本发明属于天然有机化学领域，具体涉及一种同时提取富集金银花中六环烯醚萜苷类成分的方法。
背景技术：
金银花为忍冬科忍冬属植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或初开的花。其味甘、性寒，归肺、心、胃经，具有清热解毒、疏散风热的功能。金银花及相关中成药在清热解毒、抗病毒等方面疗效显著，在临床上得到广泛应用。
金银花的化学成分包括挥发油、环烯醚萜苷类化合物、三萜及三萜皂苷类化合物、黄酮类化合物、有机酸类化合物等。其中，环烯醚萜苷类化合物是金银花中的一类重要化学成分。近年来研究发现，环烯醚萜苷类成分具有抗病毒、抗菌、抗氧化、保肝利胆、抗肿瘤、抗炎、增强免疫等多种活性。
有报道指出，目前金银花中目前已被分离鉴定出的环烯醚萜苷类化合物多达36个，其中马钱酸、莫诺苷、马钱苷、当药苷、断氧化马钱子苷和开联番木鳖苷二甲基乙缩醛6种环烯醚萜苷类化合物因其具有较好的抗病毒、抗炎、保肝利胆、抑制肿瘤等药理作用愈发受到研究人员的重视。因此，如何有效、便捷和安全的提取富集这6种环烯醚萜苷类成分成为更好利用金银花问题之关键。现有报道中对环烯醚萜苷类提取富集方法多样，水蒸气蒸馏法、超临界流体萃取法、有机溶剂提取法等方法均有报道，然而超临界流体萃取法虽然具有收率高、挥发油不易分解氧化，绿色无污染等优点，但设备一次性投入大，成本高，在工业化提取中药及植物挥发油的应用并不普遍。有机溶剂提取法则存在色素等杂质较多，且有溶剂残留。而水蒸气蒸馏法工业化提取环烯醚萜苷类化合物的主要问题是环烯醚萜苷类具亲水性，与水分离效果较差，收率很低。而且由于每种环烯醚萜苷类化合物均具有各自特有的基团，造成其理化性质存在差异，因此造成富集提取特定多种环烯醚萜苷类化合物时更加困难。因此，发展适合金银花中这6种环烯醚萜苷类成分的快速、高效的提取富集方法亟待解决。
技术实现要素：
针对上述现有技术的不足，本发明提供一种同时提取富集金银花中环烯醚萜苷类成分的方法，该方法操作简便、样品富集效果好，结果重现性高，稳定性好。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种同时提取富集金银花中六种环烯醚萜苷类成分的方法，其中提取富集的六种环烯醚萜苷类成分是马钱酸、莫诺苷、马钱苷、当药苷、断氧化马钱子苷和开联番木鳖苷二甲基乙缩醛，具体步骤如下：
(1)取干燥粉碎过20-40目筛的金银花粉末，使用乙醇作为提取溶剂，对金银花粉末进行超声提取，超声后对乙醇提取液进行抽滤，旋蒸浓缩至无醇味，得提取液备用；
(2)将步骤(1)得到的提取液上样大孔吸附树脂进行六种环烯醚萜苷类成分富集，吸附过程上样量为0.5-0.7g金银花粉末/mL树脂，体积流量为1-3BV/h；采用乙醇溶液进行梯度洗脱得六种环烯醚萜苷类成分的乙醇洗脱液，洗脱前先用水洗除杂。
(3)将步骤(2)得到的乙醇洗脱液除去乙醇得环烯醚萜苷。
优选的，所述步骤(1)中过筛目数为20目；所用乙醇为50％乙醇，所述金银花粉末与乙醇质量体积比为1g:10ml；
优选的，所述步骤(1)中超声提取具体条件为：超声提取2h，超声时温度为25℃；
优选的，所述步骤(2)中大孔吸附树脂为NKA-2树脂或HPD-826树脂；进一步优选的，所述大孔吸附树脂为HPD-826树脂；
优选的，所述步骤(2)中吸附过程上样量为0.61g金银花粉末/mL树脂；
优选的，所述步骤(2)中体积流量为2BV/h；
优选的，所述步骤(2)中水洗除杂中蒸馏水用量为3BV；
优选的，所述步骤(3)中梯度洗脱方法为：10％乙醇洗脱7BV，30％乙醇洗脱7BV，50％乙醇洗脱2BV；
优选的，上述方法中所用乙醇均为药用乙醇。
本发明还公开了上述方法在中药环烯醚萜苷类成分提取富集中的应用。
本发明克服了现有技术的缺陷和条件的限制，与现有技术相比本发明具有如下有益效果：
(1)本发明采用大孔树脂吸附法，对采用超声波提取的金银花环提取液进行富集，用药用乙醇进行洗脱，用量较少，可直接得到高浓度的6种环烯醚萜苷类成分乙醇溶液，蒸去溶剂后即得环烯醚萜苷类；在解决了工业大生产中有机残留问题的同时，还减少了有机溶剂的使用量。
(2)本发明的方法可以适用于不同中药的环烯醚萜苷类成分的提取富集，可显著提高环烯醚萜苷类成分的收率，结果重现性高，稳定性好。所用溶剂为药用乙醇，安全无毒，价廉。
(3)本发明的方法特别适用于亲水基团比例较高的物质如环烯醚萜苷类成分及其类似物的提取。由于亲水基团比例较高的物质难以与水进行分离，造成提取困难，同时，对于多种物质同时提取则更增加了提取难度，本发明通过采用大孔树脂吸附，选取适合型号的大孔树脂及富集工艺参数，则实现了对此类难提取物质的提取富集。本发明提取富集方法操作简便、样品富集效果好，结果重现性高，稳定性好。
具体实施方式
结合实施例对本发明作进一步的说明，应该说明的是，下述说明仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。
实施例1：金银花中六种环烯醚萜苷类成分提取富集工艺
1.取干燥粉碎过20目筛的金银花粉末300g，50％乙醇作为提取溶剂，料液比1g:10ml进行超声提取，超声2h，超声温度25℃，提取液抽滤，旋蒸浓缩至无醇味，备用。
2.HPD-826型大孔吸附树脂，以体积流量为2BV/h上样吸附，每mL湿态树脂处理0.61g金银花粉末，吸附完全后，3BV蒸馏水水洗除杂，然后进行梯度洗脱：7BV 10％乙醇，7BV 30％乙醇，2BV 50％乙醇梯度洗脱，洗脱体积流量为2BV/h，得到的乙醇洗脱液除去乙醇得环烯醚萜苷。
经试验验证，经HPD-826大孔树脂富集后，各环烯醚萜苷含量得到大幅度提高，同时保留率大部分在64％以上，当药苷和开联番木鳖苷二甲基乙缩醛的保留率甚至达到了100％。表明该方法具有对6种烯醚萜苷具有优异的富集效果。
实施例2：金银花中六种环烯醚萜苷类成分提取富集工艺
1.取干燥粉碎过20目筛的金银花粉末300g，50％乙醇作为提取溶剂，料液比1g:10ml进行超声提取，超声2h，超声温度25℃，提取液抽滤，旋蒸浓缩至无醇味，备用。
2.HPD-826型大孔吸附树脂，以体积流量为3BV/h上样吸附，每mL湿态树脂处理0.7g金银花粉末，吸附完全后，3BV蒸馏水水洗除杂，然后进行梯度洗脱：7BV 10％乙醇，7BV 30％乙醇，2BV 50％乙醇梯度洗脱，洗脱体积流量为2BV/h，得到的乙醇洗脱液除去乙醇得环烯醚萜苷。
实施例3：金银花中六种环烯醚萜苷类成分提取富集工艺
1.取干燥粉碎过20目筛的金银花粉末300g，50％乙醇作为提取溶剂，料液比1g:10ml进行超声提取，超声2h，超声温度25℃，提取液抽滤，旋蒸浓缩至无醇味，备用。
2.NKA-2型大孔吸附树脂，以体积流量为1BV/h上样吸附，每mL湿态树脂处理0.5g金银花粉末，吸附完全后，3BV蒸馏水水洗除杂，然后进行梯度洗脱：7BV 10％乙醇，7BV 30％乙醇，2BV 50％乙醇梯度洗脱，洗脱体积流量为2BV/h，得到的乙醇洗脱液除去乙醇得环烯醚萜苷。
对比例1
将HPD-826大孔树脂替换为D4020、HPD-500、DM130、D101、HPD-400和HPD-100，其余同实施例1。
计算实施例1和对比例1六种大孔树脂对六种环烯醚萜苷类成分的吸附量，结果见表1。
表1大孔树脂吸附能力(mg/mL)
从表1可以看出，各种型号的大孔吸附树脂对于金银花提取液中的环烯醚萜苷成分都有不同程度的吸附。但是HPD-826吸附效果远优于其他吸附树脂。
对比例2
将实施例1中的上样体积流量调整为1BV/h，5BV/h，10BV/h和20BV/h，其余同实施例1。
上样完成后，测定实施例1、对比例2中大孔树脂对六种环烯醚萜苷类成分的吸附率，结果见表2。
表2上样流速考察结果
结果表明，上样流速较低时，大孔树脂对六种环烯醚萜苷的吸附率较高，随着流速的增加，大孔树脂对六种环烯醚萜苷的吸附率降低。但上样流速也不宜偏低，流速过低会降低生产效率，增加生产成本。因此，综合考虑吸附效果和生产效率，以实施例1所采用的上样流速2BV/h为宜。
对比例3
将实施例1中的梯度洗脱(方案1)修改为单一方式洗脱，分别使用7BV 10％乙醇单一方式洗脱(方案2)，7BV 30％乙醇单一方式洗脱(方案3)，2BV 50％乙醇单一方式(方案4)洗脱，计算实施例1与对比例3各洗脱方式六种环烯醚萜苷类成分各解吸率。
表3洗脱方式解吸率考察结果
由表3结果不难看出，尽管对比例单一洗脱方式存在某一种或几种环烯醚萜苷类成分解吸率高于实施例1中的梯度洗脱，但综合来看，实施例1中的洗脱方式远优于对比例方案2-4。
上述虽然结合实施例和对比例对本发明的具体实施方式进行了描述，但并非对本发明保护范围的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围以内。