本发明属于生物技术领域，具体涉及的是一种从柑橘果皮中提取柠檬苦素类物质的方法。
背景技术：
柑橘为芸香科(Rutaceae)柑橘属(Citrus)植物,以柠檬、柚、葡萄柚、甜橙、宽皮橘为主要栽培品种。中国柑橘主要分布于四川、重庆、湖南、福建、广东、浙江、广西等省,主要是柚类的沙田抽、福建蜜抽,甜橙类的脐橙、锦橙、血橙、宽皮橘类的温州蜜柑、芦柑、红橘等。
柑橘无论是鲜食还是加工,果皮是其主要副产物,约占果实重的20%。随着柑橘产量的逐年增加,柑橘果皮的综合利用就越发显得重要。但是,当前我国柑橘的综合利用水平却远远落后于世界先进水平,除少量药用(陈皮)外,大部分柑橘果皮被当作垃圾丢弃。
据测定,柑橘果皮除含有人体健康必需的营养成分如多种氨基酸、抗坏血酸、钙、铁、磷等外,还含有多种对人体健康具有促进作用及对一些疾病有防治作用的非营养性生理活性成分,如柠檬苦素类化合物、黄酮类化合物,香精油等,且这些成分在果皮中的含量明显高于可食部分。因此,柑橘果皮具有很高的保健和药用价值。若不对柑橘果皮加以利用,不但对环境造成严重的污染,也是资源的浪费，但柑橘果皮综合利用率并不高。
柠檬苦素类化合物(Limonoids)是一类高度氧化的四环三萜类次生代谢产物,主要存在于芸香科(Rutaceae)和楝科(Meliaceae)的多种植物组织中,这些植物有芸香科的脐橙、酸橘、香橙、八朔柑、柚、构椽等, 楝科植物糠树、大叶桃花心木、川楝等,迄今己从这些植物中分离大约300多种柠檬苦素类化合物。芸香科柑橘属植物是柠檬苦素类化合物的主要来源,以柠檬苦素(Lirnonin)和诺米林（Nomilin)含量为最多,它们也是引起柑橘汁苦味的主要原因之一。由于这类化合物具有抗癌、抑菌以及高效除虫等诸多生物学活性,越来越受到学者们的重视。目前,柠檬苦素类化合物高效提取、分离纯化和鉴定体系的建立,单体的药理研究己经成为研究的热点。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种从柑橘果皮中提取柠檬苦素类物质的方法，解决本发明技术问题是通过以下技术方案实现的：
一种从柑橘果皮中提取柠檬苦素类物质的方法，包括以下步骤：
(1)柑橘果皮预处理：柑橘果皮洗净干燥，粉碎后，先用沸点60℃～ 90℃的石油醚脱脂，弃去石油醚，得柑橘果皮预处理料；
(2) 抽提：所述步骤(1) 得到的柑橘果皮预处理料，以60％～ 80％乙醇水溶液作为溶剂， 65℃～75℃热回流抽提1.5h～2.5h，收集抽提液；
(3) 纯化：所述步骤(2) 抽提液稀释至乙醇浓度为40％～ 60％，pH 为3.0～5.0，以非极性大孔吸附树脂吸附14-20h，以30％～ 50％乙醇水溶液洗涤，洗涤液弃去；再以60％～80％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液；
(4) 浓缩、溶解：所述步骤(3)洗脱液减压浓缩至干，用二氯甲烷溶解后过滤；
(5) 结晶：所述步骤(4) 得到的二氯甲烷过滤液中，加入2 倍体积异丙醇，冷却至4℃，缓慢搅拌结晶；
(6) 过滤和干操：所述步骤(5) 得到晶体物过滤，50℃～ 70℃真空干燥，即得柠檬苦素类似物。
所述步骤1）石油醚脱脂是采用沸点60℃～ 90℃的石油醚脱脂，条件为：水浴温度为50 ～ 60℃，保持其微沸，脱脂时间为8～12h。
步骤(2) 中柑橘果皮粉末料重量g ∶乙醇溶液ml 为1 ∶10-20，连续抽提2～3 次。
步骤(3)中所述非极性非极性大孔吸附树脂为AB-8 型。
本发明分离纯化方法简单易行，可得到柠檬苦素类物质纯度较高的固形物：固形物中柠檬苦素类似物含量＞ 30%，柠檬苦素含量＞ 9%，诺米林含量＞ 10% 的固形物。
具体实施方式
以下通过对本发明具体实施方式的描述说明但不限制本发明。
实施例1
(1)柑橘果皮预处理：柑橘果皮洗净干燥，粉碎后，采用沸点60℃～ 90℃的石油醚脱脂，条件为：水浴温度为50 ～ 60℃，保持其微沸，脱脂时间为8～12h，弃去石油醚，得柑橘果皮预处理料，备用；
(2) 抽提：称量柑橘果皮粉料60 克，用滤纸包裹后，置于索氏提取仪中，用60％乙醇水溶液1800ml 在65℃温度下，连续抽提3 次，收集抽提液；
(3) 纯化：将抽提液稀释至乙醇浓度为40％，提取液pH ＝ 3.0，加入50ml AB-8树脂慢速搅拌吸附20h；先用30％乙醇水溶液200ml 洗涤，洗涤液弃去，再用60％乙醇水溶液300ml 洗脱，收集洗脱液；
(4) 浓缩、溶解：所述步骤(3)洗脱液减压浓缩至干，用二氯甲烷溶解后过滤；
(5) 结晶：所述步骤(4) 得到的二氯甲烷过滤液中，加入2 倍体积异丙醇，冷却至4℃，缓慢搅拌结晶；
(6) 过滤和干操：将结晶液过滤，得到无色晶体，60℃真空干燥，得柠檬苦素类物质。
柠檬苦素类似物纯度31.2%，柠檬苦素纯度9.4%，诺米林12.4%。
实施例2
(1)柑橘果皮预处理：柑橘果皮洗净干燥，粉碎后，采用沸点60℃～ 90℃的石油醚脱脂，条件为：水浴温度为50 ～ 60℃，保持其微沸，脱脂时间为8～12h，弃去石油醚，得柑橘果皮预处理料，备用；
(2) 抽提：称量柑橘果皮粉料60 克，用滤纸包裹后，置于索氏提取仪中，用80％乙醇水溶液1500ml 在65℃温度下，连续抽提2 次，收集抽提液；
(3) 纯化：将抽提液稀释至乙醇浓度为60％，提取液pH ＝5.0，加入50ml AB-8树脂慢速搅拌吸附20h；先用50％乙醇水溶液200ml 洗涤，洗涤液弃去，再用80％乙醇水溶液300ml 洗脱，收集洗脱液；
(4) 浓缩、溶解：所述步骤(3)洗脱液减压浓缩至干，用二氯甲烷溶解后过滤；
(5) 结晶：所述步骤(4) 得到的二氯甲烷过滤液中，加入2 倍体积异丙醇，冷却至4℃，缓慢搅拌结晶；
(6) 过滤和干操：将结晶液过滤，得到无色晶体，60℃真空干燥，得柠檬苦素类物质。
柠檬苦素类似物纯度31.8%，柠檬苦素纯度9.9%，诺米林12.9%。
实施例3
(1)柑橘果皮预处理：柑橘果皮洗净干燥，粉碎后，采用沸点60℃～ 90℃的石油醚脱脂，条件为：水浴温度为50 ～ 60℃，保持其微沸，脱脂时间为8～12h，弃去石油醚，得柑橘果皮预处理料，备用；
(2) 抽提：称量柑橘果皮粉料60 克，用滤纸包裹后，置于索氏提取仪中，用70％乙醇水溶液1650ml 在70℃温度下，连续抽提2 次，收集抽提液；
(3) 纯化：将抽提液稀释至乙醇浓度为40％，提取液pH ＝4.0，加入50ml AB-8树脂慢速搅拌吸附17h；先用40％乙醇水溶液200ml 洗涤，洗涤液弃去，再用70％乙醇水溶液300ml 洗脱，收集洗脱液；
(4) 浓缩、溶解：所述步骤(3)洗脱液减压浓缩至干，用二氯甲烷溶解后过滤；
(5) 结晶：所述步骤(4) 得到的二氯甲烷过滤液中，加入2 倍体积异丙醇，冷却至4℃，缓慢搅拌结晶；
(6) 过滤和干操：将结晶液过滤，得到无色晶体，60℃真空干燥，得柠檬苦素类物质。
柠檬苦素类似物纯度33.4%，柠檬苦素纯度10.6%，诺米林13.4%。