本发明属于益生菌产品领域，尤其涉及一种包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法。
背景技术：
益生菌是一类对宿主有益的活性微生物，是定植于人体肠道、生殖系统内，能产生确切健康功效从而改善宿主微生态平衡、发挥有益作用的活性有益微生物的总称。人体、动物体内有益的细菌或真菌主要有：酪酸梭菌、乳酸菌、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、放线菌以及酵母菌等。定期的摄入益生菌，对于人体的健康大有裨益。但是，经过科学实验认证，益生菌以液态存活非常难且益生菌怕水，因此，人们通常会服用包埋型益生菌产品，来实现益生菌在人体内的肠部等位置释放，更好地发挥益生菌的作用。
为确保包埋型益生菌产品的最优效果以及产品质量检测的需求，对于包埋型益生菌产品的活菌数量检测显得尤为重要。现有技术中，通常采用国标GB4789.35-2010乳酸菌检验法来进行活菌数量检测，但是，上述检测方法，由于无法将包埋型益生菌产品的包埋层有效地溶解，而使得益生菌无法最大限度地释放，导致计数误差大、检出率低。从上述背景技术的描述可以得出，现有技术中，包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法，具有计数误差大以及检出率低的技术缺陷。
因此，研发出一种包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法，用于解决现有技术中，包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法具有计数误差大以及检出率低的技术缺陷，成为了本领域技术人员亟待解决的问题。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明提供了一种包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法，用于解决现有技术中，包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法具有计数误差大以及检出率低的技术缺陷。
本发明提供了一种包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法，所述活菌数量检测方法为：
步骤一、预处理：待检测的包埋型益生菌产品经预处理后溶于磷酸盐稀释液，震荡摇匀，得第一产物；
步骤二、稀释：所述第一产物用所述磷酸盐稀释液稀释，得第二产物；
步骤三、菌落培养：所述第二产物进行菌落培养，得第三产物；
步骤四、菌落计数：所述第三产物经菌落计数，得活菌检测结果。
优选地，所述预处理的方法为：所述待检测的包埋型益生菌产品在无菌条件下研磨。
优选地，所述包埋型益生菌产品与所述磷酸盐稀释液的比值为(0.5～2)g：(100～500)ml。
优选地，所述磷酸盐稀释液包括：Na2HPO4溶液和NaH2PO4溶液；
所述Na2HPO4溶液和NaH2PO4溶液的体积比为(55～65)：(45～35)。
优选地，所述Na2HPO4溶液的浓度为0.15～0.35mol/L，所述NaH2PO4溶液的浓度为0.15～0.35mol/L。
优选地，所述稀释步骤中，所述第一产物和所述磷酸盐稀释液的体积比为1：9。
优选地，所述稀释的次数为3～10次。
优选地，所述菌落培养的培养基为MRS培养基，所述第二产物与所述培养基的体积比为1：(15～20)，所述菌落培养的温度为36±1℃，所述菌落培养的时间为48～72h。
优选地，所述菌落计数需经过空白对照组纠正，所述菌落技术的方法为：选取菌落数在30～300之间的培养皿进行计数。
优选地，所述空白对照组的对照品为所述磷酸盐稀释液。
综上所述，本发明提供了一种包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法，所述活菌数量检测方法为：步骤一、预处理：待检测的包埋型益生菌产品经预处理后溶于磷酸盐稀释液，震荡摇匀，得第一产物；步骤二、稀释：所述第一产物用所述磷酸盐稀释液稀释，得第二产物；步骤三、菌落培养：所述第二产物进行菌落培养，得第三产物；步骤四、菌落计数：所述第三产物经菌落计数，得活菌检测结果。本发明提供的技术方案中，对待检测的包埋型益生菌产品进行研磨、多次稀释，确保益生菌可以有效溶解；同时，选用磷酸盐稀释液对于包埋曾进行溶解，有效地提高了益生菌的释放。解决了现有技术中，包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法具有计数误差大以及检出率低的技术缺陷。同时，本发明提供的技术方案，还具有操作简单、应用范围广的优点。
具体实施方式
本发明提供了一种包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法，用于解决现有技术中，包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法具有计数误差大以及检出率低的技术缺陷。
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
为了更详细说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的一种包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法，进行具体地描述。
实施例1
1.1 配制磷酸盐稀释液
分别配制0.2mol/L的Na2HPO4以及0.2mol/L的NaH2PO4溶液各1000ml，按溶液体积比为Na2HPO4:NaH2PO4＝61:39的比例混匀，配成磷酸盐稀释液，所得磷酸盐稀释液的pH为7.0。在121℃的灭菌釜中灭菌15分钟。
本实施例中所使用的培养基为MRS培养基，具体为：Oxoid CM0361。
本实施例中所使用的设备及材料按GB/T 4789.35-2003《食品微生物学检验乳酸菌饮料中乳酸菌检验》中第4项要求。
1.2 试样制备
取适量的市售益生菌咀嚼片样品置于无菌研钵中研细，精密称取1.0克细粉末加入500ml带无菌玻璃珠的无菌锥形瓶中，一次性加入无菌磷酸盐稀释液300ml，用手振摇约10分钟，让瓶中样品充分溶解，必要时用漩涡振荡器使瓶底的不溶物充分分散、溶解，配制得到1：3×102样品溶液。
精密吸取1ml上述1：3×102样品溶液，加到9ml无菌磷酸盐稀释液，摇匀成为1：3×103样品溶液。再精密吸取1ml上述1：3×103样品液加到9ml无菌磷酸盐稀释液摇匀成为1：3×104样品溶液。按上述操作顺序，做10倍递增样品溶液，每递增稀释一次，即换1次1ml无菌吸管或吸头，直至递增稀释到1：3×108样品溶液为止。
分别取1：3×107样品液和1：3×108样品溶液各1ml，接种于无菌平皿中，每个样品平行制备两个平皿，另外，取1ml无菌磷酸盐稀释液加入两个无菌平皿作空白对照。将15～20ml冷却至45℃的MRS培养基倾注于每个平皿中，小心旋转平皿将培养基与样品溶液充分混匀，待琼脂凝固后翻转平板，置于36±1℃下培养48小时。
1.3 菌落计数及报告
选取菌落数在30-300之间平板进行计数，再乘以相应稀释倍数，采用10的指数表示，每克食品中所含有乳酸菌数以CFU/g表示。具体方法按菌落总数的规定报告。
本实施例中，所测得的乳酸菌数为＝2.1×109cfu/g。
实施例2
1.1 配制磷酸盐稀释液
分别配制0.25mol/L的Na2HPO4以及0.15mol/L的NaH2PO4溶液各1000ml，按溶液体积比为Na2HPO4:NaH2PO4＝55:45的比例混匀，配成磷酸盐稀释液，所得磷酸盐稀释液的pH为7.0。在121℃的灭菌釜中灭菌15分钟。
本实施例中所使用的培养基为MRS培养基，具体为：Oxoid CM0361。
本实施例中所使用的设备及材料按GB/T 4789.35-2003《食品微生物学检验乳酸菌饮料中乳酸菌检验》中第4项要求。
1.2 试样制备
取适量的市售益生菌咀嚼片样品置于无菌研钵中研细，精密称取0.5克细粉末加入500ml带无菌玻璃珠的无菌锥形瓶中，一次性加入无菌磷酸盐稀释液150ml，用手振摇约10分钟，让瓶中样品充分溶解，必要时用漩涡振荡器使瓶底的不溶物充分分散、溶解，配制得到1：3×102样品溶液。
精密吸取1ml上述1：3×102样品溶液，加到9ml无菌磷酸盐稀释液，摇匀成为1：3×103样品溶液。再精密吸取1ml上述1：3×103样品液加到9ml无菌磷酸盐稀释液摇匀成为1：3×104样品溶液。按上述操作顺序，做10倍递增样品溶液，每递增稀释一次，即换1次1ml无菌吸管或吸头，直至递增稀释到1：3×108样品溶液为止。
分别取1：3×107样品液和1：3×108样品溶液各1ml，接种于无菌平皿中，每个样品平行制备两个平皿，另外，取1ml无菌磷酸盐稀释液加入两个无菌平皿作空白对照。将15～20ml冷却至45℃的MRS培养基倾注于每个平皿中，小心旋转平皿将培养基与样品溶液充分混匀，待琼脂凝固后翻转平板，置于36±1℃下培养72小时。
1.3 菌落计数及报告
选取菌落数在30～300之间平板进行计数，再乘以相应稀释倍数，采用10的指数表示，每克食品中所含有乳酸菌数以CFU/g表示。具体方法按菌落总数的规定报告。
本实施例中，所测得的乳酸菌数为＝1.8×109cfu/g。
实施例3
1.1 配制磷酸盐稀释液
分别配制0.18mol/L的Na2HPO4以及0.22mol/L的NaH2PO4溶液各1000ml，按溶液体积比为Na2HPO4:NaH2PO4＝65:35的比例混匀，配成磷酸盐稀释液，所得磷酸盐稀释液的pH为7.0。在121℃的灭菌釜中灭菌15分钟。
本实施例中所使用的培养基为MRS培养基，具体为：Oxoid CM0361。
本实施例中所使用的设备及材料按GB/T 4789.35-2003《食品微生物学检验乳酸菌饮料中乳酸菌检验》中第4项要求。
1.2 试样制备
取适量的市售益生菌咀嚼片样品置于无菌研钵中研细，精密称取2.0克细粉末加入1000ml带无菌玻璃珠的无菌锥形瓶中，一次性加入无菌磷酸盐稀释液600ml，用手振摇约10分钟，让瓶中样品充分溶解，必要时用漩涡振荡器使瓶底的不溶物充分分散、溶解，配制得到1：3×102样品溶液。
精密吸取1ml上述1：3×102样品溶液，加到9ml无菌磷酸盐稀释液，摇匀成为1：3×103样品溶液。再精密吸取1ml上述1：3×103样品液加到9ml无菌磷酸盐稀释液摇匀成为1：3×104样品溶液。按上述操作顺序，做10倍递增样品溶液，每递增稀释一次，即换1次1ml无菌吸管或吸头，直至递增稀释到1：3×108样品溶液为止。
分别取1：3×107样品液和1：3×108样品溶液各1ml，接种于无菌平皿中，每个样品平行制备两个平皿，另外，取1ml无菌磷酸盐稀释液加入两个无菌平皿作空白对照。将15～20ml冷却至45℃的MRS培养基倾注于每个平皿中，小心旋转平皿将培养基与样品溶液充分混匀，待琼脂凝固后翻转平板，置于36±1℃下培养72小时。
1.3 菌落计数及报告
选取菌落数在30～300之间平板进行计数，再乘以相应稀释倍数，采用10的指数表示，每克食品中所含有乳酸菌数以CFU/g表示。具体方法按菌落总数的规定报告。
本实施例中，所测得的乳酸菌数为＝2.5×109cfu/g。
请提供的具体活菌检测的实验，包括：实验方法、实验步骤和实验结果。
从实施例1～实施例3可以得出，本发明提供的技术方案，可有效检测包埋型益生菌的活菌数。
综上所述，本发明提供了一种包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法，所述活菌数量检测方法为：步骤一、预处理：待检测的包埋型益生菌产品经预处理后溶于磷酸盐稀释液，震荡摇匀，得第一产物；步骤二、稀释：所述第一产物用所述磷酸盐稀释液稀释，得第二产物；步骤三、菌落培养：所述第二产物进行菌落培养，得第三产物；步骤四、菌落计数：所述第三产物经菌落计数，得活菌检测结果。本发明提供的技术方案中，对待检测的包埋型益生菌产品进行研磨、多次稀释，确保益生菌可以有效溶解；同时，选用磷酸盐稀释液对于包埋曾进行溶解，有效地提高了益生菌的释放。解决了现有技术中，包埋型益生菌产品的活菌数量检测方法具有计数误差大以及检出率低的技术缺陷。同时，本发明提供的技术方案，还具有操作简单、应用范围广的优点。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。