本发明涉及一种低分子量透明质酸制备方法及应用，特别是涉及应用Fe2+及S2O82-氧化体系硫酸根自由基对透明质酸的氧化降解作用，来制备低分子量透明质酸的方法。属于生物技术领域。
背景技术：
透明质酸 (hyaluronic acid， HA) 是一种酸性黏多糖， 由 N- 乙酰氨基葡糖和 D- 葡糖醛酸双糖重复单位通过 β-(1 → 4) 糖苷键和 β-(1 → 3) 糖苷键构成的无分支高分子糖胺聚糖， 存在于动物组织细胞间质和某些细菌的荚膜中。透明质酸广泛用于医药、 化妆品、食品等领域，分子量一般为 10 5 ~10 7 Da（道尔顿）。寡聚透明质酸是指分子量小于 10kDa 的透明质酸。 研究表明， 分子量对透明质酸的活性有很大影响，但是对分子的渗透性影响很大，因此小分子透明质酸在生物渗透，生物降解方面具有独特的特性，极具应用价值。
目前， 透明质酸降解的方法主要有物理降解、 化学降解、 生物降解三大类， 物理降解法很难将透明质酸降至 10kDa 以下， 化学降解法和酶法可以制备寡聚透明质酸， 但化学降解法制备寡聚透明质酸， 需要较剧烈的反应条件 （如较高的酸碱浓度等）才能达到最大程度的降解。此时， 不但糖链上的糖苷键断裂， 而且单糖 （葡糖醛酸和乙酰氨基葡糖） 残基的结构也遭到破坏， 如乙酰基被水解掉， 单糖六元环断裂等， 对制得的寡聚透明质酸的生物活性产生一定影响。化学降解法制备的寡聚透明质酸还容易发生褐变 （专利申请号201110008110.9），生产过程会污染环境。因此，本发明采用物理降解方法制备小分子透明质酸。
技术实现要素：
本发明的目的在于解决现有技术存在的上述技术问题，通过研究改进，提供了一种采用Fe2+及S2O82-氧化体系硫酸根自由基对透明质酸的氧化降解作用，来制备低分子量透明质酸的方法。本发明包括配制溶液，降解发酵，沉淀，超高速旋转离心，浓缩，冻干等系列工艺。
本发明给出的技术方案是：这种低分子量透明质酸制备方法，其特点是有以下步骤：
1）以透明质酸（1x106Da）为原料配制溶液，具体为加入5mg/ml摩尔浓度的透明质酸5mg;
2）以Fe2+（10mmol/l）摩尔浓度原料配制溶液，加入2.5mg该溶液;
3）以S2O82-(10mmol/l)摩尔浓度为原料配制溶液，加入2.5mg该溶液;
4）使用H2So42-溶液将混合溶液PH值调制5-6;
5）将液体稀释5倍;
6）加热至35℃-40℃，降解30-60分钟;
7)降解后使用70%乙醇沉淀降解产物;
8)放入离心器中，高速离心，转速400-900r/min;
9)凝缩，冻干成冻干粉;
10)将冻干粉采用凝胶层析纯化，注入蒸馏水清浇脱水，水流速0.3-0.7ml/min;
11)浓缩，冻干得小分子透明质酸。
所述低分子量透明质酸制备方法，在于每1kg透明质酸原料，加入0.5kgFe2+标准摩尔溶液，加入0.5kg S2O82-标准摩尔溶液。
所述低分子量透明质酸制备方法，在于小分子透明质酸应为医学，化妆品。
具体实施方式
实施例1。
使用材料：透明质酸1x106Da，1.1-二苯基苦基苯肼(DPPH)、硝基四氮唑蓝(NBT)、吩嗪硫酸甲酯(PMS)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)、菲洛嗪(ferrozine)Sigma，多糖系列标准品P-82 0.59-78.8x104 Da，FeSO4.7H20、K2S208，分析纯。实验用水为二次蒸馏水，其它试剂均为分析纯。
本发明给出的这种低分子量透明质酸制备方法，包括有以下步骤。
1）以透明质酸（1x106Da）为原料配制溶液，具体为加入5mg/ml摩尔浓度的透明质酸5mg。
2）以Fe2+（10mmol/l）摩尔浓度原料配制溶液，加入2.5mg该溶液。
3）以S2O82-(10mmol/l)摩尔浓度为原料配制溶液，加入2.5mg该溶液。
4）使用H2So42-溶液将混合溶液PH值调制5-6。
5）将液体稀释5倍。
6）加热至35℃-40℃，降解30-60分钟。。
7）降解后使用70%乙醇沉淀降解产物。
8）放入离心器中，高速离心，转速400-900r/min。
9）凝缩，冻干成冻干粉。
10）将冻干粉采用凝胶层析纯化，注入蒸馏水清浇脱水，水流速0.3-0.7ml/min.
浓缩，冻干得小分子透明质酸。