一种从55天果龄罗汉果中提取及检测罗汉果苷IV、苷V的方法与流程

文档序号:12242446阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种从55天果龄罗汉果中提取及检测罗汉果苷IV、苷V的方法,其特征在于:包括提取步骤和检测步骤,

所述提取步骤如下:

1)前处理

取55天果龄的新鲜罗汉果为原料,称重、捣碎均匀;得罗汉果浆,备用;

2)提取

采用60%乙醇水溶液加超声波辅助提取;以质量比例计,料液比1:2,控制温度为50℃,用53Hz的超声波辅助提取;将料液用离心机在2500r/min离心15min,抽滤;滤渣再用60%乙醇水溶重复提取一次;合并滤液,得到罗汉果初提液;

3)絮凝

用Ca(OH)2乳浊液进行絮凝,加入罗汉果浆质量15%的10%Ca(OH)2乳浊液,进行搅拌絮凝;离心,得到澄清溶液;

4)回收乙醇

将到得澄清溶液浓缩至流浸膏状态,回收除去乙醇;加入纯水溶解流浸膏,得到提取澄清水溶液;

5)层析

采用D101大孔树脂对罗汉果提取澄清水溶液进行分离、纯化;

先上柱吸附,过柱条件:上样液,将得到提取澄清水溶液调到pH为9.0,使用两倍柱体积每小时的流速过柱;过柱完成后依次用纯水、20%乙醇清洗、60%乙醇洗脱,流速都使用每小时两倍柱体积过柱,60%乙醇洗脱液总用量为 3倍树脂床体积,收集60%乙醇洗脱液;

6)减压浓缩,干燥

将收集到的60%乙醇洗脱液减压浓缩回收乙醇,得到浓缩液;将浓缩液进一步干燥,得到有高含量的罗汉果苷IV、罗汉果苷V的罗汉果提取物;

所述检测步骤如下:用HPLC法检测

A 标准品的制备

用万分之一天平精确地称量8.2mg 98.56%的罗汉果甜苷V标准品,置于10mL的容量瓶,用甲醇定容至刻度,在25℃下用超声波药品处理机超声15min,溶解;并用微孔滤膜过滤所得溶液,将过滤后的液体置于进样瓶待检测;再精确称量3.0mg 98.79%的罗汉果甜苷IV标准品,处理,置于进样瓶待检测;

B 供试品的制备

精确称量30mg左右的样品,置于10ml的容量瓶,用甲醇定容,超声波处理15min后,用针筒吸取样品上清液,并经过微孔滤膜处理,将过滤后的样品液置于进样瓶待检测;

C 色谱柱条件

C18柱(4.6 mm×150mm),乙腈-水溶液的质量比例为21:79;检测波长为203nm;流速1 mL/min,柱温25℃,进样量10µL,跑柱30min;

D 处理流动相

将乙腈和纯水分别通过过滤装置,乙腈采用有机系滤膜,纯水采用水系滤膜;将过滤后的液体分装到干净的流动相瓶子,并用保鲜膜封住瓶口,留一个小孔,再超声处理20min;

E 样品检测。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述高含量的罗汉果苷IV、罗汉果苷V的罗汉果提取物,罗汉果苷IV含量为5.02%,罗汉果苷V含量为15.77%。

3.按照权利要求1所述的方法所得到的高含量的罗汉果苷IV、罗汉果苷V的罗汉果提取物。

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