1.一种鉴别用作促进或抑制细胞死亡的候选试剂的试剂的方法,所述方法包括:
(a)使试剂与BCL-2相关X蛋白(BAX)单体或其部分、和/或与BAX二聚体接触,以及
(b)测量试剂是否抑制或促进BAX的二聚化;
其中相比于试剂缺少时,在试剂存在时BAX单体与其它BAX单体或与BAX单体的部分的结合减少表明试剂抑制BAX的二聚化,其中抑制BAX的二聚化的试剂是用于促进细胞死亡的候选试剂;以及
其中相比于试剂缺少时,在试剂存在时BAX单体或其部分与其它BAX单体或其部分的结合增加表明试剂促进BAX的二聚化,其中促进BAX的二聚化的试剂是用于抑制细胞死亡的候选试剂。
2.如权利要求1所述的方法,其中所述试剂结合至BAX的N末端结合位点和/或C末端结合位点的氨基酸残基。
3.如权利要求1所述的方法,其中试剂在结合位点残基S16、E17、Q18、I19、M20、K21、T22、G23、A24、L25、L26、I27、Q28、G29、F30、I31、Q32、D33、R34、A35、G36、R37、M38、G39、G40、E41、A42、P43、E44、L45、A46、L47、D48、P49、V50、P51、Q52、D53、A54、V129、P130、E131、L132、I133、R134、T135、I136、M137、G138、W139、T140、L141、D142、F143、L144、R145、E146和R147中一处或多处结合至BAX的N末端。
4.如权利要求1所述的方法,其中试剂在结合位点残基N73、M74、E75、L76、D98、M99、F100、S101、D102、G103、N104、F105、N106、W107、G108、R109、I152、Q153、D154、Q155、G156、G157、W158、D159、G160、L161、L162、S163、Y164、F165、G166、T167、P168、T169、W170、Q171、T172、V173、T174、I175、F176、V177、A178、G179、V180、L181、T182、A183、S184、L185、T186、I187、W188、K189K190、M191和G192中一处或多处结合至BAX的C末端。
5.如权利要求1-4中任何项所述的方法,其中对二聚体或单体形式的BAX的测量是使用荧光偏振测定法、尺寸排阻层析(SEC)、聚丙烯酰胺凝胶电泳、动态光散射和特异性结合BAX二聚体或BAX单体的抗体中的一者或多者来进行的。
6.一种用于鉴别调节BAX的活性的试剂的方法,所述方法包括:
在试剂存在和缺少时,使BAX的α9螺旋肽与BAX的N末端结合位点接触;以及
测量BAX的α9螺旋肽与BAX的N末端结合位点之间的结合,其中相比于试剂缺少时的结合,在试剂存在时减少的结合表明试剂是BAX活性的调节剂。
7.如权利要求6所述的方法,其中试剂是BAX的抑制剂。
8.如权利要求6或7所述的方法,其中BAX的α9肽具有氨基酸序列TWQTVTIFVAGVLTASLTIWKKMG(SEQ ID NO:11)。
9.如权利要求6-8中任何项所述的方法,其中BAX的α9螺旋肽或BAX的N末端结合位点固定在固体基质上。
10.如权利要求6-9中任何项所述的方法,其中BAX的α9螺旋肽与BAX的N末端结合位点之间的结合使用荧光测定法来测量。
11.如权利要求1-10中任何项所述的方法,其中BAX是人BAX。
12.如权利要求1-11中任何项所述的方法,其中试剂是小分子、分离肽、合成肽、具有天然或非天然氨基酸或组合的肽基试剂、烃钉合肽、限制性肽、大环、类肽、模拟肽、折叠体、适体、抗体、单抗体、纳米抗体或它们的组合。
13.如权利要求1-12中任何项所述的方法,进一步包括向受试者施用鉴别为促进BAX的二聚化或抑制BAX的试剂,所述受试者患有与过早或不需要的细胞死亡相关联并且特征为BAX的异常激活、表达或功能的疾病或病症;以及测试所述试剂在治疗所述疾病上的功效。
14.如权利要求1-12中任何项所述的方法,进一步包括向患有癌症的受试者施用鉴别为抑制BAX的二聚化或激活BAX的试剂,以及测试所述试剂在治疗癌症上的功效。
15.一种由以下组成的肽:
a)TWQTVTIFVAGVLTASLTIWKKMG(SEQ ID NO:11),
b)TWQTVTIFVAGVLTASLT(SEQ ID NO:12),
c)TWQTVTIFVAGVLTA(SEQ ID NO:13),
d)TWQTVTIFVAGVL(SEQ ID NO:14),
e)包含序列TXQTXXIFXAG(SEQ ID NO:15)的11-30个氨基酸残基,其中任何位置处的X可独立地为任何氨基酸或非天然氨基酸或非天然存在的化学修饰氨基酸,
f)包含序列TXQTXXIFXAGVXTA(SEQ ID NO:16)的15-30个氨基酸残基,其中任何位置处的X可独立地为任何氨基酸或非天然氨基酸或非天然存在的化学修饰氨基酸,或
g)包含序列Y1XY2Y3XXY4Y5XY6Y7(SEQ ID NO:17)的11-30个氨基酸残基,其中Y1为苏氨酸或保守氨基酸或非天然氨基酸或非天然存在的化学修饰氨基酸,Y2为谷氨酰胺或保守残基或非天然氨基酸或非天然存在的化学修饰氨基酸,其中Y3为苏氨酸或保守氨基酸或非天然氨基酸或非天然存在的化学修饰氨基酸,其中Y4为异亮氨酸或保守氨基酸或非天然氨基酸或非天然存在的化学修饰氨基酸,其中Y5为苯丙氨酸或保守氨基酸或非天然氨基酸或非天然存在的化学修饰氨基酸,其中Y6为丙氨酸或保守氨基酸或非天然氨基酸或非天然存在的化学修饰氨基酸,其中Y7为甘氨酸或保守氨基酸或非天然氨基酸或非天然存在的化学修饰氨基酸,其中任何位置处的X可独立地为任何氨基酸或天然或非天然存在的化学修饰氨基酸。
16.如权利要求15所述的肽,其由序列TXQTXXIFXAG(SEQ ID NO:15)或序列TXQTXXIFXAGVXTA(SEQ ID NO:16)组成。
17.一种化学合成肽,其由权利要求15或16所述肽中的任何者组成。
18.一种通过重组DNA或cDNA产生的肽,所述肽由权利要求15或16所述肽中的任何者组成。
19.一种分离和纯化的肽,其由权利要求15或16所述肽中的任何者组成。
20.一种抑制BAX的方法,所述方法包括使BAX与权利要求15-19中任何项所述的肽接触。
21.如权利要求20所述的方法,其中BAX处于活细胞中并且BAX的抑制抑制细胞死亡。
22.如权利要求20或21所述的方法,其中所述BAX处于受试者中并且将试剂施用于受试者。
23.如权利要求22所述的方法,其中受试者是人。
24.如权利要求22或23所述的方法,其中受试者患有与过早或不需要的细胞死亡相关联并且特征为BAX的异常激活、表达或功能的疾病或病症。
25.如权利要求13或24所述的方法,其中所述疾病或病症是心血管疾病或病症、神经变性或神经疾病或障碍、肝疾病或病症、肾疾病或病症、免疫病症、缺血、不育症、血液病症、肾缺氧、肝炎、哮喘或AIDS。
26.一种标记的肽,其包含连接至荧光标记或放射性标记的权利要求15-19中任何项所述的肽。
27.一种鉴别用作抑制细胞死亡的候选试剂的试剂的方法,所述方法包括:
在试剂存在和缺少时,使BCL-2相关X蛋白(BAX)与权利要求15-19或26中任何项的一种或多种肽接触,以及
测量所述一种或多种肽与BAX的结合,
其中相比于试剂缺少时所述一种或多种肽与BAX的结合,在试剂存在时所述一种或多种肽与BAX减少的结合表明试剂是用于抑制细胞死亡的候选试剂。