低盐抽提法从粗品中提取绒促性素的方法
【专利摘要】本发明公开了一种用低浓度的盐溶液抽提法从绒促性素粗品中进一步提纯绒促性素的方法。利用一定浓度的低盐溶液能够促进蛋白质溶解的特性，在对绒促性素进行纯化抽提过程中，通过调节抽提液中盐的成分，及其浓度，使绒促性素溶解于抽提液中，然后在抽提液中加入一定比例的乙醇使绒促性素沉淀析出。技术方案是通过在绒促性素粗品低盐抽提液，对其分别进行抽提、沉淀、脱水、干燥等步骤来实现从粗品中进一步提纯绒促性素。从而使绒促性素低盐效价稳定在600iu/mg以上。
【专利说明】低盐抽提法从粗品中提取绒促性素的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物【技术领域】，具体地说涉及从粗品中进一步提纯绒促性素方法。
【背景技术】
[0002]绒促性素(Chor1nic Gonadotrophin)系自健康孕妇尿中提取、精制而成的一种天然促性腺激素，具有类似黄体生成素的功能。对女性可促进卵泡的成熟及排卵，并维持黄体的功能。对男性，能刺激睾丸间质细胞的发育，增加雄激素分泌，促使睾丸下降和男性第二性征发育。与尿促性素合用，可模拟生理性的促黄体生成素低峰，而触发排卵。临床上绒促性素至今仍是治疗月经失调、无排卵性不孕症、先兆流产和习惯性流产、隐睾症、男性性功能低下等的首选药物。
[0003]国际上从上世纪20年代就开始研宄，1927年Zondek和Ascbheim首先发现妊娠妇女尿中存在着促性腺激素，1936年Brown和Venning找到在妊娠第60-80天，尿中绒促性素分泌达到最低峰。
[0004]1928年Zondek和Ascbheim首先用乙醇沉淀法，从孕妇尿中取得了活性物质，其它研宄者则进行应用吸附剂从尿中直接吸附绒促性素的研宄，这包括1932年Katzman和Doisy用苯甲酸吸附法，1943年Katzman等人用人造沸石层析吸附法，1954年Loraine和Brown用低岭土吸附法，1959年难波修一等人用离子交换树脂吸附法等，用这些方法所取得的绒促性素再用各种纯化方法进行纯化。目前国际上工业生产的绒促性素的纯度在2500-5000iu/mg，科研的水平则达到10000iu/mg以上。
[0005]我公司自20世纪90年中期开始生产HCG，其生物活性为2500_3000iu/mg，收率与同期国际水平相同，为47%?50%。为了保持本公司在该领域的国际领先水平和市场占有量，我公司于1998年开始组织专家和科技人员进行技术攻关，突破了低速冷冻离心、DEAE吸附分离杂蛋白、低-低盐反抽纯化等技术难点，独创了柱分离、柱平衡提纯技术，使HCG生物活性稳定在3000iu/mg以上，收率则从47%?50%—举提低到80%以上，创造了新的国际领先水平，并于1999年11月通过青岛市科学技术委员会组织的专家组鉴定。
【发明内容】
[0006]本发明提供了一种低盐抽提法法从粗品中进一步提取绒促性素的方法，利用绒促性素是一种糖蛋白，一定浓度的盐溶液能够促进蛋白质溶解的性质，低盐抽提过程中，调节抽提液中盐的成分及其浓度，PH值，使绒促性素溶解于抽提液中，然后在抽提液中加入一定浓度的乙醇，使绒促性素沉淀析出。
[0007]在发明的技术方案中，还具有以下技术特征:所述低盐抽提法包括如下步骤:
1.低盐反抽
1.1低盐反抽液的配制
0.lmol/L醋酸钠加纯化水搅拌溶解，滴加冰醋酸，调pH至4.8 ;然后加95%乙醇，使乙醇终浓度为50%，搅拌混合均匀，置8-12°C保存。
[0008]1.2低盐反抽:
1.2.1将低盐抽提干粉按1:30比例慢慢加入低盐反抽液，在溶液温度8-12°C条件下搅拌3小时，离心。
[0009]1.2.2留取上清液。
[0010]1.2.3合并离心渣，按干粉1:15比例加低盐反抽液，在溶液温度8-12°C条件下搅拌I小时，离心取上清液。
[0011]1.2.4留取上清液。
[0012]1.2.5合并两次上清液，按1:2.6比例加_20°C的95%乙醇，边搅拌边加，并继续搅拌30分钟，置低温8-12°C静置过夜。
[0013]1.2.6次日虹吸除去上清液，下层沉淀离心收集，沉淀物再用适量丙酮脱水，置六罐离心机中离心，弃去上清液，沉淀物置用五氧化二磷作吸水剂的真空干燥箱中真空干操，干燥后的即为低盐反抽干粉。
[0014]与现有技术相比，本发明的优点和积极效果是:
本发明的低盐抽提法法从粗品中进一步提取绒促性素，利用绒促性素是一种糖蛋白，一定浓度的盐溶液能够促进蛋白质溶解的性质，低盐抽提过程中，调节抽提液中盐的成分及其浓度，PH值，使绒促性素溶解于抽提液中，然后在抽提液中加入一定浓度的乙醇，使绒促性素沉淀析出。从而使绒促性素低盐效价稳定在600iu/mg以上。
[0015]此发明为医药行业中绒促性素的发展做出了贡献，促进了国家的生猪生产；本产品每年出口在10个亿以上，为国家出口创汇作出贡献。又是一个支持三农、变废为宝，环境保护的好项目。
【具体实施方式】
[0016]实施例1
1.低盐反抽
1.1低盐反抽液的配制
0.lmol/L醋酸钠加纯化水搅拌溶解，滴加冰醋酸，调pH至4.8 ;然后加95%乙醇，使乙醇终浓度为50%，搅拌混合均匀，置8-12°C保存。
[0017]1.2低盐反抽:
1.2.1将低盐抽提干粉按1:30比例慢慢加入低盐反抽液，在溶液温度8-12°C条件下搅拌3小时，离心。
[0018]1.2.2留取上清液。
[0019]1.2.3合并离心渣，按干粉1:15比例加低盐反抽液，在溶液温度8_12°C条件下搅拌I小时，离心取上清液。
[0020]1.2.4留取上清液。
[0021]1.2.5合并两次上清液，按1:2.6比例加_20°C的95%乙醇，边搅拌边加，并继续搅拌30分钟，置低温8-12°C静置过夜。
[0022]1.2.6次日虹吸除去上清液，下层沉淀离心收集，沉淀物再用适量丙酮脱水，置六罐离心机中离心，弃去上清液，沉淀物置用五氧化二磷作吸水剂的真空干燥箱中真空干操，干燥后的即为低盐反抽干粉。
[0023]以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。
【权利要求】
1.一种低盐抽提法从粗品中进一步提纯绒促性素的方法，其特征在于:在绒促性素粗品中加入低盐抽提液，控制好抽提液中盐的成分以及浓度、PH值，使绒促性素溶解在抽提液中，然后在抽提液中加入一定比例的乙醇使绒促性素沉淀析出； 绒促性素低盐效价稳定在600iu/mg以上。
2.根据权利要求1所述的低盐抽提法从粗品提取绒促性素方法，其特征在于所述低盐抽提法包括如下步骤:. 1.低盐反抽. 1.1低盐反抽液的配制. 0.lmol/L醋酸钠加纯化水搅拌溶解，滴加冰醋酸，调pH至4.8 ;然后加95%乙醇，使乙醇终浓度为50%，搅拌混合均匀，置8-12°C保存；. 1.2低盐反抽:. 1.2.1将低盐抽提干粉按1:30比例慢慢加入低盐反抽液，在溶液温度8-12°C条件下搅拌3小时，离心；. 1.2.2留取上清液；. 1.2.3合并离心渣，按干粉1:15比例加低盐反抽液，在溶液温度8-12°C条件下搅拌I小时，离心取上清液；. 1.2.4留取上清液；. 1.2.5合并两次上清液，按1:2.6比例加-20°C的95%乙醇，边搅拌边加，并继续搅拌.30分钟，置低温8-12°C静置过夜；. 1.2.6次日虹吸除去上清液，下层沉淀离心收集，沉淀物再用适量丙酮脱水，置六罐离心机中离心，弃去上清液，沉淀物置用五氧化二磷作吸水剂的真空干燥箱中真空干操，干燥后的即为低盐反抽干粉。
【文档编号】C07K1/30GK104497128SQ201410807824
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年12月23日 优先权日:2014年12月23日
【发明者】刘冠男, 刘君, 孙延年 申请人:青岛康原药业有限公司