一种甜菊糖苷St的工业高效液相色谱精制方法
【专利摘要】本发明属于天然产物提取领域，采用甜叶菊提取物粗品为原料，通过HPLC优化条件得到合适的流动相和柱分离条件，进一步放大到工业制备级液相色谱分离系统，精制得到高纯度的甜菊糖苷St。本发明的优点是，粗品使用工业制备级液相色谱分离制备所需物质，可达到较好的分离提纯效果，所需溶剂成本低，操作简单，周期短，效率高，纯度可达99.5%以上。
【专利说明】一种甜菊糖苷St的工业高效液相色谱精制方法
【技术领域】
[0001]本发明属于天然产物提取领域，具体涉及一种甜菊糖苷的制备方法。
【背景技术】
[0002]甜菊糖苷(Stevia)又称作甜菊糖(Stevia sugar),甜叶菊叶子提取物,不含糖分和热量。它们是一类具甜味的萜烯类配糖体，色泽白色至微黄色，口感适宜、无异味，是发展前景广阔的新糖源。其中，甜菊糖苷St成分占糖苷总量的60%~70%，甜度为蔗糖的300倍，是我国卫生部批准使用的甜味剂，其天然低热值并且非常接近蔗糖口味。是继甘蔗、甜菜糖之外第三种有开发价值和健康推崇的天然甜味剂，被国际上誉为“世界第三糖源”。其通常可以采用传统低压层析的方法制备得到甜菊糖苷产品，但是工艺技术耗时长，生产量也受到限制，同时纯度不高。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于针对目前在甜菊糖苷粗品精制过程中所存在的时间长以及纯度不高的问题，提供一种采用工业制备级液相色谱分离系统制备高纯度甜菊糖苷St的新方法，该方法包括以下步骤:
a.将甜菊糖苷粗品与水溶液混合后进行过滤，一般将甜菊糖苷粗品配置成饱和溶液，具体实施时，可根据实际溶解效果进行调整；
b.采用HPLC优化甜菊糖苷St的最佳分离洗脱条件，将其等比例放大，应用在填充十八烷基反相硅胶填料的动态轴向压缩柱上进行分离，在线收集甜菊糖苷St对应谱带的馏分；
c.将步骤b中收集的对应谱带洗脱液减压干燥，即可得到色谱纯为99.5%的甜菊糖苷
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[0004]本发明的有益效果是直接采用提取后的甜菊糖苷粗品来制备甜菊糖苷St，不需要大量的前处理过程，简单、易控制，工艺技术简化，适用于大规模制备。高效液相色谱测定中，总杂质峰小于0.5%，纯度大于99.5%，完全可用于食品和药物的开发。
【专利附图】
【附图说明】
[0005]图1是甜菊糖苷粗品液相色谱法测定图谱。
[0006]图2是用填充10 μ m十八烷基反相硅胶填料的动态轴向压缩柱分离纯化甜菊糖苷的高效液相色谱图，进样400mg。
[0007]图3是用填充10μ m十八烷基反相硅胶填料的动态轴向压缩柱分离纯化甜菊糖苷的高效液相色谱图，进样lg。
[0008]图4是用填充20-45 μ m十八烷基反相硅胶填料的动态轴向压缩柱分离纯化甜菊糖苷的高效液相色谱图，进样lg。
【具体实施方式】[0009]实施例1
1.取400mg甜菊糖苷粗品与水溶液混合,配置成饱和溶液，置于过滤装置中，过滤除去固体颗粒；
2.将甜菊糖苷溶液注入动态轴向压缩柱制备色谱系统，动态轴向压缩柱尺寸为Φ50X 250mm,十八烷基反相硅胶填料粒径为10 μ m,上样量400mg，流动相流速为80ml/min。分离初期，流动相甲醇与水体积比范围为30/70-20/80，洗脱45min后，流动相甲醇与水的体积比切换为90/10，洗脱至65min，使后端杂质冲洗出来，一个分离周期结束。采用的紫外光度检测器的检测波长为210nm，收集保留时间在29~33min的馏分，如图2所示，经HPLC分析纯度≥99.5%。
[0010]实施例2
1.取Ig甜菊糖苷粗品与水溶液混合，配置成饱和溶液，置于过滤装置中，过滤除去固体颗粒；
2.将甜菊糖苷溶液注入动态轴向压缩柱制备色谱系统，动态轴向压缩柱尺寸为Φ 50 X 250mm，十八烷基反相硅胶填料粒径为10 μ m，上样量lg，流动相流速为80ml/min。分离初期，流动相甲醇与水体积比为30/70-20/80，洗脱45min后，流动相甲醇与水体积比切换为90/10，洗脱65min，使后端杂质冲洗出来，一个分离周期结束。采用的紫外光度检测器的检测波长为210nm，收集保留时间在29~33min的馏分，如图3所示，经HPLC分析纯度≥ 99.5%。
[0011]实施例3
1.取Ig甜菊糖苷粗品与水溶液混合，配置成饱和溶液，置于过滤装置中，过滤除去固体颗粒；
2.将甜菊糖苷溶液注入动态轴向压缩柱制备色谱系统，动态轴向压缩柱尺寸为Φ50X 250mm，十八烷基反相硅胶填料粒径为20-45μπι，上样量lg，流动相流速为80ml/min。分离初期，流动相甲醇与水体积比为40/60-20/80，洗脱55min后，流动相甲醇与水体积比切换为90/10，洗脱65min，使后端杂质冲洗出来，一个分离周期结束。采用的紫外光度检测器的检测波长为210nm，收集保留时间在47飞Imin的馏分，如图4所示，经HPLC分析纯度≥99.5%ο
【权利要求】
1.一种甜菊糖苷的制备方法，其特征在于包括以下步骤: (1)将甜菊糖苷粗品与水混合后进行过滤，除去微小的固体不溶物，得到滤液作为分离粗品; (2)将过滤产物通过进样泵或者进样阀注入动态轴向压缩制备色谱系统； (3)采用甲醇和水做流动相，梯度洗脱，将色谱峰对应的流出液进行减压干燥，即可得到高纯度的甜菊糖苷St。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是:所述步骤(2)中，在制备色谱系统中，采用动态轴向压缩柱，规格为Φ50Χ250πιπΦ150Χ250πιπι，且所填充固定相为十八烷基反相硅胶填料，粒径为10 μ m~45 μ m。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征是:所述步骤(3)中，梯度洗脱时，流动相甲醇与水的体积比(V/V)范围为4:6~9:1。
【文档编号】C07H15/256GK103788149SQ201210425196
【公开日】2014年5月14日 申请日期:2012年10月31日 优先权日:2012年10月31日
【发明者】张宇, 王亚辉, 沈健增 申请人:江苏汉邦科技有限公司