专利名称：一种制备牛膝多糖的方法
技术领域：
本发明涉及一种植物多糖的制备方法，尤其涉及一种从生药牛膝中制备牛膝多糖的方法。
背景技术：
牛膝(学名Achyranthes bidentata)为觅科牛膝属的植物。牛膝作为我国传统的中药材，从明代李时珍的《本草纲目》到清代叶天士的《本草经解》，以及近代医学《中药大辞典》都记载了它特有的临床应用价值补肝肾、强筋骨、治腰膝酸麻、肝肠眩晕、散瘀血、消痈肿等等。
牛膝多糖(Achyranthesbidentata polysaccharide, ABP)是从牛膝的根提取获得。它是由果糖-葡萄糖组成的小分子化合物，牛膝多糖是体内重要的信息分子，具有广泛的生物学活性。近几年来，国内外对牛膝多糖做了大量研究，药理研究和临床试用后认为，牛膝多糖制品能增强人体免疫力，升高血清溶血素和脾脏内抗体形成的细胞数，提高血清免疫球蛋白，激发网状内皮系统的吞噬功能，促进淋巴细胞增殖，增强NK细胞和CTL细胞的活性。因此，牛膝多糖制备及其产品的开发对临床具有重要意义。关于牛膝多糖的提取分离方法，常见的报道是由牛膝的根经水提、反复醇沉、再透析制得。但其得到的牛膝多糖纯度不高，已无法满足目前日益提高的制剂制备要求，鉴于此，研发一种从生药牛膝中制备牛膝多糖的新方法尤为必要。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明要解决的问题是提供一种从生药牛膝中制备牛膝多糖的方法。本发明所述制备牛膝多糖的方法，由下述步骤组成(I)将牛膝切成片状或粉碎至颗粒直径为300 500 Pm，与水以质量比计，按I 6 8的量浸于蒸馏水中，浸泡50 70小时；(2)以3000 5000rpm离心(I)所述浸泡液13 16min,得含牛膝多糖的上清液；(3)向⑵的上清液中加入其体积3 4倍量的90% 95%乙醇，搅拌25 35min ；(4)以3000 5000rpm离心(3)所述搅拌混合液13 16min,取沉淀并用蒸懼水溶稀至比重为I. 05 I. 15的溶液；(5)选取内径和高度比为I : 30 50的层析柱；向柱内加入葡聚糖凝胶，加入量为柱体积的65% 85% ；(6)凝胶过滤层析步骤(4)的溶液，洗脱液为蒸馏水，流速为0. 4 0. 5ml/min,以波长为280nm检测收集液，选择吸收峰洗脱液收集，即得牛膝多糖的提取液；(7)常规真空冷冻干燥牛膝多糖的提取液，得牛膝多糖。
上述制备牛膝多糖的方法中，步骤(2)或(4)所述离心速度优选4000rpm，离心时间优选15min。上述制备牛膝多糖的方法中，步骤(5)所述层析柱的内径和高度比优选I : 40。上述制备牛膝多糖的方法中，步骤(5)所述向柱内加入的具有分子筛作用的葡聚糖凝胶量优选为柱体积的70% 80%。上述制备牛膝多糖的方法中，步骤(5)所述葡聚糖凝胶选用SephadexG-150或SephadexG-200。进一步的,步骤(5)所述葡聚糖凝胶优选SephadexG-150。上述制备牛膝多糖的方法中，步骤(6)所述流速优选0. 4ml/min。 利用本发明提出的制备牛膝多糖的方法，可以制备出纯度达95%以上的牛膝多糖，根本解决了牛膝多糖分离难，纯度低，质量不稳定的不足，且本发明的方法设备及环境要求低，方法简便，成本低，灵活实用，利于推广、开发和应用。采用本发明的分离纯化方法制备出的牛膝多糖在临床应用和保健食品开发上将有很广阔的前景。
具体实施例方式实施例I :(I)将牛膝切成片状，与水以质量比计，按I : 6的量浸于蒸馏水中，浸泡50小时；(2)以3000rpm离心(I)所述浸泡液16min，得含牛膝多糖的上清液；(3)向⑵的上清液中加入其体积3倍量的95%乙醇，搅拌25min ；(4)以3000rpm离心(3)所述搅拌混合液16min,取沉淀并用蒸懼水溶稀至比重为I. 10 I. 15的溶液；(5)选取内径和高度比为I : 30的层析柱；向柱内加入S印hadexG-150葡聚糖凝胶，加入量为柱体积的75% ；(6)凝胶过滤层析步骤(4)的溶液，洗脱液为蒸馏水，流速为0. 4ml/min,以波长为280nm检测收集液，选择吸收峰洗脱液收集，即得牛膝多糖的提取液；(7)常规真空冷冻干燥牛膝多糖的提取液，得牛膝多糖。实施例2 (I)将牛膝粉碎至颗粒直径为400 500 iim，与水以质量比计，按I : 7的量浸于蒸馏水中，浸泡60小时；(2)以4000rpm离心(I)所述浸泡液15min，得含牛膝多糖的上清液；(3)向⑵的上清液中加入其体积4倍量的90%乙醇，搅拌35min ；(4)以4000rpm离心(3)所述搅拌混合液15min,取沉淀并用蒸懼水溶稀至比重为I. 11 I. 15的溶液；(5)选取内径和高度比为I : 40的层析柱；向柱内加入S印hadexG-200葡聚糖凝胶，加入量为柱体积的85% ；(6)凝胶过滤层析步骤(4)的溶液，洗脱液为蒸馏水，流速为0. 4ml/min,以波长为280nm检测收集液，选择吸收峰洗脱液收集，即得牛膝多糖的提取液；(7)常规真空冷冻干燥牛膝多糖的提取液，得牛膝多糖。
实施例3 (I)将牛膝粉碎至颗粒直径为300 400 U m,与水以质量比计，按I : 8的量浸于蒸馏水中，浸泡70小时；(2)以5000rpm离心⑴所述浸泡液13min，得含牛膝多糖的上清液；(3)向⑵的上清液中加入其体积3倍量的95%乙醇，搅拌30min ；(4)以5000rpm离心(3)所述搅拌混合液13min,取沉淀并用蒸懼水溶稀至比重为
I.05 I. 10的溶液；(5)选取内径和高度比为I : 50的层析柱；向柱内加入S印hadexG-150葡聚糖凝胶，加入量为柱体积的80% ；(6)凝胶过滤层析步骤⑷的溶液，洗脱液为蒸馏水，流速为0. 5ml/min,以波长为280nm检测收集液，选择吸收峰洗脱液收集，即得牛膝多糖的提取液；(7)常规真空冷冻干燥牛膝多糖的提取液，得牛膝多糖。本发明中涉及的“SephadexG-150、SephadexG-200” 为 pharmacia 公司产品。我国代理经销Pharmacia产品的公司有“北京拜尔迪生物技术公司，北京市海淀区中关村北二街4号水清木华园I号楼910室(100080);电话(TEL) =010-82642396 ;传真(FAX)010-82642395。”
权利要求
1.一种制备牛膝多糖的方法，由下述步骤组成 (1)将牛膝切成片状或粉碎至颗粒直径为300 500iim，与水以质量比计，按I : 6 8的量浸于蒸馏水中，浸泡50 70小时； (2)以3000 5000rpm离心(I)所述浸泡液13 16min，得含牛膝多糖的上清液；(3)向⑵的上清液中加入其体积3 4倍量的90% 95%乙醇，搅拌25 35min； (4)以3000 5000rpm离心(3)所述搅拌混合液13 16min,取沉淀并用蒸懼水溶稀至比重为1.05 I. 15的溶液； (5)选取内径和高度比为I: 30 50的层析柱；向柱内加入葡聚糖凝胶,加入量为柱体积的65% 85% ； (6)凝胶过滤层析步骤(4)的溶液，洗脱液为蒸馏水，流速为0.4 0. 5ml/min,以波长为280nm检测收集液，选择吸收峰洗脱液收集，即得牛膝多糖的提取液； (7)常规真空冷冻干燥牛膝多糖的提取液，得牛膝多糖。
2.如权利要求I所述制备牛膝多糖的方法，其特征是，步骤(2)或(4)所述离心速度是4000rpm,离心时间是15min。
3.如权利要求I所述制备牛膝多糖的方法，其特征是，步骤(5)所述层析柱的内径和高度比为I : 40。
4.如权利要求I所述制备牛膝多糖的方法，其特征是，步骤(5)所述向柱内加入的具有分子筛作用的葡聚糖凝胶量为柱体积的70% 80%。
5.如权利要求I所述制备牛膝多糖的方法，其特征是，步骤(5)所述葡聚糖凝胶选用SephadexG-150 或 SephadexG-200。
6.如权利要求5所述制备牛膝多糖的方法，其特征是，步骤(5)所述葡聚糖凝胶选用SephadexG—150。
7.如权利要求I所述制备牛膝多糖的方法，其特征是，步骤(6)所述流速为0.4ml/mirio
全文摘要
本发明公开一种制备牛膝多糖的方法，是将牛膝切成片状或粉碎后浸于蒸馏水中，离心得含牛膝多糖的上清液，然后加入乙醇搅拌，离心，收集沉淀并用蒸馏水溶稀，凝胶过滤层析，选择吸收峰洗脱液收集，真空冷冻干燥，得牛膝多糖。利用本发明制备的牛膝多糖纯度达95％以上，且本发明的方法设备及环境要求低，方法简便，成本低，灵活实用，利于推广、开发和应用。
文档编号C08B37/00GK102617749SQ20121010492
公开日2012年8月1日 申请日期2012年4月11日 优先权日2012年4月11日
发明者张尚立, 张恒 申请人:山东大学