一种用叶绿体微卫星引物对鉴定霍山石斛的方法与流程

文档序号:11838664阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用叶绿体微卫星引物对鉴定霍山石斛的方法,其特征在于操作步骤如下:

(1)提取待测样品的DNA作为模板,采用引物对进行PCR扩增反应,得到PCR扩增产物;

所述引物对为:上游引物CPSSR1s:5’-CGTATGCGATAGAAGAAT-3’,

下游引物CPSSR1a:5’-ATCTGTAGATTGGGCTCT-3’;

(2)琼脂糖凝胶电泳法检测PCR扩增产物

若PCR扩增产物中含有282 bp的DNA片段,则所述待测样品中含有霍山石斛;若PCR扩增产物中不含有282 bp的DNA片段,则所述待测样品中不含有霍山石斛。

2.根据权利要求1所述一种用叶绿体微卫星引物对鉴定霍山石斛的方法,其特征在于:步骤(1)PCR扩增反应中,PCR反应体系的总体积25 µL,其中0.5 µL待测样品的DNA,1.0µL含量为10 pmol的上游引物CPSSR1s,1.0 µL含量为10 pmol的下游引物CPSSR1a,2.5 µL 10×buffer缓冲液,1.5 µL浓度为25 mM的氯化镁水溶液,0.5 µL浓度为10 mM的dNTPs ,0.5 µL浓度为5U/µL的Taq DNA聚合酶,无菌双蒸水补足至25 µL;PCR扩增反应条件: 95 ℃ 5 min;95 ℃ 30 s,55 ℃ 30 s,72 ℃ 30 s,35个循环;72 ℃ 10 min。

3.根据权利要求1所述一种用叶绿体微卫星引物对鉴定霍山石斛的方法,其特征在于:步骤(2)的具体操作如下:取5 µL PCR扩增产物,用2%的琼脂糖凝胶,在电压80-90V下电泳30分钟,凝胶成像系统下观察并拍照;若PCR扩增产物中含有282 bp的DNA片段,则所述待测样品为霍山石斛;若PCR扩增产物中未含有282 bp的DNA片段,则所述待测样品为非霍山石斛。

4.一种权利要求1所述用叶绿体微卫星引物对鉴定霍山石斛的检测试剂盒,其特征在于:将PCR反应体系中的上游引物CPSSR1s和下游引物CPSSR1a分别单独包装;将除待测样品的DNA、上游引物CPSSR1s和下游引物CPSSR1a外的其它物质混合均匀单独包装;将以上分别单独包装的物质放置于同一个试剂盒内,组成一个检测试剂盒。

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