专利名称：：全氟化碳类乳液的制作方法全氟化碳类乳液本申请要求2009年11月13日提交的美国专禾I』，专利临时申请号(U.S.ProvisionalApplicationNo.)为61Λ81，191，2009年10月19日提交的美国专利，专利临时申请号为61/279，359，2009年4月四日提交的美国专利，专利临时申请号为61/214，992，和2009年4月15日提交的美国专利，专利临时申请号为61/212，689的优先权，每一项申请被全文纳入本申请作为参考。贯穿本申请，参考了各种出版物，发表的专利申请和专利。为了更加完整地描述有关本发明所属的技术发展水平，这些公开文件的全文被纳入本申请作为参考。
背景技术：
：已知的全氟化碳(PFCs)是化学和生物学惰性的物质，它们能够溶解包括氧气和二氧化碳的很大体积的气体，达到的浓度远高于气体溶解在水，盐水和血浆中的浓度。此外，PFC类能输送这些气体扩散穿越一段距离。因此，PFC类可以成为将高浓度的氧气或者其它治疗气体传递给细胞组织和器官系统的合适工具。由于它们独特的性质，结果PFC类已经在治疗许多急性医疗处境的继发性缺氧时作为输送气体成份的首选(Spahn，1999；美国专利，专利公告号(PatentApplicationPublicationNo.)%2009-0202617)通常用于医学研究的PFC类是室温下生物学惰性的，有生物稳定的(biostatic)液体，其密度约为1.5-2.0g/mL，并且对于氧气和二氧化碳有高的溶解度。但是，纯的PFC液体不适合于注入血流中，这是由于它们的疏水性导致它们与血液不溶混的缘故。将纯的全氟化碳液体移置到小血管中去会产生血管梗阻和死亡。因此，对于需要血管内注射的医疗应用，必须将全氟化碳分散在生理上可接受的水性乳液(aqueousemulsion)中。参见，例如L.C.Clark,Jr.etal.,"EmulsionsofPerfluorinatedSolventsforIntravascularGasTransport",Fed.Proc.,34(6),pp.1468-77(1975)；K.Yokoyamaetal.,"APerfluorochemicalEmulsionAsAnOxygenCarrier，，，Artif.Organs(Ceve),8(1)，pp.34-40(1984)；以及美国专利，专利号(U.S.Pat.No.)为4，110，474和4，187,252。美国专利，专利号为5，514，720，5，684，050，5，635，539，5，171，755，5，407，962和5，536，753披露了包括全氟化碳的各种高度氟化化合物的乳液，它们被全文纳入本申请作为参考。全氟化碳乳液被视为有前景的技术，具有广泛的用途(参见，例如，Spiess,2009；Spahn,1999；Mason,1989)。但是，在本申请中所讨论的许多有关安全性和效能的问题以前并未被识别和解决，使得全氟化碳乳液可用于临床。发明综述本申请提供了一种包含一定量的全氟化碳液体的乳液(emulsion)，全氟化碳液体作为颗粒分散在连续液相中，其特征在于，该分散的颗粒具有单峰粒径分布(monomodalparticlesizedistribution)，以及乳液的应用。本发明还提供了一种生产全氟化碳乳液的方法，它包含步骤a)将乳化剂(emulsifier)与水一起混合；b)将全氟化碳加到步骤a)的混合物中；c)混合步骤b)的混合物以形成粗乳液(coarseemulsion)；d)获得步骤c)粗乳液的样品，测定该样品的粒径分布(particlesizedistributio)；e)如果步骤d)的样品具有单峰粒径分布(monomodalparticlesizedistribution)，则使步骤c)的粗乳液均质化；以及f)获得该乳液。本发明还提供了一种制备含有PFC乳液的药物产品(pharmaceuticalproduct)的方法，该方法包含a)获得一批PFC乳液或者粗乳液；b)1)测定该批次的粒径分布；2)测定存在于该批次中的残留氟化物(residualfluoride)的总量；或者3)测定存在于该批次中的溶血磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholine)(LPTC)的总量；以及c)仅当1)该批次被测定具有单峰粒径分布；幻按乳液的重量计，该批次被测定含有少于40ppm的残留氟化物；或者3)按乳液的重量计，该批次被测定含有少于7g/L的溶血磷脂酰胆碱(LPTC)时，由该批次制备药物产品。本申请还提供了一种验证乳液批次可用于药物使用(pharmaceuticaluse)的方法，该方法包含a)1)测定该批次的样品的粒径分布；2)测定该批次的样品中残留氟化物的总量；或者幻测定该批次的样品中溶血磷脂酰胆碱(LPTC)的总量；以及b)仅当1)该批次被测定具有单峰粒径分布；2)按乳液的重量计，该批次被测定含有少于40ppm的残留氟化物；或者幻按乳液的重量计，该批次被测定含有少于7g/L的溶血磷脂酰胆碱(LPTC)时，验证该批次可以用于药物使用。附图的简要说明图1显示生产权利要求乳液的生产流程图。图2A)显示加入PFC后不合格的粗乳液百分粒径分布(percentilesizedistribution)(PSD)；B)显示高剪切混合后不合格的粗乳液PSD。图3A)显示图2B的粗乳液在9000psig下均质化过程后的PSD；B)显示图2B的粗乳液在15000psig下均质化过程后的PSD。图4A)显示图2B的粗乳液在20000psig下均质化过程后的PSD；B)显示图2B的粗乳液在25000psig下均质化过程后的PSD。图5A)显示合格粗乳液的PSD；B)显示高压均质化过程后合格粗乳液的PSD。图6显示典型的均质化装置的示意图。发明的详细说明发明的实施例本申请提供了一种包含一定量的全氟化碳液体的乳液，全氟化碳液体作为颗粒分散在连续液相中，其特征在于，该分散的颗粒具有单峰粒径分布。在一个实施例中，乳液含有少于40ppm的按乳液重量计的残留氟化物。在另一个实施例中，按乳液的重量计，存在于全氟化碳乳液中的残留氟化物的量少于40ppm。在另一个实施例中，按乳液的重量计，乳液含有少于30ppm的残留氟化物。在另一个实施例中，按乳液的重量计，乳液含有少于20ppm的残留氟化物。在另一个实施例中，按乳液的重量计，乳液含有10ppm-40ppm的残留氟化物。在另一个实施例中，按乳液的重量计，乳液含有20ppm-30ppm的残留氟化物。在一个实施例中，按乳液的重量计，乳液含有少于7g/L的溶血磷脂酰胆碱(LPTC或LPC)。在另一个实施例中，存在于全氟化碳乳液中的溶血磷脂酰胆碱(LPTC)的量，按乳液的重量计，少于7g/L。在另一个实施例中，按乳液的重量计，乳液含有少于3g/L的溶血磷脂酰胆碱(LPTC)。在另一个实施例中，按乳液的重量计，乳液含有少于2g/L的溶血磷脂酰胆碱(LPTC)。在另一个实施例中，按乳液的重量计，乳液含有少于1.5g/L的溶血磷脂酰胆碱(LPTC)。按乳液的重量计，乳液含有1.2g/L-7g/L的溶血磷脂酰胆碱(LPTC)。按乳液的重量计，乳液含有2g/L-6g/L的溶血磷脂酰胆碱(LPTC)。按乳液的重量计，乳液含有3g/L-5g/L的溶血磷脂酰胆碱(LPTC)。在一个实施例中，按分散的颗粒的体积计，总量的90%或者更多具有颗粒尺寸小于700纳米(nm)。在另一个实施例中，按分散的颗粒的体积计，总量的90%或者更多具有颗粒尺寸小于600纳米(nm)。在一个实施例中，按分散的颗粒的体积计，总量的50%或者更多具有颗粒尺寸小于400纳米(nm)。在另一个实施例中，按分散的颗粒的体积计，总量的50%或者更多具有颗粒尺寸小于300-350纳米(nm)。在另一个实施例中，按分散的颗粒的体积计，总量的50%或者更多具有颗粒尺寸小于200-300纳米(nm)。在另一个实施例中，按分散的颗粒的体积计，总量的99%或者更多具有颗粒尺寸小于1微米(μm)。在一个实施例中，分散颗粒的D(0.9)约为700纳米(nm)。在另一个实施例中，分散颗粒的D(0.9)约为600纳米(nm)。在另一个实施例中，分散颗粒的D(0.5)约为150-400纳米(nm)。在另一个实施例中，分散颗粒的D(0.5)约为200-330纳米(nm)。在另一个实施例中，分散颗粒的D(0.99)约为1微米(μπι)。在另一个实施例中，分散颗粒的平均尺寸(meansize)约为200-400μm。在一个实施例中，分散颗粒的平均直径(meandiameter)约为0.20-0.25μm。在另一个实施例中，分散颗粒的平均直径约为0.20μm0在另一个实施例中，分散颗粒的粒度中值(mediasize)约为180_300nm。在一个实施例中，全氟化碳是全氟(叔丁基环己烷)，全氟萘烷，全氟异丙基萘烷，全氟三丙基胺，全氟三丁基胺，全氟甲基环己基哌啶，全氟辛基溴，全氟癸基溴，全氟二氯辛烷，全氟己烷，十二氟戊烷，或者它们的混合物。在一个实施例中，全氟化碳含有按全氟化碳重量计的少于5ppm的残留共轭烯烃(conjugatedolefin)。在另一个实施例中，存在于全氟化碳中的残留共轭烯烃的量，按全氟化碳重量计，少于5ppm。在另一个实施例中，全氟化碳含有按全氟化碳重量计的少于3ppm的残留共轭烯烃。在另一个实施例中，全氟化碳含有按全氟化碳重量计的少于Ippm的残留共轭烯烃。在一个实施例中，全氟化碳含有按全氟化碳重量计的少于Ippm的残留氟化物。在另一个实施例中，存在于全氟化碳中的残留氟化物的量，按全氟化碳重量计，少于lppm。在一个实施例中，全氟化碳含有按全氟化碳重量计的少于0.7ppm的残留氟化物。在一个实施例中，全氟化碳含有按全氟化碳重量计的少于20ppm的残留有机氢(organichydrogen)。在另一个实施例中，存在于全氟化碳中的残留有机氢的量，按全氟化碳重量计，少于20ppm。在另一个实施例中，全氟化碳含有按全氟化碳重量计的少于IOppm的残留有机氢。在一个实施例中，全氟化碳含有按全氟化碳重量计的少于5ppm的残留有机Μ,ο在一个实施例中，乳液包含20-80%w/v的全氟化碳。在另一个实施例中，乳液包含60%w/v的全氟化碳。在一个实施例中，乳液还包含乳化剂。在另一个实施例中，乳液包含1-10%w/v的乳化剂。在另一个实施例中，乳液包含2.5-4.5%w/v的乳化剂。在另一个实施例中，该乳化剂是表面活性剂。在还有另外一个实施例中，该表面活性剂是蛋黄磷脂(eggyolkphospholipid)。在一个实施例中，乳液包含40-80%w/v的水。在另一个实施例中，乳液包含50-70%w/v的水。在还有另一个实施例中，该水是注射用水。在一个实施例中，乳液还包含水介质(aqueousmedium)。在另一个实施例中，该水介质是等渗的。在另一个实施例中，该水介质被缓冲至PH为6.8-7.4。在还有另一个实施例中，该乳液还包含维生素E。本申请还提供了一种治疗受试者患有的镰状细胞病，减压病，气泡栓塞或者一氧化碳中毒方法，它包含给予受试者这里描述的乳液，以有效治疗受试者的镰状细胞病，减压病，气泡栓塞或者一氧化碳中毒。在一个实施例中，该乳液通过血管内(IV)或者鞘内给予。本申请还提供了一种在移植前保存器官的方法，它包含将器官与这里描述的乳液接触，以有效延长器官存活时间。在一个实施例中，用该乳液灌注该器官。本申请还提供了一种治疗受试者患有的创伤，烧伤，痤疮或者酒糟鼻的方法，它包含局部给予受试者的皮肤这里描述的乳液，以有效治疗受试者的创伤，烧伤，痤疮或者酒糟鼻。本申请还提供了一种提高受试者的皮肤紧致或者减少受试者的细纹，皱纹或者瘢痕出现的方法，它包含局部给予受试者的皮肤这里描述的乳液，以有效提高受试者的皮肤紧致或者减少受试者的细纹，皱纹或者瘢痕出现。本申请还提供了一种生产全氟化碳乳液的方法，它包含步骤a)将乳化剂与水介质一起混合；b)将全氟化碳加到步骤a)的混合物中；C)混合步骤b)的混合物以形成粗乳液；d)获得步骤C)粗乳液的样品，测定该样品的粒径分布；e)如果步骤d)的样品具有单峰粒径分布，则使步骤C)的粗乳液均质化；以及f)获得该乳液。在一个实施例中，在步骤a)中，乳化剂与水介质一起在2，000-7，OOOrpm的条件下混合ο在一个实施例中，在步骤c)中，步骤b)的混合物在高于8，OOOrpm的条件下混合。在一个实施例中，在步骤e)中，步骤c)的粗乳液在高压下被均质化。在一个实施例中，在步骤d)中，粒径分布采用激光散射粒径分布分析仪来测定。在另一个实施例中，在步骤e)中，仅当步骤d)的样品的中值粒径(medianparticlesize)小于20μπι时，步骤c)的混合物才被均质化。在另一个实施例中，在步骤e)中，仅当步骤c)的混合物的pH值为6.8-7.4时，步骤c)的混合物才被均质化。在另一个实施例中，在步骤e)中，粗乳液在7000psi或高于7000psi下被均质化。在还有另一个实施例中，在步骤f)中，在预先确定好的一段时间后获得了乳液。该预先确定好的一段时间可以是乳化作用时间，它取决于批量的大小和通过均化器的流量大小。乳化作用时间可以通过连续流计算来确定，可以利用Leviton和I^allansch披露的计算方法来计算。(Leviton，1959)本申请还提供了一种制备含有PFC乳液的药物产品的方法，该PFC乳液具有单峰粒径分布，该方法包含a)获得一批全氟化碳乳液或者粗乳液；b)测定该批次的粒径分布；和c)仅当该批次经测定具有单峰粒径分布时，由该批次制备药物产品。在一个实施例中，在步骤b)中，粒径分布采用激光散射粒径分布分析仪来测定。本申请还提供了一种制备含有PFC乳液的药物产品的方法，按乳液重量计，该PFC乳液含有少于40ppm的残留氟化物，该方法包含a)获得一批全氟化碳乳液或者粗乳液；b)测定存在于该批次中的残留氟化物总量；和c)仅当确定按乳液重量计，该批次含有少于40ppm的残留氟化物时，由该批次制备药物产品。本申请还提供了一种制备含有PFC乳液的药物产品的方法，按乳液重量计，该PFC乳液含有少于7g/L的溶血磷脂酰胆碱(LPTC)，该方法包含a)获得一批全氟化碳乳液或者粗乳液；b)测定存在于该批次中的溶血磷脂酰胆碱(LPTC)总量；和c)仅当确定按乳液重量计，该批次含有少于7g/L的溶血磷脂酰胆碱(LPTC)时，由该批次制备药物产品。本申请还提供了一种验证乳液批次可作为药物使用的方法，该方法包含a)测定该批次的样品的粒径分布；和b)仅当该批次的样品具有单峰粒径分布时，才验证该批次可以用于药物使用。在一个实施例中，在步骤a)中，粒径分布采用激光散射粒径分布分析仪来测定。本申请还提供了一种验证乳液批次可用于药物使用的方法，该方法包含a)测定该批次的样品中的残留氟化物总量；和b)仅当按乳液重量计，该批次样品含有少于40ppm的残留氟化物时，才验证该批次可以用于药物使用。本申请还提供了一种验证乳液批次可用于药物使用的方法，该方法包含a)测定该批次的样品中的溶血磷脂酰胆碱(LPTC)总量；和b)仅当按乳液重量计，该批次样品含有少于7g/L的溶血磷脂酰胆碱(LPTC)时，才验证该批次可以用于药物使用。在一个实施例中，在步骤a)中的该批次的样品已经接受过稳定性的测试。在这里描述的各种要素的所有组合都在本发明的范围之内。创伤愈合的生物化学和创伤治疗的策略由Chin等人，Q007)陈述在"BiochemistryofWoundHealinginWoundCarePractice"WoundCarePractice,2nded.,BestPublishing,AZ.，文章在此被纳入作为参考。痤疮治疗见!"heMerckManual,17thEdition(1999),MerckResearchLaboratories,WhitehouseStation,NJ,U.S.A.第116章第10节，811-813页的描述，文章在此被纳入作为参考。镰状细胞病的治疗见TheMerckManual,17thEdition(1999),MerckResearchLaboratories,WhitehouseStation,NJ,U.S.A.第127章第11节，878-883页的描述，文章在此被纳入作为参考。术语除非另有说明，如这里所使用的，下述术语的每一项具有如下陈述的定义。“约”在一个数值或者范围的上下文中意味着所列举或声称的数值或者范围的士10%。“加速愈合”意指与未经治疗的对照受试者的组织修复和愈合速度相比，组织修复和愈合速度加快。“给予受试者”意指给受试者给予，发放，或者敷用药品，药物以缓解或者治愈一种病理状况。局部给予是将即时的化合物和组合物(instantcompoundsandcompositions)给予受试者的一种途径。给予也可以通过，例如，静脉内或者动脉内来进行。“改善”一种状况或者状态意味着减轻那种状况或者状态的症状。有关皮肤粉刺，脓包或者丘疹的“改善”指的是减少由粉刺，脓包或者丘疹引起的不适和/或减少他们的出现和/或实际尺寸大小。“抗菌剂”指的是杀菌的化合物，像硝酸银溶液，醋酸甲磺米隆，或磺胺嘧啶银，或者指的是抗生素。根据本发明，抗菌剂可以存在于“Curpon”产品中。“Cupron”产品利用铜的性质，将铜结合到纺织纤维中用以制造含浸渍有铜的纤维的纺织品，针织品和无纺布，起到抗菌效果，抵抗像细菌和霉菌那样的微生物。“生物活性试剂”指的是对于生命物质具有有益效果的物质。“烧伤”指的是有烧伤引起的创伤，它是由于热，辐射，电或者化学热所造成的一度，二度或三度伤害，例如在，TheMerckManual,17thEdition(1999)，MerckResearchLaboratories,WhitehouseStation,NJ,U.S.A.第276章，第20节，第对；34页的描述。“一氧化碳中毒”或者“C0中毒”指的是因受试者暴露在一氧化碳中引起的中毒。一氧化碳的毒性随受试者的暴露时间长短，CO浓度，呼吸和循环的速率的不同而变。一氧化碳的中毒症状随血液中的碳氧血红蛋白百分比不同而异，可以包括头疼，眩晕，呼吸困难，精神错乱，瞳孔放大，惊厥和昏迷(其中的部分是脑部受损引起)。CO中毒的标准治疗方法是通过呼吸面罩给予100%氧气(TheMerckManual,1999；Prockop，2007)。“中枢神经系统”或者“CNS”指的是受试者的脑和脊髓。“闭合性颅脑(Closedhead)”损伤或者“非穿通性(non-penetrating)”损伤是一种颅脑内的损伤，未发生头颅穿通。如在有效达到一个目标的量中的“有效”指的是按照本发明的方式使用的某一成分的量足以实现期望的治疗应答，并且具有合理的利益/风险比例。例如，有效加速伤口愈合而又不会产生过分的有害副作用的量。具体的有效量随着一些因素的不同而变化，像接受治疗的个别状况，患者的身体状况，接受治疗的哺乳动物的类型，治疗的持续时间，并行治疗(如果有的话)的实际情况，以及采用的具体处方和化合物或者其衍生物的结构。“乳化剂”意指使乳液稳定的物质。“乳液”意指两种不溶混液体的混合物。乳液是胶体，其中，胶体的两个相(即分散相和连续相)都是液体，一种液体(分散相)被分散在另一种液体(连续相)中。如在PFC中经常碰到的，分散相液体可以”颗粒”的形式悬浮在连续相液体中。这里每次使用的术语”颗粒”意在把它用于在连续液相和微气泡中的液体PFC微球或者滴(这样使乳液呈胶体悬浮液状态)。在本发明的一个实施例中，该乳液是全氟化碳乳液，该全氟化碳乳液的两种不溶混的液体是全氟(叔丁基环己烷)和蛋黄磷脂。这里所说的“颗粒”也可以指一种物质在气相中的微泡沫，例如，以微泡沫形式出现的PFC蒸气。“D(0.5)”是以微米表示的粒径，发现50%的总体体积分布在D(0.5)以下。"D(0.9)”是以微米表示的粒径，发现90%的总体体积分布在D(0.9)以下。“减压病”S卩“DCS”指的是周围压力的降低所带来的功能紊乱(例如，潜水后上浮，从沉箱或者高压仓里出来，或者上升到一定高度)，归因于溶解在血液或组织中的气体形成气泡，通常的特征表现为疼痛和/或神经病学的表现形式(TheMerckManual,1999)0“吸入的氧气分数(FractionofInspiredOxygen)”或"FiO2”是指空气中传递给受试者的氧量。FiO2用从0(0%)到1(100%)的一个数字来表示。正常室内空气的FW2是0.21(21%)，SP，正常室内空气的21%是氧气。如在这里使用的那样，说一种组合物”无”某一种化学个体指的是，意在分离该化学个体与该组合物的肯定行动采取之后，该组合物不可避免地含有，即使有也是极少，一定量的该化学个体。“格拉斯哥昏迷计分表(GlasgowComakale)”或“GCS”指的是用于测定最好的眼反应(BestEyeResponse)，最好的言语反应(BestVerbalResponse)，最好的运动反应(BestMotorResponse)的神经病学计分表(见TeasdaleG.，JennettB.，LANCET(ii)81-83，1974.)。它是一种应用广泛的评分系统以量化外伤性的颅脑损伤后的知觉水平。“氧合障碍(Impairedoxygenation)，，指的是，关于组织或者细胞，该组织的氧合水平低于正常生理条件下存在于相同组织或者细胞内的氧合水平。如用于有关痤疮丙酸杆菌(Propionibacteriumacnes)“感染”指的是痤疮丙酸杆菌在(宿主)对象体内的有害植入和生长，引起受试者的炎症反应。“局部缺血疼痛(Ischemicpain)”指的是患有镰状细胞病受试者的局部缺血所引起的疼痛或者不适。“单峰粒径分布(Monomodalparticlesizedistribution)”意指一群颗粒(例如，液体微球，小滴，粉末，粒料，珠粒，晶粒，丸粒等)，它们的粒径分布曲线上具有单个清晰可辨识的最大值(纵坐标或Y轴为重量百分数或者强度，横坐标或X轴为粒径大小)。单峰粒径分布不同于双模态粒径分布(bimodalparticlesizedistribution)，它指的是一群颗粒，其粒径分布曲线上具有两个清晰可辨识的最大值。单峰粒径分布也不同于多模态粒径分布(multimodalparticlesizedistribution)，它指的是一群颗粒，其粒径分布曲线上具有三个或更多的清晰可辨识的最大值。“氧张力(Oxygentension)”或者“组织氧张力(tissueoxygentension)”是在特定组织上直接测定到的局部氧分压。“氧合的全氟化碳(Oxygenatedperfluorocarbon)”是在饱和或者亚饱和水平上携带了氧气的全氟化碳。“外周阻力(Peripheralresistance)”指的是体循环的外周血管阻力。“药物可接受的载体(Pharmaceuticallyacceptablecarrier)”指的是载体或者助剂，它们适用于人类和/或动物，不会产生过分有害的副作用(像毒性，刺激作用，和过敏反应)，与合理的利益/风险比例相称。它可以是药用可接受的溶剂，悬浮剂或者赋形剂用以给受试者输送即时化合物。载体可以是液体或者固体，根据考虑好的计划给予方式来加以选择。“药物有效化合物(Pharmaceuticallyactivecompound)”指的是药物处方中的有效药物成分的化合物。“有效药物成分(Activepharmaceuticalingredient)”或“API”是由美国食品药物监督局(U.S.FoodandDrugAdministration)界定的作为设计用于药品生产过程中的任何物质或者这些物质的混合物，当被用于药物生产过程中时，它们成为药品中的有效成分。这样的物质被设计成为诊断，医治，减轻，治疗或者防止疾病提供药理学的活性或者其它的直接效果，或者影响身体的结构与功能。“原发的(Primary”)和“继发的(secondary)”是颅脑损伤发生过程的分类。在外伤性脑损伤(TBI)中，原发性损伤发生在最初的伤害过程中，起因于颅脑物理结构的位移。继发性损伤逐步产生，可能涉及一系列的细胞病变。非由于最初的机械损伤引起的继发性损伤可以是起因于原发性损伤，或者可以与原发性损伤无关。因此，“原发性缺血(primaryischemia)”是血流不足(导致供氧受限)，直接起因于最初的脑颅损伤，而“继发性缺血(secondaryischemia)”是血流不足(导致供氧受限)，起因于由最初损伤启动的病变，例如，起因于最初损伤的并发症，并且可以涉及在最初损伤中未受伤害的组织。有关TBI的原发性和继发性分类在Silver，J.，etal.(2005)"NeuralPathology"TextbookOfTraumaticBrainInjury.Washington,DC:AmericanPsychiatricAssociation.Chap.2,pp.27-33中有详细讨论。“促进减轻疼痛(Promotesalleviationofpain)”指的是减轻受试者由于伤口，损伤，例如烧伤或者其它的病理性状况所引起的疼痛感觉。“性器官”(Sexorgan)或者“生殖器”(sexualorgan)指的是涉及到有性生殖和/或性满足并且构成复杂生物体生殖系统的身体上任何解剖学部位。在本发明的一个优选实施例中，该性器官是受试者的生殖器。如在这里所说的，“生殖器(genitalia)”指外面看得见的性器官男性是阴莲，女性是阴蒂和外阴。“镰状细胞病(SickleCellDisease)”是一种由HbS的同型接合遗传所致的慢性血红蛋白病。“稳定性试验(labilitytesting)”指的是在特定的时间间隔和各种环境条件下(例如，温度和湿度)所进行的试验以观察一种药物在指定的的货架期内是否降解和降解到何种程度。特定的条件和试验的时间是加速药品在货架期内估计会遇到的条件。例如，成品药稳定性试验的各项要求被整理在21C.F.R§211.166中，它的全部内容被纳入本申请作为参考。“局部给予(Topicaladministration)”一种组合物用在这里指的是将该组合物敷贴在受试者的皮肤或者粘膜上。在一个实施例中，局部给予一种组合物是将该组合物敷贴在受试者的表皮上。“外伤性脑损伤(TraumaticBrainInjury)”或“TBI”指的是源自冲击的中枢神经系统损伤，即CNS神经元的，轴索的，神经胶质的和/或血管的阻塞。这样的冲击包括钝器撞击，子弹杀伤或者爆炸杀伤。“血管闭塞危象(Vaso-occlusivecrisis)”指的是临床上识别的状况，源自镰状红细胞阻塞毛细血管，限制了血液流向组织和/或器官，尤其导致缺血和疼痛。"w/v"意指重量/体积比，典型地用于表征生物溶液。一种1%w/v溶液是Ig的溶质溶于IOOmL最终溶液体积中。PFC乳液的特征由于PFC液体与包括血液和其它体液的水系统不溶混，所以，它们应该先被配制成生理上相容的乳液才能静脉内给予。在配制血流中注射用的PFC乳液时应该考虑若干因素，包括但不限于，存在于乳液中的杂质，乳液颗粒尺寸，乳液粒径分布以及乳液的稳定性。理想的PFC乳液应当具有以下的特征而不论用于乳液中的PFC是哪种化合物。存在于PFC乳液中的杂质受到限制理想的PFC乳液中的杂质应该在最低水平上。理想的PFC乳液应当具有以下的具体特征1.按乳液重量计，全氟化碳乳液含有少于40ppm的残留氟化物，优选地，按乳液重量计，含有少于20ppm的残留氟化物；2.全氟化碳乳液含有少于7g/L的溶血磷脂酰胆碱(LPTC)，它已经被牵涉到作为有关糖尿病性视网膜病变，动脉粥样化形成和神经变性有力的炎性脂质；3.按全氟化碳重量计，全氟化碳乳液含有少于5ppm的残留共轭烯烃，优选地，按全氟化碳重量计，含有少于Ippm的残留共轭烯烃；4.按全氟化碳重量计，全氟化碳乳液含有少于Ippm优选地，少于0.7ppm的残留氟化物；5.按全氟化碳重量计，全氟化碳乳液含有少于20ppm的残留有机氢，优选地，按全氟化碳重量计，含有少于5ppm的残留有机氢。小的颗粒尺寸非常小的颗粒尺寸是需要血流中注射的PFC乳液的一个理想特性。业已表明，颗粒尺寸是决定颗粒从循环中的清除率(clearancerate)，初期清除的位点(thesiteofprimaryclearance)以及补体激活程度的一个主要因素。PFC是不产生代谢变化的，它们不溶于水或者脂质中。因此，它们不会在尿液或者粪便中被排泄出去，但是通过肺部作为排除的途径被呼出去。业已表明，静脉注射后PFC乳液从血液腔(bloodcompartment)中的清除率与剂量有关，并且受到乳液组合物的影响。从血流中清除出去的占支配地位的手段是通过网状内皮系统(REQ的巨噬细胞对乳液颗粒的吞噬作用，即主要是通过脾脏和肝脏中的固定的巨噬细胞(fixedmacrophages)的吞噬作用。粒径分布是通过单核吞噬细胞系统的颗粒清除率和居留巨噬细胞(residentmacrophages)的伴随激活潜势的主要决定因素。它也是有害效应的一个主要原因。小颗粒可能允许颗粒躲避开RES，较长时间地留在脉管系统中，副效应较低。颗粒尺寸也直接与乳液毒性相关。较大颗粒的分布与较高的毒性相关联即使平均颗粒尺寸<0.3微米，较大颗粒的存在增加了产生有害效应的机会。有关各种脂质体处方的研究已经指出，颗粒直径>0.3微米的颗粒容易受补体的调理素作用，比颗粒直径<0.2微米的颗粒更快地从循环中被清除出去。较大的颗粒好像被脾脏清除，而小颗粒主要被肝脏所清除。单峰粒径分布在PFC乳液生产过程中，具体地说，在生产过程的高速混合步骤之后和均质化步骤之前，可以利用激光散射粒径分布分析仪来分析粗乳液的粒径分布。借助激光散射粒径分布分析仪，可以看到颗粒具有单峰，双模态或者多模态的粒径分布。发明者令人惊讶地发现，只有在这个中间步骤具有单峰粒径分布的粗乳液才能导致形成最终乳液具有单峰粒径分布。也就是说，如果第二个峰不在生产过程中的这个阶段消除掉，它就会保留在最终乳液中。因此，只有在粗乳液在激光散射粒径分析仪下呈现单峰粒径分布时才可从高速混合机转移到均质化器去。免疫活性理想的乳液不应该是免疫活性的。业已发现一些早期的PFC乳液(例如，日本GreenCross公司的FluosolDA和俄罗斯Perftoran公司的Perftoran)具有免疫活性。已经发现了这些PFC乳液中所使用的表面活性剂(PluronicF68和ftx)xanol-268)激活了免疫系统的补体旁路。PFC乳液的高稳定性理想的乳液应当在指定的货架期内连续满足所有最初的验收指标。颗粒尺寸和粒径分布有别于其它指标，这是因为随着乳液的陈化它们会发生变化的缘故。由于根据定义，乳液是热力学不稳定的，所以这个结果是不可避免的。即使是一个好的乳液在其指定的货架期内颗粒尺寸会呈现出一些增长，不论是由于Ostwald熟化，聚集，絮凝还是沉降所引起。但是，如果乳液配制恰当，生产过程经过优化，则颗粒尺寸的增长率应该相当小，粒度中值应该维持在200-400nm的范围，粒径分布应该保持相当狭窄。已知的PFC乳液有若干稳定性的问题。FluosolDA(20%):P_F68非常不稳定，该乳液需要冷冻储藏；Perftoran重建后只能稳定8小时；Oxygent花生四烯酸的降解产物可能引起类似流感的反应；OxyFluor非冷藏条件下只能储存一年)。与这些PFC乳液相比，这里披露的PFC乳液是高度稳定的。PFC乳液的其它特性在配制PFC乳液时其它要考虑的因素包括1.乳液对血小板减少发展的效应血小板减少是一种血液中血小板数量不足的病症；2.乳液对血小板凝集的抑制效应已经发现一些现有的PFC乳液抑制血小板凝集，它使创伤病人不易形成威胁生命的血凝块，但是也可能会增加颅内出血的风险；3.乳液对PMN粘连在内皮细胞上的抑制效应中性白细胞(PMN)粘连在内皮细胞上被认为是在导致脉管内皮损伤顺序中的早期事件。4.乳液对激活巨噬细胞的效应被激活的巨噬细胞的吞噬细胞的活性有所提高，尤其是对于李斯特菌属种和沙门菌属种(ListeriaandSalmonella)。但是，被激活的巨噬细胞也能刺激产生有破坏性的炎性细胞活素(cytokine)。例如，兴奋的人牙槽巨噬细胞在体外暴露在Oxygent下时减少了细胞活素的产生，提示Oxygent，而且同样Oxycyte，可能具有抗炎活性。5.乳液对免疫活性，血小板功能，和血小板存活的效应优选的PFC乳液不影响受试者的免疫活性和血小板功能，而且不应该缩短受试者的血小板存活。全氟(叔丁基环己烷)PFC普遍被认可为生物惰性的分子，由于它们的广泛卤化形成了抵抗代谢降解作用的电子构型。因此，传统的起源于生成反应性代谢物或者PFC直接与生物大分子的相互作用所产生的毒性形式对于这一类化合物来说已经不成问题。同样，未曾鉴别出有关PFC类的遗传毒性。但是，用于氧传递(oxygendelivery)应用所需要的PFC剂量的典型范围为每公斤体重2-3克，这显著高于常规药品。因此，通过静脉内注射PFC类输送足够的氧有可能要求通过静脉内传递相当大量的颗粒悬浮物。因而，PFC类对组织形态学的效应就成为选择它作为这种用途时的一个重要考虑因素。全氟化碳的恰当选择应该提供必要的效能以及合适的安全曲线。除了对于其指定用途是安全和有效的之外，该全氟化碳也应当能经济地与稳定的产品处方结合。为了要达到这些目标，该全氟化碳应当满足以下标准的绝大部分，最好是全部满足1.该全氟化碳应该能溶解和释放出大量的气体，尤其是血液气体氧和二氧化碳。2.该全氟化碳最好仅由碳和氟组成。3.该全氟化碳最好是单一的化学体，没有多少异构体和非异构体的杂质。残留的杂质，像共轭烯烃类，有机氢化物类，和氟化物应当维持在PPm水平上。4.该全氟化碳应当没有化学活性，直至并且包括用于典型的蒸汽灭菌过程温度下应当是热稳定的。5.该全氟化碳应当是代谢惰性的。6.该全氟化碳应当能被配制成亚微粒尺寸小滴的稳定乳液，它能被持续一段时间储存而不会因为凝聚或者扩散控制的机理产生显著的小滴增长。优选地，该处方仅含有单一的全氟化碳。7.该全氟化碳应当具有可接受的安全曲线，无毒性。8.在乳液形态中，该全氟化碳应当在血液中具有可观的停留时间，以及从身体主要的网状内皮器官中清除出去的可接受的时间范围。理想地，被选择的PFC也会具有两项令人满意的特征迅速RES清除和引起过度充气(hyperinflation)的可能性最低。PFC通过RES的清除率和正常RES组织形态学恢复率与PFC的亲脂性成正相关，其次与PFC的蒸气压正相关。虽然PFC乳液颗粒被RES巨噬细胞的吞噬作用对摄取的主要器官并无害处，但在临床上有源自该过程的影响后果。在PFC乳液产品的临床研究中表征得最好的是常见的类似流感的症状。因此，迅速的RES清除对于一种PFC被选作静脉内乳液应用时是一种令人满意的特性。在已知处方中悬着了某些PFC类部分地是以他们在RES中较短的停留时间为依据。两种这样的PFC类是全氟萘烷(PFD)和全氟辛基溴(PFOB)，前者是日本GreenCross公司的FluosolDA中的主要成分，该产品是FDA批准的首个血液代用品，后者是加利福尼亚(California)，圣地亚哥(SanDiego)AlliancePharmaceutical公司，的血液代用品Oxygent中的主要成分。PFD和PFOB的蒸气压分别约为13和lOtorr。由于认识到PFC类的肺呼出并非一个有益健康的过程，这些年来，选择具有较短RES停留时间的PFC类的倾向性已经有所缓和。一种被称为”肺过度充气(pulmonaryhyperinflation)”的现象首次在兔子身上被证明。这个状况的特征在于双肺未缩回到它们的正常”静息容积(restingvolume)”。在接受了单一剂量的某些PFC乳液处理的兔子身上，双肺不仅未缩回到它们的静息容积，而且看起来扩张到超过了它们的正常肺部功能残气量(functionalresidualcapacity)(即，过度充气)。在其极端形态下，呼吸动力学受到影响，气体交换被累及，该状况有可能威胁生命。决定不同的PFC类诱发肺部过度充气倾向的唯一最重要的因素是PFC往气腔的迁移速率，它主要依赖于蒸气压，以及其次，它的亲脂性。选择一种具有最合适性质的PFC的困难在于，两项最期望的特性，即，迅速的RES清除和引起过度充气的可能性最低，是相互对立的。选择一个几乎很少或者没有引发过度充气可能性的具有低蒸汽压的候选物可能会导致RES半衰期长得不可接受。而它可能受到有力地争辩，认为这个较慢的RES清除并非是重要的有关安全的关注点，持续的器官肿大和相关的病理组织学从制定规章的立场出发可能被认为是不可接受的。6O%和2O%w/v浓度的全氟(叔丁基环己烧)(Perfluoro(tert-butylcyclohexane))都已经在鼠和猴的身上进行了对照，单剂量的良好药品实验研究管理规范(GoodLaboratoryI^ractice(GLP))毒性研究试验。与其它的PFC类相比较，在用全氟(叔丁基环己烷)处理过的过度充气的程度远低于在用PFOB处理过的猴身上所见到的，以及先前未发表的在用全氟萘烷处理过的兔身上所见到的。全氟(叔丁基环己烷)在体内的吸收普遍与已经报告的其它PFC类的类似。但在肝脏和脾脏内的持续保留时间稍长于已经报告过的PF0B。尽管如此，全氟(叔丁基环己烷)在持续保留时间与产生过度充气，肺部未缩回的倾向性之间比已经报告过的PFOB和全氟萘烷的表现出更好的平衡。除此之外，与其它试验过作为氧载体的全氟化碳类相比，根据动物试验结果，全氟(叔丁基环己烷)显示出较好的安全曲线，它不含溴或者氯，因而没有臭氧消耗的风险。另外，可以大量制造生物医学等级的化合物。根据前边所说，在这里披露的全氟(叔丁基环己烷)具有各性质之间的最适平衡。其RES半衰期稍长于作为全氟化碳基准点的PF0B，但它引起肺部过度充气的倾向相应地较低。总的来说，全氟(叔丁基环己烷)看来是用于静脉内PFC乳液的一个良好的备选化合物。全氟(叔丁基环己烷)(C10F20)有市售，例如，加利福尼亚州(California)，科斯塔梅萨(CostaMesa)的OxygenBiotherapeutics公司出口口口的Oxycyte。Oxycyte是一种全氟化碳乳液氧载体。Oxycyte中的有效成分，全氟(叔丁基环己烷)(C10F20，MW=500.08)，也称之为F-叔丁基环己烷或者FtBu，是一种饱和脂环族PFC0全氟(叔丁基环己烷)是无色，完全惰性，不溶于水，非亲脂的分子，密度是水的2倍，沸点是147°C。FtBu的CAS登记号为84808-64-0。CAS名称为1_(1，1_二(三氟甲基)-2，2，2-三氟乙基)-l，2，2，3，3，4，4，5，5，6，6-^氟环己烷。由于FtBu分子是非对称的，在环己烷环上只有单一的非氟取代基，该分子不可能有异构体，因此以如下所示的单一构型存在全氟(叔丁基环己烷)的物理性质如下分子式=C10F20分子量(g/mol):500.08室温下的物理形态液体密度(g/mL):1.97沸点(°C):14725°C下的蒸气压(mmHg)3.837°C下的蒸气压(mmHg):4.4动力粘度(cP):5·3781520°C下的折射率1.3098计算偶极矩(Debye):0·287计算表面张力(dyne/cm):14.4体温下，全氟(叔丁基环己烷)可以携带约43mL氧/IOOmLPFC,196mL的C02/100mLPFC。室温下的FtBu是无色无嗅的液体，憎水(几乎不溶于水)和憎油的，在溶剂中，像2，2，4_三甲基戊烷(异辛烷)中有极微的溶解度。FtBu最可溶于像异氟烷(isoflurane)那样的卤化溶剂中。因此，FtBu应当配制成水乳剂用于静脉给予。FtBu能够溶解和释放大量的气体，包括血液气体氧和二氧化碳。但是，FtBu并不表现出血红蛋白结合氧的性质，而只是简单地作为气体的溶剂。因而，没有遇到正弦样的氧释放曲线。通过FtBu输送和释放氧气只是一个被动的过程，溶解的气体量与其分压线性相关，基本上遵从亨利定律(Henry’sLaw)0全氟(叔丁基环己烷)乳液在本发明的一个实施例中，根据上述讨论过的标准选择的PFC，即，全氟(叔丁基环己烷)利用提纯过的表面活性剂在缓冲的，等渗水介质中被乳化。该乳液可含有如表1所示的成分。配制生产的Oxycyte是灭菌的，不引起发热的乳液，它由全氟(叔丁基环己烷)在一种等渗的并且温和缓冲至中性PH范围的水介质中的亚微细颗粒(中直径(mediumdiameter)为200-300纳米)所组成。为了生理学的相容，Oxycyte中的PFC用蛋黄磷脂乳化。表1-6显示出PFC乳液的有代表性的组成。表1有代表性的PFC乳液1(60%w/v)权利要求1.一种乳液包含一定量的作为颗粒分散在连续液相中的全氟化碳液体，其特征在于，所述分散的颗粒具有单峰粒径分布。2.如权利要求第1项所述的乳液，其特征在于，含有按乳液重量计的低于40ppm的残留氟化物。3.如权利要求书第1或者第2项所述的乳液，其特征在于，含有按乳液重量计的低于7g/L的溶血磷脂酰胆碱(LPTC或LPC)。4.如权利要求书第1-3项任意一项所述的乳液，其特征在于，按分散的颗粒体积计，总量的90%或者更多的颗粒尺寸小于700nm。5.如权利要求书第1-4项任意一项所述的乳液，其特征在于，按分散的颗粒体积计，总量的50%或者更多的颗粒尺寸小于400nm。6.如权利要求书第1-5项任意一项所述的乳液，其特征在于，所述全氟化碳是全氟(叔丁基环己烷)，全氟萘烷，全氟异丙基萘烷，全氟三丙基胺，全氟三丁基胺，全氟甲基环己基哌啶，全氟辛基溴，全氟癸基溴，全氟二氯辛烷，全氟己烷，十二氟戊烷，或者它们的混合物。7.如权利要求书第1-6项任意一项所述的乳液，其特征在于，所述全氟化碳含有按该全氟化碳重量计的低于5ppm的残留共轭烯烃。8.如权利要求书第1-7项任意一项所述的乳液，其特征在于，所述全氟化碳含有按该全氟化碳重量计的低于20ppm的残留有机氢。9.如权利要求书第1-8项任意一项所述的乳液，其特征在于，所述乳液包含20-80%w/ν的全氟化碳。10.如权利要求书第1-9项任意一项所述的乳液，其特征在于，还包含乳化剂。11.如权利要求书第10项所述的乳液，其特征在于，包含1-10%w/v的乳化剂。12.如权利要求书第1-11项任意一项所述的乳液，其特征在于，所述乳化剂是表面活性剂。13.如权利要求书第12项所述的乳液，其特征在于，所述表面活性剂是蛋黄磷脂。14.如权利要求书第1-13项任意一项所述的乳液，其特征在于，还包含水介质。15.如权利要求书第14项所述的乳液，其特征在于，所述水介质是等渗的。16.如权利要求书第14或者第15项所述的乳液，其特征在于，所述水介质被缓冲至pH值为6.8-7.4。17.如权利要求书第1-16项任意一项所述的乳液，其特征在于，所述乳液还包含维生Eο18.一种治疗受试者患有的镰状细胞病，减压病，空气栓塞或者一氧化碳中毒的方法，其特征在于，包含给予受试者如权利要求书第1-17项任意一项所述的乳液，以有效治疗受试者的镰状细胞病，减压病，空气栓塞或者一氧化碳中毒。19.一种在器官移植前保存器官的方法，其特征在于，包含让该器官与如权利要求书第1-17项任意一项所述的乳液接触，以有效延长器官生存期。20.一种治疗受试者患有的创伤，烧伤，痤疮或者酒渣鼻的方法，其特征在于，包含局部给予受试者的皮肤如权利要求书第1-17项任意一项所述的乳液，以有效治疗受试者的创伤，烧伤，痤疮或者酒渣鼻。21.一种提高受试者的皮肤紧致，减少受试者皮肤细纹，皱纹或者瘢痕出现的方法，其特征在于，包含局部给予受试者的皮肤如权利要求书第1-17项任意一项所述的乳液，以有效提高受试者皮肤紧致，减少受试者皮肤细纹，皱纹或者瘢痕出现。22.—种生产全氟化碳乳液的方法，其特征在于，包含步骤a)将乳化剂与水介质一起混合；b)将全氟化碳加到步骤a)的混合物中；c)混合步骤b)的混合物，形成粗乳液；d)获得步骤c)的粗乳液的样品，测定该样品的粒径分布；e)如果步骤d)的样品具有单峰粒径分布，则使步骤c)的粗乳液均质化；以及f)获得所述乳液。23.如权利要求书第22项所述的方法，其特征在于，在步骤e)中，只有当步骤d)的样品的中值粒径小于20μm时，才对步骤c)的粗乳液均质化。24.如权利要求书第22或者第23项项所述的方法，其特征在于，在步骤e)中，该粗乳液在7000psi或高于7000psi的压力下被均质化。25.一种制备含有PFC乳液的药物产品的方法，其特征在于，所述方法包含a)获得批次的全氟化碳乳液或者粗乳液；b)1)测定该批次的粒径分布；2)测定存在于该批次中的残留氟化物总量；或者3)测定存在于该批次中的溶血磷脂酰胆碱(LPTC)总量；以及c)只有当1)确定该批次具有单峰粒径分布；幻确定该批次含有按该乳液重量计的低于40ppm的残留氟化物；或者幻确定该批次含有按该乳液重量计的低于7g/L的溶血磷脂酰胆碱(LPTC)时，由该批次制备该药品。26.—种验证一个批次的乳液用于药物使用的方法，其特征在于，所述方法方法包含a)l)测定该批次样品的粒径分布；2)测定存在于该批次样品中的残留氟化物总量；或者3)测定存在于该批次样品中的溶血磷脂酰胆碱(LPTC)总量；以及b)只有当1)该批次样品具有单峰粒径分布；幻该批次含有按该乳液重量计的低于40ppm的残留氟化物；或者幻该批次含有按该乳液重量计的低于7g/L的溶血磷脂酰胆碱(LPTC)时，验证该批次用于药物使用。27.如权利要求书第沈项所述的方法，其特征在于，步骤a)1)_a)3)在该批次的样品接受过稳定性测试后执行。全文摘要本申请提供了一种乳液，它包含一定量的作为颗粒分散在连续液相中的全氟化碳液体，其特征在于，该分散的颗粒具有单峰粒径分布，以及乳液的应用。本申请也提供了一种生产全氟化碳乳液的方法，一种制备含有PFC乳液的药物产品的方法，以及验证一个批次的乳液用于药物使用的方法。文档编号C07C23/00GK102395548SQ201080017461公开日2012年3月28日申请日期2010年4月15日优先权日2009年4月15日发明者德宝·P·汤普森,格瑞·克劳森,理查德·凯瑞申请人:奥斯金生医公司