胃肠道病症的治疗的制作方法

专利名称：胃肠道病症的治疗的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于治疗上胃肠道病症的肽、组合物和方法。优先权要求本申请案要求2009年11月9日提交的美国申请第61/259，264号的优先权。前面提到的申请的全部内容以引用的方式并入本文。序列表 本申请案通过引用的方式将名称为“IW077US_ST25. txt”(6. 64千字节)的序列表并入在内，该序列表文件创建于2010年11月3日且随本文以电子档形式提交。背景功能性消化不良(FD)和胃轻瘫(GP)是共同地以包括胃气涨、上腹部(epigastric/upper abdominal)疼痛及/或烧心、恶心、呕吐和早期饱胀(earlysatiation)的症状为特征的上胃肠道(GI)病症。对于FD和GP患者的治疗选择是非常有限的，原因在于现有的治疗缺乏效力并具有较差的安全特征。消化不良被定义为存在被认为起源于胃十二指肠区域的一种或多种消化不良症状(上腹部疼痛、烧心、令人讨厌的食后发胀和早期饱胀)，但缺乏可能解释这些症状的任何器官的、全身的或代谢的疾病(参见Drossman,D. A.编著，Rome III The Functional Gastrointestinal Disorders (功能性胃肠道病症)，第 3 版,McLean, VA Degnon Associates, Inc. ,2006)。FD 指在包括上内视镜检查的标准的医学检查之后无结构性解释的消化不良。可能涉及FD的病理生理学机制尤其包括胃排空延迟、胃容纳障碍、对胃胀高敏、十二指肠对脂质或酸的敏感性改变和十二指肠空肠运动异常。也在一些FD和GP患者中观察到十二指肠延长的酸接触，且这一接触可能减慢胃排空并引起FD或GP样症状。消化不良是常见的综合征，其占胃肠病学家所见病例的约30 %，FD代表全部的这些消化不良病例的约60 %。GP指在不存在机械性阻塞时以延迟的胃排空为特征的胃运动异常。GP可能是特发性的或可能是由多种病况和某些药物引起，所述病况包括I型或II型糖尿病、病毒感染、硬皮病、神经系统病症如帕金森氏症、代谢病症如甲状腺功能减退、术后肠梗阻，所述药物包括麻醉镇痛药物、三环抗抑郁剂和钙通道阻断剂。对于癌症的治疗，包括化学治疗药和对胸部及腹部的放射，也会引起暂时的或永久的胃轻瘫。最常见的症状是恶心、呕吐、胃气胀、上腹部疼痛、体重减轻和早期饱胀。胃轻瘫是会导致频繁住院、生活质量降低和残疾增加以及在严重情况下死亡率增加的慢性病况。症状严重的GP常见于患有糖尿病的个体，仅在美国就影响患者总人口 I百万的糖尿病患者的5-10%。FD和GP以及其它上胃肠道病症的常规治疗选择对于许多患者具有有限的效力。因此，对于治疗FD、GP和其它胃肠道病症的新的化合物和方法仍然存在需要。概述本发明的特征在于用于治疗上胃肠道病症和病况(例如，消化不良、GP、术后胃肠梗阻(post-operative gastric ileus)、功能性食管病症、功能性胃十二指肠病症、胃食管反流疾病(GERD)或十二指肠溃疡或胃溃疡)以及本文描述的其它病况和病症的肽、组合物和相关的方法。组合物的特征是在上GI活化鸟苷酸环化酶C(GC-C)但在下GI对GC-C的活化作用相对较弱或完全无作用的肽。不受限于任何具体的理论，本发明的肽是有用的，因为它们可以在足以减少上GI症状的剂量水平和给药频率下减轻上GI病症的症状(总体上或部分上是通过增加上GI运动及/或减少上腹部疼痛/不适和胃气胀)，而不会在下GI道中造成显著影响(例如，肠排便习惯的剂量限制改变，包括腹泻)。本发明的肽还对减轻胃肠疼痛和不适有用。本发明的一方面提供肽或其药学上可接受的盐，其中肽包含氨基酸序列Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Cys5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Cys9 Asn10 Pro11 Ala12Cys13 Xaa14 Gly15Xaa16 Xaa17，或其药学上可接受的盐；其中Xaa1 是 Asn、D-Asn> Gin、D_Gln、Pro、Ala、3 -Ala、D_Ala、V al、D-Val> Gly、Thr>D-Thr> Asp、D-Asp、y -羧化的 Asp、Glu、D-Glu、y -羧化的 Glu、a -氨基辛二酸(Asu)、a -氨基己二酸(Aad)、a -氨基庚二酸(Apm)，或不存在；Xaa2 是 Asp、Y -羧化的 Asp、Glu、Y -羧化的 Glu、Asu、Aad、Apm,或不存在；Xaa3 是 Asp、Y -羧化的 Asp、Glu、Y -羧化的 Glu、Asu、Aad、Apm,或不存在；Xaa4 是 Cys 或 D-Cys ；Xaa6 是 P_Ser、P-Thr> P-高-Ser、4_ 轻基纟颜氨酸磷酸酯、P-高-Thr、P-Cys 或P-Tyr ；Xaa7 是 Tyr、Leu、Phe 或 Ile ;Xaa8 是 Cys 或 D-Cys ；Xaa14 是 Thr、Ala 或 Phe ;Xaa16 是 Cys 或 D-Cys ；以及Xaa17 是 Tyr、D-Tyr 或不存在；其中如果存在Xaa1, Xaa1可以用甲基、乙二酸、丙二酸、丁二酸、戊二酸、己二酸、庚二酸或辛二酸在其氨基上修饰；如果不存在Xaa1且存在Xaa2，那么Xaa2可以用甲基、乙二酸、丙二酸、丁二酸、戊二酸、己二酸、庚二酸或辛二酸在其氨基上修饰；或如果Xaa1和Xaa2都不存在，那么Xaa3可以用甲基、乙二酸、丙二酸、丁二酸、戊二酸、己二酸、庚二酸或辛二酸在其氨基上修饰。本发明的第二方面提供包含本发明的肽的药物组合物。本发明的第三方面提供用于治疗胃肠道病症的方法，其包括施用根据本发明的药物组合物。本发明的一个或多个实施方案的细节在附随的描述中列出。附图
简述图IA说明本发明的示例性肽与碱性磷酸酶的反应。图IB说明用磷酸酶水解对照的对硝基苯基磷酸酯。图2呈现了显示肽2和肽4促进十二指肠液分泌的实例。图3呈现了关于肽2、去磷酸化肽2和肽3在小鼠肠(空肠)液中的稳定性研究的结果。
图4呈现了关于肽2和肽3对STZ诱导糖尿病大鼠中液体胃排空的影响研究的结果。这些图式通过实施例的方式提供，而不意图限制本发明的范围。
详述鸟苷酸环化酶C(GC-C)是位于胃和肠中的上皮细胞的顶表面的跨膜受体。该受体具有细胞外的配体结合域、单个跨膜区域和C-末端的鸟苷酸环化酶结构域。当配体结合GC-C的细胞外结构域时，细胞内催化结构域催化由GTP产生cGMP。在体内，这种细胞内cGMP的增加起始导致以下事件的级联增加的氯化物和碳酸氢盐分泌进入肠内腔，增加的腔内PH，降低的腔内钠吸收，增加的液体分泌和肠运输的加速。也已经显示从上皮双向地分泌进入粘膜和内腔的cGMP缓冲传入的C纤维熔结(C fiber firing)，表明观察到的GC-C激动剂对内脏痛的镇痛作用的潜在机制。利那洛肽(Linaclotide)是一种口服施用的且目前在用于治疗伴随便秘的肠易激综合征(IBS-C)和慢性便秘(CC)的临床试验中的肽GC-C激动剂，其对下GI生理学具有许多效果，包括⑴减少内脏痛，⑵减少胃气胀，和⑶增加GI运输，这可以导致大便频率增加和大便稠度改善。口服施用的利那洛肽通过在内腔表面活化GC-C局部地起作用；在以治疗剂量水平口服施用之后，在全身未见可检测水平的利那洛肽。因此，利那洛肽的临床试验的结果以及用利那洛肽和相关的肽进行的临床前研究表明可以在治疗上使用GC-C肽激动剂。服用GC-C激动剂将是有用的，其可以用于减轻上GI病症和症状(例如，功能性消化不良(FD)和胃轻瘫(GP))而不会促成可能由于GI道的下部中GC-C的刺激引起的对肠排便习惯的显著影响。这种GC-C激动剂可以减少包括改变肠排便习惯和腹泻的下GI不利事件的可能性。本文描述的GC-C肽激动剂在上GI道(例如，胃和十二指肠)具有更大的活性，而在下GI道中活性较差。这些激动剂将通过以下作用使患有上GI病症(例如，FD和GP)的患者受益(I)通过cGMP产生及/或其它机制减少内脏痛，⑵减少胃气胀，(3)增加胃排空及/或上小肠运输(例如，十二指肠运输)，和⑷通过促进碳酸氢盐分泌中和十二指肠中的酸。重要地，这些激动剂，由于它们对上GI的靶向活性，将能够减轻FD和GP的症状而不引起对肠排便习惯的显著的影响(例如，这些影响可源于GI道的下部中GC-C的刺激)。在一方面，本发明提供了对治疗胃肠道病症，具体地上GI病症如FD和GP有用的新的GC-C肽激动剂。GC-C肽激动剂被设计为在包括食管、胃和上小肠(十二指肠)的上GI中具有活性，但当其经过小肠的剩余部分和大肠时活性降低。本发明的肽还对减轻胃肠疼痛和不适有用。GC-C激动剂肽含有磷酸氨基酸，例如磷酸丝氨酸，以代替其它GC-C激动剂肽中发现的保守的谷氨酸或天冬氨酸。磷酸氨基酸-OPO32-如磷酸丝氨酸的磷酸酯能够作为谷氨酸或天冬氨酸的COO-的生物模仿物(biomimetic)，以致含磷酸氨基酸的肽能够结合并活化GC-C。含磷酸氨基酸的肽可以通过肠碱性磷酸酶脱去磷酸，这大大地降低了肽的GC-C结合和激动剂活性。肠内碱性磷酸酶存在于GI道各处，且在包括小肠的碱性腔内环境中最具活性。含磷酸氨基酸的肽能够在包括酸性胃环境和上GI道的上GI道中活化GC-C，以促进液体和碳酸氢盐分泌。当肽在上GI中促进增加的液体和碳酸氢盐分泌时，肠内腔的碱性变得更强，因而活化碱性磷酸酶活性。因而，通过肽对GC-C的作用以及肽移动通过肠，肽的磷酸氨基酸被转化成脱去磷酸的氨基酸，由此当其从上GI向下GI转移时，其作为GC-C激动剂的活性被降低。如本文所用，在氨基酸或其三字母缩写之前的术语“P-”指磷酸氨基酸。例如，术语 “P-Ser”、“P-Thr”、“P-Tyr”、“P-CyS”、“P-高-Cys”、“P_ 高-Serj^P “P-高-Thr” 分别
指磷酸丝氨酸、磷酸苏氨酸、磷酸酪氨酸、磷酸半胱氨酸、磷酸高半胱氨酸、磷酸高丝氨酸和
磷酸高苏氨酸。如本文所用，磷酸氨基酸指氨基酸与磷酸的酯或硫酯；例如，醇或硫醇官能
H2N
团上的氢被-P(O) (OH)2替代。例如，P-Ser具有结构 (5^^P~Thr具有结
O OH ，
NH2NH2
P-Tyr 具有结构HCJ H且 P-Cys 具有结构
O1 HOO,
O
卜OHH2N^ O
Ls 十 OH
OH在一方面，本发明提供肽或其药学上可接受的盐，其中肽包含以下氨基酸序列Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Cys5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Cys9 Asn10 Pro11 Ala12Cys13 Xaa14 Gly15Xaa16 Xaa17，或其药学上可接受的盐；其中Xaa1 是 Asn、D_Asn、Gin、D_Gln、Pro、Ala、3 -Ala、D_Ala、Val、D-VaK Gly、Thr、D-Thr、Asp、D_Asp、Y -羧化的 Asp、Glu、D_Glu、Y -羧化的 Glu、a -氨基辛二酸(Asu)、a -氨基己二酸(Aad)、a -氨基庚二酸(Apm)，或不存在；Xaa2 是 Asp、Y -羧化的 Asp、Glu、Y -羧化的 Glu、Asu、Aad、Apm,或不存在；Xaa3 是 Asp、Y -羧化的 Asp、Glu、Y -羧化的 Glu、Asu、Aad、Apm,或不存在；Xaa4 是 Cys 或 D-Cys ；Xaa6 是 P_Ser、P_Thr、P-高-Ser、4_ 轻基缴氨酸磷酸酯、P-高-Thr、P-Cys 或P-Tyr ；Xaa7 是 Tyr、Leu、Phe 或 lie ;Xaa8 是 Cys 或 D-Cys ；Xaa14 是 Thr、Ala 或 Phe ；Xaa16 是 Cys 或 D-Cys ；以及Xaa17 是 Tyr、D-Tyr 或不存在；其中如果存在Xaa1, Xaa1可以用甲基、乙二酸、丙二酸、丁二酸、戊二酸、己二酸、庚二酸或辛二酸在其氨基上修饰；如果不存在Xaa1且存在Xaa2，那么Xaa2可以用甲基、乙二酸、丙二酸、丁二酸、戊二酸、己二酸、庚二酸或辛二酸在其氨基上修饰；或
如果Xaa1和Xaa2都不存在，那么Xaa3可以用甲基、乙二酸、丙二酸、丁二酸、戊二酸、己二酸、庚二酸或辛二酸在其氨基上修饰。在一些实施方案中，Xaa2和Xaa3都不存在。在其它实施方案中，Xaa2是Asp或Glu且Xaa3不存在。在又一些其它实施方案中，Xaa2是Asp或Glu且Xaa3是Asp或Glu。在一些实施方案中，Xaa7是Tyr或Leu。在一些实施方案中，Xaa14是Thr。在一些实施方案中，Xaa17是Tyr或不存在。在一些实施方案中，Xaa1是 Asn、D-Asn、Gln、D_Gln、Pro、Ala、β -Ala、D_Ala、Val、 D-Val、Gly、Thr、D-Thr、Asp、D-Asp> Glu 或 D-Glu0 在进一步的实施方案中，Xaa1 是 Asp、D-Asp、Glu 或 D-Glu。在一些实施方案中，Xaa6是P-Ser或P-Thr。在进一步的实施方案中，Xaa6是P-Ser。在一些实施方案中，Xaa1^ Xaa2和Xaa3不存在且Xaa4是D-Cys或Cys。在进一步的实施方案中，Xaa7是Tyr或Leu。在进一步的实施方案中,Xaa14是Thr。在进一步的实施方案中，Xaa17是Tyr或不存在。在进一步的实施方案中，Xaa6是P_Ser。在一些实施方案中，Xaa4、Xaa8* Xaa16中的至少一个是Cys。在一些实施方案中，Xaa4、Xaa8或Xaa16中的至少二个是Cys。在一些实施方案中，Xaa4> Xaa8和Xaa16都是Cys。在一些实施方案中，Xaa4、Xaa8或Xaa16中的至少一个是D_Cys。在一些实施方案中，Xaa4>Xaa8或Xaa16中的至少二个是D_Cys。在一些实施方案中，Xaa4> Xaa8和Xaa16都是D_Cys。在一些实施方案中，提供了肽或其药学上可接受的盐，其中肽包含以下氨基酸序列Cys4 Cys5 P-Ser6 Xaa7 Cys8 Cys9 Asn10 Pro11 Ala12 Cys13 Thr14 Gly15Cys16 Xaa17,其中Xaa7是Tyr或Leu。在一些实施方案中，提供了肽或其药学上可接受的盐，其中肽包含以下氨基酸序列Asp Asp Cys Cys P-Ser Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly CysTyr ；Asp Asp Cys Cys P-Ser Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys ；Asp Asp Cys Cys P-Ser Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly CysTyr ；Asp Asp Cys Cys P-Ser Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys ；Cys Cys P-Ser Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr ；Cys Cys P-Ser Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys ；Cys Cys P-Ser Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr ;或Cys Cys P-Ser Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys。在一些实施方案中，提供了肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽包括包含不多于50、40、30或20个氨基酸的肽。在进一步的实施方案中，肽包含不多于19、18、17、16、15或14个氨基酸。在另一方面，本发明提供肽或其药学上可接受的盐，其中肽由以下氨基酸序列组成Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Cys5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Cys9 Asn10 Pro11 Ala12Cys13 Xaa14 Gly15Xaa16 Xaa17，或其药学上可接受的盐；其中Xaa1 是 Asn、D-Asn、Gin、D_Gln、Pro、Ala、β -Ala、D_Ala、Val、D-Val> Gly、Thr、D-Thr、Asp、D-Asp、y -羧化的 Asp、Glu、D-Glu、y -羧化的 Glu、a -氨基辛二酸(Asu)、a -氨基己二酸(Aad)、α -氨基庚二酸(Apm)，或不存在；Xaa2 是 Asp、Y -羧化的 Asp、Glu、Y -羧化的 Glu、Asu、Aad> Apm,或不存在；Xaa3 是 Asp、Y -羧化的 Asp、Glu、Y -羧·化的 Glu、Asu、Aad> Apm,或不存在；Xaa4 是 Cys 或 D-Cys ；Xaa6 是 P_Ser、P-Thr> P-高-Ser、4_ 轻基纟颜氨酸磷酸酯、P-高-Thr、P-Cys 或P-Tyr ；Xaa7 是 Tyr、Leu、Phe 或 Ile ;Xaa8 是 Cys 或 D-Cys ；Xaa14 是 Thr、Ala 或 Phe ；Xaa16 是 Cys 或 D-Cys ；以及
Xaa17 是 Tyr、D-Tyr 或不存在；其中如果存在Xaa1, Xaa1可以用甲基、乙二酸、丙二酸、丁二酸、戊二酸、己二酸、庚二酸或辛二酸在其氨基上修饰；如果不存在Xaa1且存在Xaa2，那么Xaa2可以用甲基、乙二酸、丙二酸、丁二酸、戊二酸、己二酸、庚二酸或辛二酸在其氨基上修饰；或如果Xaa1和Xaa2都不存在，那么Xaa3可以用甲基、乙二酸、丙二酸、丁二酸、戊二酸、己二酸、庚二酸或辛二酸在氨基上修饰。在一些实施方案中，Xaa2和Xaa3都不存在。在其它实施方案中，Xaa2是Asp或Glu且Xaa3不存在。在又一些其它实施方案中，其中Xaa2是Asp或Glu且Xaa3是Asp或Glu。在一些实施方案中，Xaa7是Tyr或Leu。在一些实施方案中，Xaa14是Thr。在一些实施方案中，Xaa17是Tyr或不存在。在一些实施方案中，Xaa1是 Asn、D-Asn、Gln、D_Gln、Pro、Ala、β -Ala、D_Ala、Val、D-Val、Gly、Thr> D-Thr、Asp、D-Asp> Glu 或 D-Glu0 在进一步的实施方案中，Xaa1 是 Asp、D-Asp、Glu 或 D-Glu。在一些实施方案中，Xaa6是P-Ser或P-Thr。在进一步的实施方案中，Xaa6是P-Ser。在一些实施方案中，Xaa^ Xaa2和Xaa3不存在且Xaa4是D-Cys或Cys。在进一步的实施方案中，Xaa7是Tyr或Leu。在进一步的实施方案中,Xaa14是Thr。在进一步的实施方案中，Xaa17是Tyr或不存在。在进一步的实施方案中，Xaa6是P_Ser。在一些实施方案中，提供了肽或其药学上可接受的盐，其中肽由以下氨基酸序列组成Cys4 Cys5 P-Ser6 Xaa7 Cys8 Cys9 Asn10 Pro11 Ala12 Cys13 Thr14 Gly15Cys16 Xaa17,其中Xaa7是Tyr或Leu。在一些实施方案中，提供了肽或其药学上可接受的盐，其中肽由以下氨基酸序列组成Asp Asp Cys Cys P-Ser Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly CysTyr ；Asp Asp Cys Cys P-Ser Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys ；Asp Asp Cys Cys P-Ser Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly CysTyr ；Asp Asp Cys Cys P-Ser Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys ；Cys Cys P-Ser Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr ；Cys Cys P-Ser Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys ；Cys Cys P-Ser Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr ;或

Cys Cys P-Ser Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys。在一些实例中，肽是经过分离的。在其它实例中，肽是经过纯化的。在一些实施方案中，Xaa6是可以被磷酸化的任何氨基酸。在一些实施方案中，提供了肽的药学上可接受的盐。在一些实例中，药学上可接受的盐是盐酸盐。夺体狀在一些情况中，用结合并活化肠内GC-C受体的变体肽治疗患者是需要的，但是变体肽与非变体形式的肽相比活性更高或更低。减少的活性可源于对受体的亲和力降低或结合之后活化受体的能力降低或肽的稳定性降低。增加的活性可源于对受体的亲和力增加或结合之后活化受体的能力增加或肽的稳定性增加。在一些肽中，通常形成二硫键的一对或两对Cys残基的一个或两个成员可以用高半胱氨酸、青霉胺、3-巯基脯氨酸(Kolodziej 等，1996Int J Pept Protein Res 48 :274)；β，β - 二甲基半胱氨酸(Hunt 等，1993 Int J Pept Protein Res 42 :249)或二氨基丙酸(Smith等，1978 J Med Chem21 :117)代替以在正常的二硫键的位置形成可选的内部交联。在其它实施方案中，二硫键可以用烃交联代替(Schafmeister等,2000 J Am Chem Soc122 :5891, Patgiri 等，2008 Acc Chem Res 41 :1289, Henchey 等，2008 Curr Opin ChemBiol 12 :692)。肽的产牛在一种实施方案中，本发明的肽或前体肽可以在任何已知蛋白表达系统中重组产生，所述系统包括但不限于，细菌(例如，大肠杆菌(E. coli)或枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis))、昆虫细胞系统(例如，果蝇(Drosophila) Sf9细胞系统)、酵母细胞系统(例如，酿酒酵母(S. cerevisiae)、酵母(S. saccharomyces))或丝状真菌表达系统或动物细胞表达系统(例如，哺乳动物细胞表达系统)。本发明的肽或前体肽也可以进行化学合成。如果肽或变体肽通过(例如)大肠杆菌重组产生，编码肽的核酸分子也可以编码允许成熟的肽从细胞分泌的前导序列。因而，编码肽的序列可以包括，例如，天然存在的细菌ST肽的前序列(pre sequence)和原序列(pro sequence)。可以从培养基中纯化被分泌的成熟的肽。本文描述的编码肽的序列可以被插入能够在细菌细胞中递送和维持核酸分子的载体。DNA分子可以被插入自主复制载体(合适的载体包括，例如，pGEM3Z和pcDNA3及其衍生物)。载体核酸可以是细菌DNA或噬菌体DNA，如噬菌体λ或Μ13及其衍生物。可以在含有本文描述的核酸的载体的构建之后转化宿主细胞如细菌。合适的细菌宿主包括但不限于大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、假单胞菌(Pseudomonas)和沙门氏菌(Salmonella)。除了编码核酸分子之外，基因构建体也包括允许表达的元件，如启动子和调控序列。表达载体可以包含控制转录起始的转录控制序列，如启动子、增强子、操作子和抑制子序列。许多转录控制序列是本领域的技术人员熟知的。表达载体也可以包括翻译调控序列(例如，非翻译的5'序列、非翻译的3'序列或内部核糖体进入位点)。载体可以是能够自主复制，或其可以整合进入宿主DNA以保证肽产生期间的稳定性。包括本文描述的肽的蛋白编码序列也可以被融合到编码肽亲和标签的核酸上以便于纯化，所述肽亲和标签例如为谷胱甘肽S-转移酶(GST)、麦芽糖E结合蛋白、蛋白A、FLAG标签、六聚组氨酸、myc标签或流行性感冒HA标签。亲和标签或报告基因融合将受关注的肽的读框连接到编码亲和标签的基因的读框，以产生翻译融合。融合基因的表达引起包括受关注的肽和亲和标签的单个肽的翻译。在其中使用亲和标签的一些实例中，编码蛋白酶识别位点的DNA序列将被融合到亲和标签的读框和受关注的肽的读框之间。适合用于在除了细菌的蛋白表达系统中产生本文描述的肽和变体的不成熟和成 熟形式的基因构建体和方法，且对于本领域的技术人员熟知的基因构建体和方法，也可以用于在生物系统中广生妝。重组产生的肽可以使用本领域的技术人员已知的方法磷酸化。在一些实施方案中，肽被重组产生，从其被表达的细胞中分离，然后使用蛋白激酶例如丝氨酸/苏氨酸激酶或酪氨酸激酶磷酸化。大量的激酶是本领域已知的且可以用于这一目的。本领域的技术人员将认识到不同的激酶具有不同的底物特异性，且将根据肽的序列挑选激酶使用。在其它实施方案中，肽在也表达将磷酸化肽的丝氨酸/苏氨酸激酶或酪氨酸激酶的细胞中重组产生。在其它实施方案中，肽可以通过结合磷酸氨基酸被重组产生。本领域已知用于修饰tRNA的方法，包括但不限于修饰反密码子、氨基酸附着位点及/或接受柄(accepter stem)以允许并入非天然的及/或任意氨基酸(Biochem. Biophys. Res. Comm. (2008) 372 480-485 ；Chem. Biol. (2009) 16 :323-36 ；Nat. Methods (2007) 4 :239-44 ；Nat. Rev. Mol. Cell Biol.(2006) 7 :775-82 !Methods(2005)36 :227-238 !Methods(2005) 36 :270-278 ；Annu. Rev.Biochem. (2004) 73 :147-176 ;Nuc. Acids Res. (2004)32 :6200-6211 ；Proc. Natl. Acad.Sci. USA(2003) 100 :6353-6357 ；Royal Soc. Chem. (2004)33 :422-430)。在一些实施方案中，肽可以用化学方法产生。肽可以通过许多不同的方法合成，所述方法包括使用传统的BOC或FMOC保护的液相和固相合成。例如，可以使用连续的氨基酸偶联在2-氯三苯甲基氯树脂或王树脂(Wang resin)上合成肽。可以使用以下保护基芴甲氧羰基或叔丁氧羰基(α-氨基，N-端)；三苯甲基或叔丁基(Cy的巯基)；叔丁基(如果存在，谷氨酸的Y-羧基和苏氨酸的羟基)；三苯甲基(如果存在，天冬酰胺侧链的氨基官能团(amid function)和酪氨酸的酹基)；三苯甲基或叔丁基二甲基甲娃烧基(如果存在，丝氨酸的羟基)和叔丁氧羰基(在随后的侧链修饰之前的N-端)。可以在叔胺的存在下用DIC和HOBt完成偶联，且可以将肽去保护并使用cocktail K(三氟乙酸81%、苯酚5%、茴香硫醚5%、1，2-乙二硫醇2. 5%、水3%、二甲基硫2%、碘化铵1.5% w/w)从固体载体上将其分开。除去三氟乙酸和其它挥发物之后，可以使用有机溶剂将肽沉淀。使用二甲基亚砜(Tam等(1991) J. Am. Chem. Soc. 113 :6657-62)或使用空气氧化方法可以形成Cys残基之间的二硫键。生成的肽可以通过反相色谱法纯化，并冻干。
磷酸氨基酸，例如磷酸丝氨酸可以通过本领域技术人员已知的任何方法引入月太(参见，例如，G. K. Toth 等(2007)，Current Organic Chemistry 11 :409-426)。在一些实施方案中，受保护的磷酸氨基酸类似物例如磷酸丝氨酸类似物可以作为固相上肽组装体(peptide assembly)的一部分被引入；例如作为 Fmoc-Ser[P0(0Bzl)0H]-0H(T·Wakamiya 等 (1997), Bioorganic and Medicinal Chemistry 5 135-145,1997)或作为Fmoc-Ser [PO(O 芳基 / 烧基)2]-OH(G. K. Toth 等(2007) Current Organic Chemistry, 11 409-426)。在另一实施方案中，受保护的氨基酸类似物，例如，受保护的丝氨酸类似物，可以作为固相上肽组装体的一部分被引入(例如，用三苯甲基保护羟基侧链的Fmoc-保护的丝氨酸)。肽链的完全组装之后，Ser [Trt]或Ser [SiMe2tBu]可以选择性地脱保护，且可以使用亚磷酰胺/氧化方法引入磷酸酯基团(G. Shapiro等(1994) Tetrahedron Letters 35 869-872 ;P. Hormozdiari 等(1996) Tetrahedron Letters, 37 :8227-8230)。在其它实施方案中，化学产生的肽可以使用如上面描述的丝氨酸/苏氨酸激酶或酪氨酸激酶磷酸化。
肽可以呈游离碱的形式或作为其药学上可接受的盐被制备、分离或使用。盐的实例包括但不限于肽的乙酸盐、盐酸盐、硫酸盐和磷酸盐。肽和GC-C受体激动剂的组合物在另一方面，提供了组合物，其中肽可以单独地或结合地与任何药学上可接受的载体或介质组合。肽可以与当向患者施用时不产生不利的、过敏的或其它不期望的反应的物质组合。使用的载体或介质可以包括溶剂、分散剂、包衣、吸收促进剂、控释剂和一种或多种惰性赋形剂(其包括淀粉、多元醇、制粒剂、微晶纤维素(例如，celphere,Celphere beads )、稀释剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂以及类似物)等。如果需要，公开的组合物的片剂制剂可以通过标准的含水或无水技术包覆。用作药学上可接受的载体和药学上可接受的惰性载体的赋形剂以及前面提到的其它成分的实例包括，但不限于粘合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂、抗微生物剂和包衣剂。如本文所用，术语“粘合剂”指在本发明的实践中可以使用的任何药学上可接受的粘合剂。药学上可接受的粘合剂的实例包括但不限于淀粉(例如，玉米淀粉、马铃薯淀粉和预糊化淀粉(例如，STARCH I 500 和STARCH 1500 LM⑩，由Colorcon, Ltd.出售)和其它淀粉)、麦芽糊精、明胶、天然的和合成的胶如阿拉伯胶、粉状黄蓍胶、瓜尔胶、纤维素及其衍生物(例如，甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟乙基甲基纤维素、羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素(羟丙甲纤维素)、乙基纤维素、醋酸纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素、粉状纤维素、微细纤维素、微晶纤维素(例如，AVICEL ，如AVICEL-PH-101TM、-103 和-105 ，由美国宾夕法尼亚州Marcus Hook市的FMC Corporation出售))、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮(例如，聚乙烯吡咯烷酮K30)，及其混合物。可以具体地用于药物组合物的粘合剂的实例包括聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮(聚维酮)、淀粉、麦芽糊精或纤维素醚(如，例如，甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟乙基甲基纤维素、羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素)。如本文所用，术语“填充剂”指在本发明的实践中可以使用的任何药学上可接受的填充剂。药学上可接受的填充剂的实例包括但不限于滑石、碳酸钙(例如，颗粒或粉末)、磷酸氢钙、正磷酸钙、硫酸钙(例如，颗粒或粉末)、微晶纤维素(例如，Avicel PHlOl或CelphereCP-305)、微细纤维素、粉状纤维素、葡聚糖结合剂(dextrates)、高岭土、甘露醇、硅酸、山梨醇、淀粉(例如，Starchl500)、预糊化淀粉、乳糖、葡萄糖、果糖、半乳糖、海藻糖、蔗糖、麦芽糖、异麦芽酮糖醇(isomalt)、棉子糖、麦芽糖醇、松三糖、水苏糖、乳糖醇、直辉中基性岩(palatinite)、木糖醇、肌醇及其混合物。可以具体地用于包覆所述肽的药学上可接受的填充剂的实例包括但不限于滑石、微晶纤维素(例如，Avicel PHlOl或Celphere CP-305)、粉状纤维素、葡聚糖结合剂、高岭土、甘露醇、硅酸、山梨醇、淀粉、预糊化淀粉、乳糖、葡萄糖、果糖、半乳糖、海藻糖、蔗糖、麦芽糖、异麦芽酮糖醇、磷酸氢钙、棉子糖、麦芽糖醇、松三糖、水苏糖、乳糖醇、直辉中基性岩、木糖醇、甘露醇、肌醇及其混合物。如本文所用，术语“添加剂”指任何药学上可接受的添加剂。药学上可接受的添加剂包括但不限于崩解剂、分散添加剂、润滑剂、助流剂、抗氧化剂、包衣添加剂、稀释剂、表面活性剂、调味添加剂、保湿剂、吸收促进添加剂、控释添加剂、抗结块添加剂、抗微生物剂(例如，防腐剂)、着色剂、干燥剂、增塑剂及染料。如本文所用，“赋形剂”是任何药学上可接受的添加剂、填充剂、粘合剂或药剂。 本发明的组合物也可以任选地包括其它治疗成分、抗结块剂、防腐剂、增甜剂、着色剂、调味剂、干燥剂、增塑剂、染料、助流剂、抗粘着剂、抗静电剂、表面活性剂(润湿剂)、抗氧化剂、薄膜包衣剂以及类似物。任何这些任选的成分必须是与本文描述的化合物相容的，以保证制剂的稳定性。组合物可以包含其它所需的添加剂，包括例如乳糖、葡萄糖、果糖、半乳糖、海藻糖、蔗糖、麦芽糖、棉子糖、麦芽糖醇、松三糖、水苏糖、乳糖醇、直辉中基性岩、淀粉、木糖醇、甘露醇、肌醇以及类似物，及其水合物，和氨基酸，例如丙氨酸、甘氨酸和甜菜碱，以及肽和蛋白，例如白蛋白。组合物可以包括，例如，各种附加的溶剂、分散剂、包衣、吸收促进添加剂、控释添加剂和一种或多种惰性添加剂(其包括，例如，淀粉、多元醇、制粒添加剂、微晶纤维素、稀释剂、润滑剂、粘合剂、崩解添加剂以及类似物质)等。如果需要，公开的组合物的片剂制剂可以通过标准的含水或无水技术包覆。组合物也可以包括，例如，抗结块添加剂、防腐剂、增甜添加剂、着色剂、调味剂、干燥剂、增塑剂、染料以及类似物。合适的崩解剂包括，例如，琼脂、碳酸钙、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、交聚维酮、聚维酮、波拉克林钾、淀粉羟乙酸钠、马铃薯淀粉或木薯淀粉、其它淀粉、预糊化淀粉、粘土、其它藻胶、其它纤维素、胶及其混合物。合适的润滑剂包括，例如，硬脂酸钙、硬脂酸镁、矿物油、轻质矿物油、甘油、山梨醇、甘露醇、聚乙二醇，其它二醇、硬脂酸、十二烷基硫酸钠、滑石、氢化植物油(例如，花生油、棉籽油、葵花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油)、硬脂酸锌、油酸乙酯、月桂酸乙酯、琼脂、syloid硅胶(美国马里兰州巴尔的摩市W.R. Grace Co.的AEROSIL 200)、合成二氧化娃的凝聚型气溶胶(美国德克萨斯州Plano市的Evonik Degussa Co.)、热解二氧化娃(美国马萨诸塞州波士顿市Cabot Co.的CAB-0-SIL)及其混合物。合适的助流剂包括，例如，亮氨酸、胶体二氧化硅、三硅酸镁、粉状纤维素、淀粉、滑石和正磷酸钙。合适的抗结块添加剂包括，例如，硅酸钙、硅酸镁、二氧化硅、胶体二氧化硅、滑石及其混合物。可以使用的合适的抗微生物添加剂，例如作为肽组合物的防腐剂，包括例如，苯扎氯铵、苄索氯铵、苯甲酸、苯甲醇、对羟基苯甲酸丁酯、西吡氯铵、甲酚、三氯叔丁醇、脱氢乙酸、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸甲酯、苯酚、苯乙醇、苯氧基乙醇、苯基醋酸汞、苯基硝酸汞、山梨酸钾、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸钠、脱氢乙酸钠、丙酸钠、山梨酸、硫柳汞(thimersol)、百里香酹(thymo)及其混合物。合适的抗氧化剂包括，例如，BHA( 丁羟基茴香醚)、BHT(丁羟基甲苯)、维生素E、没食子酸丙酯、抗坏血酸及其盐或酯、生育酚及其酯、α-硫辛酸和β-胡萝卜素。合适的包衣添加剂包括，例如，羧甲基纤维素钠、醋酸邻苯二甲酸纤维素、乙基纤维素、明胶、药用釉料、羟丙基纤维素、羟丙甲基纤维素、羟丙甲基纤维素邻苯二甲酸酯、甲基纤维素、聚乙二醇、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯、虫胶、蔗糖、二氧化钛、巴西棕榈蜡、微晶蜡及其混合物。合适的保护性包衣包括Aquacoat (例如,Aquacoat乙基纤维素水分散体，15%w/w, FMC Biopolymer, ECD-30)、Eudragit (例如，Eudragit E PO PE-EL, Roehm PharmaPolymers)和 Opadry (例如，Opadry AMB 分散体,20% w/w, Colorcon)。在某些实施方案中，肽组合物的合适的添加剂包括蔗糖、滑石、硬脂酸镁、交聚维 酮或BHA中的一种或多种。本发明的组合物也可以包括其它赋形剂，药剂及其类别，包括但不限于L-组氨酸、Pluronic 、泊洛沙姆(如Lutrol 和泊洛沙姆188)、抗坏血酸、谷胱甘肽、渗透增强剂(例如，脂质、胆酸钠、酰基肉毒碱、水杨酸盐、混合的胆盐、脂肪酸微团、螯合剂、脂肪酸、表面活性剂、中链甘油酯)、蛋白酶抑制剂(例如，大豆胰蛋白酶抑制剂、有机酸)、pH降低剂以及对促进生物利用度有效的吸收增强剂(包括但不限于描述在US 6086918和US 5912014中的那些)、用于咀嚼片的材料(如右旋糖、果糖、一水乳糖、乳糖和阿斯巴甜、乳糖和纤维素、麦芽糊精、麦芽糖、甘露醇、微晶纤维素和瓜尔胶、结晶山梨醇)；肠胃外剂(parenterals)(如甘露醇和聚维酮)；增塑剂(如癸二酸二丁酯、用于包衣的增塑剂、聚乙烯乙酸邻苯二甲酸酯)；粉状润滑剂(如甘油山嵛酸酯)；软胶胶囊(如山梨醇特种溶液)；包衣用球(如糖球)；搓圆剂(如甘油山嵛酸酯和微晶纤维素)；混悬剂/胶凝剂(如角叉菜胶、结冷胶、甘露醇、微晶纤维素、聚维酮、羟基乙酸淀粉钠、黄原胶)；增甜剂(如阿斯巴甜、阿斯巴甜和乳糖、右旋糖、果糖、蜂蜜、麦芽糊精、麦芽糖、甘露醇、糖蜜、结晶山梨醇、山梨醇特种溶液、蔗糖)；湿法制粒剂(如碳酸钙、无水乳糖、一水乳糖、麦芽糊精、甘露醇、微晶纤维素、聚维酮、淀粉)、焦糖、羧甲基纤维素钠、樱桃乳酪调味剂和樱桃调味剂、无水柠檬酸、朽1檬酸、糖粉(confectioner，s sugar)、D&C红色33号，D&C黄色10号招色淀、依地酸二钠、乙醇15%、FD&C黄色6号铝色淀、FD&C蓝色I号铝色淀、FD&C蓝色I号、FD&C蓝色2号铝色淀、FD&C绿色3号、FD&C红色40号、FD&C黄色6号铝色淀、FD&C黄色6号、FD&C黄色10号、硬脂酸棕榈酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、靛胭脂、卵磷脂、甘露醇(manitol)、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、甘草酸单铵、天然的和人工的橙调味剂、药用釉料、泊洛沙姆188、聚葡萄糖、聚山梨酯20、聚山梨酯80、聚维酮、预糊化玉米淀粉、预糊化淀粉、红色氧化铁、糖精钠、羧甲基醚纤维素钠(sodium carboxymethyl ether)、氯化钠、朽1檬酸钠、磷酸钠、草莓调味剂、合成的黑色氧化铁、合成的红色氧化铁、二氧化钛和白蜡。在一些实施方案中，提供了包含本文描述的肽和一种或多种选自Mg2+、Ca2+、Zn2+、Mn2+、K+、Na+或Al3+、其组合及/或空间位阻伯胺的稳定剂的药物组合物。在进一步的实施方案中，所述剂是Mg2+、Ca2+或Zn2+或其组合。在一些实施方案中，提供了阳离子，不限于乙酸镁、氯化镁、磷酸镁、硫酸镁、乙酸钙、氯化钙、磷酸钙、硫酸钙、乙酸锌、氯化锌、磷酸锌、硫酸锌、乙酸锰、氯化锰、磷酸锰、硫酸锰、乙酸钾、氯化钾、磷酸钾、硫酸钾、乙酸钠、氯化钠、磷酸钠、硫酸钠、乙酸铝、氯化铝、磷酸铝或硫酸铝。在进一步的实施方案中，提供阳离子为氯化镁、氯化钙、磷酸钙、硫酸钙、乙酸锌、氯化锰、氯化钾、氯化钠或氯化铝。在其它实施方案中，提供阳离子为氯化钙、氯化镁或乙酸锌。在另一个实施方案中，稳定剂是空间位阻伯胺。在进一步的实施方案中，空间位阻伯胺是氨基酸。在又一实施方案中，氨基酸是天然存在的氨基酸。在又进一步的实施方案中，天然存在的氨基酸选自由以下组成的组组氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、谷酰胺、亮氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、酪氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、色氨酸、甘氨酸和缬氨酸；又进一步，天然存在的氨基酸是亮氨酸、异亮氨酸、丙氨酸或甲硫氨酸。在另一个实施方案中，空间位阻伯胺是非天然存在的氨基酸(例如，I-氨基环己烷羧酸)。在进一步的实施方案中，空间位阻伯胺是环己基胺、2-甲基丁基胺或聚合胺，如壳聚糖。在另一个实施方案中，可在组合物中使用一种或多种空间位阻伯胺。在一些情况下，空间位阻伯胺具有式
权利要求
1.一种肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含以下氨基酸序列Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Cys5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Cys9 Asn10 Pro11 Ala12 Cys13 Xaa14 Gly15 Xaa16Xaa17，或其药学上可接受的盐；其中Xaa1 是 Asn、D-Asn、Gin、D-Gln、Pro、Ala、^ -Ala> D-Ala> Val> D-Val> Gly> Thr> D-Thr>Asp、D-Asp> Y ~ 竣化的 Asp、Glu、D-Glu、y -竣化的 Glu、a -氛基羊二酸(Asu)、a -氛基己二酸(Aad)、a -氨基庚二酸(Apm)，或不存在； Xaa2 是 Asp、y -羧化的 Asp、Glu、y -羧化的 Glu、Asu、Aad> Apm,或不存在； Xaa3 是 Asp、y -羧化的 Asp、Glu、y -羧化的 Glu、Asu、Aad> Apm,或不存在；Xaa4 是 Cys 或 D-Cys ；Xaa6 是 P-Ser、P-Thr> P-高 _Ser、4_ 轻基纟颜氨酸磷酸酯、P-高-Thr、P-Cys 或 P-Tyr ； Xaa7 是 Tyr、Leu> Phe 或 Ile ;Xaa8 是 Cys 或 D-Cys ；Xaa14 是 Thr > Ala 或 Phe ；Xaa16 是 Cys 或 D-Cys ；以及Xaa17是Tyr、D-Tyr或不存在； 其中 如果存在Xaa1, Xaa1可以用甲基、乙二酸、丙二酸、丁二酸、戊二酸、己二酸、庚二酸或辛二酸在其氨基上修饰； 如果不存在Xaa1且存在Xaa2,那么Xaa2可以用甲基、乙二酸、丙二酸、丁二酸、戊二酸、己二酸、庚二酸或辛二酸在其氨基上修饰；或 如果Xaa1和Xaa2都不存在，那么Xaa3可以用甲基、乙二酸、丙二酸、丁二酸、戊二酸、己二酸、庚二酸或辛二酸在其氨基上修饰。
2.根据权利要求I所述的肽或其药学上可接受的盐，其中Xaa2和Xaa3都不存在。
3.根据权利要求I所述的肽或其药学上可接受的盐，其中Xaa2是Asp或Glu且Xaa3不存在。
4.根据权利要求I所述的肽或其药学上可接受的盐，其中Xaa2是Asp或Glu且Xaa3是 Asp 或 Glu。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的肽或其药学上可接受的盐，其中Xaa7是Tyr或Leu0
6.根据权利要求1-5中任一项所述的肽或其药学上可接受的盐，其中Xaa14是Thr。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的肽或其药学上可接受的盐，其中Xaa17是Tyr或不存在。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的肽或其药学上可接受的盐，其中Xaa1是Asn、D-Asn、Gin、D-Gln、Pro、Ala、3 -Ala、D_Ala、Val、D-VaK Gly、Thr、D_Thr、Asp、D_Asp、Glu或D-Glu0
9.根据权利要求8所述的肽或其药学上可接受的盐，其中Xaa1是Asp、D-Asp,Glu或D-Glu。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的肽或其药学上可接受的盐，其中Xaa6是P-Ser或P-Thr。
11.根据权利要求10所述的肽或其药学上可接受的盐，其中Xaa6是P-Ser。
12.根据权利要求I所述的肽或其药学上可接受的盐，其中Xaa1'Xaa2和Xaa3都不存在。
13.根据权利要求12所述的肽或其药学上可接受的盐，其中Xaa7是Tyr或Leu。
14.根据权利要求12或13所述的肽或其药学上可接受的盐，其中Xaa14是Thr。
15.根据权利要求12-14中任一项所述的肽或其药学上可接受的盐，其中Xaa17是Tyr或不存在。
16.根据权利要求12-15中任一项所述的肽或其药学上可接受的盐，其中Xaa6是P-Ser。
17.根据权利要求16所述的肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含以下氨基酸序列Cys4 Cys5 P-Ser6 Xaa7 Cys8 Cys9 Asn10 Pro11 Ala12 Cys13 Thr14 Gly15 Cys16 Xaa17,其中 Xaa7 是 Tyr 或 Leu。
18.根据权利要求I所述的肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含以下氨基酸序列Asp Asp Cys Cys P-Ser Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr ；Asp Asp Cys Cys P-Ser Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys ；Asp Asp Cys Cys P-Ser Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr ；Asp Asp Cys Cys P-Ser Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys ；Cys Cys P-Ser Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr ；Cys Cys P-Ser Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys ；Cys Cys P-Ser Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr ;或Cys Cys P-Ser Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys0
19.根据权利要求1-18中任一项所述的肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含不多于50、40、30或20个氨基酸。
20.根据权利要求19所述的肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含不多于19、18、17、16、15或14个氨基酸。
21.—种肽或其药学上可接受的盐，所述肽由氨基酸序列Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Cys5 Xaa6Xaa7 Cys8 Cys9 Asn10 Pro11 Ala12 Cys13 Xaa14 Gly15 Cys16 Xaa17 组成；其中Xaa1 是 Asn、D_Asn、Gin、D_Gln、Pro、Ala、^ -Ala、D_Ala、Val、D-Val、Gly、Thr、D-Thr、Asp、D~Asp、Y -駿化的 Asp、Glu、D-Glu、Y -駿化的 Glu、a -氛基羊二酸(Asu)、ct -氛基己二酸(Aad)、a -氨基庚二酸(Apm)，或不存在； Xaa2 是 Asp、Y -羧化的 Asp、Glu、Y -羧化的 Glu、Asu、Aad、Apm,或不存在； Xaa3 是 Asp、Y -羧化的 Asp、Glu、Y -羧化的 Glu、Asu、Aad、Apm,或不存在；Xaa4 是 Cys 或 D-Cys ； Xaa6 是 P-Ser、P_Thr、P-高 _Ser、4_ 轻基缴氨酸磷酸酯、P-高-Thr、P-Cys 或 P-Tyr ； Xaa7 是 Tyr、Leu、Phe 或 Ile ；Xaa8 是 Cys 或 D-Cys ；Xaa14 是 Thr、Ala 或 Phe ；Xaa16 是 Cys 或 D-Cys ；以及 Xaa17是Tyr、D-Tyr或不存在； 其中 如果存在Xaa1, Xaa1可以用甲基、乙二酸、丙二酸、丁二酸、戊二酸、己二酸、庚二酸或辛二酸在其氨基上修饰； 如果不存在Xaa1且存在Xaa2,那么Xaa2可以用甲基、乙二酸、丙二酸、丁二酸、戊二酸、己二酸、庚二酸或辛二酸在其氨基上修饰；或 如果Xaa1和Xaa2都不存在，那么Xaa3可以用甲基、乙二酸、丙二酸、丁二酸、戊二酸、己二酸、庚二酸或辛二酸在其氨基上修饰。
22.根据权利要求21所述的肽或其药学上可接受的盐，其中Xaa2和Xaa3都不存在。
23.根据权利要求21所述的肽或其药学上可接受的盐，其中Xaa2是Asp或Glu且Xaa3不存在。
24.根据权利要求21所述的肽或其药学上可接受的盐，其中Xaa2是Asp或Glu且Xaa3是 Asp 或 Glu。
25.根据权利要求21-24中任一项所述的肽或其药学上可接受的盐，其中Xaa7是Tyr或 Leu0
26.根据权利要求21-25中任一项所述的肽或其药学上可接受的盐，其中乂&&14是1111'。
27.根据权利要求21-26中任一项所述的肽或其药学上可接受的盐，其中Xaa17是Tyr或不存在。
28.根据权利要求21-27中任一项所述的肽或其药学上可接受的盐，其中Xaa1是Asn、D-Asn、Gin、D-Gln、Pro、Ala、3 -Ala、D_Ala、Val、D-VaK Gly、Thr、D_Thr、Asp、D_Asp、Glu或D-Glu0
29.根据权利要求28所述的肽或其药学上可接受的盐，其中Xaa1是Asp、D-Asp,Glu或D-Glu。
30.根据权利要求21-29中任一项所述的肽或其药学上可接受的盐，其中Xaa6是P-Ser 或 P-Thr。
31.根据权利要求30所述的肽或其药学上可接受的盐，其中Xaa6是P_Ser。
32.根据权利要求21所述的肽或其药学上可接受的盐，其中XaapXaa2和Xaa3都不存在。
33.根据权利要求32所述的肽或其药学上可接受的盐，其中Xaa7是Tyr或Leu。
34.根据权利要求32或33所述的肽或其药学上可接受的盐，其中Xaa14是Thr。
35.根据权利要求32-34中任一项所述的肽或其药学上可接受的盐，其中Xaa17是Tyr或不存在。
36.根据权利要求32-35中任一项所述的肽或其药学上可接受的盐，其中Xaa6是P-Ser。
37.根据权利要求36所述的肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽由以下氨基酸序列组成Cys4 Cys5 P-Ser6 Xaa7 Cys8 Cys9 Asn10 Pro11 Ala12 Cys13 Thr14 Gly15 Cys16 Xaa17,其中 Xaa7 是 Tyr 或 Leu。
38.根据权利要求32所述的肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽由以下氨基酸序列组成Asp Asp Cys Cys P-Ser Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr ；Asp Asp Cys Cys P-Ser Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys ；Asp Asp Cys Cys P-Ser Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr ；Asp Asp Cys Cys P-Ser Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys ；Cys Cys P-Ser Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr ；Cys Cys P-Ser Leu Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys ；Cys Cys P-Ser Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr ;或Cys Cys P-Ser Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys0
39.根据权利要求1-38中任一项所述的肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽或其药学上可接受的盐是经过分离的。
40.根据权利要求39所述的肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽或其药学上可接受的盐是经过纯化的。
41.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-40中任一项所述的肽或其药学上可接受的盐。
42.一种药物组合物，其包含药学上可接受的载体、根据权利要求1-40中任一项所述的肽和选自以下的一种或多种试剂(i)选自Mg2+、Ca2+、Zn2+、Mn2+、K+、Na+或Al3+的阳离子，或(ii)空间位阻伯胺。
43.根据权利要求42所述的药物组合物，其中所述试剂是Mg2+、Ca2+、Zn2+、Mn2+、K+、Na+或 Al3+。
44.根据权利要求42或43所述的药物组合物，其中将所述Mg2+、Ca2+、Zn2+、Mn2+、K+、Na+或Al3+作为乙酸镁、氯化镁、磷酸镁、硫酸镁、乙酸钙、氯化钙、磷酸钙、硫酸钙、乙酸锌、氯化锌、磷酸锌、硫酸锌、乙酸锰、氯化锰、磷酸锰、硫酸锰、乙酸钾、氯化钾、磷酸钾、硫酸钾、乙酸钠、氯化钠、磷酸钠、硫酸钠、乙酸铝、氯化铝、磷酸铝或硫酸铝提供。
45.根据权利要求42所述的药物组合物，其中所述试剂是空间位阻伯胺。
46.根据权利要求45所述的药物组合物，其中所述空间位阻伯胺是氨基酸。
47.根据权利要求46所述的药物组合物，其中所述氨基酸是天然存在的氨基酸、非天然存在的氨基酸或氨基酸衍生物。
48.根据权利要求47所述的药物组合物，其中所述天然存在的氨基酸是组氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、谷氨酰胺、亮氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、酪氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、色氨酸或缬氨酸，或所述非天然存在的氨基酸是I-氨基环己烷羧酸、Ianthanine或茶氨酸。
49.根据权利要求42所述的药物组合物，其中所述空间位阻伯胺具有式
50.根据权利要求49所述的药物组合物，其中所述空间位阻伯胺是环己胺或2-甲基丁胺。
51.根据权利要求42所述的药物组合物，其中所述空间位阻伯胺是聚合胺。
52.根据权利要求51所述的药物组合物，其中所述聚合胺是壳聚糖。
53.根据权利要求45-52中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物还包含Mg2+、Ca2+、Zn2+、Mn2+、K+、Na+ 或 Al3+。
54.根据权利要求50所述的药物组合物，其中将所述Mg2+、Ca2+、Zn2+、Mn2+、K+、Na+或Al3+作为乙酸镁、氯化镁、磷酸镁、硫酸镁、乙酸钙、氯化钙、磷酸钙、硫酸钙、乙酸锌、氯化锌、磷酸锌、硫酸锌、乙酸锰、氯化锰、磷酸锰、硫酸锰、乙酸钾、氯化钾、磷酸钾、硫酸钾、乙酸钠、氯化钠、磷酸钠、硫酸钠、乙酸铝、氯化铝、磷酸铝或硫酸铝提供。
55.根据权利要求42-54中任一项所述的药物组合物,还包含抗氧化剂。
56.根据权利要求55所述的药物组合物，其中所述抗氧化剂是BHA、维生素E或没食子酸丙酯。
57.根据权利要求42-56中任一项所述的药物组合物，还包含药学上可接受的粘合剂或添加剂。
58.根据权利要求57所述的药物组合物，其中所述药学上可接受的粘合剂或添加剂选自聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮(聚维酮)、淀粉、麦芽糊精或纤维素醚。
59.根据权利要求58所述的药物组合物，其中所述药学上可接受的粘合剂或添加剂是聚乙烯醇。
60.根据权利要求59所述的药物组合物，其中所述药学上可接受的粘合剂或添加剂是纤维素醚。
61.根据权利要求60所述的药物组合物，其中所述纤维素醚选自甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟乙基甲基纤维素、羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素。
62.根据权利要求42-61中任一项所述的药物组合物，还包含药学上可接受的填充剂。
63.根据权利要求62所述的药物组合物，其中所述药学上可接受的填充剂是纤维素、异麦芽酮糖醇、甘露醇、乳糖或磷酸氢钙。
64.根据权利要求63所述的药物组合物，其中所述纤维素选自微细纤维素和微晶纤维素。
65.根据权利要求41-64中任一项所述的药物组合物，还包含附加的治疗剂。
66.根据权利要求65所述的药物组合物，其中所述附加的治疗剂选自以下中的一种或多种止痛剂、抗抑郁剂、促动力剂或蠕动促进剂、止吐药、抗生素、质子泵抑制剂、酸阻断齐[J、PDE5抑制剂、酸泵拮抗剂、GABA-B激动剂、胆汁酸螯合剂或粘膜保护剂。
67.一种剂量单位，其包含根据权利要求41-67中任一项所述的药物组合物。
68.根据权利要求67所述的剂量单位，其中所述剂量单位是胶囊或片剂。
69.根据权利要求69所述的剂量单位，其中每个所述剂量单位包含5呢至Img的所述肽。
70.一种用于治疗胃肠道病症的方法，其包括施用根据权利要求41-69中任一项所述的药物组合物。
71.根据权利要求70所述的方法，其中所述胃肠道病症是胃轻瘫、术后胃肠梗阻、功能性食管病症、功能性胃十二指肠病症、胃食管反流疾病(GERD)、乳糜泻、粘膜炎或十二指肠溃瘍或胃溃瘍。·
72.根据权利要求71所述的方法，其中所述胃肠道病症是胃轻瘫。
73.根据权利要求72所述的方法，其中所述胃轻瘫是特发性胃轻瘫、糖尿病胃轻瘫或术后胃轻瘫。
74.根据权利要求71所述的方法，其中所述胃肠道病症是术后胃肠梗阻。
75.根据权利要求71所述的方法，其中所述胃肠道病症是功能性食管病症。
76.根据权利要求75所述的方法，其中所述功能性食管病症是功能性胃灼热、假定的食管源性功能性胸痛、功能性吞咽困难或球状感。
77.根据权利要求71所述的方法，其中所述胃肠道病症是功能性胃十二指肠病症。
78.根据权利要求77所述的方法，其中所述功能性胃十二指肠病症是功能性消化不良、嗳气病症、恶心或呕吐病症，或反刍综合征。
79.根据权利要求78所述的方法，其中所述功能性消化不良是餐后不适综合征或上腹痛综合征。
80.根据权利要求78所述的方法，其中所述嗳气病症是吞气症或非特异性过度嗳气。
81.根据权利要求78所述的方法，其中所述恶心或呕吐病症是慢性特发性恶心、功能性呕吐或周期性呕吐综合征。
82.根据权利要求71所述的方法，其中所述胃肠道病症是胃食管反流疾病(GERD)。
83.根据权利要求71所述的方法，其中所述胃肠道病症是十二指肠溃疡或胃溃疡。
全文摘要
本发明提供对治疗胃肠道病症有用的肽。本发明还提供治疗胃肠道病症的组合物和方法与实现治疗胃肠道病症的药物组合物。在一些实施方案中，这些药物组合物包括口服剂量形式。
文档编号C07K7/08GK102812038SQ201080060997
公开日2012年12月5日 申请日期2010年11月9日 优先权日2009年11月9日
发明者M.G.卡里, A.弗雷岑, M.克斯勒, D.P.齐默 申请人:硬木药品公司