专利名称：一种从赤非夹竹桃木中提取阿枯明的方法
技术领域：
本发明属于中药化学领域，涉及ー种从赤非夾竹桃木中提取阿枯明的方法。
背景技术：
阿枯明(Akuammine)，又名阿枯胺，呈细针晶状，是ー种吲哚类生物碱。分子式C22H26N2O4,分子量为382. 46。在植物中广泛存在，主要存在于夾竹桃科植物中，如/7icrWiaaklaineana 的种子、Picralima(Stapf) Th&H. Durand 种子、鸭脚树 Tonduziapittieri莖皮、漫长春花Vinca major C. V. Variegata叶中。药理研究表明，阿枯明具有广泛的生理活性。阿枯明具有局麻作用，強度可与可卡因相当，并且具有抗疟作用，对恶性疟原虫D6 (氯喹敏感株)和W2 (耐氯喹株)的ED5tl分别为530ng/ml和1110ng/ml，另外，阿枯明还具有拟5-羟色胺活性。
目前国内外尚未见制备阿枯明的方法报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种高效快速、从赤非夾竹桃木中提取阿枯明的方法。为达到上述目的，本发明采用以下技术方案
一种从赤非夾竹桃木中提取阿枯明的方法，其特征在于包括以下步骤
(1)将赤非夾竹桃木种子破碎后，用4-6倍量的酸醇回流提取2-3次，合并提取液，浓缩得到浓缩液；
(2)将浓缩液加于阳离子树脂柱上，先以水洗脱除杂，再用40-60%こ醇溶液洗脱，检查无生物碱为止，收集洗脱液，浓缩得总生物碱浸膏；
(3)将浸膏与氧化铝粉混合均匀上氧化铝柱，用不同配比的混合有机溶剂分段洗脱并分段收集，收集阿枯明高含量流分，合并后减压浓缩，得阿枯明半成品；
(4)将阿枯明粗品采用制备液相色谱分离纯化，得到阿枯明纯品。步骤(I)中所述酸醇溶液为20%_80%的こ醇或甲醇溶液，盐酸调节醇溶液pH至
2.2-4. 7。步骤(2)中所述阳离子树脂可以是大孔型或凝胶型强酸性阳离子交换树脂，树脂柱径高比为1:6-10。步骤(2)中阳离子树脂柱的上柱液浓度为每ml相当于生药O. 5_4g，上样速度为O. 5-3BV/h，洗脱速度为 3-5BV/h。步骤(3)中所述氧化铝柱填料为中性或碱性氧化铝，粒度为100-400目，混合有机溶剂为氯仿-こ酸こ酷-甲醇，体积比为6:3: f 1:3:6，或石油醚-こ酸こ酷，体积比为15:1-1:1,或石油醚-丙酮，体积比为50:1-1:1，分段收集半成品。步骤(4)中所述制备液相填料为C18，流动相为甲醇-水或こ腈-水，所述流动相中甲醇的体积百分比为60-90%，所述流动相中こ腈的体积百分比为40-65%。本发明的有益效果是本发明步骤少、得率高、操作简便，易于エ业化生；离子交换树脂结合高效制备液相色谱用于阿枯明的分离纯化也属首次，本发明为阿枯明的进ー步开发利用提供了药理原料、理论和实践支持。下面将结合具体实施方式
进ー步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施例方式 实施例I:
取Ikg赤非夾竹桃木种子破碎，用5LpH3. 3的50%こ醇溶液加热回流提取2次，过滤，合并提取液，浓缩至1500ml，离心，上清液以2BV/h加入阳离子交换树脂柱(柱径高比为1:7),先用去离子水洗至流出液无颜色，再用50%こ醇溶液洗脱，检查无生物碱为止，收集洗脱液，浓缩得总生物碱浸膏。将总生物碱浸膏与5倍量的碱性氧化铝混合均匀，55°C以下烘干，加于填充好的中压碱性氧化铝柱，用氯仿-こ酸こ酷-甲醇按体积比6:3:11:3:6洗 脱，分段收集，合并阿枯明流分，浓缩干燥后甲醇溶解，经高效制备液相色谱分离，柱填料为C18，流动相为こ腈-水(47:53)，检测波长为242nm，紫外检测器在线监测，针对性收集阿枯明的制备流分溶液，减压回收试剂得4. 9g阿枯明晶体，含量96. 5%。实施例2
取Ikg赤非夾竹桃木种子破碎，用6LpH4. 2的70%こ醇溶液加热回流提取3次，过滤，合并提取液，浓缩至1000ml，离心，上清液以2. 5BV/h加入阳离子交换树脂柱(柱径高比为1:6)，先用去离子水洗至流出液无颜色，再用55%こ醇溶液洗脱，检查无生物碱为止，收集洗脱液，浓缩得总生物碱浸膏。将总生物碱浸膏与10倍量的碱性氧化铝混合均匀，55°C以下烘干，加于填充好的中压碱性氧化铝柱，用石油醚-こ酸こ酯按体积比15:1-1:1洗脱，分段收集，合并阿枯明流分，浓缩干燥后甲醇溶解，经高效制备液相色谱分离，柱填料为C18，流动相为甲醇-水(66:34)，检测波长为242nm，紫外检测器在线监测，针对性收集阿枯明的制备流分溶液，减压回收试剂得4. 2g阿枯明晶体，含量98. 2%。实施例3:
取Ikg赤非夾竹桃木种子破碎，用4LpH2. 2的60%甲醇溶液加热回流提取3次，过滤，合并提取液，浓缩至2000ml，离心，上清液以O. 8BV/h加入阳离子交换树脂柱(柱径高比为1:10)，先用去离子水洗至流出液无颜色，再用60%こ醇溶液洗脱，检查无生物碱为止，收集洗脱液，浓缩得总生物碱浸膏。将总生物碱浸膏与8倍量的中性氧化铝混合均匀，55°C以下烘干，加于填充好的中压中性氧化铝柱，用石油醚-丙酮按体积比50:1-1:1洗脱，分段收集，合并阿枯明流分，浓缩干燥后甲醇溶解，经高效制备液相色谱分离，柱填料为C18，流动相为こ腈-水(52:48 )，检测波长为242nm，紫外检测器在线监测，针对性收集阿枯明的制备流分溶液，减压回收试剂得4. 5g阿枯明晶体，含量96. 8%。实施例4:
取Ikg赤非夾竹桃木种子破碎，用6LpH4. 5的80%甲醇溶液加热回流提取2次，过滤，合并提取液，浓缩至800ml，离心，上清液以lBV/h加入阳离子交换树脂柱(柱径高比为1:8)，先用去离子水洗至流出液无颜色，再用45%こ醇溶液洗脱，检查无生物碱为止，收集洗脱液，浓缩得总生物碱浸膏。将总生物碱浸膏与6倍量的中性氧化铝混合均匀，55°C以下烘干，加于填充好的中压中性氧化铝柱，用氯仿-こ酸こ酷-甲醇按体积比6:3:11:3:6洗脱，分段收集，合并阿枯明流分，浓缩干燥后甲醇溶解，经高效制备液相色谱分离，柱填料为C18，流动相为甲醇-水(73:27)，检测波长为242nm，紫外检测器在线监测，针对性收集阿枯 明的制备流分溶液，减压回收试剂得4. 8g阿枯明晶体，含量97. 3%。
权利要求
1.一种从赤非夹竹桃木中提取阿枯明的方法，其特征在于包括以下步骤 (1)将赤非夹竹桃木种子破碎后，用4-6倍量的酸醇回流提取2-3次，合并提取液，浓缩得到浓缩液； (2)将浓缩液加于阳离子树脂柱上，先以水洗脱除杂，再用40-60%乙醇溶液洗脱，检查无生物碱为止，收集洗脱液，浓缩得总生物碱浸膏； (3)将浸膏与氧化铝粉混合均匀上氧化铝柱，用不同配比的混合有机溶剂分段洗脱并分段收集，收集阿枯明高含量流分，合并后减压浓缩，得阿枯明半成品； (4)将阿枯明粗品采用制备液相色谱分离纯化，得到阿枯明纯品。
2.如权利要求I所述的一种从赤非夹竹桃木中提取阿枯明的方法，其特征在于步骤Cl)中所述酸醇溶液为20%-80%的乙醇或甲醇溶液，盐酸调节醇溶液pH至2. 2-4. 7。
3.如权利要求I所述的一种从赤非夹竹桃木中提取阿枯明的方法，其特征在于步骤(2)中所述阳离子树脂可以是大孔型或凝胶型强酸性阳离子交换树脂，树脂柱径高比为1:6-10。
4.如权利要求I所述的一种从赤非夹竹桃木中提取阿枯明的方法，其特征在于步骤(2)中阳离子树脂柱的上柱液浓度为每ml相当于生药O. 5-4g，上样速度为O. 5_3BV/h，洗脱速度为3-5BV/h。
5.如权利要求I所述的一种从赤非夹竹桃木中提取阿枯明的方法，其特征在于步骤(3)中所述氧化铝柱填料为中性或碱性氧化铝，粒度为100-400目，混合有机溶剂为氯仿-乙酸乙酯-甲醇，体积比为6:3: f 1:3: 6，或石油醚-乙酸乙酯，体积比为15:1-1: 1，或石油醚-丙酮，体积比为50:1-1: 1，分段收集半成品。
6.如权利要求I所述的一种从赤非夹竹桃木中提取阿枯明的方法，其特征在于步骤(4)中所述制备液相填料为C18，流动相为甲醇-水或乙腈-水，所述流动相中甲醇的体积百分比为60-90%，所述流动相中乙腈的体积百分比为40-65%。
全文摘要
本发明公开了一种从赤非夹竹桃木中提取阿枯明的方法，其特征在于工艺步骤包括将赤非夹竹桃木种子破碎，用酸醇回流提取，提取液浓缩后加于阳离子树脂柱上，先以水洗脱除杂，再用0.5%-15%酸液洗脱，检查无生物碱为止，收集洗脱液，加碱中和，经脱盐处理，浓缩得总生物碱浸膏，将浸膏与氧化铝粉混合均匀上氧化铝柱，用不同配比的混合有机溶剂分段洗脱并分段收集，收集阿枯明高含量流分，合并后减压浓缩，最后采用制备液相色谱分离纯化，得到高含量阿枯明产品。本发明提取分离阿枯明快速、高效，产品含量高，并可有效降低成本和减少环境污染。
文档编号C07D491/22GK102827178SQ20121035059
公开日2012年12月19日 申请日期2012年9月20日 优先权日2012年9月20日
发明者苏刘花 申请人:南京泽朗农业发展有限公司