专利名称：一种银杏黄素或异银杏黄素的提取方法
技术领域：
本发明涉及一种银杏黄素或异银杏黄素的提取方法。
背景技术：
^lJlilttf Capparis spinosa L. %Capparidaceae lilttfM Capparis , 又名续随子、水瓜钮、野西瓜、马槟榔，多年生藤本状半蔓生灌木。喜生于干旱有沙石的低山坡、沙地上。原产于地中海沿岸。现常见于法国南部、意大利和阿尔及利亚等地区，我国新疆、西藏等地区亦有出产。刺山柑味辛苦，性温，其根皮、叶和果实在维吾尔族民间有着广泛的应用，用于治疗风湿病，有祛风、散寒、除湿的作用。刺山柑的主要成分为芸香甙、癸酸、阿魏酸、芥子酸、含18个碳的不饱和脂肪酸。迄今为止，尚未有文献公开过关于从刺山柑中提取银杏黄素或异银杏黄素的报导。现有技术中，银杏黄素和异银杏黄素通常从银杏外种皮、银杏叶或满山香种子中分离提取。潘竟先，张虎翼，杨宪斌等植物资源与环境1995,4 ) :17-21报导了从银杏外种皮中提取银杏黄素和异银杏黄素的方法。该方法将银杏外种皮930g粉碎后，用石油醚浸泡以除去极性小的成分，再用乙酸乙酯浸泡2次，每次3天，过滤，浓缩得乙酸乙酯提取物40g。 经硅胶减压柱层析用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和甲醇洗脱，得4部分。其中乙酸乙酯部分6. Sg经聚酰胺柱层析，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，得到01 12样品。07有231. 5mg，其中50mg经制备薄层层析(PTLC)，展开剂二氯甲烷甲醇(96 4)，展开4次得银杏黄素 3. :3mg，异银杏黄素27. 3mgo唐于平，楼凤昌，王景华，李延芳中国药学杂志2001,36(4) :231-233报导了从银杏叶中提取银杏黄素和异银杏黄素的方法。该方法将干燥银杏叶10. Okg粉碎，以95%乙醇回流提取3次。提取液合并，减压浓缩，与硅燥土拌样后，置索式提取器中，依次用石油醚、乙酸乙酯、甲醇回流提取。乙酸乙酯提取物经硅胶柱(硅胶粒度200 300目)反复层析，氯仿-甲醇(100 1 100 100)梯度洗脱，得到化合物I VII的粗品，再用 SephadexLH-20柱层析(用纯甲醇洗脱)进行纯化，分别得到化合物I (50mg)，II (16mg)， III (IOmg)，IV(IOmg)，V (800mg)，银杏黄素 VI (IOOmg)，异银杏黄素 VII (40mg)的纯品。李俊，李甫，陆园园等广西植物2006，26( :690-691报导了从满山香种子中提取银杏黄素的方法。该方法将满山香种子2kg粉碎，用75%乙醇IOL回流提取3次，每次2h， 合并提取液，减压浓缩得粗提物268g。将该提取物用水混悬后依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇各萃取3次，回收溶剂后得乙酸乙酯萃取物48g。将乙酸乙酯萃取物经硅胶柱层析，以氯仿-甲醇(体积比100 0 50 50)进行梯度洗脱。将95 5洗脱部分合并， 经反复硅胶柱层析、SephadexLH-20柱层析和硅胶制备薄层层析分离得银杏黄素32mg。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供了一种与现有技术完全不同的银杏黄素或异银杏黄素的提取方法。本发明的提取方法的原料与现有技术完全不同。本发明涉及一种银杏黄素的提取方法，其包含下列步骤(1)将刺山柑果实的水提醇沉液过滤，浓缩，得浸膏；(2)将步骤(1)得到的浸膏溶于水，依次用石油醚和氯仿萃取，得到氯仿部位；(3)将步骤( 所得的氯仿部位用聚酰胺柱进行梯度洗脱，洗脱剂依次为水和体积百分比为30% 95%的乙醇水溶液，收集以硅胶薄层层析法检测，展开剂氯仿和甲醇的体积比为8 1时，Rf值为0.5 0.8的馏分；(4)将步骤( 所得物质用凝胶柱进行洗脱，收集以硅胶薄层层析法检测，展开剂氯仿和甲醇的体积比为8 1时，Rf值为0.6 0.8的馏分；(5)将步骤(4)所得物质进行硅胶柱层析分离，或者硅胶制备薄层层析分离，收集以硅胶薄层层析法检测，展开剂为体积比为15 1的氯仿和甲醇时，Rf值为0.45的馏分；(6)将步骤( 所得物质进行制备液相分离，收集以下检测条件下检测到的组分 柱温为 25 30°C, Waters510 泵，Waters484 检测器，Global_C18 柱子，检测波长 270nm, 流动相为甲醇与水的混合液，二者体积比为90 10，流速为3.40ml/min，保留时间为 24. 7min，即得银杏黄素。步骤(1)中，所述的刺山柑果实优选干燥的果实；所述的刺山柑干燥果实较佳的为粉碎后使用，粉碎后的粒径较佳的为3 7目；所述的浸膏的浓缩程度较佳的以检测无醇味即可，其密度较佳的为1. 0 2. Og/ml。所述的水提醇沉液可由下列方法制得将刺山柑果实用水提取，过滤，将滤液浓缩，加入乙醇水溶液，静置，即可。其中，所述水的体积较佳的为刺山柑干燥果实体积的8 10倍，优选8倍。用水提取的次数较佳的为2 3次，优选2次；用水提取的时间较佳的为每次1 2小时，优选2小时。所述的浓缩后滤液的密度较佳的为1. O 2. Og/ml，优选 1. 2g/ml。所述的加入乙醇水溶液后溶液中的乙醇的浓度较佳的为体积百分比65 85%， 优选70%。步骤⑵中，所述的水的用量较佳的为步骤⑴得到的浸膏体积的10 15倍；所述的石油醚的用量较佳的为步骤(1)得到的浸膏体积的10 15倍；所述的氯仿的用量较佳的为步骤(1)得到的浸膏体积的15 20倍。用石油醚萃取的次数较佳的为2 3次， 最佳3次，用氯仿萃取的次数较佳的为3 4次，最佳4次。步骤(3)中，所述的聚酰胺柱的规格较佳的为14-30目、30-60目、60-100目、 100-120目或200-400目，更佳的为100-200目；聚酰胺柱中的聚酰胺填料与上柱物质的重量比较佳的为50 1 80 1 ；所述的梯度洗脱的洗脱剂较佳的为水一30%乙醇水溶液 —50%乙醇水溶液一70%乙醇水溶液一90%乙醇水溶液(以上均为体积百分比)；其中， 水的用量较佳的为聚酰胺柱体积的3 5倍，30%乙醇水溶液的用量较佳的为聚酰胺柱体积的4 6倍；50%乙醇水溶液的用量较佳的为聚酰胺柱体积的4 6倍；70%乙醇水溶液的用量较佳的为聚酰胺柱体积的4 6倍；90%乙醇水溶液的用量较佳的为聚酰胺柱体积的4 6倍。步骤中，所述的凝胶柱较佳的为kphadex LH20 0所述的用凝胶柱进行洗脱的洗脱剂较佳的为甲醇。所述的洗脱剂的用量较佳的为凝胶柱体积的1 2倍。步骤(5)中，所述的硅胶柱层析分离中，洗脱剂较佳的为氯仿和甲醇的混合溶剂。所述的硅胶制备薄层层析分离中，展开剂较佳的为氯仿和甲醇的混合溶剂，两者的体积比较佳的为15 1。步骤(5)较佳的包含下列步骤(1’)将步骤⑷所得物质进行硅胶柱层析分离， 收集以硅胶薄层层析法检测，展开剂氯仿和甲醇的体积比为15 1时，Rf值为0.3 0.5 的馏分；(2’ )将步骤(1’ )所得物质进行硅胶柱层析分离，或者硅胶制备薄层层析分离，收集以硅胶薄层层析法检测，展开剂为体积比为15 1的氯仿和甲醇时，Rf值为0.45的馏分。步骤(1’ )中，所述的硅胶柱层析分离中，硅胶的粒度较佳的为100 200目；硅胶与上柱物质的重量比较佳的为50 1 80 1。所述的硅胶柱层析分离中的洗脱剂较佳的为石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂或正己烷与乙酸乙酯的混合溶剂，更佳的为石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂，所述的石油醚和乙酸乙酯的体积比较佳的为6 1 1 1 ；所述的硅胶柱层析分离中的洗脱方法较佳的为梯度洗脱，当洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂时，梯度较佳的为石油醚乙酸乙酯 =6:1 — 4:1 — 2:1 — 1: 1，每个梯度的洗脱剂用量较佳的为硅胶柱体积的4 6 倍。步骤(2’ )中，所述的硅胶柱层析分离中，洗脱剂较佳的为氯仿和甲醇的混合溶剂。所述的硅胶制备薄层层析分离中，展开剂较佳的为氯仿和甲醇的混合溶剂，两者的体积比较佳的为15 1。步骤(6)中，所述的制备液相分离的条件可为本领域制备液相的常规条件，只要通过制备液相分离的方法得到上述检测条件下的保留时间的物质即可。优选的制备液相分离的条件如下柱温较佳的为20 30°C ；色谱柱较佳的为反向C18柱，更佳的为 Global-C18柱子；泵较佳的为waterS510泵；检测器较佳的为waters484检测器；检测波长较佳的为270nm;流动相较佳的为甲醇和水的混合液，其体积比较佳的为90 10 ；流速较佳的为3 5ml/min。本发明还涉及一种异银杏黄素的提取方法，其包含下列步骤(1)将刺山柑果实的水提醇沉液过滤，浓缩，得浸膏；(2)将步骤(1)得到的浸膏溶于水，依次用石油醚和氯仿萃取，得到氯仿部位；(3)将步骤( 所得的氯仿部位用聚酰胺柱进行梯度洗脱，洗脱剂依次为水和体积百分比为30% 95%的乙醇水溶液，收集以硅胶薄层层析法检测，展开剂氯仿和甲醇的体积比为8 1时，Rf值为0.5 0.8的馏分；(4)将步骤( 所得物质用凝胶柱进行洗脱，收集以硅胶薄层层析法检测，展开剂氯仿和甲醇的体积比为8 1时，Rf值为0.6 0.8的馏分；(5)将步骤(4)所得物质进行硅胶柱层析分离，或者硅胶制备薄层层析分离，收集以硅胶薄层层析法检测，展开剂为体积比为15 1的氯仿和甲醇时，Rf值为0.45的组份；(6)将步骤( 所得物质进行制备液相分离，收集以下检测条件下检测到的组分 柱温为 25 30°C, waters510 泵，waters484 检测器，Global_C18 柱子，检测波长 270nm, 流动相为甲醇与水的混合液，二者体积比为90 10，流速为3.40ml/min，保留时间为 21.8min，即得异银杏黄素。其中，步骤(1) (6)的优选的方法和条件均与前述的银杏黄素的提取方法相同。
本发明中，上述制备方法中的各优选条件在不违背本领域常识的基础上可进行任意组合，即得本发明的各优选实例。除特殊说明外，本发明涉及的原料和试剂均市售可得。本发明的积极进步效果在于本发明第一次从刺山柑中提取了银杏黄素或异银杏黄素，为银杏黄素和异银杏黄素的获取提供了一条新的途径。
具体实施例方式下面用实施例来进一步说明本发明，但本发明并不受其限制。实施例1提取银杏黄素刺山柑干燥果实50kg，粉碎(粉碎后的粒径为6目)，用8倍体积的水提取，提取两次，每次2小时，过滤，合并两次滤液，减压浓缩，至密度1.2g/ml。加入乙醇，至醇浓度为 70%，醇沉静置过夜。过滤得到滤液，减压浓缩至无醇味得浸膏。将浸膏溶于水，依次用石油醚、氯仿萃取，得到石油醚部位40g、氯仿部位168g。将氯仿部位用聚酰胺柱进行分离，依次用水、30 %乙醇、50 %乙醇、70 %乙醇、90 % 乙醇洗柱。收集以硅胶薄层层析法检测，展开剂氯仿和甲醇的体积比为8 1时，Rf值为 0. 5 0. 8的馏分。将上述所得馏分浓缩后用kphadex IjHm柱进行分离，甲醇洗柱，收集以硅胶薄层层析法检测，展开剂氯仿和甲醇的体积比为8 1时，Rf值为0.6 0.8的馏分。将上述所得馏分浓缩后进行硅胶柱层析分离，以石油醚-乙酸乙酯(体积比为 6 1 1 1)进行梯度洗脱(梯度为6 —4:1 —2:1 —1: 1)，收集以硅胶薄层层析法检测，展开剂氯仿和甲醇的体积比为15 1时，Rf值为0.3 0.5的馏分。将上述所得馏分浓缩后进行硅胶制备薄层层析(硅胶板型号HSGF-2M，由烟台江友硅胶开发有限公司提供)，展开剂为氯仿-甲醇(体积比为15 1)，收集Rf值为0. 45 的馏分，得到29. 3mg混合物。将上述所得29. 3mg混合物进行制备液相分离，条件为柱温为25 30°C， waters510泵，WaterS484检测器，global-C18柱子(由江苏环球色谱有限责任公司提供)， 检测波长270nm,流动相甲醇水=90 10 (体积比)，流速3. 40ml/min。收集保留时间为7min的组分，得到银杏黄素17.6mg。HPLC面积归一法测得其纯度为98%。其结构鉴定数据如下银杏黄素Ginkgetin，黄色晶体，mp 347-349 "C ；ESIMS :m/z = 565. 18[Μ_ΗΓ ； 1H-WR(DMSO-Cl6)PPm δ 3. 77 (3Η，s，4 ‘ -OCH3)，3. 81 (3H，s，7_0CH3)，6. 21 (1H，s，H-6)， 6. 34(lH，s，H-6〃)，6. 68 (1H，s，H_3〃 ) ,6. 70(2H,d, J = 8. 5Ηζ,Η-3" ‘，5〃 ‘ ) ,6. 77 (1Η, s，H-8)，6. 96(lH，s，H-3)，7. 32(lH，d，J = 9. 0Hz，H-5' ),7. 46(2H,d, J = 8. 5Ηζ,Η-2"‘， 6" ‘ )，8.04(lH，d，J = 2.0Hz，H-2' ),8. 15 (1H, dd, J = 9.0,2. 0Hz,H-6' ), 12. 92 (1H, s，5-0H)，13. 04(1H，s，5 “ -OH) 匪R(DMS0_d6)ppm :55. 9 (4 ' -OCH3)，56. 1 (7_0CH3)， 92. 7(C-8)，98. 2(C-6〃)，99. 5 (C_6)，102. 2 (C_3 〃)，103. 7 (C_3，C-10 〃)，103.9(C_8〃)， 104. 8 (C-IO), 111. 6(C-5' )，115.9(C_3〃 ‘，C_5〃 ' )，121.3(C_1〃 ' ), 122. 2 (C-I')， 123. 1 (C-3 ' ),127. 8 (C-6 ‘，C_2 〃 ‘，C_6 〃 ' )，131.2(C_2' )，154.5(C_9〃 )，157. 4(C-9), 160. 6(C-4 ‘，C-5 “ )，161.0(C_4 “ ‘ )，161. 2 (C-5)，161. 7 (C-7 “)， 163. 9(C-2，C-2" )，165. 2(C-7)，181. 4(C-4)，182. 0(C-4〃 )。与文献 艮道——至文(文献为:Konda, Y. , Sasaki, Τ. , Kagawa, H. , Takayanagi, H., Harigaya,Y. ,Sun,Χ.-L. ,et al. (1995). Conformational analysis of c3' _c8connected biflavones. J Heterocyclic Chem,32(5),1531-1535)。实施例2提取异银杏黄素刺山柑干燥果实50kg，粉碎(粉碎后的粒径为6目)，用8倍体积的水提取，提取两次，每次2小时，过滤，合并两次滤液，减压浓缩，至密度1. 2g/ml。加入乙醇，至醇浓度为 70%，醇沉静置过夜。过滤得到滤液，减压浓缩至无醇味得浸膏。将浸膏溶于水，依次用石油醚、氯仿萃取，得到石油醚部位40g、氯仿部位168g。将氯仿部位用聚酰胺柱进行分离，依次用水、30 %乙醇、50 %乙醇、70 %乙醇、90 % 乙醇洗柱。收集以硅胶薄层层析法检测，展开剂氯仿和甲醇的体积比为8 1时，Rf值为 0. 5 0. 8的馏分。将上述所得馏分浓缩后用kphadex LH20柱进行分离，甲醇洗柱，收集以硅胶薄层层析法检测，展开剂氯仿和甲醇的体积比为8 1时，Rf值为0.6 0.8的馏分。将上述所得馏分浓缩后进行硅胶柱层析分离，以石油醚-乙酸乙酯(体积比为 6 1 1 1)进行梯度洗脱(梯度为6 —4:1 —2:1 —1: 1)，收集以硅胶薄层层析法检测，展开剂氯仿和甲醇的体积比为15 1时，Rf值为0.3 0.5的馏分。将上述所得馏分浓缩后进行硅胶制备薄层层析(硅胶板型号HSGF-2M，由烟台江友硅胶开发有限公司提供)，展开剂为氯仿-甲醇(体积比为15 1)，收集Rf值为0. 45 的馏分，得到29. 3mg混合物。将上述所得29. 3mg混合物进行制备液相分离，条件为柱温为25 30°C， waters510泵，WaterS484检测器，global-C18柱子(由江苏环球色谱有限责任公司提供)， 检测波长270nm,流动相甲醇水=90 10 (体积比)，流速3. 40ml/min。收集保留时间为21. Smin的组分，得到异银杏黄素9. lmg。HPLC面积归一法测得其纯度为98%。其结构鉴定数据如下异银杏黄素Isoginkgetin，黄色晶体 mp 349-351 °C ;ESIMS :m/z = 565. 16[Μ_ΗΓ ； 1H-WR(DMSO-Cl6)PPm : δ 3· 75 (3Η，s，4〃 ' -OCH3)，3· 78 (3Η，s，4' -OCH3)，6· 20 (1H，s，H_6)， 6. 42 (1H, s, H-6" )，6· 49 (1H, s, H_8)，6· 90 (1H, s, H_3" )，6· 92 (1H, s, H_3)，6· 94 (2H, d, J = 8. 5Hz，H-3〃 ‘，5〃 ' )，7. 36(1H，d，J = 10. 0Hz，H-5' ),7. 61 (2H, d, J = 8. 5Hz, H-2〃 ‘，6〃 ' )，8· 05(lH，s，H-2' ) ,8. 18(lH,d, J= 10. 0Hz,H-6' )，12. 92 (1H，s，5-0H)， 13. 06 (1H, s, 5 “ -OH) ； 13C-匪R(DMS0_d6)ppm δ 55. 5 (4 ' -OCH3)，56. 0(4 “ ‘ -OCH3)， 94. 2(C-8)，98. 7(C-6 “ )，98. 9(C-6)，103.3 (C-3 “ )，103. 7(C-3)，103. 8 (C-10，8
10 “ ), 111. 8(C-5 ‘ ), 114. 6(C-3 “ ‘ ,5 “ ‘ )，121.6(C_3 ‘ ), 122. 6 (C-1 ‘)， 122.9 (C-1 “ ‘ ), 127.8(C-2 “ ‘，C-6 “ ‘ )，128.3(C_6 ‘ )，130.9(C-2 ‘)， 154. 5(C-9 “ )，157. 5(C-9)，160. 5(C-5 〃 ), 160. 7 (C-4 ‘ )，161.5(C_7〃 ), 161. 8 (C-5), 162. 3(C-4" ' ),163. 1 (C-7) ,163. 4 (C-2) ,164. 3 (C-2〃 )，181. 8 (C_4)，182. 01 (C_4〃 )。与文献报道一致(文献为Markham，K.R.，Sheppard, C.，& Geiger，H. (1987) · 13C NMR studies of some naturally occurring amentoflavone and hinokiflavonebiflavonoids. Phytochemistry,26(12),3335-3337)。对比实施例1将实施例1中的氯仿部位浸膏lOOmg，经kphadex LH20柱反复进行分离，甲醇洗柱，收集以硅胶薄层层析法检测，展开剂氯仿和甲醇的体积比为8 1时，Rf值为0.5 0.8 的馏分。将上述所得馏分浓缩后经HPLC检测银杏黄素和异银杏黄素含量之和大于85%， 用反相C18柱柱层析进行分离，分别用30^^40^^50%甲醇洗脱，HPLC(条件乙腈-0. 1% 甲酸水梯度，Omin — 40min 乙腈 45%— 85% ；仪器Agilent HP1100 ；色谱柱Diamonsil C-18,5y ,250X4. 6mm)检测馏分，银杏黄素与异银杏黄素未分离开。对比实施例2将实施例1中的氯仿部位浸膏lOOmg，用95%乙醇回流提取，2小时，过滤，滤液浓缩。将上述所得浓缩后进行反复硅胶柱层析分离，以石油醚-氯仿-甲醇(体积比为 1:2: 0 0 100 1)进行梯度洗脱(梯度为 1 2 0—1 8 0 —1 1 0. 01 —1 2 0.01-0 1 0.01)，收集以硅胶薄层层析法检测，展开剂氯仿和甲醇的体积比为8 1 时，Rf值为0. 5 0. 8的馏分。将上述所得馏分浓缩后经HPLC检测银杏黄素和异银杏黄素含量之和大于80%。将上述所得浓缩后进行反复硅胶柱层析分离，以石油醚-氯仿-甲醇 (体积比为1 2 0 0 100 1)进行梯度洗脱(梯度为1 2 0—1 4 0—1 8 0—1 1 0.01 —1 2 0.01 —1 4 0.01 —0 1 0. 01) ,HPLC(条件乙腈~0· 甲酸
水梯度，Omin — 40min 乙腈 45%— 85% ；仪器=Agilent HP1100 ；色谱柱=Diamonsil C_18， 5μ,250X4. 6mm)检测馏分，银杏黄素与异银杏黄素未分离开。
权利要求
1.一种银杏黄素的提取方法，其包含下列步骤(1)将刺山柑果实的水提醇沉液过滤，浓缩，得浸膏；(2)将步骤(1)得到的浸膏溶于水，依次用石油醚和氯仿萃取，得到氯仿部位；(3)将步骤( 所得的氯仿部位用聚酰胺柱进行梯度洗脱，洗脱剂依次为水和体积百分比为30% 95%的乙醇水溶液，收集以硅胶薄层层析法检测，展开剂氯仿和甲醇的体积比为8 1时，Rf值为0. 5 0. 8的馏分；(4)将步骤C3)所得物质用凝胶柱进行洗脱，收集以硅胶薄层层析法检测，展开剂氯仿和甲醇的体积比为8 1时，Rf值为0.6 0.8的馏分；(5)将步骤(4)所得物质进行硅胶柱层析分离，或者硅胶制备薄层层析分离，收集以硅胶薄层层析法检测，展开剂为体积比为15 1的氯仿和甲醇时，Rf值为0.45的馏分；(6)将步骤( 所得物质进行制备液相分离，收集以下检测条件下检测到的组分柱温为25 30°C，Waters510泵，Waters484检测器，GlcAal-C18柱子，检测波长270nm，流动相为甲醇与水的混合液，二者体积比为90 10，流速为3. 40ml/min，保留时间为24. 7min,即得银杏黄素。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤(1)中，所述的刺山柑果实为干燥的果实；所述的刺山柑果实粉碎后使用，粉碎后的粒径为3 7目。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤(1)中，所述的水提醇沉液由下列方法制得将刺山柑果实用水提取，过滤，将滤液浓缩，加入乙醇水溶液，静置，即可；所述水的体积为刺山柑干燥果实体积的8 10倍，用水提取的次数为2 3次，用水提取的时间为每次1 2小时；所述的浓缩后滤液的密度为1. 0 2. Og/ml ；所述的加入乙醇水溶液后溶液中的乙醇的浓度为体积百分比65 85%。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤O)中，所述的水的用量为步骤 (1)得到的浸膏体积的10 15倍；所述的石油醚的用量为步骤(1)得到的浸膏体积的 10 15倍；所述的氯仿的用量为步骤(1)得到的浸膏体积的15 20倍；所述的用石油醚萃取的次数为2 3次；所述的用氯仿萃取的次数为3 4次。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤(3)中，所述的聚酰胺柱的规格为 14-30目、30-60目、60-100目、100-120目或200-400目，所述的聚酰胺柱中的聚酰胺填料与上柱物质的重量比为50 1 80 1 ；所述的梯度洗脱的洗脱剂为水一30%乙醇水溶液一50%乙醇水溶液一70%乙醇水溶液一90%乙醇水溶液，以上均为体积百分比，所述的梯度洗脱中，水的用量为聚酰胺柱体积的3 5倍，30%乙醇水溶液的用量为聚酰胺柱体积的4 6倍，50%乙醇水溶液的用量为聚酰胺柱体积的4 6倍，70%乙醇水溶液的用量为聚酰胺柱体积的4 6倍，90%乙醇水溶液的用量为聚酰胺柱体积的4 6倍。
6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤⑷中，所述的凝胶柱Skphadex LH20 ；所述的用凝胶柱进行洗脱的洗脱剂为甲醇，洗脱剂的用量为凝胶柱体积的1 2倍。
7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤( 包含下列步骤(1’)将步骤 (4)所得物质进行硅胶柱层析分离，收集以硅胶薄层层析法检测，展开剂氯仿和甲醇的体积比为15 1时，Rf值为0.3 0.5的馏分；(2’)将步骤(1’)所得物质进行硅胶柱层析分离，或者硅胶制备薄层层析分离，收集以硅胶薄层层析法检测，展开剂为体积比为15 1的氯仿和甲醇时，Rf值为0. 45的馏分。
8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于步骤(1’)中，所述的硅胶柱层析分离中，硅胶的粒度为100 200目；硅胶与上柱物质的重量比为50 1 80 1;洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂或正己烷与乙酸乙酯的混合溶剂；当洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂时，石油醚和乙酸乙酯的体积比为6 1 1 1;洗脱方法为梯度洗脱，当洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂时，梯度为石油醚乙酸乙酯= 6:1 — 4:1 — 2:1 — 1: 1，每个梯度的洗脱剂用量为硅胶柱体积的4 6倍。
9.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于步骤O’)中，所述的硅胶柱层析分离中，洗脱剂为氯仿和甲醇的混合溶剂；所述的硅胶制备薄层层析分离中，展开剂为氯仿和甲醇的混合溶剂。
10.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤(6)中，所述的制备液相分离的条件如下柱温为20 30°C，色谱柱为反向C18柱，泵为waterS510泵，检测器为WaterS484 检测器，检测波长270nm，流动相为甲醇和水的混合液，其体积比为90 10，流速为3 5ml/min。
11.一种异银杏黄素的提取方法，其包含下列步骤(1)将刺山柑果实的水提醇沉液过滤，浓缩，得浸膏；(2)将步骤(1)得到的浸膏溶于水，依次用石油醚和氯仿萃取，得到氯仿部位；(3)将步骤( 所得的氯仿部位用聚酰胺柱进行梯度洗脱，洗脱剂依次为水和体积百分比为30% 95%的乙醇水溶液，收集以硅胶薄层层析法检测，展开剂氯仿和甲醇的体积比为8 1时，Rf值为0. 5 0. 8的馏分；(4)将步骤C3)所得物质用凝胶柱进行洗脱，收集以硅胶薄层层析法检测，展开剂氯仿和甲醇的体积比为8 1时，Rf值为0.6 0.8的馏分；(5)将步骤(4)所得物质进行硅胶柱层析分离，或者硅胶制备薄层层析分离，收集以硅胶薄层层析法检测，展开剂为体积比为15 1的氯仿和甲醇时，Rf值为0.45的馏分；(6)将步骤( 所得物质进行制备液相分离，收集以下检测条件下检测到的组分柱温为25 30°C，waters510泵，waters484检测器，GlcAal-C18柱子，检测波长270nm，流动相为甲醇与水的混合液，二者体积比为90 10，流速为3. 40ml/min，保留时间为21. 8min,即得异银杏黄素；其中，步骤(1) (6)中的各条件均如权利要求1 10中任一项所述。
全文摘要
本发明公开了一种提取银杏黄素或异银杏黄素的方法。本发明第一次从刺山柑中提取了银杏黄素或异银杏黄素，为银杏黄素或异银杏黄素的获取提供了一条新的途径。
文档编号C07D311/40GK102399207SQ20111028537
公开日2012年4月4日 申请日期2011年9月13日 优先权日2010年9月14日
发明者吴彤, 周海凤, 姜仁吉, 庄昌龙, 张乐乐, 李燕, 杨方, 樊晓, 王鑫杰 申请人:上海医药工业研究院