15Hz,1H),4.25(d,J=15Hz,2H),3.15(m，2H),2.26(q,J=5Hz,J=5Hz,2H),2.10(s,2H)，1.33(t,J=10Hz,IH);13C-NMR(DMSO-d6,75MHz)S=174.48，173.33,172.42,171.63,155.63,136.58,130.34,130.24,128.33,127.81,126.85,124.23,121.15，120.68,111.80,110.77,78.59,65.37，55.33,53.25,51.48，39.42,31.13,27.36;IR3388.93,3329.14，2974.23,1687.71,1641.42,1622.13,1489.05,1456.26,1388.75,1367.33,1336.67,1263.37，1163.08,740.67。实施例11Boc-色氨酰-p-四氢咔啉-3-甲酰基-(N(o-苄氧羰基)赖氨酸苄酯(ld)的数据1.05g(81.2%)。Mp101-103°C;ESI(m/e)833[M+H]+;[a]D20=33.56(c4.0,甲醇)；！H-NMR(DMSO-d6,500MHz)S=10.88(d,J=15Hz,IH),8.45(d,J=5Hz,lH),8.36(d，J=10Hz,IH),7.64(d,J=10Hz，IH)，7.40(m,4H),7.19(m,4H),7.06(m,3H),5.735(d,J=5Hz，2H)，4.96(m,2H),4.215(d，J=5Hz,2H),3.085(d,J=5Hz,IH),2.94(m,3H),1.38(s,3H),1.28(s,2H),0.91(m,2H);13C-NMR(DMSO-d6,75MHz)5=172.90,172.00,170.01,156.50,136.47,136.31,130.19,129.71,128.05,127.59,119.08,111.37,109.25,79.27,66.24,65.59,55.24，53.15,52.58,50.28,38.91,30.92,30.43,28.58,21.93;IR3390.86,3288.63,3057.17,2972.31,2953.02,1739.79,1678.07,14894.83,1452.40，1336.67,1305.81，1365.60,1236.37,1165.00,740.67。实施例12Boc-色氨酰-p-四氢咔啉-3-甲酰基-亮氨酸苄酯(le)的数据1.37g;(79.5%);Mp:113-115。C;ESI(m/e)707[M+H]+;[ct]D20=38.27(c-1.0,甲醇)；！H-NMR(DMSO-^，500MHz)5=10.89(d,J=15Hz，1H),8.45(d,J=10Hz,1H),7.61(dd,J=10Hz,J=5Hz,IH),7.34(m,5H),7.20(m,4H),7.08(m,IH),5.70(s,2H),5.14(dd,J=10Hz,J=7.5Hz,IH),4.98(m，2H),2.9(m,2H)，1.52(m，2H)，1.40(s,3H),0.880(d,J=5Hz,3H);13C-NMR(DMSO75MHz)S=169.%,156.42,136.63，136.48,136.13，130.15,129.63,127.84，127.56,121.53,121.12,119.09，111.48,111.34,110.68,109.19,79.27,66.25,52.36,50.92，41.88,38.94,28.56,23.77,23.17,21.13;IR3390.86,3311.78,2958.80,1741.72,1685.79,1378.07,1529.55,1498.69，1454.33,1336.67,1305.81，1246.02,1234.44,1165.00,740.67。实施例13Boc-色氨酰-p-四氢咔啉-3-甲酰基-丙氨酸苄酯(lf)的数据l.OOg(82.3%);Mp115-117。C;ESI(m/e)664[M+H]+;[a]D20=20.17(c-1.0,甲醇)；^-NMR(DMSO-c/6,500MHz)5=10.90(d,J=15Hz,IH),8.195(d,J=5Hz,IH),7.54(t,J=7.5Hz,IH),7.41(m,4H),7.16(m,4H),6.84(dd,J=10Hz，J=5Hz,IH)，5.665(d，J=5Hz,IH),5.43(s,2H),5.08(m，2H),4.23(t，J=7.5Hz,2H),3.96(m,2H),1.41(s,3H),1.38(s,3H);13C-NMR(DMSO-4,75MHz)5=172.64，170.61,136.56,136.10,130.24,129.66,128.61,127.52,126.61，121.65,119.15,118.49,111.60,110.10,109.56,78.66,66.66，66.54,55.33,51.42，28.67,23.18,18.71,18.61;IR3388.93,3296.35,3057.17,2976.16,2931.80,1739.79,1678.07,1527.62,1496.76,1456.26,1390.68,1365.60,1338.60,1305.81,1236.37,1197.79,1161.15,740.67。实施例14Boc-色氨酰-p-四氢咔啉-3-甲酰基-色氨酸苄酯(lg)的数据1.22g(78.7%);Mp129-130°C;ESI(m/e)801[M+H]+;[a]D20=0.80°(c4.0,甲醇)；^-NMR(DMSO-4,500MHz)5=10.87(d,J=10Hz,IH),8.78(d，J=10Hz，IH),8.495(d,J=5Hz,1H),8.015(d,J=5Hz,IH),7.51(m,4H),7.25(m,4H),7.03(m，4H),6.37(s，IH),5.765(d，J=5Hz,2H)，5.595(d,J=5Hz,2H),4.50(t,J=10Hz,IH),4.375(q,J=5Hz,J=5Hz,IH),3.00(q,J=5Hz,J=5Hz,2H),1.40(s,3H);13C-NMR(DMSO-A,75MHz)5=173.09,171.93，169.89,156.49,136.59,136.24,129.56，128.11，127.36,126.77,121.32,118.96,111.45,110.72，109.85,79.33,66.29,54.56，53.90,33.83,28.26,28.58,21.16;IR3365.78,3305.99,3032.10,2974.23,2927.94,1735.93,1678.07,1642.06,1498.69,1438.90,1365.60,1338.60,1232.51,1161.15,740.67。实施例15Boc-色氨酰-p-四氢咔啉-3-甲酰基-0-苄基丝氨酸苄酯(lh)的数据1.08g(82.0%);Mp:111-117°C;ESI(m/e)758[M+H]+;[a]D20=39.10(c-1.0,甲醇)；^-NMR(DMSO-4500MHz)5=10.69(s,IH),10.65(s,IH),8.90(q,J=5Hz,J=5Hz,IH)，7.73(d,J=10Hz,IH),7.61(t,J-5Hz,lH),7.25(m,5H),7.09(m,4H),6.84(d,J=5Hz,IH),5.34(s,IH)，5.29(t,IH),5.10(d,J=5Hz,2H),4.73(q,J=5Hz,2H)，3.54(t,J=7.5Hz,2H),1.38(s，3H);13C-NMR(DMSO-475MHz)S=173.24,171.78,170.11,156.08,136.57,136.58,130.07，128.79,127.81,127.68,126.87,121.12,118.96,111.37,110.66,109.42,79.11,72.71,69.31，54.91,53.02,39.09,28.59,23.98;IR3410.15,3292.49,2974.23，2927.94,1743.65,1678.07，1469.76,1442.75,1390.68,1365.60，1336.67,1236.37,1163.08,740.67。实施例16Boc-色氨酰-p-四氢昨啉-3-甲酰基-异亮氨酸苄酯(li)的数据1.26g(71.2%);Mp120-122。C;ESI(m/e)706[M+H]+;[汰]020=24.8(c4.0,甲醇)；^-NMR(DMSO-c/6,500MHz)S=10.92(s,IH),10.85(d,J=5Hz,IH),8.29(s,lH),7.62(d,J=10Hz，IH)，7.40(t，J=10Hz,lH),7.37(t,J=5Hz,IH),7.32(m,4H),7.22(m,4H),7.135(d,J=5Hz,IH),6.99(s，IH),5.765(d,J=5Hz,2H),5.59(d,J=10Hz,2H),4.87(t,J=5Hz,2H),4.21(t，J=5Hz,IH)，3.26(d,J=10Hz,IH)，2.99(m,IH),1.37(s,3H),1.28(m,2H),1.155(d,J=5Hz,2H),0.74(t,J=5Hz,3H);13C-NMR(DMSO-c/6,75MHz)5=172.98,171.60,170.17,156.14,136.56,136.56，136.20,129.98,128.80,127.80,121.11,119.01，118.88,111.35,109.34,79.06,78.58，66.24,54.95,36.84,28.58,28.52，25.31，22.66,15.80,11.16;IR3309.85,2962.66,2927.94,1737.86,1698.64,1639.49,1523.76,1498.69,1454.33,1365.60,1336.67,1307.74,1244.09,1234.44,1165.00,740.67。实施例17Boc-色氨酰-p-四氢咔啉-3-甲酰基-苯丙氨酸苄酯(lj)的数据0.99g(70.3%);Mp:124-126°C;ESI(m/e)740[M+H]+;[a]D20=14.6(c-1.0,甲醇)；^-NMR(DMSO-4,500MHz)5=10.87(s,IH),10.86(d，J=5Hz，IH)，8.56(d,J=5Hz,IH),8.40(d,J=10Hz,IH)，7.64(t,J=5Hz,IH),7.30(m,5H),7.21(m,4H),6.卯(m,4H),5.07(s,2H),5.03(d,J=5Hz,2H),4.98(q，J=5Hz,IH),4.41(t,J=5Hz,1H),4.35(d,J=5Hz,IH)，3.12(d,J=5Hz,2H),2.10(s,2H),1.41(s,3H);13C-NMR(DMSO-4,75MHz)5=171.56,169.78,156.55,137.59,136.40,136.23,129.53,129.38,128.34,127.83，127.53,124.15,121.08,119.11,111.33,110.76，109.08，66.47,54.44,52.35,38.36,36.39,28.67，28.56,21.25;IR3402.43,3304.06,2974.23,2931.80,17393.39，1678.07，1649.14,1496.76,1444.68,1365.60,1336.67,1305,81,1234.44，1166.93,742.59。实施例18Boc-色氨酰-p-四氢咔啉-3-甲酰基-甘氨酸苄酯(lk)的数据1.09g(76.5%);Mp139-143。C;ESI(m/e)650[M+H]+;[o_]D20=19.9(c=1.0,甲醇)；^-NMR(DMSO-4,500MHz)5=10.89(d,J=5Hz,IH),10.87(s,IH),8.48(dd,J=10Hz,J=5Hz,IH),8.41(s,IH)，7.465(d,JN5Hz,IH),7.40(d,J=10Hz，IH),7.28(m,5H),7.12(m，4H),7.025(d,J=15Hz，IH),5.735(d,J=5Hz,2H),4.945(d,J=5Hz,IH)，4.835(d,J=5Hz，2H),4.31(s,IH),4.28(s,IH),3.04(dd,J=10Hz,J=5Hz,2H),1.40(s,3H);13C-NMR(DMSO-^4,75MHz)5=171.33,169.88,155.80,136.69,136.24,130.07,128.84，129.34,127.82,126.85,124.19,121.37,118.90,118.00,111.80，111.50,109.65,66.31,52.31,28.61，22.28;IR3394.72，3296.35,2974.94,2927.94,1743.65，1639.49,1498.69,1452.40,1367.53,1336.67,1278.81,1234.44，1165.00,738.74。实施例19Boc-色氨酰-p-四氢昨啉-3-甲酰基-组胺酸苄酯(11)的数据0.56g(53.2%);Mp138-140°C;ESI(m/e)730[M+H]+;[a]D20=19.9(c=1.0,甲醇);工HNMR(CDCl3)S/ppm=13.4(s,IH),10.23(s,IH),10.01(s,IH)，8.02(s,IH),7.45(s,IH),7.27(d,J=5Hz,IH),7.19(m,5H),7.18(m,4H),6.88(s,IH),6.86(d，J=7.5Hz,IH),6.65(d,J=5Hz,IH),5.87(s,2H),5.59(d,J=7.5Hz,2H),4.61(s,2H),4.81(t,J=5Hz,IH),3.06(d,J=5Hz,2H)，3.00(d,J=10Hz,2H),2.51(m,IH),1.99(s,2H),1.39(s,9H);13CNMR(CDC13)S/ppm=172.30,169.88,157.21,136.64,131.24,130.22,128.78,127.74,121.64,121.15,118.91,118.70,111.36，110.51，104.89,78.72,66.55,55.17，52.43,34.94，31.10,29.73,28.57,27.40，24.89,22.80;IR3331.07,3070.68,2926.01,2848.86，2115.91,1627.92,1507.06,1448.54,1435.04,1363.67,1346.30,1309.67,1271.09,1230.58,1186.22,1157.29,891.11,738.74。实施例20Boc-色氨酰-p-四氢咔啉-3-甲酰基-蛋氨酸苄酯(lm)的数据1.06g(55.4%);Mp97-99°C;ESI-MS(m/e)746[M+H]+;[ct]D20=33.5(c=L0,甲醇)；丄H-NMR(DMSO-4,500MHz)5=10.895(d,J=15Hz,1H)，7.57(d，J=10Hz,1H),7.30(m,5H),7.12(m,5H),6.705(d,J=5Hz,1H),5.595(d,J=5Hz,2H)，4.66(t,J=7.5Hz,2H),3.605(d,J=5Hz，2H)，2.955(q,J=10Hz,2H),2.38(s,3H),1.50(s,3H);13C-NMR(DMSO-c/6，75MHz)5=170.87,155.46,136.48,128.87,128.24,127.86,121.36,118.82,110.20,66.24,50.83,39.44,33.82,28.56，24.39;IR3400.50,3304.06,3055.24,2970.38,2918.30,1747.51，1685.96,1498.69,1456.26,1367.53,1338.60,1234.44,1163.38,740.67。实施例21Boc-色氨酰-p-四氢咔啉-3-甲酰基-谷氨酸双苄酯(ln)的数据0.96g(63.2%);Mp99-101。C;ESI-MS(m/e)834[M+H]+;[汰]020=8.2(c=1.0,甲醇)；工H-NMR(DMSO-t/6,500MHz)5=10.87(d,J=10Hz,1H),8.505(d,J=5Hz,1H),8.445(d,J=5Hz，1H),7.635(d,J=5Hz,1H),7.54(t,J=5Hz,IH),7.40(m,4H),7.18(m,4H),5.725(d,J=5Hz,2H),5.13(m,IH),5.06(s,2H)，3.31(m,2H),1.31(s,3H);13C-NMR(DMSO-^,75MHz)5=172.89，171.53,170.16，156.40,136.56,129.73,128.84,127.58,121.31,118.85,117.89,111.34,79.34,66.40,52.41,30.51，28.55,26.46,21.93;IR3311.78,3273.20,2951090,2924.09,1735.93,1678.07,1624.06,1498.69,1454.33，1390.68,0367.53,1338.60,1350.81,1236.37,1163.08,740.67。实施例22Boc-色氨酰-p-四氢咔啉-3-甲酰基-天冬酰胺苄酯(10)的数据1.17g(56.2%);Mp141-143。C;ESI(m/e)726[M+H]+;[<i]D20=7.2(c=1.0,甲醇^H-NMR(DMSO-4,500MHz)5=10.88(s,IH),10.84(s，IH),8.44(d,J=5Hz,IH),7.66(d,J=5Hz,IH),7.43(d,J=5Hz,IH),7.23(m,4H),7.04(m,4H),5.74(d,J=10Hz,2H),4.72(t，J=5Hz,IH),4.68(t,J=7.5Hz，IH),4.61(s，2H),4.59(t,J=5Hz,IH),3.35(d,J=10Hz,2H),3.12(m,2H),2.59(d,J=5Hz,2H)，1.39(s,3H);13C-NMR(DMSO-^4,75MHz)5=173.07,171.64,170.89,156.05,136.34,130.07,127.97,127.27,121.44,121.10,118.93,110.74,109.45,79.65,66.37,55.08,52.54,49.72,38.85,36.97,31.12,28.58;IR3348.42,3331.07,2974.23，2927.94,1739.79,1678.07,1496.76，1456.26,1390.68,1367.53，1336.67，1309.67,1161.15,740.67。实施例23Boc-色氨酰-P-四氢咔啉-3-甲酰基-脯氨酸苄酯(lp)的数据0.99g(80.3%);Mp133-135°C;ESI(m/e)690[M+H]+;[a]D20=-118.8(c二1.0，甲醇)；iH-NMR(DMSO-^,500MHz)^10.88,(d,J=10Hz,1H),7.645(d,J=5Hz，1H),7.64(m,1H)，7.28(m,5H),7.22(m,4H),5.78(d,J=10Hz,2H),4.84(m，2H)，4.38(t,J=10Hz,2H),3.48(m,2H),3.07(m,2H)，1.38(s,3H);13C-NMR(DMSO-d6，75MHz)5=172.28，171.97,155.71，136.58,136.45,130.10，128.97,127.73,127.63,126.92,121.06,118.86,111.32，110.43,104.71,78.70，66.28,59.17，52.76,47.04，31.12,28.80,28.59,22.89,22.02;IR3390.86,3315.63,3057.17，2974.23,1743.65,1639.49,1496.67,1454.82,1365.60,1336.67,1271.09,1238.30,1166.93,740.67。实施例24Boc-色氨酰-p-四氢咔啉-3-甲酰基-对甲氧基苄基半胱氨酸苄酯(lq)的数据1.32g(78.6%);Mp101-103°C;ESI(m/e)816[M+H]+;[ct]D20=-14.3(。=1.0,甲醇)；丄H-NMR(DMSO-4,500MHz)5=10.89(d,J=15Hz,IH),8.495(d,J=5Hz,IH),7.650(d,J=5Hz,IH),7.500(m,5H),7.25(m,5H),7.150(m,4H),5.805(d,J=5Hz,2H),4.83(s，IH)，3.70(s,2H),3.63(s,3H),3.375(d,J=5Hz,2H)，1.340(s,3H);13C-NMR(DMSO-t/6,75MHz)5=172.79,170.54,156.45,138.22,136.45,136.16,129.79,129.24,128.82,127.58，127.29,121.14,119.11,111.37,110.77,109.19，79,34，78.58,66.69,55.37,52.44，35.59,32.18,28.16,21.58;IR3402.43,3307.92,2966.52,2931.80,1741.72,1680.00,1643.35,1498.69,1454.33,1390.68,1367.53,1336.67,1307.74,1234.44,1163.08,740.67。实施例25Boc-色氨酰-p-四氢咔啉-3-甲酰基-硝基精氨酸苄酯(lr)的数据l.Olg(79.0%);Mp103-105°C;ESI(m/e)795[M+H]+;[n]D20=18.6(c=1.0,甲醇)；!H-NMR(DMSO-4,500MHz)5=10.89(s,IH),10.86(s,IH),8.49(d,J=10Hz,IH),8.33(s,IH),7.64(d:J=10Hz,IH),7.60(d，J=10Hz,IH),7.485(d，JN5Hz，IH),7.33(m,4H),7.17(m,4H),5.73(d,J=10Hz,2H),5.15(t,J=7.5Hz,2H),4.91(m,2H),4.18(t,J=7.5Hz,2H),3.58(t,J=5Hz,2H),2.10(s,IH)，1.67(m，IH),1.38(s,3H);13C-NMR(DMSO-475MHz)5=171.98,170.10,159.81,156.34,136.61,136.32，130.20,136.24,130.20,129.78,128.89,127.84,127.60,121.14，119.06,111.37,110.68,109.27,79.65,78.60,66.58,52.86,31.15,28.26，22.05;IR3311.78，3273.20,2974.23,2931.80，1793.79,1685.79,1624.06,1529.55,1454.33,1440.83,1390.68,1365.60,1338.60,1255.66，1163.08,740.67。实施例26Boc-色氨酰-p-四氢咔啉-3-甲酰基-苏氨酸苄酯(ls)的数据1.38g(71.0%);Mp125-127。C;ESI(m/e)694[M+H]+;[a〗D20=9.7(c=1.0，甲醇)；！H-NMR(DMSO-^，500MHz)5=10.87(t,J=7.5Hz,lH),10.77(s，1H),8.18(d,J=10Hz,lH),7.98(d,J=10Hz,1H)，7.31(m，5H),7.08(m,5H),5.88(d,J=15Hz,2H),5.05(m，2H),3.11(m,2H),3.01(m，2H)，2.10(s，1H),1.37(s,3H),1.31(s,3H);13C-NMR(DMSO-^4,75MHz)S=171.87,136.74,136.54,129.53,128.10,127.79,126.94,126.85,124.26,121.08,118.88,118.47,111.49,111.33，110.59,109.60,66.81,66.65,58.62,58.30,54.55,31.75,31.13,20.61.IR3373.50,3313.71,2958.80，2924.09,2852.72,1743.65,1685.79,1624.06,1498.69,1442.75，13卯.68,1367.53,1334.74，1307.74,1234.44,1165.00，740.67。实施例27Boc-色氨酰-p-四氢咔啉-3-甲酰基-酪氨酸节酯(lt)的数据1.20g(43.2%);Mp145-146°C;ESI(m/e)778[M+H]+;[a]D20=29.9(c4.0，甲醇)；^-NMR(DMSO-4500MHz)5=10.86(d,J=10Hz,IH),8.525(d,J=5Hz,1H),7.78(d,J=10Hz,IH),7.50(m，5H),7.25(m,5H),5.605(d，J=5Hz,IH),4.94(m,2H),3.38(m，2H),3.09(d,J=10Hz,2H),1.43(s,3H);13C-NMR(DMSO-a6,75MHz)S=171.47,169.92,156.60,136.59,136.07,130.35，129.68,128.36,128.03,127.83,127.58,126.75,121.34,119.52,119.52,118.75,115.60,111.85,110.18，79.37,66.35,54.85,35.76,31.14,28.59,24.93;IR3392.79,3311.78,2974.23，2927.94,1739.79,1643.35,1502.55,1440.83,1367.53,1338.60,1242.16,1234.44,1166.93,738.74。实施例282-色氨酰-p-四氢咔啉-3-甲酰基-氨基酸苄酯盐酸盐的制备通法将3.18mmolBoc-色氨酰-p-四氢咔啉-3-甲酰基-氨基酸苄酯置于50mL茄形瓶中并用2mL乙酸乙酯溶解。冰浴下往得到的溶液中缓慢滴入2mL4N氯化氢/EtOAc。反应混合物0。C搅拌3小时后减压浓縮至干,残留物先用乙醚反复抽取(10mlx4)，然后用甲醇-乙醚重结晶，得到标题化合物。实施例292-色氨酰-p-四氢咔啉-3-甲酰基-缬氨酸苄酯盐酸盐(2a)的数据0.092g(80%);ESI(m/e)590[M-H]..iHNMR(CDCl3):S/ppn^10.99(s,1H),10.92(s,1H)，8.11(s，1H),7.40(m,1H),7.30(m,5H),7.21(m,4H),7.01(d,JN10Hz，1H),6.97(s,1H),5.25(d，J=10Hz,1H),4.93(t,J=7.5Hz，1H)，4.85(d，J-10Hz,1H),4.54(s,2H),3.93(m,1H),3.06(d,J=10Hz,2H),2.80(d,J=10Hz,2H),2.08(s,2H)，1.05(d，J=7.5Hz,6H);"CNMR(CDC13)S/ppm=167.99,136.55,136.20，129.00,128.82,127.63,125.32,121.74,119.16,118.94,112.08,107.26,66.34,65.37,57.71,52.74,33.80,24.90,18.58,17.92,15.63。实施例302-色氨酰-p-四氢咔啉-3-甲酰基-天冬氨酸双节酯盐酸盐(2b)的数据0.107g(83%);ESI(m/e)696[M-町.toMR(CDC13)S/ppm=10.42(s,1H)，8.23(s,1H)，7.27(d,J=2Hz,1H),7.21(m,10H),7.14(m，4H),6.76(t，J=10Hz,IH),5.78(d,J=7.5Hz,IH)，5.21(s，2H),5.18(s,2H),5.02(d,J=3Hz,IH),4.96(t,J=5Hz，IH),4.34(s,2H),3.40(t,J=7.5Hz，IH),3.04(d，J=10Hz,IH),2.94(d,J=7.5Hz，2H),2.87(d,J=7,5Hz，IH),1.99(s,2H);13CNMR(CDC13)S/ppm=170.51,169.50,136.51,136.20,129.77,128.77,127.53，126.74,121.62,119.04,106.85,104.21,66.71,66.28,54.97,51.016,49.31,36.11,17.63,22.81。实施例312-色氨酰-p-四氢咔啉-3-甲酰基-谷氨酰胺苄酯盐酸盐(2c)的数据0.083g(81%);ESI(m/e)602[M-H]..iHNMR(CDCl3):S/ppm:10.06(s,IH),8.15(s,IH),7.23(m,5H)，7.19(m,4H),7.00(m,IH),6.95(d，J=7.5Hz,IH),6.82(s,IH),6.32(s,2H),5.28(d,J=5Hz,2H)，4.93(t,J=7.5Hz,IH),4.88(s,IH),4.50(s,2H),4.33(t,J=7.5Hz,IH),3.94(m,IH),3.06(d,2H),2.12(m,2H),1.92(s,2H);13CNMR(CDC13)S/ppm=172.36,171.55,170.50,136.45,129.77,127.60,127.35,123.01,121.55,121.20,120.00,119.06,111.80,111.45,106.78,56.48,52.27,41.62,27.23,23.86,21.51。实施例322-色氨酰-P-四氢咔啉-3-甲酰基-(Nco-苄氧羰基)赖氨酸苄酯盐酸(2d)的数据0.078g(82.0%);ESI陽MS(m/e)709[M-H]..IHNMR(CDC13)S/ppm=10.91(s,IH),10.87(s,IH),8.24(s,IH),8.09(s,IH),7.29(m,10H),7.27(m，IH),7.19(m,4H),7.17(d,J=7.5Hz,IH),6.75(t,J=5Hz,IH),5.79(d,J=7.5Hz,2H),5.24(s,2H),4.92(t,J=5Hz,IH),4.42(s,2H),4.39(t,J=7.5Hz,IH),4.03(m，IH),3.05(q,J=7.5Hz,J=7.5Hz,2H)，2.09(s,2H),1.92(m,2H),1.64(m,2H),1.33(m,2H);13CNMR(CDC13)5/ppm=171.99，170.03,169.76,156.55,137.74,136.75，130.01,129.76,128.20,127.57,121.56,119.20,111.58,106.78,66.27,65.36，52.56,50.87,42.26,30.94,29.44,23.16,15.62。实施例332-色氨酰-p-四氢咔啉-3-甲酰基-亮氨酸苄酯盐酸盐(2e)的数据0.103g(90%);ESI-MS(m/e)60争-町.(CDC13)S/ppm=11.02(s,IH),10.87(s，lH),8.23(s,IH),7.72(d,J=7.5Hz,IH),7.31(m,IH),7.27(m，5H),7.20(m,4H),7.02(d,J=5Hz，IH),6.97(t，J=10Hz,IH),5.68(d,J=5Hz,IH),5.24(s,2H),4.98(t,J=7.5Hz,IH),4.58(d,J=5Hz,2H),4.40(s，2H)，4.18(m，IH),3.40(m,IH),2.51(s,2H),1.10(t,J=5Hz，IH)，7.32(d，J=6Hz，6H);13CNMR(CDC13)5/ppm=172.22,171.07，170.02,169.77,129.93,129.70,128.19,127.53,121.63,119.18,111.57,106.76,106.39,66.27,65.36,54.38,50.99,42.24,24.21,23.14,21.74。实施例342-色氨酰-p-四氢咔啉-3-甲酰基-丙氨酸苄酯盐酸盐(2Q的数据0.089g(91.0%);ESI(m/e)562[M-H]-.输MR(CDC13)S/ppm=11.02(s，IH),10.87(s，IH),8.23(s,IH),7.72(d,J=7.5Hz,IH),7.31(m,IH),7.27(m,5H),7.20(m,4H),7.02(d,J=5Hz,IH)，6.97(t，J=5Hz，IH),5.68(d,J=5Hz,IH),5.24(s,2H),4.98(t,J=7.5z,IH),4.58(d,J=5Hz,2H),4.40(s,2H),4.18(m,IH),3.40(m,IH),2.51(s,2H),1.10(t,J=5Hz，IH),7.32(d,J=6Hz,6H);13CNMR(CDC13)S/ppm=172.22，171.07,170.02,169.77,129.93,129.70,128.19，127.53，121.63,119.18,111.57,106.76,106.39，66.27,65.36，54.38,50.99,42.24,24.21,23.14,21.74。实施例352-色氨酰-p-四氢咔啉-3-甲酰基-色氨酸苄酯盐酸盐(2g)的数据0.107g(80%);ESI(m/e)677[M-H]-.iHNMR(CDCl3)S/ppm=10.50(s,IH),8.14(s,IH)，10.06(s,IH),7.26(d，J=2.5Hz,IH),7.21(m,5H),7.18(m,8H),6.97(m,IH),6.92(t,JM7.5Hz,IH),6.75(t,J=5Hz,IH),5.40(s,2H),4.92(d,J=3.0Hz,IH)，4.80(d,J=10.25Hz,IH),4.45(s,2H),4.37(m,IH)，3.18(d,J=7.5Hz,IH),3.07(d,J=8.3Hz,4H),2.00(s,IH);13CNMR(CDC13)S/ppm=172.03,170.06,136.62,128.73,128.30,126.72,125.18，124.27,119.03,117.99,111.93，66.34,65.37,53.99,51.61,47.98,33.80，27.93,25.81,24.91,15.63。实施例362-色氨酰-p-四氢昨啉-3-甲酰基-0-节基丝氨酸苄酯盐酸盐(2h)的数据0.088g(86.0%);ESI(ra/e)654[M-H]-.i丽MR(CDC13)S/ppm=10.55(s,IH),8.20(s,IH),7.26(t,J=7.5Hz,IH),7.20(m,10H),7.10(m,4H),6.96(d,J=7.5Hz,IH),6.71(d,J=7.5Hz,IH):5.53(d,J=7.5Hz,2H),4.98(t,J=5Hz，IH),4.86(t,J=5Hz，IH)，4.67(s,2H),3.90(m,IH)，3.88(d,J=10Hz，2H),3.21(d,J=7.5Hz,4H),1.99(s,2H);"CNMR(CDC13)S/ppm=171.28,170.18,169.71,138.26,137.77，136.58,130.09,129.74,128.71,128.13,127.97,121.54,119.01,117.90，111.96,106.79,72.77,69.54,66.53,54.27,52.99，26.40，23.75。实施例372-色氨酰-P-四氢咔啉-3-甲酰基-异亮氨酸苄酯盐酸盐(2i)的数据O.lllg(93%);ESI(m/e)604[M-町.1HNMR(CDC13)S/ppm=10.92(s,1H),8.24(s，1H),7.27(m，1H),7.22(m,5H),7.20(m,1H),7.14(m,4H),6.93(s,2H),5.83(d,J=10Hz,1H),5.24(s,2H),4.91(t，J=10Hz,3H),4.88(t,J=5Hz,1H),4.54(s,2H)，4.15(t,J=7.5Hz,1H),3.14(m,1H)，3.06(d,J=10Hz,2H),1.99(s,2H),1.06(d,J=5Hz,3H),0.88(t,J=5Hz，3H);13CNMR(CDC13)S/ppm=171.46,169.96,167.98，136.75,130.28，129.81,128.77,127.61,126.79,121.50，119.15,111.59,106.68,104.28,66.31,57.12，53.88，36.91,33.80,27.43,25.41,24.89，15.89,11.62。实施例382-色氨酰-p-四氢咔啉-3-甲酰基-苯丙氨酸苄酯盐酸盐(2j)的数据0.120g(91%);ESI(m/e)638[M-H]-.1HNMR(CDC13)S/ppm=10.82(s,1H),10.76(s,1H),8.17(s,1H),7.25(m，5H),7.22(m，1H)，7.18(m,4H),7.15(m,1H),6.98(m,1H),6.93(d,J=5Hz,1H),6.76(t,J=7.5Hz,1H),5.75(d,J=7.5Hz,1H),4.94(t,J=5Hz,IH),4.80(t,J=7.5Hz，IH),4.45(s,2H),3.80(t,J=Hz,IH),3.29(d,J=7.5Hz,2H),3.07(d,J=7.8Hz，IH)，2.91(d,J=7.3Hz，2H)，2.50(s,2H);13CNMR(CDC13)S/ppm=171.42,170.86,169.88,137.71,136.12,129.89,129.05,128.78,127.53,126.93,126.72,121.67,119.20,119.05,111.61,111.43,106.87,66.46,63.65,54.14,51.44,36.73,36.53,23.15。实施例392-色氨酰-p-四氢咔啉-3-甲酰基-甘氨酸苄酯盐酸盐(3k)的数据0.078g(96%);ESI(m/e)547[M-H]—.1HNMR(CDCD)S/ppm=9.08(s,IH),8.93(s,IH),8.19(s,IH)，7.53(m,IH),7.44(m,IH)，7.32(m，5H)，7.22(m,4H),6.98(d,J=5Hz,IH),6.97(d，J=5Hz,IH),5.89(d,J=5Hz，2H)，5.47(s，2H),5.03(t，J=5Hz,IH)，5.00(s,2H),4.27(m,IH),3.09(m,IH),3.01(d,J=7.5Hz,2H),1.99(s,2H);13CNMR(CDC13)5/ppm=169.97,166.32165.89,136.61，128.67,127.58，127.07,124.49,121.47,118.95,118.05,111.97,109.51,66.72,65.36，49.50,42.28，41.77,28.79,15.62。实施例402-色氨酰-P-四氢咔啉-3-甲酰基-组氨酸苄酯盐酸盐(21)的数据0.087g(81%);ESI(m/e)628[M-H]-.l丽MR(CDC13)S/ppm=10.52(s,IH),9.55(s,IH),8.06(s,IH),7.44(d，J=10Hz,IH),7.25(s,5H),7.17(m,4H),7.07(m,IH),6.18(t,J=5Hz,IH),5.85(d,J=5Hz，2H),5.77(d,J=7.5Hz，IH),4.87(t,J=7.5Hz，IH),4.83(t,J=5Hz,IH)，4.55(s,2H),4.00(t,J=7.5Hz,IH),3.12(d,J=10Hz,2H),3.06(m,2H),1.21(s,2H);13CNMR(CDC13)S/ppm=170.31,169.97,157.20,136.64,129.69,128.23,127.57，121.53,11904,118.31,111.57,106.52,63.63,53.20,48.00,33.77，25.80,22.95。实施例412-色氮酰-p-四氢咔啉-3-甲酰基-蛋氨酸苄酯盐酸盐(2m)的数据0.096g(85%);ESI(m/e)618[M-H]—.iflNMR(CDC13)S/ppm=10.99(s,IH),10.88(s，IH),8.26(s,IH),7.27(m,IH),7.22(m,5H),7.17(m,4H),6.84(s,IH),6.82(d,J=7.5Hz,IH),5.54(s,2H),4.55(d，J=5Hz,IH),4.53(s,2H),3.69(m,IH),3.42(t,J=7.5Hz,2H),3.12(d,J=5Hz，2H),2.79(d,J=5Hz，2H),2.43(t,J-lOHz,2H),2.41(m,2H),2.09(s,3H),2.01(s,2H);13CNMR(CDC13)5/ppm=167.97，136.53,128.87,128.22,127.62,125.68,121.71,119.13,118.48，112.07,107.26,65.83,65.47,49.65，45.93,42.35,27.64。实施例422-色氨酰-p-四氢味啉-3-甲酰基-谷氨酸双苄酯盐酸盐(211)的数据0.078g(86%);ESI(m/e)710[M-H]-.1HNMR(CDC13)S/ppm=11.01(s,IH),10.85(s,IH),8.23(s,IH)，7.36(m,10H),7.26(m,IH),7.18(m,4H),6.97(d,J:7.5Hz,IH),5.78(d,JK7.5Hz,IH),5.40(s,2H)，4.99(t,J=10Hz,IH),4.82(t,J=5Hz,IH),4.39(s,2H),4.34(m,IH),3.18(d,J=5Hz,2H),2.35(q,J=5Hz,J=5Hz,2H),2.24(t,J=7.5Hz,2H),1.99(s,2H);13CNMR(CDC13)S/ppm=172.55,172.40,171.39,136.84,136.59,136.20,129.96,128.87，128.21，127.58,121.65,119.20，111.59,111.42,106.85,66.45,65.98,52.29,33.80,27.61,26.37,24.13,23.25。实施例432-色氨酰-p-四氢昨啉-3-甲酰基-天冬酰胺苄酯盐酸盐(20)的数据0.089g(87%);ESI(m/e)605[M-H]-.^MR(CDC13)S/ppm=10.48(s,IH),10.46(s,IH),8.15(s,IH),7.27(m,IH),7.23(m,5H)，7.19(m，4H),6.86(d,J=10Hz,IH),6.73(d,J=7.5Hz，IH),5.79(d,J=7.5Hz,2H),4.92(t，J=7.5Hz,IH),10.64(t,J=5Hz,IH),4.50(s,2H),4.40(t,JK7.5Hz:IH),3.04(d,J=10Hz,2H),2.65(d,J=7.5Hz，2H),1.99(s,2H);13CNMR(CDC13)S/ppm=171.24:169.72，136.59,128.76,128.01,127.57,126.88,121.57,119.01,117.93,111.88,106.41,89.25,66.39,54.65，49.61,36.85,29.36,26.45,21.80。实施例442-色氨酰-p-四氢咔啉-3-甲酰基-脯氨酸苄酯盐酸盐(2p)的数据0.122g(89%);ESI(m/e)588[M-町.i冊MR(CDC13)S/ppm=10.34(s,IH),8.16(s,1H),7.27(m，1H),7.24(m,5H)，7.17(m,4H),7.06(m,1H)，6.92(d,J=7.5Hz，1H),6.82(t,J=10Hz,1H),5.72(d,J=7.5Hz,2H)，4.89(t,J=10Hz，IH),4.45(s，IH),4.31(t,J=7.5Hz,2H),4.01(m,IH),3.80(t,J=7.5Hz,2H),3.09(d,J=7.5Hz,2H),3.06(d,J=5Hz,2H),2.30(m,2H),2.00(s，2H);13CNMR(CDC13)S/ppm=173.40,169.07,136.86，136.50，128.97,128.00,127.58,125.61,121.68,121.37,119.21,119.06,111.57,111.38，106.74,67.76,59.15,51.39,49.30,47.21，28.92,23.46,22.30。实施例452-色氨酰-p-四氢咔啉-3-甲酰基-对甲氧基苄基半胱氨酸苄酯盐酸(2q)的数据0.121g(83%);ESI(m/e)668[M-H]-.输MR(CDC13)5/ppm=10.88(s,IH),8.24(s,IH),7.22(m,5H),7.19(m,4H),7.04(m,IH),7.00(d,J=7.5Hz,IH),5.30(s,2H),4.93(m，2H),4.41(s,2H),3.77(m,IH),3.72(s,2H),3.37(s,3H),3.32(t,J=10Hz,2H),2.82(t,J=7.5Hz，4H),1.92(s,2H);13CNMR(CDC13)S/ppm=170.59,170.09,169.75,136.70,136.16,129.44,129.22,128.15，127.54,127.24,121.69,121.64,119.05,112.05,111.60,111.45,66.71,65.35,52.32,35.77，35.53,32.10,23.99。实施例462-色氨酰-p-四氢咔啉-3-甲酰基-硝基精氨酸苄酯盐酸盐(2r)的数据0.086g(85%);ESI(m/e)692[M-H]..1HNMR(CDC13)S/ppm=10.01(s,IH),9.10(s,IH),8.08(s,IH)，8.03(s,IH),7.31(m,IH),7.29(m,5H),7.22(m,4H),7.16(m,IH),7.00(d,J=2.5Hz,IH)，6.97(d,J=7.5Hz,IH),6.95(d,J=7.5Hz,IH),5.24(s,2H),4.95(t,J=7.5Hz,IH),4.50(s，2H)，4.03(m,IH),3.07(d,J-10Hz,IH),3.03(t,J=10Hz,2H),2.50(t,J=5Hz,2H),2.09(s,2H),1.99(s,IH),1.92(s,IH),1.73(m,2H),1.57(m,2H);13CNMR(CDC13)S/ppm=172.36,171.95,159.82，136.79,136.27,128.88,128.24,127.60,126.87,124.90,121.55,119.05,113.42,111.88,66.47,65.33，63.65,52.48,50.97,28.41,25.46,21.51。实施例472-色氨酰-P-四氢咔啉-3-甲酰基-苏氨酸苄酯盐酸盐(2s)的数据O.lOlg(87%);ESI(m/e)592[M-H]-.t丽MR(CDC13)5/ppm=10.78(s,IH),10.55(s,IH),8.32(s,1H),7.27(m，1H)，7.23(m,5H),7.12(m，4H),6.97(m,1H),6.82(d,J=5Hz,1H),6.78(s,1H),6.71(d，J=10Hz,1H),5.53(s,2H),4.93(m,1H),4.69(t,J=5Hz,1H),4.52(t,J=5Hz，1H)，4.46(s,2H)，2.51(d,J=5Hz,1H),1.91(s，2H),1.23(d,J=5Hz,3H);13CNMR(CDC13)5/ppm=171.58,170.23,169.44,136.32,130.17,129.59,128.80,127.68,127.58,126.52,121.50，119.21，111,55，68.13，67.37,65.34,58.90，51.56,42.24,27.41,20.76，20.09,16.63。实施例482-色氨酰-p-四氢咔啉-3-甲酰基-酪氨酸苄酯盐酸盐(2t)的数据0.098g(83%);ESI-MS(m/e)654[M-町.toMR(CDC13)5/ppm=10.76(s,IH),8.14(s,IH),7.27(d，J=5Hz，IH)，7.20(m,5H),7.10(m,4H),6.97(d,J=7.5Hz,IH)，6.87(d，J=7.5Hz,IH),6.79(s，IH),6.76(d,J=7.5Hz，2H)，6.55(s,2H),5.07(s,IH),4.94(t,J=7.5Hz,IH),4.82(t,J=5Hz,IH),4.03(t,IH),3.31(d,J=7.5Hz,2H),3.25(d,J=Hz,2H)，2.96(t,J=7.5Hz,2H),1.99(s,2H);13CNMR(CDC13)S/ppm=169.49,136.46,136.16,130.49，130.43,128.74,127.69，127.55,121.66,121.25，119.55,111.44,110.18,106.59,66.39,63.69,54.13,52.80,35.83,33.80,23.14,15.62。实验例1本发明化合物(2a-t)抗肿瘤细胞增殖活性评价l)受试样品本发明实施例29-48所制备的化合物化合物(2a-t);用含lXDMSO的PBS配制成所需浓度。2)人癌细胞株S180细胞(腹水型肉瘤细胞)，H22细胞(小鼠腹水型肝癌细胞株)3)主要仪器酶标仪450，Biorad公司高压灭菌锅400Ep-Z，Bruckmanning公司细胞孵育箱INC153,memmer公司低温离心机SPD111V，Thermo公司96孔细胞培养板Costar公司石英自动双重纯水蒸馏器1810—B，江苏荣华仪器制造有限公司4)主要试剂MTT:四噻唑蓝(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)2,5-diphenyl-tetrazoliumbromide)(Flka)，溶于PBS中，浓度为5mg/ml，过滤除菌，4'C避光保存。PBS:每升溶液中含有NaCl8.2g，KC10.20g，Na2HP04.H201.56g,KH2PO40.2g，pH7.4RPMI-1640培养基Gibco公司DMEM培养基Gibco公司改良的Mccy's5Amedium十L-Glutamine培养基Gibco公司胎牛血清Hyclone公司青霉素石药集团中诺药业(石家庄)有限公司链霉素石药集团中诺药业(石家庄)有限公司DMSO:Hyclone公司。其余所用试剂均为市售分析纯.5)本发明化合物2a-t抗肿瘤细胞增殖评价的实验方法分别将生长状态良好、处于对数生长期的HL-60细胞以5xl(^个/mL的密度接种于96孔板，每孔100pl,按预设的浓度梯度加入待测、经灭菌处理的样品，对照组加入等体积的溶解样品的溶媒。继续培养48小时后，每孔加25pl浓度为5mg/ml的MTT溶液，继续置于37'C孵育四个小时，离心5min(2500rpm)小心吸出上清液，每孔加入100pl的DMSO溶解紫色残留物(甲瓒)，振荡约15min沉淀全部溶解，于570nm酶标仪上测定aD.(吸收值)，波长570跳按照公式"相对生存率=^!含药-D空白)/CD对照-"空白)x100%"计算每一个样品浓度下的样品对肿瘤细胞的抑制率。实验重复3次,以抑制率对药物浓度作图，按作图法求出IC50(半数有效抑制浓度)值。6)实验结果实验结果见表l。表l2a-t抗肿瘤细胞增殖活性(IC5Q±SD^M)<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>实验例2本发明化合物2a-t的抗肿瘤活性实验1)实验材料受试化合物本发明实施例29-48所制备的化合物化合物(2a-1);阳性对照品为阿糖胞苷实验动物SCI小鼠(KM清洁级)，雄性，体重20士2g(J土s);购自北京大学医学部动物实验中心提供。每12只小鼠一组，空白及阳性对照各一组。瘤源小鼠Si80肉瘤，由北京大学医学部动物实验中心提供，自行传代维持。溶剂生理盐水，0.5XCMC-Na溶液。2)剂量设置受试化合物2a-t及阿糖胞苷设为8.9pmol/kg，均采用腹腔单次给药。3)药物配制受试化合物2a-t在水中难溶，实验时加入少量的吐温80润湿助溶，逐渐加入0.5%CMC-Na溶液至所需要浓度即可。阿糖胞苷为水溶性，采用生理盐水溶解。4)给药剂量及给药方案受试化合物2a-t均以腹腔单次给药。按相应的给药剂量每天一次，0.2ml/鼠，连续给药7天，共给药7次。阴性对照以等体积的相应溶液，均以腹腔给药。按相应的给药剂量每天一次，0.2m1/鼠，连续给药7天，共给药7次。阿糖胞苷按8.9pmol/kg的剂量，腹腔给药。每天一次，0.2ml/鼠，连续给药7天，共给药7次。5)动物模型采用体内抗肿瘤腋皮下接种模型在无菌条件下抽取接种7天后取生长旺盛S咖腹水瘤瘤液，用生理盐水稀释成(1:2)的液体充分混合，将肿瘤细胞悬液用新鲜配制的0.2%台盼蓝染色,混匀后按白细胞计数方法计数，染蓝色者为死细胞，不染色者为活细胞，按如下公式计算细胞浓度和细胞存活率。细胞浓度z4大方格内活细胞数/4xl0、稀释倍数^细胞数/ml细胞存活率=活细胞数/(活细胞数+死细胞数)x100%将存活率大于90Q/。的瘤液用匀浆法制备成lxl0MVml的细胞悬液，于相应宿主腋皮下接种0.21111/鼠，制成实体瘤动物模型。6)检测指标及方法7)体内神经毒性观察每日观察给药各组动物的反应小鼠的自主活动、精神状态、毛发、呼吸、饮食，粪便性状。8)实体瘤抑瘤率和体重增长的测定各组连续给药7天后于第8天脱颈椎处死小鼠,称取体重(处死体重)，然后用镊子固定小鼠右腋肿瘤生长部位，剪开皮肤，暴露肿瘤，钝性剥离，称重，按如下公式计算抑瘤率。抑瘤率％=[(阴性对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/阴性对照组平均瘤重]x100%体重增长(g)=处死体重-原始体重-瘤重9)肝重、脾指数和胸腺指数的测定采用称重法即剥离肿瘤后的小鼠,再解剖取出脑、肝、肾、和脾,称取脑重(g)、肝重(g)、肾重(g)、脾重(mg)，并按如下公式计算脾指数。脾指数(mg/kg)-脾重/处死体重10)统计方法本实验数据统计均采用f检验和方差分析，以(7±&0)表示。11)实验结果受试化合物2a-t对荷S削肉瘤的体内抗肿瘤活性实验结果列入表2。给药剂量为8.9pmol/kg，经连续腹腔给药7天以后，平均肿瘤重量为1.69士0.61g至049士0.12g;阴性对照组的平均肿瘤重量为1.76i0.54g，有10个化合物具有显著的抗肿瘤作用，其中化合物化合物2a，e，i，l，m，r(瘤重范围为0.49士0.12g至0.63士0.20g，与生理盐水组比较p0.05)的抗肿瘤活性与阿糖胞苷相当。表2受试化合物2a-1对荷S18Q小鼠肿瘤重量的影响a化合物抑瘤率％瘤重NS0.76±0.16Arc30.02±0.44a0.56±0.1340.52±1.05a0.57±0.202b2.16±3.260.74±0.262c9.58±3.590.91±0.332d17.23±2.36b0.72±0.192e29.04±1.01a0.63±0.202f-1.39±3.900.78±0.092g21.19±3.42b0.57±0.252h10.67±2.470.78±0.242i35.45±7.390.75±0.442j18.22±5.670.74±0.152k24.61±2.14b0.57±0.222145.44±0.22a0.50±0.232m44.03土0.00r0.49±0.142n-7.24土2.630.92士0.272o13.14±3.580.80±0.412p15.35±3.220.90±0.402q8.69±1.270.71±0.242r35.55±1.21b0.47±0.262s-6.55±2.750.97±0.292t17.46±1.690.86±0.33a)Arc(阿糖胞苷)和2a-t给药剂量为8.9"mol/kg,昭=溶媒，n=12,平均瘤重表示为3f±SDg;b)与NS比较p〈0.01,与阿糖胞苷比较p〉0.05;c)与NS比较p〈0.01，与阿糖胞苷比较p<0.05;权利要求1、具有抗肿瘤活性的通式I化合物id="icf0001"file="A2008101144030002C1.tif"wi="55"he="27"top="36"left="64"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>通式I式中AA选自缬氨酸残基、天冬氨酸-γ-苄酯、谷氨酰胺残基、Nω-苄氧羰基赖氨酸残基、亮氨酸残基、丙氨酸残基、色氨酸残基、O-苄基丝氨酸残基、苯丙氨酸残基、异亮氨酸残基、甘氨酸残基、组氨酸残基、蛋氨酸残基、谷氨酸-δ-苄酯、天冬酰胺残基、脯氨酸残基、对甲氧基苄基半胱氨酸、硝基精氨酸残基、苏氨酸残基或酪氨酸残基。2、一种制备权利要求1所述通式I化合物的方法，包括-(1)将色氨酸转变为Boc-色氨酸；(2)将色氨酸转变为p-四氢咔啉-3-羧酸；(3)将p-四氢咔啉-3-羧酸转变为p-四氢咔啉-3-羧酸苄酯；(4)将氨基酸转变为氨基酸苄酯；(5)将Boc-色氨酸与p-四氢咔啉-3-羧酸苄酯縮合制备2-(800色氨酰)-|3-四氢咔啉-3-羧酸苄酯；(6)将2-(Boc-色氨酰)-卩-四氢咔啉-3-羧酸苄酯氢解制备2-(Boc-色氨酰)-卩-四氢咔啉-3-羧酸；(7)将2-(Boc-色氨酰)-p-四氢咔啉-3-羧酸和步骤(4)所制备的氨基酸苄酯縮合制备2-(Boc-色氨酰)-p-四氢咔啉-3-甲酰氨基酸苄酯；(8)将2-(Boc-色氨酰)-p-四氢咔啉-3-甲酰氨基酸苄酯脱去保护基Boc，即得。3、按照权利要求2所述的方法，其特征在于步骤(4)中所述的氨基酸苄酯选自缬氨酸苄酯、天冬氨酸双苄酯、谷氨酰胺苄酯、(N"-苄氧羰基)赖氨酸苄酯、亮氨酸苄酯、丙氨酸苄酯、色氨酸苄酯、0-苄基丝氨酸苄酯、异亮氨酸苄酯、苯丙氨酸苄酯、甘氨酸节酯、组胺酸苄酯、蛋氨酸苄酯、谷氨酸双苄酯、天冬酰胺苄酯、脯氨酸苄酯、对甲氧基苄基半胱氨酸苄酯、硝基精氨酸苄酯、酪氨酸苄酯或苏氨酸苄酯。4、一种治疗肿瘤的药物组合物，由治疗上有效量的权利要求1所述的通式I化合物和药学上可接受的载体或辅料组成。5、权利要求l所述的化合物在制备抗肿瘤药物中的用途。全文摘要本发明公开了2-色氨酰-β-四氢咔啉-3-甲酰基氨基酸苄酯及其制备方法和应用，属于生物医药领域。本发明2-色氨酰-β-四氢咔啉-3-甲酰基氨基酸苄酯的结构式为通式I所示，式中AA选自缬氨酸残基、天冬氨酸-γ-苄酯、谷氨酰胺、N^ω-苄氧羰基赖氨酸、亮氨酸残基、丙氨酸残基、色氨酸残基、O-苄基丝氨酸残基、苯丙氨酸残基、异亮氨酸残基、甘氨酸残基、组氨酸残基、蛋氨酸残基、谷氨酸-δ-苄酯、天冬酰胺残基、脯氨酸残基、对甲氧基苄基半胱氨酸、硝基精氨酸残基、苏氨酸残基或酪氨酸残基。本发明在肿瘤细胞模型和小鼠S₁₈₀肉瘤模型上评价了通式I化合物的抗肿瘤活性，实验结果表明，本发明通式1化合物具有优秀的抗肿瘤活性，可作为抗肿瘤剂应用。文档编号C07K5/08GK101597289SQ20081011440公开日2009年12月9日申请日期2008年6月2日优先权日2008年6月2日发明者张丽娜,彭师奇,明赵申请人:首都医科大学