经遗传修饰的细菌和用于细菌的遗传修饰的方法与流程

文档序号:11109343阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种丙酸杆菌属的经遗传修饰的细菌,其包含编码哺乳动物生长因子或哺乳动物细胞因子的核酸。

2.一种组合物,其包含权利要求1所述的丙酸杆菌属的经遗传修饰的细菌。

3.根据权利要求1所述的经遗传修饰的细菌,其中所述生长因子是激素。

4.根据权利要求1所述的经遗传修饰的细菌,其中所述生长因子是人激素或牛激素。

5.根据权利要求1所述的经遗传修饰的细菌,其中所述生长因子是生长激素。

6.根据权利要求5所述的经遗传修饰的细菌,其中所述生长激素包含SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48或SEQ ID NO:49。

7.根据权利要求1所述的经遗传修饰的细菌,其中所述生长因子由所述细菌分泌。

8.根据权利要求1所述的经遗传修饰的细菌,其中所述生长因子是人生长因子。

9.根据权利要求1所述的经遗传修饰的细菌,其中所述生长因子选自:转化生长因子β(TGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)、肝细胞生长因子(HGF)、成纤维细胞生长因子FGF)、胰岛素样生长因子-1(IGF1)、血小板衍生生长因子(PDGF)、粒细胞单核细胞集落刺激因子(GMCSF)和表皮生长因子(EGF)。

10.根据权利要求1所述的经遗传修饰的细菌,其中所述生长因子是包含SEQ ID NO:63至SEQ ID NO:69中的任一个的转化生长因子或包含SEQ ID NO:70的肝细胞生长因子。

11.根据权利要求1所述的经遗传修饰的细菌,其中所述生长因子是包含SEQ ID NO:71至SEQ ID NO:91中的任一个的血管内皮生长因子(VEGF)。

12.根据权利要求1所述的经遗传修饰的细菌,其中所述生长因子是包含SEQ ID NO:93至SEQ ID NO:102中的任一个的血小板衍生生长因子(PDGF)。

13.根据权利要求1所述的经遗传修饰的细菌,其中所述生长因子是包含SEQ ID NO:103至SEQ ID NO:106中的任一个的表皮生长因子(EGF)。

14.根据权利要求1所述的经遗传修饰的细菌,其中所述生长因子是包含SEQ ID NO:107至SEQ ID NO:144中的任一个的成纤维细胞生长因子(FGF)。

15.根据权利要求1所述的经遗传修饰的细菌,其中所述细菌分泌所述哺乳动物细胞因子。

16.根据权利要求1所述的经遗传修饰的细菌,其中所述哺乳动物细胞因子是免疫抑制性细胞因子。

17.根据权利要求1所述的经遗传修饰的细菌,其中所述哺乳动物细胞因子是人细胞因子。

18.根据权利要求1所述的经遗传修饰的细菌,其中所述细胞因子选自白介素-10(IL-10)、白介素-6(IL-6)、白介素-7(IL-7)和白介素-8(IL-8)。

19.根据权利要求15所述的经遗传修饰的细菌,其中所述细胞因子选自SEQ ID NO:24,SEQ ID NO:25,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28。

20.根据权利要求1所述的经遗传修饰的细菌,其中所述哺乳动物细胞因子包含IL-10。

21.根据权利要求20所述的经遗传修饰的细菌,其中所述IL-10包含SEQ ID NO:25。

22.根据权利要求1所述的经遗传修饰的细菌,其中所述丙酸杆菌属包括选自产酸丙酸杆菌、产丙酸丙酸杆菌、痤疮丙酸杆菌、澳大利亚丙酸杆菌、贪婪丙酸杆菌、环己酸丙酸杆菌、费氏丙酸杆菌、费氏丙酸杆菌、颗粒丙酸杆菌、詹氏丙酸杆菌、微嗜氧丙酸杆菌、丙酸丙酸杆菌和特氏丙酸杆菌中的物种。

23.根据权利要求22所述的经遗传修饰的细菌,其中所述物种是痤疮丙酸杆菌(P.acnes)。

24.根据权利要求22所述的经遗传修饰的细菌,其中所述痤疮丙酸杆菌的菌株包含CRISPR阵列。

25.根据权利要求24所述的经遗传修饰的细菌,其中所述痤疮丙酸杆菌的菌株是痤疮丙酸杆菌,II型,核糖体型6。

26.根据权利要求1所述的经遗传修饰的细菌,其中所述核酸包含被配置为调节所述哺乳动物生长因子或所述哺乳动物细胞因子的表达的诱导型启动子。

27.根据权利要求1所述的经遗传修饰的细菌,其中所述核酸在指导所述哺乳动物生长因子或所述哺乳动物细胞因子的表达的内源启动子的控制下。

28.根据权利要求1所述的经遗传修饰的细菌,其中所述核酸包含配置为指导所述哺乳动物生长因子或所述哺乳动物细胞因子表达的内源启动子。

29.根据权利要求27或28所述的经遗传修饰的细菌,其中所述诱导型启动子或内源启动子包含lacZ启动子或lacZ操纵子或阿拉伯糖操纵子的启动子。

30.根据权利要求1所述的经遗传修饰的细菌,其中所述编码哺乳动物生长因子或哺乳动物细胞因子的核酸插入编码致病蛋白的内源基因的全部或部分中。

31.根据权利要求1所述的经遗传修饰的细菌,其中内源蛋白的表达被显著减少或消除。

32.根据权利要求1所述的经遗传修饰的细菌,其中致病性蛋白的表达被显著减少或消除。

33.根据权利要求32所述的经遗传修饰的细菌,其中所述致病性蛋白包含内毒素和/或外毒素。

34.根据权利要求32所述的经遗传修饰的细菌,其中所述内源性致病性蛋白包含甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GADPH)蛋白或CAMP蛋白。

35.根据权利要求1所述的经遗传修饰的细菌,其包含调节必需蛋白的表达的诱导型启动子。

36.根据权利要求35所述的经遗传修饰的细菌,其中所述必需蛋白选自染色体复制起始蛋白DnaA、FtsA、FtsI、FtsL、FtsK、FtsN、FtsQ、FtsW、FtsZ、ZipA、aroE、atpD、gmk、guaA、lepA、recA和sodA。

37.根据权利要求35所述的经遗传修饰的细菌,其中所述诱导型启动子能由糖诱导。

38.根据权利要求37所述的经遗传修饰的细菌,其中所述糖是乳糖或阿拉伯糖。

39.根据权利要求35所述的经遗传修饰的细菌,其中所述诱导型启动子能由氨基酸诱导。

40.根据权利要求35所述的经遗传修饰的细菌,其中所述诱导型启动子能由合成氨基酸诱导。

41.根据权利要求1所述的经遗传修饰的细菌,其中所述细菌具有多重遗传修饰。

42.一种包含多种根据权利要求1所述的经遗传修饰的细菌的组合物,其中所述细菌具有多重遗传修饰。

43.根据权利要求41所述的经遗传修饰的细菌或者根据权利要求42所述的组合物,其中所述细菌具有修饰,其中1)内源蛋白的表达被显著减少或消除;和2)调节必需蛋白的表达的诱导型启动子。

44.一种痤疮丙酸杆菌种的经遗传修饰的细菌,其包含:

a)哺乳动物生长因子,其中所述哺乳动物生长因子是分泌的;以及

b)诱导型启动子,其指导必需蛋白的表达,所述必需蛋白选自染色体复制起始蛋白DnaA、FtsA、FtsI、FtsL、FtsK、FtsN、FtsQ、FtsW、FtsZ、ZipA、aroE、atpD、gmk、guaA、lepA、recA和sodA;其中在所述经遗传修饰的细菌中显著减少或消除了内源性CAMP2和/或内源性GADPH蛋白的表达。

45.一种痤疮丙酸杆菌种的经遗传修饰的细菌,其包含:

a)人IL10,其中所述IL10是分泌的;和

b)诱导型启动子,其指导必需蛋白的表达,所述必需蛋白选自染色体复制起始蛋白DnaA、FtsA、FtsI、FtsL、FtsK、FtsN、FtsQ、FtsW、FtsZ、ZipA、aroE、atpD、gmk、guaA、lepA、recA和sodA;

其中在所述经遗传修饰的细菌中显著减少或消除了内源性CAMP2和/或内源性GADPH蛋白的表达。

46.一种组合物,其包含权利要求44或45所述的经遗传修饰的细菌。

47.根据权利要求2、42或46所述的组合物,其中所述组合物被配置用于局部或粘膜施用于哺乳动物。

48.根据权利要求2、42或46所述的组合物,其中所述组合物包含糖或氨基酸,其中所述诱导型启动子通过所存在的所述糖或氨基酸诱导或刺激。

49.一种试剂盒,其包含权利要求1-48中任一项所述的经遗传修饰的细菌或组合物以及使用说明书。

50.一种治疗皮肤或指甲疾病的方法,其包括使哺乳动物的皮肤与根据权利要求1-48中任一项所述的经遗传修饰的细菌或组合物接触,从而治疗所述皮肤或指甲疾病。

51.根据权利要求50的方法,其中所述哺乳动物是人、狗或猫。

52.根据权利要求50所述的方法,其中所述皮肤或指甲病症包括痤疮、光化性角化病、斑秃、运动员脚、甲真菌病、特应性皮炎、腋臭、湿疹、指甲真菌感染、牛皮癣、玫瑰痤疮、慢性伤口愈合、毛囊炎、毛发角化病、口周皮炎、血管纤维瘤、皮肤炎症、老化损伤、皮肤变色、过早变白毛发或皮脂溢。

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