一种保持建鲤遗传多样性的方法与流程

文档序号:12167784阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种保持建鲤遗传多样性的方法,其特征在于,包含以下步骤:

第1步、个体标记:从建鲤繁殖群体中选取雌雄各300尾以上体质健壮的个体进行个体标记;

第2步、建立模板:采样被标记建鲤的血液或鳍条,提取全基因组DNA;

第3步、基因分型:选用12~15个扩增稳定、且在繁殖群体中含有3个以上等位基因的微卫星位点,设计微卫星引物,以第2步提取的基因组DNA为模板,进行PCR扩增、判定基因型;

第4步、构建家系:将基因型判定结果进行数字化处理,用遗传分析软件进行分析,获得每个个体之间的遗传距离和群体遗传多样性参数;选择个体间遗传距离大于平均遗传距离的个体进行配组繁殖,构建30个以上家系;

第5步、建立育种档案:第4步构建的家系中每家系取100尾以上体质健壮的个体进行个体标记,作为后备亲本,后备亲本经第2步~第4步处理,获得各家系之间和每个家系的个体之间的遗传距离;

第6步、亲本更新:根据育种档案,每4年从后备亲本中选择家系间和个体间遗传距离大于平均遗传距离、体质健壮的个体进行配组繁殖,构建新家系,更新亲本。

2.根据权利要求1所述的一种保持建鲤遗传多样性的方法,其特征在于,第1步中采用的标记为PIT电子标记。

3.根据权利要求1所述的一种保持建鲤遗传多样性的方法,其特征在于,第3步中选用15个扩增稳定、且在繁殖群体中含有4~13个等位基因的微卫星位点,设计微卫星引物,以第2步提取的基因组DNA为模板,进行PCR扩增、判定基因型。

4.根据权利要求1所述的一种保持建鲤遗传多样性的方法,其特征在于,第4步构建家系中,建鲤群体个体之间遗传距离为0.0900~0.7546,平均为0.4652;平均观测杂合度为0.671,平均多态信息含量为0.506。

5.根据权利要求1所述的一种保持建鲤遗传多样性的方法,其特征在于,第5步中,所述育种档案中包括繁殖群体来源,个体标记号,性别,个体间遗传距离;后备亲本的父、母本个体标记号,个体间遗传距离,繁殖时间;后备亲本个体标记号,性别,后备亲本各家系间和个体间遗传距离;后备亲本体长、体高、体厚等数量性状参数;后备亲本各家系畸型率,病害情况和生长状况。

6.根据权利要求1所述的一种保持建鲤遗传多样性的方法,其特征在于,第5步中,后备亲本群体个体之间遗传距离为0.118~0.967,平均为0.6279;家系之间的遗传距离在0.142~0.683之间,平均0.4280;平均观测杂合度为0.757,平均多态信息含量为0.745。

7.根据权利要求1所述的一种保持建鲤遗传多样性的方法,其特征在于,第3步中PCR扩增的反应体系为10μL,其中10×反应缓冲液1.0μL,Mg2+ 2mmol/L,dNTP 200μmol/L,上下游引物各0.2μmol/L,Taq酶0.3U,DNA 50ng~80ng,灭菌双蒸馏水补足至10μL。

8.根据权利要求1所述的一种保持建鲤遗传多样性的方法,其特征在于,第3步中PCR扩增的反应条件为:94℃ 3min;94℃ 20s,51℃~60℃退火20s,72℃ 20s,25~30个循环;72℃延伸5min。

9.根据权利要求1所述的一种保持建鲤遗传多样性的方法,其特征在于,第3步中PCR扩增结束后,PCR产物用8.0%的聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分离,银染法染色后,拍照记录电泳结果。

10.根据权利要求1所述的一种保持建鲤遗传多样性的方法,其特征在于,第4步中采用的遗传分析软件为populations软件和Cervus3.0软件。

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