专利名称：一种4-甲基咪唑完全抗原的合成方法
技术领域：
本发明涉及4-甲基咪唑完全抗原，特别是涉及一种4-甲基咪唑-蛋白(BSA和0VA)的合成方法，属于生物化工技术领域。
背景技术：
4-甲基咪唑(中文别名为4-甲基咪唑，4-甲基甘哑啉，4-甲基-IH-咪唑)，英文名4-Methylimidazole (缩写4_Mel或4-MI),是一种含氮杂环化合物,分子式为C4H6N2,是白色至类白色结晶粉末，溶于水和乙醇，有腐蚀性。它是合成多种药物的重要医药中间体，还是生产农用化学品、环氧树脂固化剂染 料工业乳化剂金属防腐剂等多种产品的中间体。4-甲基咪唑是氨(铵)法焦糖色素生产中的副产物，这类色素被广泛应用于酒类、饮料、酱油、醋、酱菜、糕点、咖啡、巧克力、糖果、汤料、糖浆药品等行业。然而，据有关文献报道，4-甲基咪唑作为一种神经毒素，具有强烈的致惊闕作用，能使动物产生超兴奋状态，对反刍动物有后天性的损害，可以令人发生痉挛；它对雄性小鼠的痉挛致死量为370mg/kg体重；同时，它可以诱发老鼠患肺癌，与雌性小鼠患白血病有一定的关联。鉴于4 一甲基咪唑对人体潜在的危害性，世界卫生组织(WHO)对焦糖色素的质量标准做出了规定，焦糖色素中4-甲基咪唑的含量小于200mg/kg，中国卫生标准GB8817-88中规定其在焦糖色素内含量不得超过0.02%。因此，通过检测食品药品中的4-甲基咪唑含量，进而控制其在食品药品中的含量、确保食品药品的安全，具有非常重要的现实意义。目前，国内外有关4-甲基咪唑的检测方法主要有层析法、色谱法、分光光度法。层析法和分光光度法虽然操作简单快捷，但是其不能准确定性定量，准确度较低；色谱法可以非常准确对4-甲基咪唑进行定性和定量，但是其耗时长，成本高，对被检材料要求较高，并且需要专业技术人员进行操作，费时又费力，已经不能满足现代检测对方便、快速、准确的要求。目前，国内尚无使用免疫快速检测法检测食品药品中4-甲基咪唑含量的报道，为了弥补这一空白，为今后人们在免疫检测方面的研究提供材料，设计了 4-甲基咪唑半抗原，在此基础上进一步设计了可用于免疫检测用的4-甲基咪唑完全抗原。
发明内容
针对现有检测技术的缺点和不足，本发明的目的是提供一种4-甲基咪唑完全抗原的制备方法，所制备的产品可用于食品药品中4-甲基咪唑含量的免疫检测，为后续研究、开发及应用提供必需的人工抗原。本发明是以4-甲基咪唑为原料，与乙醛酸、丙醛酸、丁醛酸、戊醛酸、己醛酸或对醛基苯甲酸反应得到4-甲基咪唑半抗原，再以EDC和NHS为活化剂，将4-甲基咪唑半抗原与蛋白(BSA和0VA)结合在一起，制备4-甲基咪唑的人工抗原，即4-甲基咪唑-牛血清白蛋白和4-甲基咪唑-卵清白蛋白。本发明的目的通过如下技术方案实现。一种4-甲基咪唑完全抗原的合成方法，包括如下步骤
( I)半抗原的制备将4-甲基咪唑与有机酸混合后，溶解于溶剂中，配成4-甲基咪唑的质量浓度为0. 01g/mL 0. 5g/mL,且有机酸的质量浓度为0. 05g/L 5g/mL的混合溶液，在0°C 70°C条件下反应0. Ih 24h，得到4-甲基咪唑半抗原；所述有机酸为乙醛酸、丙醛酸、丁醛酸、戊醛酸、己醛酸或对醛基苯甲酸；所述溶剂为水、甲醇、乙醇、DMSO或DMF ；(2)半抗原的活化将4-甲基咪唑半抗原溶于DMSO或DMF中，得到浓度为0.001 0. 5g/mL的4-甲基咪唑半抗原溶液，在搅拌条件下加入I- (3- 二甲氨基丙基)_3_乙基碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，使EDC和NHS在DMSO或DMF溶液中的质量浓度为0. 001 0. 5g/mL,活化 0. I 12h ;(3)偶联蛋白溶液的制备将牛血清白蛋白(BSA)或卵清白蛋白(OVA)溶解于磷酸盐缓冲液中，配成偶联蛋白浓度为0. 001g/mL 0. 5g/mL的蛋白溶液；(4)人工抗原的合成在搅拌条件下，蛋白溶液加入活化后的半抗原溶液中，在温度为0°C 30°C条件下反应0. 5h 12h，得到人工抗原混合液； (5)透析将人工抗原混合液转移到能透过分子量为IkDalOOkDa的透析袋中，在搅拌的条件下，使用磷酸盐缓冲液透析I天I天；透析结束后，干燥，得到固体状的4-甲基咪唑完全抗原。为进一步实现本发明，步骤(2)所述的EDC与NHS的质量比为5 : I I : 5 ;步骤(3)和步骤(5)所述的碳酸盐缓冲液的浓度优选为0. 01 0. 6mol/L, pH为5. 0 9. O。步骤(4)中所述蛋白溶液与半抗原溶液的体积比为I : 10 10 : I。步骤(2)、步骤(4)和步骤(5)所述的搅拌为磁力搅拌或电动搅拌。步骤(5)所述干燥为冷冻干燥或真空干燥。与现有技术相比，本发明具有以下优点I、产率高对4-甲基咪唑进行了分子改造，与乙醛酸、丙醛酸、丁醛酸、戊醛酸、己醛酸或对醛基苯甲酸进行反应得到4-甲基咪唑半抗原，使4-甲基咪唑分子增加了一段连接臂，它使4-甲基咪唑更容易与蛋白结合，从而克服了 4-甲基咪唑与蛋白直接偶联速度慢、效率低的缺点，极大提高了 4-甲基咪唑与蛋白的偶联速度和效率，使4-甲基咪唑-牛血清白蛋白和4-甲基咪唑-卵清白蛋白完全抗原的产率提高。2、稳定性好对4-甲基咪唑进行分子改造，增加的一段连接臂末端含有羧酸根(-C00H)，在EDC和NHS的作用下，使得4-甲基咪唑与蛋白稳定的结合在一起。3、可用于免疫产生高特异性抗体对4-甲基咪唑的进行分子改造，增加了一段连接臂，将4-甲基咪唑与蛋白(BSA和0VA)结合在一起，能最大程度地将4-甲基咪唑分子暴露出来，在免疫过程中有利于产生高特异性的抗体，从而开发快速检测4-甲基咪唑的产品。
图I和图2分别为实施例I中4-甲基咪唑完全抗原制备前、后的紫外扫描图。图3和图4分别为实施例2中4-甲基咪唑完全抗原制备前、后的紫外扫描图。图5和图6分别为实施例3中4-甲基咪唑完全抗原制备前、后的紫外扫描图。
具体实施例方式下面结合附图和实施例对本发明作进一步的描述，但是本发明要求保护的范围并不局限于实施例表述的范围。实施例I称取50mg的4_甲基咪唑溶解于5mL乙醇中，加入250mg对醒基苯甲酸，配制成4-甲基咪唑质量浓度为0. 01g/mL的混合液，在10°C下反应24h，制备4-甲基咪唑半抗原；将IOmg的4-甲基咪唑半抗原溶于IOmLDMSO,得到浓度为0. 001g/mL的4-甲基咪唑半抗原溶液，在搅拌条件加入20mgEDC和4mgN HS，活化0. 5h ；将Img的蛋白(BSA或0VA)溶解于lmL，浓度为0. 2mol/L，pH为7. 0的磷酸盐缓冲液(0. 2mol/L的磷酸二氢钠与0. 2mol/L的磷酸氢二钠水溶液按体积比61 39配置)中，配制成蛋白质量浓度为0. 001g/mL的蛋白溶液，置于4°C冰箱中保存；
在磁力搅拌器的搅拌的情况下，将蛋白溶液滴加到活化好的4-甲基咪唑半抗原溶液中，使两者充分反应，在30°C下反应2h，反应完成后，即得到人工抗原混合液；将人工抗原混合液装入能透过分子量为90kDa的透析袋中，用浓度为0. 01mol/L,pH为7. 0的磷酸盐缓冲液(0. 01mol/L的磷酸二氢钠与0. 01mol/L的磷酸氢二钠水溶液按体积比61 39配置)透析I天，每隔3h更换一次磷酸盐缓冲液；透析结束后，将人工抗原混合液进行冷冻干燥，即得到人工抗原4-甲基咪唑-牛血清白蛋白和4-甲基咪唑-卵清白蛋白。4-甲基咪唑人工抗原的鉴定采用紫外分光光度计测定其紫外扫描图谱。本实施例中4-甲基咪唑-牛血清白蛋白和4-甲基咪唑-卵清白蛋白完全抗原制备前后的紫外扫描图分别如附图I、附图2所示。从图I中可以看出牛血清白蛋白的最大吸收波长为278nm，4-甲基咪唑半抗原的最大吸收波长为282nm，4-甲基咪唑-牛血清白蛋白抗原的最大吸收波长为284nm，4-甲基咪唑-牛血清白蛋白抗原与牛血清白蛋白的最大吸收波长不同，认为这是半抗原偶联到蛋白上的结果，即说明4-甲基咪唑半抗原已经成功偶联到蛋白上，成功得到4-甲基咪唑-牛血清白蛋白抗原；从图2中看出卵清白蛋白的最大吸收波长为279nm，4-甲基咪唑半抗原的最大吸收波长为282nm，4-甲基咪唑-牛血清白蛋白抗原的最大吸收波长为284nm，4-甲基咪唑-牛血清白蛋白抗原与卵清白蛋白的最大吸收波长不同，说明4-甲基咪唑半抗原已经成功偶联到卵清白蛋白上，成功得到4-甲基咪唑-卵清白蛋白抗原。产率的计算产率是评价一个反应合成效率的一个重要的指标，产率高说明此化学反应合成效率高，反之则称合成效率低。产率=实际得到的产物的质量(g) X100% /理论上产物的质量(g)。经检测，本实施例计算得4-甲基咪唑-牛血清白蛋白产率为81. 5 %，4-甲基咪唑-卵清白蛋白为80. 1%，说明本法合成4-甲基咪唑-牛血清白蛋白和4-甲基咪唑-卵清白蛋白完全抗原的效率较高。稳定性试验将本法制备的4-甲基咪唑-牛血清白蛋白和4-甲基咪唑-卵清白蛋白完全抗原溶液置于4°C冰箱中3个月，观察其是否出现沉淀或絮状物。3个月后，观察其溶液状态，依然为澄清的溶液，说明本法合成的4-甲基咪唑-牛血清白蛋白和4-甲基咪唑-卵清白蛋白完全抗原具有很好的稳定性。特异性试验将本法制备的4-甲基咪唑-牛血清白蛋白完全抗原溶液溶于生理盐水(0. 9%的氯化钠溶液)，使抗原浓度为lmg/mL。吸取配好的抗原溶液100 u L，加入200 u L不完全弗氏佐剂，充分乳化lOmin。将乳化好的混合液注射Balb/c小鼠，皮下多点注射，剂量为200 u L。一个星期后，用同样的方法对Balb/c小鼠加强免疫(此次免疫用完全佐剂替换不完全弗氏佐剂)，免疫3天后对小鼠进行尾部取血，用酶联免疫(ELISA)的方法测定其交叉率。具体步骤如下(I)包被将4-甲基咪唑-卵清白蛋白完全抗原溶解于碳酸盐缓冲溶液(PH9. 6，0. 05M)中，使抗原浓度为I U g/mL,往96孔板各孔加入100 u L抗原溶液，于4°C冰箱过夜，然后在自动洗板机上洗涤3次，甩干。(2)封闭往 IOOmL PBS 溶液(pH 7. 4，0. 015M)中加入 0. 05mLTween_20 试剂和 3gBSA,搅拌使其充分混匀，配制成封闭液。往96孔板中加 入200 y L封闭液，于37°C培养箱中封闭2h，自动洗板机上洗涤3次，甩干。(3)加样用PBS溶液(pH 7. 4,0. 015M)将小鼠血清稀释1000倍，得到血清稀释液；将咪唑、2-乙基咪唑、4-羟甲基咪唑和2-乙基-4-甲基咪唑溶解于PBS溶液(pH 7.4，0. 015M)中，使咪唑、2-乙基咪唑、4-羟甲基咪唑和2-乙基-4-甲基咪唑溶液的浓度为8 u g/mL ;往 96 孔板第一列的 A 加入 50 u L PBS 溶液(pH 7. 4,0. 015M)，往第一列 B、C、D、E孔分别加入50 ii L咪唑、2-乙基咪唑、4-羟甲基咪唑和2-乙基-4-甲基咪唑溶液。然后再往第一列的A、B、C、D、E孔加入50 ii L血清稀释液，于37°C培养箱中反应lh。自动洗板机上洗涤3次，甩干。(4)加酶标二抗用PBS溶液(pH 7. 4,0. 015M)将羊抗鼠IgG-HRP进行1/20000稀释，往(3)中的各孔加入IOOii L，37°C培养箱中反应30min。自动洗板机上洗涤3次，甩干。(5)显色往(4)中各孔加入显色液100iiL，37°C培养箱中反应lOmin，然后加入10 %的硫酸溶液(2mo I/L ) 50 ii L，终止反应。(6)检测酶联免疫检测仪测定各孔A450nm的吸光值。A、B、C、D、E各孔测定结果分别为2. 8,2. 73,2. 78,2. 66,2. 71。抗原的特异性一般用抗血清的交叉反应率来表示，抗血清与半抗原结构类似物的交叉反应率越低，则说明此抗原免疫的特异性越高。根据测定结果，0药物浓度孔的吸收值记为CRtl，其他各浓度药物孔的吸光值记为CR，交叉反应率=(CRtl-CR) X 100% /C&。经过计算得到，本实例抗血清与各药物的交叉反应率均小于5%，说明了本实例制得的抗原用于免疫时产生的抗体特异性非常高。本实施例制备的4-甲基咪唑-牛血清白蛋白和4-甲基咪唑-卵清白蛋白完全抗原不仅产率高，稳定性好，而且用于免疫时可产生高特异性抗体，故可用于食品及药品中4-甲基咪唑含量的快速免疫检测，具有很好的应用前景。实施例2称取400mg的4_甲基咪唑溶解于5mL甲醇中，加入2g乙醒酸,配制成4_甲基咪唑质量浓度为0. 08g/mL的混合液，在30°C下反应12h，制备4-甲基咪唑半抗原；将50mg的4_甲基咪唑半抗原溶于5mlDMF中，得到浓度为0. 01 g/mL的4-甲基咪唑半抗原溶液，在搅拌条件加入50mgEDC和50mgN HS，活化6h ；将30mg的蛋白(BSA或OVA)溶解于3mL，浓度为0. 2mol/L，pH为6. 0的磷酸盐缓冲液(0. 2mol/L的磷酸二氢钠与0. 2mol/L的磷酸氢二钠水溶液按体积比12. 3 87. 7配置)中，配制成蛋白质量浓度为0. 01g/ml的蛋白溶液，放置于4°C冰箱中保存；在磁力搅拌器的搅拌的情况下，将蛋白溶液滴加到活化好的4-甲基咪唑半抗原溶液中，使两者充分反应，在0°c下反应6h，反应完成后，即得到人工抗原混合液；将人工抗原混合液装入能透过分子量为14kDa的透析袋中，用浓度为0. 2mol/L,pH为6. 0的磷酸盐缓冲液(0. 2mol/L的磷酸二氢钠与0. 2mol/L的磷酸氢二钠水溶液按体积比12. 3 87. 7配置)透析8天，每隔6h更换一次磷酸盐缓冲液；透析结束后，将人工抗原混合液进行冷冻干燥，即得到人工抗原4-甲基咪唑-牛血清白蛋白和4-甲基咪唑-卵清白蛋白产品。 4-甲基咪唑人工抗原的鉴定采用紫外分光光度计测定其紫外扫描图谱。本实施例中4-甲基咪唑-牛血清白蛋白和4-甲基咪唑-卵清白蛋白完全抗原制备前后的紫外扫描图分别如附图3、附图4所示。从图3中可以看出牛血清白蛋白的最大吸收波长为278nm，4-甲基咪唑半抗原的最大吸收波长为281nm，4-甲基咪唑-牛血清白蛋白抗原的最大吸收波长为283nm，4-甲基咪唑-牛血清白蛋白抗原与牛血清白蛋白的最大吸收波长不同，说明4-甲基咪唑半抗原已经成功偶联到蛋白上，成功得到4-甲基咪唑-牛血清白蛋白抗原；从图4中看出卵清白蛋白的最大吸收波长为279nm，4-甲基咪唑半抗原的最大吸收波长为281nm，4-甲基咪唑-牛血清白蛋白抗原的最大吸收波长为280nm，4-甲基咪唑-牛血清白蛋白抗原与卵清白蛋白的最大吸收波长不同，说明4-甲基咪唑半抗原已经成功偶联到卵清白蛋白上，成功得到4-甲基咪唑-卵清白蛋白抗原。本实施例计算得4-甲基咪唑-牛血清白蛋白人工抗原的产率为83. 6%，4_甲基咪唑-卵清白蛋白人工抗原的产率为82. 5%。采用实施例I中测定抗原稳定性的方法，对本实施例中的4-甲基咪唑-牛血清白蛋白人工抗原和4-甲基咪唑-卵清白蛋白人工抗原进行稳定性检测，结果表明，4摄氏度条件下静置3个月的4-甲基咪唑-牛血清白蛋白人工抗原和4-甲基咪唑-卵清白蛋白人工抗原溶液无浑浊。说明本实施例合成的4-甲基咪唑-牛血清白蛋白和4-甲基咪唑-卵清白蛋白完全抗原具有很好的稳定性；采用实施例I的方法测定抗原的交叉反应率，结果得到抗血清与各药物的交叉反应率均小于5%，说明了本实例制得的抗原用于免疫时产生的抗体特异性非常高。实施例3称取2. Og的4-甲基咪唑溶解于5mLDMS0中，加入IOg对醛基苯甲酸，配制成4_甲基咪唑质量浓度为0. 4g/mL的混合液，在60°C下反应lh，制备4-甲基咪唑半抗原；将0. 5g的4-甲基咪唑半抗原溶于ImlDMSO中，得到浓度为0. 5g/mL的4-甲基咪唑半抗原溶液，在搅拌条件加入0. 4gEDC和2gNHS，活化12h ；将5g的蛋白(BSA或OVA)溶解于10mL，浓度为0. 5mol/L，pH为8. 0的磷酸盐缓冲液(0. 5mol/L的磷酸二氢钠与0. 5mol/L的磷酸氢二钠水溶液按体积比94. 7 5. 3配置)中，配制成蛋白质量浓度为0. 5g/ml的蛋白溶液，放置于4°C冰箱中保存；在磁力搅拌器的搅拌的情况下，将蛋白溶液滴加到活化好的4-甲基咪唑半抗原溶液中，使两者充分反应，在10°c下反应12h，反应完成后，即得到人工抗原混合液；将人工抗原混合液装入能透过分子量为80kDa的透析袋中，用浓度为0. 2mol/L,pH为6. 0的磷酸盐缓冲液(0. 2mol/L的磷酸二氢钠与0. 2mol/L的磷酸氢二钠水溶液按体积比12. 3 87. 7配置)透析3天，每隔6h更换一次磷酸盐缓冲液；透析结束后，将人工抗原混合液进行冷冻干燥，即得到人工抗原4-甲基咪唑-牛血清白蛋白和4-甲基咪唑-卵清白蛋白产品。4-甲基咪唑人工抗原的鉴定采用紫外分光光度计测定其紫外扫描图谱。本实施例中4-甲基咪唑-牛血清白蛋白和4-甲基咪唑-卵清白蛋白完全抗原制备前后的紫外扫描图分别如附图I、附图2所示。从图I中可以看出牛血清白蛋白的最大吸收波长为278nm，
4-甲基咪唑半抗原的最大吸收波长为282nm，4-甲基咪唑-牛血清白蛋白抗原的最大吸收波长为284nm，4-甲基咪唑-牛血清白蛋白抗原与牛血清白蛋白的最大吸收波长不同，说明4-甲基咪唑半抗原已经成功偶联到蛋白上，成功得到4-甲基咪唑-牛血清白蛋白抗原；从图2中看出卵清白蛋白的最大吸收波长为279nm，4-甲基咪唑半抗原的最大吸收波长为282nm，4-甲基咪唑-牛血清白蛋白抗原的最大吸收波长为284nm，4-甲基咪唑-牛血清白蛋白抗原与卵清白蛋白的最大吸收波长不同，说明4-甲基咪唑半抗原已经成功偶联到卵清白蛋白上，成功得到4-甲基咪唑-卵清白蛋白抗原。本实施例计算得4-甲基咪唑-牛血清白蛋白人工抗原的产率为76. 3%，4_甲基咪唑-卵清白蛋白人工抗原的产率为75. 2%。采用实施例I中测定抗原稳定性的方法，对本实施例中的4-甲基咪唑-牛血清白蛋白人工抗原和4-甲基咪唑-卵清白蛋白人工抗原进行稳定性检测，结果表明，4摄氏度条件下静置3个月的4-甲基咪唑-牛血清白蛋白人工抗原和4-甲基咪唑-卵清白蛋白人工抗原溶液无浑浊。说明实施例合成的4-甲基咪唑-牛血清白蛋白和4-甲基咪唑-卵清白蛋白完全抗原具有很好的稳定性；采用实施例I的方法测定抗原的交叉反应率，结果得到抗血清与各药物的交叉反应率均小于5%，说明了本实例制得的抗原用于免疫时可产生高特异性抗体。本发明制备的4-甲基咪唑-牛血清白蛋白和4-甲基咪唑-卵清白蛋白完全抗原不仅产率高，稳定性好，而且用于免疫时可产生高特异性抗体，说明本发明合成的4-甲基 咪唑完全抗原可用于食品及药品中4-甲基咪唑的快速免疫检测。
权利要求
1.ー种4-甲基咪唑完全抗原的合成方法，其特征在于包括如下步骤 (1)半抗原的制备将4-甲基咪唑与有机酸混合后，溶解于溶剂中，配成4-甲基咪唑的质量浓度为O. Olg/mL O. 5g/mL,且有机酸的质量浓度为O. 05g/L 5g/mL的混合溶液，在0°C 70°C条件下反应O. Ih 24h，得到4-甲基咪唑半抗原；所述有机酸为こ醛酸、丙醛酸、丁醛酸、戊醛酸、己醛酸或对醛基苯甲酸；所述溶剂为水、甲醇、こ醇、DMSO或DMF ； (2)半抗原的活化将4-甲基咪唑半抗原溶于DMSO或DMF中，得到浓度为O.001 O.5g/mL的4-甲基咪唑半抗原溶液，在搅拌条件下加入EDC和NHS，使EDC和NHS在DMSO或DMF溶液中的质量浓度为O. 001 O. 5g/mL,活化O. I 12h ; (3)偶联蛋白溶液的制备将牛血清白蛋白(BSA)或卵清白蛋白(OVA)溶解于磷酸盐缓冲液中，配成偶联蛋白浓度为O. 001g/mL O. 5g/mL的蛋白溶液； (4)人工抗原的合成在搅拌条件下，蛋白溶液加入活化后的半抗原溶液中，在温度为(TC 30°C条件下反应O. 5h 12h，得到人工抗原混合液； (5)透析将人工抗原混合液转移到能透过分子量为IkDalOOkDa的透析袋中，在搅拌的条件下，使用磷酸盐缓冲液透析I天 8天；透析结束后，干燥，得到固体状的4-甲基咪唑完全抗原。
2.根据权利要求I所述的ー种4-甲基咪唑完全抗原的合成方法，其特征在于步骤(2)所述的EDC与NHS的质量比为5: I I : 5。
3.根据权利要求I所述的ー种4-甲基咪唑完全抗原的合成方法，其特征在于步骤(3)和步骤(5)所述的碳酸盐缓冲液的浓度为O.01 O. 6mol/L, pH为5. O 9. O。
4.根据权利要求I所述的ー种4-甲基咪唑完全抗原的合成方法，其特征在于步骤(4)中蛋白溶液与半抗原溶液的体积比为I: 10 10 : I。
5.根据权利要求I所述的ー种4-甲基咪唑完全抗原的合成方法，其特征在于步骤(2)、步骤(4)和步骤(5)所述搅拌为磁力搅拌或电动搅拌。
6.根据权利要求I所述的ー种4-甲基咪唑完全抗原的合成方法，其特征在于步骤(5)所述干燥为冷冻干燥或真空干燥。
全文摘要
本发明公开了一种4-甲基咪唑完全抗原的合成方法。本发明将4-甲基咪唑与有机酸混合后，溶解于溶剂中，有机酸为乙醛酸、丙醛酸、丁醛酸、戊醛酸、己醛酸或对醛基苯甲酸，配成4-甲基咪唑的质量浓度为0.01g/mL~0.5g/mL，且有机酸的质量浓度为0.05g/L~5g/mL的混合溶液，反应得到4-甲基咪唑半抗原；然后在1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的活化作用下，使4-甲基咪唑半抗原与蛋白结合，制备4-甲基咪唑完全抗原。本发明成功合成了4-甲基咪唑的人工抗原，合成步骤简洁，有效，可用于食品及药品中4-甲基咪唑的快速检测，并为后续产品的研究、开发及应用提供必需的人工抗原。
文档编号C07K14/77GK102675454SQ20121014245
公开日2012年9月19日 申请日期2012年5月9日 优先权日2012年5月9日
发明者于淑娟, 吴鑫兰, 管永光, 邓丽卿 申请人:华南理工大学