专利名称：一种特利回生的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种特利回生的制备方法，尤其是涉及一种采用制备型液相色谱方法制备特利回生的方法。
背景技术：
特利回生(Trewiasine)，分子式为C37H52CIN3qO11,分子量为750. 29，CAS登录号78987-26-5。特利回生是大戟科植物滑桃树nudiflora L.种子中分离得到的一种大环生物碱。滑桃树又名红背叶，主要化学成分为具有抗肿瘤活性的美登木素类化合物。有文献报道，从印度采集的滑桃树种子的乙醇提取物对体外KB细胞和实验动物体内淋巴细胞白血病P388显示很强的活性，并从中分离得到特利回生等美登木素类肿瘤抑制剂。药理研究表明，特利回生对人体肿瘤细胞有明显细胞毒活性，还具有抗肿瘤作用， 2.5 μ g/kg时，对小鼠艾氏癌的延命率为183%，对白血病小鼠也具有一定的治愈率。另外，对腹水型S180、肝癌、U14及Lewis肺癌等均有明显疗效。国内目前主要采用脱脂、反复硅胶柱层析等方法提取制备，如李炳钧等在发表的文献“滑桃树种子的美登素类成分”中报道，采用石油醚脱脂、乙醇提取、有机溶剂反复萃取、反复硅胶柱层析等步骤得到美登素类成分。该方法使用大量有毒试剂，操作不安全，不适用于工业化生产。
发明内容
本发明的目的是提供一种快速、简便、环保的制备特利回生的方法。本发明的目的是通过以下技术方案来实现的
A.取滑桃树种子粉碎，加质量百分比浓度为1-3%的酸性水溶液浸泡提取2-3次，过滤得到浸出液；
B.浸出液加入阳离子交换树脂中吸附，柱中的流出液继续用于浸泡滑桃树种子过滤后的浸出液再上阳离子交换树脂柱吸附，如此循环浸泡提取至滑桃树种子粉中的生物碱浸提完全;
C.待离子树脂吸附饱和后，用75-85%乙醇/氨水溶液洗脱，洗脱液减压浓缩干燥得粗
品;
D.上述粗品采用制备型液相色谱分离，紫外检测器在线监测，收集目标流分，减压浓缩至干得粗晶；
E.将上述粗晶用正己烷-乙酸乙酯溶解结晶，于_1(T-5°C条件下放置结晶，滤出晶体，干燥得特利回生。步骤A中所述酸性水溶液为盐酸或硫酸水溶液。步骤B中所述阳离子交换树脂可选732型、DOOl型、HZ002型或JK006型。步骤D中所述制备型液相色谱分离，用二氯甲烷-乙醇作为流动相进行梯度洗脱，薄层层析跟踪制备色谱分离情况，合并特利回生流分。
本发明技术优势在于方法利用酸水浸泡提取特利回生，杂质溶出少，再经阳离子树脂富集和制备型液相色谱分离，步骤简单易操作，可以快速得到高含量产品，并可连续生产。
具体实施例方式 下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明。实施例I :
取IOkg滑桃树种子粉碎成60目粉末，投入提取罐中，加入8倍量质量百分比浓度为I. 5%的盐酸水溶液常温浸泡提取5小时，将浸出液过滤后装上732型阳离子交换树脂柱中吸附，从离子交换树脂柱中流出的下注液放入到提取罐中继续浸提滑桃树种子粉，过滤后的浸出液再上离子交换树脂柱吸附，如此循环3次，至滑桃树种子粉中的生物碱浸提完全。待柱中的离子树脂吸附饱和后，取5BV75%乙醇/氨水溶液洗脱，收集洗脱液减压浓缩干燥得粗品。以二氯甲烷-乙醇溶液为流动相梯度洗脱，用流动相溶解粗品，控制流速为50ml/min，紫外在线跟踪柱层析分离情况，合并富含特利回生主流分，低温减压浓缩干燥，用正己烷-乙酸乙酯溶解结晶，-1(T-5°C条件下放置结晶，滤出晶体，干燥得特利回生301mg，含量98. 6%。实施例2:
取IOkg滑桃树种子粉碎成60目粉末，投入提取罐中，加入10倍量质量百分比浓度为2%的硫酸水溶液常温浸泡提取3小时，将浸出液过滤后装上JK006型阳离子交换树脂柱中吸附，从离子交换树脂柱中流出的下注液放入到提取罐中继续浸提滑桃树种子粉，过滤后的浸出液再上离子交换树脂柱吸附，如此循环5次，至滑桃树种子粉中的生物碱浸提完全。待柱中的离子树脂吸附饱和后，取6BV80%乙醇/氨水溶液洗脱，收集洗脱液减压浓缩干燥得粗品。以二氯甲烷-乙醇溶液为流动相梯度洗脱，用流动相溶解粗品，控制流速为40ml/min，紫外在线跟踪柱层析分离情况，合并富含特利回生主流分，低温减压浓缩干燥，用正己烷-乙酸乙酯溶解结晶，-1(T-5°C条件下放置结晶，滤出晶体，干燥得特利回生294mg，含量98. 4%。实施例3
取20kg滑桃树种子粉碎成100目粉末，投入提取罐中，加入10倍量质量百分比浓度为3%的硫酸水溶液常温浸泡提取2小时，将浸出液过滤后装上HZ002型阳离子交换树脂柱中吸附，从离子交换树脂柱中流出的下注液放入到提取罐中继续浸提滑桃树种子粉，过滤后的浸出液再上离子交换树脂柱吸附，如此循环3次，至滑桃树种子粉中的生物碱浸提完全。待柱中的离子树脂吸附饱和后，取4BV85%乙醇/氨水溶液洗脱，收集洗脱液减压浓缩干燥得粗品。以二氯甲烷-乙醇溶液为流动相梯度洗脱，用流动相溶解粗品，控制流速为30ml/min，紫外在线跟踪柱层析分离情况，合并富含特利回生主流分，低温减压浓缩干燥，用正己烷-乙酸乙酯溶解结晶，-1(T-5°C条件下放置结晶，滤出晶体，干燥得特利回生596mg，含量98. 2%。实施例4:
取25kg滑桃树种子粉碎成80目粉末，投入提取罐中，加入12倍量质量百分比浓度为1%的盐酸水溶液常温浸泡提取4小时，将浸出液过滤后装上DOOl型阳离子交换树脂柱中吸附，从离子交换树脂柱中流出的下注液放入到提取罐中继续浸提滑桃树种子粉，过滤后的浸出液再上离子交换树脂柱吸附，如此循环4次，至滑桃树种子粉中的生物碱浸提完全。待柱中的离子树脂吸附饱和后，取6BV80%乙醇/氨水溶液洗脱，收集洗脱液减压浓缩干燥得粗品。以二氯甲烷-乙醇溶液为流动相梯度洗脱，用流动相溶解粗品，控制流速为40ml/min，紫外在线跟踪柱层析分离情况，合并富含特利回生主流分，低温 减压浓缩干燥，用正己烷-乙酸乙酯溶解结晶，-1(T-5°C条件下放置结晶，滤出晶体，干燥得特利回生737mg，含量98. 7%。
权利要求
1.一种特利回生的制备方法，其特征在于以下步骤 A.取滑桃树种子粉碎，加质量百分比浓度为1-3%的酸性水溶液浸泡提取2-3次，过滤得到浸出液； B.浸出液加入阳离子交换树脂中吸附，柱中的流出液继续用于浸泡滑桃树种子过滤后的浸出液再上阳离子交换树脂柱吸附，如此循环浸泡提取至滑桃树种子粉中的生物碱浸提完全; C.待离子树脂吸附饱和后，用75-85%こ醇/氨水溶液洗脱，洗脱液减压浓缩干燥得粗品; D.上述粗品采用制备型液相色谱分离，紫外检测器在线监测，收集目标流分，减压浓缩至干得粗晶； E.将上述粗晶用正己烷-こ酸こ酯溶解结晶，于-1(T-5°C条件下放置結晶，滤出晶体，干燥得特利回生。
2.根据权利要求I所述的特利回生的制备方法，其特征在于步骤A中所述酸性水溶液为盐酸或硫酸水溶液。
3.根据权利要求I所述的特利回生的制备方法，其特征在于步骤B中所述阳离子交換树脂可选732型、DOOI型、HZ002型或JK006型。
4.根据权利要求I所述的特利回生的制备方法，其特征在于步骤D中所述制备型液相色谱分离，用ニ氯甲烷-こ醇作为流动相进行梯度洗脱，薄层层析跟踪制备色谱分离情況，合并特利回生流分。
全文摘要
一种特利回生的制备方法，方法步骤是将滑桃树种子粉碎，加酸水浸泡提取得到提取液，提取液加入阳离子交换树脂中吸附洗脱，洗脱液减压浓缩得粗品，采用制备型液相色谱分离，减压干燥得特利回生。本方法所用流动相可回收循环使用，环保经济，适合工业化生产。
文档编号C07D498/18GK102863459SQ201210357078
公开日2013年1月9日 申请日期2012年9月24日 优先权日2012年9月24日
发明者苏刘花 申请人:南京泽朗农业发展有限公司