连翘酯苷b在制备治疗肾纤维化的药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了连翘酯苷B在制备治疗肾纤维化的药物中的应用。本发明提供的连翘酯苷B药物组合物可以根据制剂需要，加入相应辅料，以注射剂、片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊、糖浆等形式存在，优选为冻干粉针和胶囊。本发明提供的各种剂型均可以采用药学常规方法制备而成。
【专利说明】连翘酯苷B在制备治疗肾纤维化的药物中的应用
[0001]摘要
本发明提供了连翘酯苷B在制备治疗肾纤维化的药物中的应用。
【技术领域】
[0002]本发明涉及连翘酯苷B在制备治疗肾纤维化的药物中的应用。
【背景技术】
[0003]连翘酯苷B是从独一味中提取获得的，体外试验表明其具有神经保护、抗动脉粥样硬化及抗炎等药理作用[Koo KA, Sung SH, Park JH, Kim SH, Lee KY, Kim YC.1nvitro neuroprotective activities of phenylethanoid glycosides from Callicarpadichotoma.Planta Med, 2005 ,71 (8):778-80.；Martin-Nizard F, Sahpaz S, KandoussiA, Carpentier M, Fruchart JC, Duriez P, Bailleul F.Natural phenylpropanoidsinhibit lipoprotein-1nduced endothelin—l secretion by endothelial cells.JPharm Pharmacol.2004, 56 (12):1607-11.；Sahpaz S, Garbacki N, Tits M, BailleulF.1solation and pharmacological activity of phenylpropanoid esters fromMarrubium vulgare.J Ethnopharmaco1.2002, 79 (3): 389-92.]。但连翅酯苷 B 治疗肾纤维化的药理作用未见报道，基于此，本发明人通过大量的实验研究，发明了连翘酯苷B在制备治疗肾纤维化的药物中的应用。
[0004]
【发明内容】
:
本发明提供了连翘酯苷B在制备治疗肾纤维化的药物中的应用。
·[0005]本发明提供了以连翘酯苷B为活性成分的用于肾纤维化的药物组合物。
[0006]本发明提供的连翘酯苷B在用于肾纤维化时，其注射使用剂量范围为10 mg~1000 mg，优选剂量范围为10 mg~500 mg ;其口服使用剂量范围为25 mg~2000 mg，优选剂量范围为25 mg~1000 mg。
[0007]本发明提供的连翘酯苷B药物组合物可以根据制剂需要，加入相应辅料，以注射剂、片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊、糖浆等形式存在，优选为冻干粉针和胶囊。本发明提供的各种剂型均可以采用药学常规方法制备而成。
[0008]本发明人进行了下列试验来证实治疗肾纤维化的药物中的应用，但药理作用不仅限于此。
[0009]【具体实施方式】:
制备例1:连翘酯苷B的制备
取独一味药材20kg，将其粉碎，过10目筛，加8倍量(V/W)80%乙醇浸泡过夜，回流提取两次，每次2小时，提取液回收乙醇至无醇味，过滤，滤液上处理好聚酰胺柱，水洗6倍柱体积弃去,继续用10%乙醇洗脱4个柱体积，收集洗脱液，上处理好的聚酰胺柱，水洗至流出液无色，再用5%乙醇洗脱4倍柱体积，收集5%乙醇洗脱液，蒸干，得含量为95%的连翘酯苷B。[0010]制备例2:连翘酯苷B的制备
取独一味药材20kg，将其粉碎，过10目筛，加20倍量(V/W)85%乙醇渗漉提取，提取液回收乙醇至无醇味，过滤，滤液上处理好聚酰胺柱，水洗6倍柱体积弃去，继续用10%乙醇洗脱4个柱体积，收集洗脱液，上处理好的AB-8大孔树脂柱，水洗2倍柱体积弃去，再用20%乙醇洗脱4倍柱体积，收集洗脱液，蒸干，得含量为90%的连翘酯苷B。
[0011]制备例3连翘酯苷B软胶囊的制备
称取20.0g连翘酯苷B加200ml药用豆油充分混合均匀后制1000粒软胶囊，每粒约200mg,即得。
[0012]制备例4连翘酯苷B滴丸的制备
分别取30mg聚乙二醇4000和20.0g连翘酯苷B，混合后置75°C恒温水浴中加热熔融，置75°C保温下搅拌I小时使分散均匀，药液转移至滴丸机75°C恒温储料罐中，在滴头口径为5.0/6.0mm,滴速60滴/分钟，冷却剂为二甲基硅油，冷却液温度10°C条件下，调节滴丸丸重为60mg，滴制成1000丸，除去滴丸表面上的冷却液分装，即得。
[0013]制备例5连翘酯苷B注射液制备
取连翘酯苷BI0.0g,加注射用水2000 ml使其溶解，，加甘露醇8g，搅拌溶解，超滤，得到无热源的澄清液，灌入10 ml西林瓶中，2 ml/只，按冻干粉针工艺冻干，制成每支含连翘酯苷B10.0 mg的冻干粉针。
[0014]试验I连翘酯苷B对单侧输尿管结扎大鼠肾间质纤维化的影响
4.1材料
连翘酯苷B按制备例I与制备例5制备
实验动物普通级Wistar大鼠，雄性，体重150-200g，SD大鼠。
[0015]苯那普利，北京诺华制药有限公司生产；羟脯氨酸试剂盒，南京建成生物公司。
[0016]4.2试验方法与结果
大鼠130只，体重200-230g，动物喂养I周，各大鼠以10%水合氯醛3.0mL/kg腹腔注射麻醉后，将大鼠右侧卧位固定于手术台上，剪毛后用碘酒、75%酒精消毒手术区，行左侧腹切口，逐层切开皮肤、肌肉及腹壁各层，暴露并分离左侧输尿管，其中10只大鼠仅切开腹腔并游离左侧输尿管，但不结扎和剪断，作为假手术组，其余120大鼠用4-0丝线结扎两道，上一道结扎点位于左肾下极水平，然后在两道结扎点间剪断输尿管，逐层缝合，120只造模大鼠随机分为12组，即模型组、依那普利(10mg/kg)组、连翘酯苷B静脉注射I mg/kg组、连翘酯苷B静脉注射2.5 mg/kg组、连翘酯苷B静脉注射25 mg/kg组、连翘酯苷B静脉注射50mg/kg组、连翘酯苷B静脉注射100 mg/kg组、连翘酯苷B灌胃2 mg/kg组、连翘酯苷B灌胃5 mg/kg组、连翘酯苷B灌胃50 mg/kg组、连翘酯苷B灌胃100 mg/kg组、连翘酯苷B灌胃200 mg/kg组，各组 给药21天后，10%水合氯醛麻醉后处死各组动物，生理盐水反复灌洗后留取左侧肾脏，肾组织经4%的多聚甲醛缓冲液固定。切取适量肾组织，按羟脯氨酸试剂盒测定说明测定羟脯氨酸。
[0017]从表1结果可以看出，，连翘酯苷B静脉注射2.5 mg/kg组、连翘酯苷B静脉注射25 mg/kg组、连翘酯苷B静脉注射50 mg/kg组、连翘酯苷B静脉注射100 mg/kg组、连翘酯苷B灌胃5 mg/kg组、连翘酯苷B灌胃50 mg/kg组、连翘酯苷B灌胃100 mg/kg组、连翘酯苷B灌胃200 mg/kg组明显降低大鼠羟脯氨酸水平(与模型组比较，p〈0.05或0.01 )，连翘酯苷B灌胃100 mg/kg组降低羟脯氨酸水平与连翘酯苷B灌胃200 mg/kg组比较，无显著性差异；连翘酯苷B静脉注射50 mg/kg组降低羟脯氨酸与连翘酯苷B静脉注射100 mg/kg组比较，无显著性差异。
[0018]常规病理学检查①肉眼检查:假手术组肾脏颜色鲜红，表面光滑，包膜光泽，无粘连。其他各组肾脏体积增大，颜色苍白，表面呈颗粒状，类似人体大白肾，少数区域肾包膜粘连。②光镜检查:假手术组肾单位结构清晰，肾小球囊无扩张或缩小，肾小管上皮细胞无明显变性及坏死，管腔内无脱落上皮细胞或管型，间质中无血管扩张或炎细胞浸润。模型对照组大片肾小管坏死，肾间质纤维细胞增生，肾小管扩张，内有大量棕黄色折光物质或坏死脱落的上皮细胞，肾小球数目减少，部分肾小球纤维化并与包曼氏囊壁粘连，囊腔消失。给药各组病变与模型对照组类似，但均有不同程度的形态学改善，尤以连翘酯苷B大剂量各组显著，与模型对照组比较有明显差异。
[0019]表1连翘酯苷B对单侧输尿管结扎大鼠肾羟脯氨酸含量的影响
【权利要求】
1.连翘酯苷B在制备治疗肾纤维化的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其注射时给药剂量范围为lO-lOOOmg，口服时给药剂量范围为 25-2000mg。
3.根据权利要求2所述的应用，其注射给药剂量范围为10-500mg，口服为25_1000mg。
4.一种以连翘酯苷B为活性成 分的用于肾纤维化的药物组合物。
【文档编号】C07H1/08GK103845346SQ201210494224
【公开日】2014年6月11日 申请日期:2012年11月28日 优先权日:2012年11月28日
【发明者】毕玉轩 申请人:青岛百草汇中草药研究所