专利名称：美伐他汀的分离提取工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及ー种从微生物发酵液中分离或纯化美伐他汀或其药学上可接受的盐的方法。
背景技术：
美伐他汀(mevastatin,如式I所示)又叫做康帕丁(compactin)、ML-236B,是一种3-羟基3-甲基戊ニ酰辅酶A 还原酶(HMG-CoA)抑制剂，由日本三共制药公司生物化学家Endo在真菌(Penicillium Citrinum)培养液中偶然提取得到的，其化学名为2-甲基丁酸-{lS_[la (R), 7 β , 8 β (2S，4S)，8a β ]} _1，2，3，7，8，8a_ 六氢 _7_ 甲基-8{2_[4_ 羟基-6-氧代-2H-四氢吡喃基]-こ基}-I-萘酷，具体结构式如下
H^
ηο^
O
H式へイCH3
I美伐他汀为第一代他汀类物质，现在多被用来作为他汀类活性药物普伐他汀的前体，因此美伐他汀的收率和质量直接影响着普伐他汀的成本和纯度。美伐他汀的传统分离提取エ艺中，大多采用大孔树脂吸附结合柱层析的エ艺，该エ艺存在操作繁琐、提取成本高、生产周期长、收率低等问题，逐渐被溶媒萃取的方法所取代。US6387258(B1)采用调节pH值的方法，达到分离提取美伐他汀的目的。在该发明说明书中公开了美伐他汀的分离提取エ艺(I)碱性环境下预处理发酵液，以除去杂质；
(2)用疏水性有机萃取剂在酸性环境下将他汀类物质以羟酸或内酯形式萃取出来；(3)将萃取液与发酵液分离；(4)浓缩包含他汀类物质的有机萃取剂，同时他汀类形成内酷；(5)碱(pH7. 5-10NH40H、l-5% (w/w) Na2CO3或NaHCO3)溶液预处理，結晶。在此发明中，发酵液预处理中没有包括过滤菌渣，直接在发酵液中进行萃取，消耗大量的有机溶剂；且调酸耗用的酸量大，水相排放时要用大量的碱中和，给环保带来压力，原材料成本提高。碱性条件下的萃取收率低，给整个的提取精制收率带来直接的影响。该方法公开的说明书中，最优的美伐他汀粗品收率为78%。李敏在《美伐他汀提取エ艺研究》公开了干法和湿法浸提两种美伐他汀的提取エ艺。干法提取美伐他汀的步骤为发酵液用稀酸处理后过滤，湿菌丝通过气流干燥，干燥方式有进风140°C气流干燥、进风80°C气流干燥和进风160°C闪蒸三种，美伐他汀的环化在气流干燥的同时完成，干燥后的菌渣(含水量低于5% )用于萃取等后续的エ艺。干法提取美伐他汀所获得的美伐他汀粗品收率仅为60%。而湿法浸提提取美伐他汀的步骤为发酵液中的菌丝经过滤得到后，用こ酸丁酷，浸提4小时，浸提比例为I : 7;第二次浸提时间为2小时，物料比为I : 4;提取浓缩液真空减压蒸馏的方式进行，生产过程中适宜的闭环温度为70-80°C，时间为6小吋。通过实验确定浸提的最佳溶剂、最佳条件，所获得的美伐他汀粗品收率仅为70%。从以上可以看出，现在的美伐他汀分离提取エ艺都存在着从发酵液中提取美伐他汀总收率低的问题，美伐他汀较低的收率不仅会造成极大的浪费，而且会无形的提高其生产升本，不利于以美伐他汀为前体的他汀类药物价格的降低，从而増大该类药物使用者的经济压力。
发明内容
本发明的目的是提供一种收率高的、生产周期短、适应大規模生产的从微生物发酵液中分离提取美伐他汀或其药学上可接受的盐的方法。本发明创造性的在萃取菌渣前，引入吹干菌渣的步骤，惊喜地发现该步骤可以显著的提高美伐他汀粗品的收率。过滤后的菌渣残留水、溶于水的一些亲水杂质和容易挥发的杂质等，这些杂质会直接影响后期的萃取和环化效率，延长环化和萃取エ艺的时间。菌渣吹干过程中，溶于水的一些亲水杂质和容易挥发的杂质等随着水蒸气被移除，另外，吹干后的菌渣重量減少，可以减少后续萃取中使用有机溶剂的量，同时缩短萃取环化的时间。具体的，本发明的方法包括以下步骤(I)将含美伐他汀的发酵液用酸进行预处理，过滤，菌渣吹干酸化后的发酵液pH值优选值为2. 0-6. O ;菌渣吹干后，含水量为5% -76%。(2)菌渣与萃取溶剂投入萃取罐中，保温环化，过滤洗涤萃取溶剂为疏水性有机溶剂，选自但是不限于こ酸丁酷、こ酸こ酷、こ酸丙酷、甲酸こ酷、己酮、ニ氯甲烷、氯仿、四氯化碳、ニ氯こ烷、甲苯、苯甲醇中的一种或者几种。萃取溶剂与菌渣的投放比例为，萃取溶剂的总投入量(V/W)相当于菌渣总投入量的 I. 0-10. O 倍(ν/w)。(3)萃取滤液浓缩，結晶，过滤烘干得美伐他汀优选的，浓缩和结晶两个步骤之间，浓缩液中加入同样温度的美伐他汀溶解度低的有机溶剂，保温搅拌，結晶。过滤，烘干粗湿品。美伐他汀溶解度低的有机溶剂，选自丙酮、丁酷、正己烷、こ醇中的ー种或几种。结晶过滤获得的滤饼抽真空，用美伐他汀溶解度低的有机溶剂浸泡数次后抽干，烘干粗湿品。优选的，本发明的方法包括以下步骤(I)将含美伐他汀的发酵液用酸进行预处理，过滤，菌渣吹干
酸化后的发酵液pH值为3. 0-4. 5 ;菌渣吹干后，含水量为40% -70%。(2)菌渣与萃取溶剂投入萃取罐中，保温环化，过滤洗涤萃取溶剂为疏水性有机溶剂，选自氯仿、四氯化碳、ニ氯こ烷、甲苯、苯甲醇中的一种或者几种。萃取溶剂与菌渣的投放比例为，萃取溶剂的总投入量(V/W)相当于菌渣总投入量的 3. 0-8. O 倍(V/W)。(3)萃取滤液浓缩，結晶，过滤烘干得美伐他汀优选的，浓缩和结晶两个步骤之间，浓缩液中加入同样温度的美伐他汀溶解度低的有机溶剂，保温搅拌，結晶。过滤，烘干粗湿品。美伐他汀溶解度低的有机溶剂，选自丙酮、丁酷、正己烷、こ醇中的ー种或几种。 结晶过滤获得的滤饼抽真空，用美伐他汀溶解度低的有机溶剂浸泡数次后抽干，烘干粗湿品。更优选的，本发明的方法包括以下步骤(I)将含美伐他汀的发酵液用酸进行预处理，过滤，菌渣吹干、酸化后的发酵液pH值为3. 0-4. 5 ;菌渣吹干后，含水量为50% -60%。(2)菌渣与萃取溶剂投入萃取罐中，保温环化，过滤洗涤萃取溶剂为疏水性有机溶剂，选自氯仿、甲苯、苯甲醇中的一种或者几种。萃取溶剂与菌渣的投放比例为，萃取溶剂的总投入量(V/W)相当于菌渣总投入量的 3. 0-8. O 倍(V/W)。(3)萃取滤液浓缩，結晶，过滤烘干得美伐他汀优选的，浓缩和结晶两个步骤之间，浓缩液中加入同样温度的美伐他汀溶解度低的有机溶剂，保温搅拌，結晶。过滤，烘干粗湿品。美伐他汀溶解度低的有机溶剂，选自丙酮、丁酷、正己烷、こ醇中的ー种或几种。结晶过滤获得的滤饼抽真空，用美伐他汀溶解度低的有机溶剂浸泡数次后抽干，烘干粗湿品。
附图是本发明方法的エ艺流程图。
具体实施例方式以下參照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。实施例I实验A5L的醋酸异丁酯和5L水混合，O. 5h后连续的向含美伐他汀发酵液(IOL)中加入。用浓NaOH调节pH9. 0-9. 6。将混合物加热到60°C并维持此温度2小时。有机相和水相用逆流分离法分离。分离的时候加入十二烷基硫酸钠帮助乳化混合物。用硫酸调节纯化后的发酵液的pH2. 0-4. 5。连续的向发酵液中加入5L醋酸异丁酷，包含美伐他汀的醋酸异丁酯相被连续的分离。
在真空下将醋酸异丁酯相浓缩到约150mL。将浓缩液稀释到800mL，用NaHCO3洗涤。洗涤后浓缩液再次浓缩到150mL。浓缩液冷却到0-5°C。过夜后得到美伐他汀。实验B5L的醋酸异丁酯和5L水混合，O. 5h后连续的向含美伐他汀发酵液(IOL)中加入。将混合物加热到60°C并维持此温度2小吋。有机相和水相用逆流分离法分离。分离的时候加入十~■烧基硫酸纳帮助乳化混合物。用硫酸调节纯化后的发酵液的pH2. 0-4. 5。连续的向发酵液中加入5L醋酸异丁酷，包含美伐他汀的醋酸异丁酯相被连续的分离。在真空下将醋酸异丁酯相浓缩到约150mL。将浓缩液稀释到800mL，用NaHCO3洗涤。洗涤后浓缩液再次浓缩到150mL。浓缩液冷却到0-5°C。过夜后得到美伐他汀。实验C 5L的醋酸异丁酯和5L水混合，O. 5h后连续的向美伐他汀发酵液(IOL)中加入。用浓NaOH调节pH9. 0-9. 6。将混合物加热到60°C并维持此温度2小时。有机相和水相用逆流分离法分离。分离的时候加入十二烷基硫酸钠帮助乳化混合物。用硫酸调节纯化后的发酵液的pH2. 0-4. 5。连续的向发酵液中加入5L醋酸异丁酷，包含美伐他汀的醋酸异丁酯相被连续的分离。在真空下将醋酸异丁酯相浓缩。浓缩液冷却到0_5°C。过夜后得到美伐他汀粗品。实验D參照《美伐他汀提取エ艺研究》；李敏；2007年天津大学硕士学位论文中干法提取美伐他汀的流程操作。发酵液(IOL)中的菌丝经过滤得到后，用こ酸丁酷，在温度35-40°C，浸提4小吋，浸提比例为I : 7;第二次浸提时间为2小时，物料比为I : 4 ;提取浓缩液真空减压蒸馏的方式进行，生产过程中适宜的闭环温度为70-80°C，时间为6小时，包含美伐他汀的こ酸丁酷相被连续的分离，浓缩液冷却到0-5°C。过夜后得到美伐他汀粗品。实验E參照《美伐他汀提取エ艺研究》；李敏；2007年天津大学硕士学位论文中干法提取美伐他汀的流程操作。发酵液(IOL)中的菌丝经过滤得到后，用温度高于80°C的气流干燥，干菌丝用こ酸丁酷，在温度35-40°C，浸提4小时，浸提比例为I : 7;第二次浸提时间为2小时，物料比为I : 4;提取浓缩液真空减压蒸馏的方式进行，包含美伐他汀的こ酸丁酯相被连续的分离，浓缩液冷却到0-5°C。过夜后得到美伐他汀粗品。实验FIOL发酵液用磷酸调节pH值至3. 7，过滤得到的菌渣吹干至菌渣的含水量为13%，滤液检测后进行处理。将吹干的菌渣与甲苯投入到萃取罐中，甲苯与菌渣的比例为6 I (V/W)，环化，环化所花费时间为8. 5小时，过滤，用甲苯洗涤滤渣3次，并将洗涤液与滤液混合并静置，完成萃取。吹干废渣，并将废渣与萃取的废液进行环保处理。萃取滤液减压蒸馏，回收甲苯和水，减压蒸馏结束后，降低浓缩液温度至15°C，カロ入同样温度的正己烷，保温搅拌，結晶。过滤，滤饼抽真空，用正己烷浸泡后抽干，50°C左右烘干粗湿品。
实验A-F美伐他汀粗品收率列表
权利要求
1.一种从发酵液中离或纯化美伐他汀或其药学上可接受的盐的方法，其特征在于该方法包括以下步骤(1)将含美伐他汀的发酵液用酸进行预处理，过滤，菌渣吹干；(2)菌渣与萃取溶剂投入萃取罐中，保温环化，过滤洗涤；(3)浓缩，結晶，过滤烘干得美伐他汀粗品。
2.根据权利要求I所述方法，其特征在于步骤(I)预处理所得的酸化发酵液PH值为2.0_6· O ο
3.根据权利要求I所述方法，其特征在于步骤(I)预处理所得的酸化发酵液PH值为3.0_4· 5 ο
4.根据权利要求I所述方法，其特征在于步骤(I)菌渣吹干后，含水量为5%-76%。
5.根据权利要求I所述方法，其特征在于步骤(I)菌渣吹干后，含水量为40%-70%。
6.根据权利要求I所述方法，其特征在于步骤(I)菌渣吹干后，含水量为50%-60%。
7.根据权利要求I所述方法，其特征在于步骤(3)结晶后，加入了美伐他汀溶解度低的有机溶剂，选自丙酮、丁酷、正己烷、こ醇中的ー种或几种。
8.根据权利要求I所述方法，其特征在于步骤(3)结晶过滤获得的滤饼抽真空，用有机溶剂浸泡后抽干，烘干粗湿品。
全文摘要
本发明提供一种从发酵液中纯化提取美伐他汀的方法，其特征在于将含美伐他汀的发酵液用酸进行预处理，菌渣进行吹干处理。本发明提供的方法缩生产周期，降低成本，同时美伐他汀粗品收率提升。
文档编号C07D309/30GK102827123SQ20121028140
公开日2012年12月19日 申请日期2012年8月2日 优先权日2012年8月2日
发明者唐阳刚, 李敬辉, 张起智, 卢创, 向双 申请人:丽珠集团新北江制药股份有限公司