专利名称：一种弥洛松甙的提纯工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种弥洛松甙的提纯工艺，属于医药领域。
背景技术：
弥洛松式来源于罗汉松科(Podocarpaceae)取洛敗Prumnopitys ferruginea (D.^Laubenf.的枝叶。弥洛松甙可溶于醇类有机试剂，溶于水，极性大。现代药理研究表明弥洛松甙具有多种生活性细胞毒活性，对P388细胞的IC50为19 μ g/ml，对猴肾细胞株(BSC)也有活性；抗菌作用，在150μ g/disk时，对大肠杆菌和枯草杆菌的抑菌圈直径(mm)为3和6 ;抗真菌活性。在150 μ g/disk时，对白色念珠菌和须发癣菌的抑菌圈直径(mm)为I和9。
目前尚未见弥洛松甙工业分离制备方法的相关报道。
发明内容
本发明目的是提供一种简单、提率较高的弥洛松甙提纯工艺。本发明是通过以下技术方案实现的。一种弥洛松甙的提纯工艺，其特征在于
1)把原料粉碎至20-80目，加入5-15倍量70%乙醇溶液，微波提取l_2h，提取1_3次，合并提取液；
2)上述提取液减压回收乙醇至浸膏状，加水溶解，滤出不溶物，滤液加入大孔树脂柱吸附，先水洗至糖反应呈阴性，再用4-7BV40-50%乙醇溶液洗脱有效成分，收集洗脱液；
3)上述洗脱液加入超滤膜超滤，透过液再加入纳滤膜浓缩，得浓缩液；
4)上述浓缩液通过制备型液相色谱分离纯化得到弥洛松甙。所述步骤I)中微波提取功率为Ι-lOkw，提取温度控制在40_50°C。所述步骤2)中大孔树脂可选AB-8、NAK-II、ADS-7或SPD100中的一种。所述步骤3)中超滤膜为截留分子量3000-10000的中空复合膜，纳滤膜选截留分子量100的中空复合膜，进口压力控制O. 4-0. 7Mpa。所述步骤4)中制备型液相色谱的流动相为33%甲醇溶液。本发明采用大孔树脂吸附，富集量大，除杂质效果好；洗脱液用生物膜截流浓缩，能耗低，并且避免温度过高发生物质变化；采用制备型液相色谱法，制备量大，产品纯度高，可实现连续生产；整个工艺操作简单，易挥发毒性溶剂使用量少，对操作人员危害程度减小。
具体实施例方式 下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施例。实施例I :
将弥洛松的枝叶粉碎至20目，取5kg投入微波提取罐，加入25L70%乙醇溶液微波提取lh，微波提取功率为10kW，提取温度控制在50°C，提取3次，合并提取液，减压回收乙醇至浸膏状加水溶解，滤出不溶物，滤液加入5L NAK-II大孔树脂柱吸附，先水洗至糖反应呈阴性，再用20L40%乙醇溶液洗脱有效成分，收集洗脱液，洗脱液加入截留分子量3000的中空复合膜超滤膜超滤，透过液再加入截留分子量100的中空复合纳滤膜浓缩，进口压力控制O. 5Mpa得浓缩液；以反相C18硅胶键合固定相为色谱柱填料，以33%甲醇溶液为流动相，将浓缩液加少量流动相溶解，进样，紫外在线监测，检测波长为213nm，收集目标成分，浓缩，冷冻干燥即得弥洛松式，含量为95. 7%。实施例2
将弥洛松的枝叶粉碎至60目，取5kg投入微波提取罐，加入75L70%乙醇溶液微波提取lh，微波提取功率为lkW，提取温度控制在40°C，提取I次，合并提取液，减压回收乙醇至浸膏状加水溶解，滤出不溶物，滤液加入5L AB-8大孔树脂柱吸附，先水洗至糖反应呈阴性，再用35L50%乙醇溶液洗脱有效成分，收集洗脱液，洗脱液加入截留分子量10000的中空复合膜超滤膜超滤，透过液再加入截留分子量100的中空复合纳滤膜浓缩，进口压力控制 O. 5Mpa得浓缩液；以反相C18硅胶键合固定相为色谱柱填料，以33%甲醇溶液为流动相，将浓缩液加少量流动相溶解，进样，紫外在线监测，检测波长为213nm，收集目标成分，浓缩，冷冻干燥即得弥洛松式，含量为96. 3%。实施例3:
将弥洛松的枝叶粉碎至80目，取5kg投入微波提取罐，加入25L70%乙醇溶液微波提取2h,微波提取功率为5kW，提取温度控制在45°C，提取3次，合并提取液减压回收乙醇至浸膏状加水溶解，滤出不溶物，滤液加入5L SPD100大孔树脂柱吸附，先水洗至糖反应呈阴性，再用28L45%乙醇溶液洗脱有效成分，收集洗脱液，洗脱液加入截留分子量6000的中空复合膜超滤膜超滤，透过液再加入截留分子量100的中空复合纳滤膜浓缩，进口压力控制O. 6Mpa得浓缩液；以反相C18硅胶键合固定相为色谱柱填料，以33%甲醇溶液为流动相，将浓缩液加少量流动相溶解，进样，紫外在线监测，检测波长为213nm，收集目标成分，浓缩，冷冻干燥即得弥洛松甙，含量为95. 5%。实施例4:
将弥洛松的枝叶粉碎至60目，取5kg投入微波提取罐，加入30L70%乙醇溶液微波提取I. 5h，微波提取功率为4kW，提取温度控制在50°C，提取3次，合并提取液减压回收乙醇至浸膏状加水溶解，滤出不溶物，滤液加入5L ADS-7大孔树脂柱吸附，先水洗至糖反应呈阴性，再用30L40%乙醇溶液洗脱有效成分，收集洗脱液，洗脱液加入截留分子量3000的中空复合膜超滤膜超滤，透过液再加入截留分子量100的中空复合纳滤膜浓缩，进口压力控制O. 4Mpa得浓缩液；以反相C18硅胶键合固定相为色谱柱填料，以33%甲醇溶液为流动相，将浓缩液加少量流动相溶解，进样，紫外在线监测，检测波长为213nm，收集目标成分，浓缩，冷冻干燥即得弥洛松式，含量为95. 2%。实施例5:
将弥洛松的枝叶粉碎至40目，取5kg投入微波提取罐，加入50L70%乙醇溶液微波提取Ih,微波提取功率为8kW，提取温度控制在50°C，提取2次，合并提取液减压回收乙醇至浸膏状加水溶解，滤出不溶物，滤液加入5L AB-8大孔树脂柱吸附，先水洗至糖反应呈阴性，再用25L40%乙醇溶液洗脱有效成分，收集洗脱液，洗脱液加入截留分子量6000的中空复合膜超滤膜超滤，透过液再加入截留分子量100的中空复合纳滤膜浓缩，进口压力控制O. 4Mpa得浓缩液；以反相C18硅胶键合固定相为色谱柱填料，以33%甲醇溶液为流动相，将浓缩液加少量流动相溶解，进样，紫外在线监测，检测波长为213nm，收集目标成分，浓缩，冷冻干燥即得弥洛松甙，含量为95. 9%。 ·
权利要求
1.一种弥洛松甙的提纯工艺，其特征在于包含以下步骤 1)把原料粉碎至20-80目，加入5-15倍量70%乙醇溶液，微波提取l_2h，提取1_3次，合并提取液； 2)上述提取液减压回收乙醇至浸膏状，加水溶解，滤出不溶物，滤液加入大孔树脂柱吸附，先水洗至糖反应呈阴性，再用4-7BV40-50%乙醇溶液洗脱有效成分，收集洗脱液； 3)上述洗脱液加入超滤膜超滤，透过液再加入纳滤膜浓缩，得浓缩液； 4)上述浓缩液通过制备型液相色谱分离纯化得到弥洛松甙。
2.根据权利要求I所述的弥洛松甙提纯工艺，其特征在于所述步骤I)中微波提取功率为Ι-lOkw，提取温度控制在40-50°C。
3.根据权利要求I所述的弥洛松甙提纯工艺，其特征在于所述步骤2)中大孔树脂可选AB-8、NAK-II、ADS-7 或 SPD100 中的一种。
4.根据权利要求I所述的弥洛松甙提纯工艺，其特征在于所述步骤3)中超滤膜为截留分子量3000-10000的中空复合膜，纳滤膜选截留分子量100的中空复合膜，进口压力控制O.4-0. 7Mpa。
5.根据权利要求I所述的弥洛松甙提纯工艺，其特征在于所述步骤4)中制备型液相色谱的流动相为33%甲醇溶液。
全文摘要
本发明公开了一种弥洛松甙的提纯工艺，方法是以弥洛松的枝叶为原料，加入乙醇溶液，微波提取2-3次，提取液回收乙醇，浸膏加水分散，加入极性大孔树脂树脂柱吸附，40-50%乙醇洗脱，洗脱液通过超滤膜超滤，纳滤膜浓缩，浓缩液经过制备型液相色谱分离得到弥洛松甙。本发明所述方法的先进性和实用价值在于，应用本方法所制备的弥洛松甙纯度高，方法简便实用。
文档编号C07H1/08GK102827217SQ20121037196
公开日2012年12月19日 申请日期2012年9月29日 优先权日2012年9月29日
发明者刘东锋, 万冬梅 申请人:南京泽朗医药科技有限公司