专利名称：从天葵子中提取格列风内酯和东方唐松草苷的方法
技术领域：
本发明属于天然植物提取领域，具体涉及ー种从天葵子中提取格列风内酯和东方唐松革苷的方法。
背景技术：
天葵子系毛莨科植物天葵Semiaquilegia adoxoides (DC. ) Makino的干燥块根,始载于清代赵学敏《本草纲目拾遺》，俗称千年老鼠屎，亦称紫背天葵根。天葵子资源丰富，分布很广，可见于河南、江苏、安徽、浙江、江西、福建、湖北等省区，主产于湖南邵阳、长沙、湖北恩施、宣恩，江苏震泽等地。收载于《中国药典》2010年版一部，具有清热解毒，消肿散结之功效，用于治疗痈肿疔疮，乳痈，瘰疬，蛇虫咬伤。现代药理实验表明，天葵子对金黄色葡萄球菌等有抑制作用；临床上用天葵子或其复方治疗急性软组织损伤及骨关节结核、急性乳腺炎、子宮肌瘤、原发性肝癌、胃癌等。天葵子主要含生物碱、内酷、香豆素、酚酸及酚苷类化合物。其中格列风内酯和东方唐松草苷在一般植物中比较少见，但在天葵子中的量较高。格列风内酯(Griffonilide)，分子式C8H8O4,分子量168. 04，为无色针晶(甲醇)，易溶于甲醇，微溶于水、丙酮，难溶于氯仿，药理研究表明，格列风内酯具有显著的抗炎活性，其对炎症的抑制率高达64%。东方唐松草苷(thalictricoside)，为硝基酚苷类成分，分子式=C19H27NO12,分子量461. 42，为无色针晶(甲醇)。
u。、^人格列风内酯东方唐松草苷牛锋采用5倍95 %こ醇加热回流提取3次，毎次3h，提取液浓缩得浸膏，悬浮于水中，分别用醋酸こ酯和正丁醇萃取，醋酸こ酯萃取部分蒸干溶剂，上硅胶柱氯仿-甲醇洗脱，氯仿-甲醇(100 8)部分浓缩析晶，甲醇重结晶得到格列风内酷；正丁醇萃取部位水浴蒸干正丁醇，适量水溶解，上AB-8大孔吸附树脂柱分离，收集30 %こ醇洗脱部位，浓缩，反复上S^hadex LH-20甲醇-水(I I)柱洗脱，除去色素，浓缩流分，在甲醇中析出无色結晶，甲醇重结晶得到东方唐松草苷。中国专利200910312563. 3公开的“一种天葵提取物及其制备方法和应用”，采用鲜品或干品，用提取溶媒进行提取，所得提取液除去溶剂后得到天葵提取物，再对提取物进行溶剂萃取或柱层析纯化，所制备的天葵提取物用于制备预防和治疗白内障药物。前者采用大量有机溶剂和多次柱层析，エ艺复杂，有效成分损失较大、得率低，且生产周期长；后者得到的是粗提取物，不能得到有效单体成分。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种从天葵子中提取格列风内酯和东方唐松草苷的方法。从天葵子中提取格列风内酯和东方唐松草苷的方法，其特征是方法步骤为用70-100 %的甲醇溶液提取，过滤，得提取液，加入硅藻上搅拌脱色，脱色液加入截留分子量6000-10000的中空复合膜超滤，透过液减压浓缩，浓缩液用水分散，加入大孔吸附树脂柱层析吸附1-3次，吸附结束后，用含水こ醇梯度洗脱，分别收集富集格列风内酯和东方唐松草苷的流分，再分别减压浓缩得到粗浸膏；将格列风内酯粗浸膏与聚酰胺拌样进行柱层析，先用氯仿洗脱，再用氯仿-甲醇(10 I)洗脱，收集洗脱液，浓缩析晶，粗晶用甲醇-丙酮重结晶得到格列风内酯纯品；将东方唐松草苷粗浸膏与聚酰胺拌样烘干上柱，用醇-水洗脱，将东方唐松草苷流分减压浓缩，静置结晶，粗晶再用氯仿-甲醇重结晶得到东方唐松草苷纯品。所述提取方法为索氏提取、加热回流、超声或者微波辅助提取。所述娃藻土加入量为提取液总量的3-5%。 所述大孔吸附树脂类型可选DA201、HPD450、XSD-1、HPD100中的任意ー种。所述大孔树脂洗脱为先用去离子水常规洗脱杂质，再依次用20%こ醇、50%こ醇、95%こ醇洗脱，分别收集富含格列风内酯的流分和富含东方唐松草苷的流分。本发明的优点是天葵子在我国分布广泛，因此价廉易得；本发明方法操作简单易行，采用甲醇为提取溶媒，提取率高；通过生物膜过滤浓縮，除去糖类成分；利用聚酰胺能与硝基化合物和内酯类成分形成氢键，具有较好的分离效果。
具体实施例方式实施例I :取天葵子500g粉碎成粗粉或切薄片，加8倍量75%甲醇索氏提取2次，毎次I小时,过滤,合并滤液,加入150g硅藻土搅拌，过滤，脱色液加入截留分子量6000-10000的中空复合膜超滤，透过液减压浓缩，浓缩液加适量去离子水分散，加入DA201大孔吸附树脂柱中吸附2次，流速为0. 5BV/h，先以去离子水洗脱杂质，再依次用20 %こ醇、50 %こ醇、95 %こ醇洗脱，分别收集富含格列风内酯的流分和富含东方唐松草苷的流分；将格列风内酯流分减压浓缩得到粗浸膏，再将粗浸膏与适量聚酰胺拌样上柱层析，先用氯仿洗脱，再用氯仿-甲醇(10 I)洗脱，收集氯仿-甲醇(10 I)洗脱液，浓缩析晶，滤除粗晶，将粗晶用甲醇-丙酮重结晶，低温干燥即得144mg格列风内酯纯品，经HPLC法測定其含量为97. 2%;将东方唐松草苷流分减压浓缩后于聚酰胺拌样烘干上柱，用40%こ醇洗脱，收集洗脱液，减压回收こ醇，浓缩静置析晶，粗晶用氯仿-甲醇重结晶即得189mg东方唐松草苷纯品，经HPLC法测定其含量为96. 6%。实施例2:取天葵子IOOOg粉碎成粗粉或切薄片，加10倍量100%甲醇加热回流提取2次，每次I. 5小时，过滤，合并滤液，加入750g硅藻土搅拌，过滤，脱色液加入截留分子量6000-10000的中空复合膜超滤，透过液减压浓縮，浓缩液加适量去离子水分散，加入HPD450大孔吸附树脂柱中吸附，流速为lBV/h，先以去离子水洗脱杂质，再依次用20%こ醇、50%こ醇、95%こ醇洗脱，分别收集富含格列风内酯的流分和富含东方唐松草苷的流分；将格列风内酯流分减压浓缩得到粗浸膏，再将粗浸膏与适量聚酰胺拌样上柱层析，先用氯仿洗脱，再用氯仿-甲醇(10 I)洗脱，收集氯仿-甲醇(10 I)洗脱液，浓缩析晶，滤除粗晶，将粗晶用甲醇-丙酮重结晶，低温干燥即得306mg格列风内酯纯品，经HPLC法測定其含量为96. 2% ;将东方唐松草苷流分减压浓缩后于聚酰胺拌样烘干上柱，用40%こ醇洗脱，收集洗脱液，减压回收こ醇，浓缩静置析晶，粗晶用氯仿-甲醇重结晶即得483mg东方唐松草苷纯品，经HPLC法测定其含量为95. 9%。实施例3:取天葵子2kg粉碎成粗粉或切薄片，加15倍量80%甲醇超声提取I次，提取2小时,过滤,加入680g硅藻土搅拌，过滤，脱色液加入截留分子量6000-10000的中空复合膜超滤，透过液减压浓缩，浓缩液加适量去离子水分散，加入XSD-I大孔吸附树脂柱中吸附2 次，流速为0. 6BV/h，先以去离子水洗脱杂质，再依次用20 %こ醇、50 %こ醇、95 %こ醇洗脱，分别收集富含格列风内酯的流分和富含东方唐松草苷的流分；将格列风内酯流分减压浓缩得到粗浸膏，再将粗浸膏与适量聚酰胺拌样上柱层析，先用氯仿洗脱，再用氯仿-甲醇(10 I)洗脱，收集氯仿-甲醇(10 I)洗脱液，浓缩析晶，滤除粗晶，将粗晶用甲醇-丙酮重结晶，低温干燥即得584mg格列风内酯纯品，经HPLC法測定其含量为95.7% ;将东方唐松草苷流分减压浓缩后于聚酰胺拌样烘干上柱，用40%こ醇洗脱，收集洗脱液，减压回收こ醇，浓缩静置析晶，粗晶用氯仿-甲醇重结晶即得743mg东方唐松草苷纯品，经HPLC法测定其含量为96.3%。实施例4:取天葵子5kg粉碎成粗粉或切薄片，加6倍量70 %甲醇微波辅助提取3次，每次0. 5小时，过滤，合并滤液，加入2. 3kg硅藻土搅拌，过滤，脱色液加入截留分子量6000-10000的中空复合膜超滤，透过液减压浓缩，浓缩液加适量去离子水分散，加入HPD100大孔吸附树脂柱中吸附次3，流速为0. 8BV/h，先以去离子水洗脱杂质，再依次用20%こ醇、50%こ醇、95%こ醇洗脱，分别收集富含格列风内酯的流分和富含东方唐松草苷的流分；将格列风内酯流分减压浓缩得到粗浸膏，再将粗浸膏与适量聚酰胺拌样上柱层析，先用氯仿洗脱，再用氯仿-甲醇(10 I)洗脱，收集氯仿-甲醇(10 I)洗脱液，浓缩析晶，滤除粗晶，将粗晶用甲醇-丙酮重结晶，低温干燥即得I. 29g格列风内酯纯品，经HPLC法測定其含量为96. 8% ;将东方唐松草苷流分减压浓缩后于聚酰胺拌样烘干上柱，用40%こ醇洗脱，收集洗脱液，减压回收こ醇，浓缩静置析晶，粗晶用氯仿-甲醇重结晶即得1.86g东方唐松草苷纯品，经HPLC法測定其含量为95. 4%。
权利要求
1.从天葵子中提取格列风内酯和东方唐松草苷的方法，其特征是方法步骤为用70-100 %的甲醇溶液提取，过滤，得提取液，加入硅藻土搅拌脱色，脱色液加入截留分子量6000-10000的中空复合膜超滤，透过液减压浓缩，浓缩液用水分散，加入大孔吸附树脂柱层析吸附1-3次，吸附结束后，用含水こ醇梯度洗脱，分别收集富集格列风内酯和东方唐松革苷的流分，再分别减压浓缩得到粗浸膏；将格列风内酯粗浸膏与聚酰胺拌样进行柱层析，先用氯仿洗脱，再用氯仿-甲醇(10 I)洗脱，收集洗脱液，浓缩析晶，粗晶用甲醇-丙酮重结晶得到格列风内酯纯品；将东方唐松草苷粗浸膏与聚酰胺拌样烘干上柱，用醇-水洗脱，将东方唐松草苷流分减压浓缩，静置结晶，粗晶再用氯仿-甲醇重结晶得到东方唐松草苷纯品。
2.根据权利要求I所述的提取格列风内酯和东方唐松草苷的方法，其特征是所述提取方法为索氏提取、加热回流、超声或者微波辅助提取。
3.根据权利要求I所述的提取格列风内酯和东方唐松草苷的方法，其特征是所述硅藻土加入量为提取液总量的3-5%。
4.根据权利要求I所述的提取格列风内酯和东方唐松草苷的方法，其特征是所述大孔吸附树脂类型可选DA201、HPD450、XSD-I、HPD100中的任意ー种。
5.根据权利要求I所述的提取格列风内酯和东方唐松草苷的方法，其特征是所述大孔树脂洗脱为先用去离子水常规洗脱杂质，再依次用20%こ醇、50%こ醇、95%こ醇洗脱，分别收集富含格列风内酯的流分和富含东方唐松草苷的流分。
全文摘要
本发明涉及从天葵子中提取格列风内酯和东方唐松草苷的方法，该方法主要采用溶剂提取、硅藻土脱色、膜分离、柱层析以及重结晶等步骤，同时获得格列风内酯和东方唐松草苷，本发明的技术效果是1、利用格列风内酯和东方唐松草苷均易溶于甲醇的性质，采用甲醇提取，得到总提取液；2、将提取液通过生物膜分离浓缩，滤除多糖成分，减轻后续操作的压力；3、利用格列风内酯和东方唐松草苷的极性差异，通过大孔树脂吸附洗脱，将格列风内酯和东方唐松草苷有效分离。该方法操作简单、成本低，获得的单体纯度高，为这两种有效成分的药理研究、天葵子及含有天葵子的制剂的质量控制奠定了物质基础。
文档编号C07D307/77GK102649782SQ20111004536
公开日2012年8月29日 申请日期2011年2月25日 优先权日2011年2月25日
发明者刘东锋, 李法庆 申请人:苏州宝泽堂医药科技有限公司