一种从大豆中同步提取油脂和抗氧化多肽的方法与流程

本发明属于食品加工技术，主要涉及一种从大豆中同步提取油脂和抗氧化多肽的方法。

背景技术：

目前制取植物油脂，主要是用浸出法和机械压榨法。压榨法工艺简单，配套设备少，对油料品种适应性强，风味纯正，但压榨后的饼残油量高，出油效率较低，动力消耗大，零件易损耗。浸出法虽油脂提取率高(95％-98％)，但湿粕在高温脱溶过程中蛋白变性严重，而且有机溶剂的使用增加了工艺的繁琐性、降低了生产的安全性、造成环境污染，并且随着石油资源的枯竭，有机溶剂也必将耗尽。水酶法提油(EAEP)技术作为一种新兴的“绿色、环保”提油技术，在提取油脂的同时能综合利用水解液而获得具有抗氧化能力的多肽。并且高压脉冲电场处理对生物大分子酶具有抑制作用，可有效抑制脂肪氧化酶的活性，可得到氧化稳定性较高的油脂。

有研究结果表明，大豆多肽对脂质体系、非脂质体系、酶系统、非酶系统、体外实验均有显著的抗氧化作用。目前抗氧化大豆多肽的生产缺乏技术基础，抗氧化多肽提取耗时久、得率低、效果差、成本高，导致现在市场上的大豆多肽产品处于初级开发阶段。因此制备没有副作用的生物活性肽具有很大的应用前景。目前，用于水解大豆蛋白的水解酶主要有胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、细菌蛋白酶和霉菌蛋白酶等。本发明通过对酶的筛选得到中性蛋白酶和碱性蛋白酶的酶解物表现出比较高的还原能力，菠萝蛋白酶的酶解物还原能力其次，胃蛋白酶和木瓜蛋白酶的酶解物还原能力较低。原因可能是前三种酶在相同的时间内使更多的基团暴露在外；再有可能是前三种酶增加了酶切位点，更有利于具有还原能力的活性基团或活性位点暴露出来。因此，从提高还原能力的角度，优化选取中性蛋白酶、碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶。通过生物酶解的温和条件在获得大豆油脂的同时，获得得高产率、低成本且具有较强抗氧化能力的大豆多肽。

技术实现要素：

本发明所要改善的技术问题是在水酶法得到蛋白基础上，提供一种同步提取大豆油脂和大豆抗氧化多肽的生产方法。

本发明提供一种同步提取大豆油脂和大豆抗氧化多肽的生产方法，通过以下技术方案来实现的：

一种从大豆中同步提取油脂和抗氧化多肽的方法，该方法包括以下步骤：(1)大豆粉碎后过60目的筛，加水混合，水添加量为大豆粉质量10倍，浸泡1h，使之成为半固体状态的混合液；(2)将半固体混合液进行高压脉冲电场预处理，脉冲强度为28-32kV/cm，脉冲时间140-420μs，脉冲流速为50-70mL/min，脉冲频率为460-540Hz；向脉冲电场处理后的混合液中加入复合酶进行酶解，所述的复合酶包括Protex-7L中性蛋白酶、碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶，所述的酶解参数为：酶解温度50℃，酶解时间4h，总加酶量为混合液中大豆质量的8％，酶解后，100℃灭酶10min，冷却至4℃，5000r/min离心15min，分离得到大豆油脂和水解液；(3)将水解液通过超滤膜截留分离得到分子量为10kDa以下大豆多肽溶液，然后将溶液进行真空冷冻干燥，得到抗氧化性多肽。

将滤液经10kDa超滤膜(PS-10中空纤维组件)截流分离，保留浓缩液；超滤过程保持组件最大工作压力不超过0.15MPa,制备分子量为10kDa以下大豆多肽溶液。

添加复合酶中，中性蛋白酶、碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶添加量的比例为2:1:1。

本发明方法采用水酶法提取大豆油脂的同时，利用产生的水解液直接制得大豆抗氧化多肽；本发明所需要的设备简单、操作安全，在获得高质量的绿色油脂同时可以同步得到高附加值的大豆抗氧化多肽。

附图说明

附图1本工艺技术路线图；

附图2通过该方法制得的多肽还原能力的测定结果图；

附图3通过该方法制得的多肽清除过氧化氢能力的测定结果图。

具体实施方式

下面结合附图对本发明具体实施例进行详细描述。

一种同步提取大豆油脂和大豆抗氧化多肽的生产方法，该方法包括以下步骤：(1)将大豆粉碎后过筛再加入水，加水量为大豆质量10倍，浸泡1h，使之成为半固体状态的混合液；(2)将半固体混合液经高压脉冲电场预处理，脉冲强度为28-32kV/cm，脉冲时间140-420μs,脉冲流速为50-70mL/min，脉冲频率为460-540Hz；(3)再向经过脉冲电场处理后的混合液中加入Protex-7L中性蛋白酶、碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶的三酶复合物进行酶解，所述的酶解参数为：酶解温度50℃，酶解时间4h，加酶量为混合液中大豆质量的8％，酶解后，100℃灭酶10min。(4)冷却至4℃,5000r/min离心15min,分离得到大豆油脂和水解液，(5)取水解液经10kDa超滤膜(PP-100中空纤维组件)截流分离得到分子量为10kDa以下大豆多肽溶液，超滤过程保持组件最大工作压力不超过0.15MPa。(5)将大豆多肽溶液进行真空冷冻干燥，得到抗氧化性多肽。

抗氧化多肽还原能力的测定的原理为：

K3Fe(CN)6+样品→K4Fe(CN)6+样品氧化物

K4Fe(CN)6+Fe3+→Fe4[Fe(CN)6]3

样品提供电子，使体系中Fe3+还原成Fe2+，在波长为700nm下测定最终反应物的吸光度，吸光度越大，说明越多的Fe3+被还原成Fe2+，样品的还原能力就越强。一般情况，样品的还原能力与抗氧化能力呈正相关。

实施例1

抗氧化多肽还原能力测定的具体步骤：将10mg样品溶于1mL蒸馏水中，加入2.5mL 0.2mol/L的PBS(pH 6.6)和2.5mL 1％的铁氰化钾溶液混匀，从上述混匀的混合液中取1mL，然后加入0.2mL0.1％的三氯化铁溶液混匀，再加1mL蒸馏水摇匀，以蒸馏水调零，在700nm处测定吸光度。吸光度越高，说明样品的还原能力越强。

由附图1可知，大豆蛋白酶解液的还原能力大于未酶解的大豆蛋白还原能力，且在4h时酶解液的还原能力达到最大，前者为后者的1.91倍。酶解4h后酶解液还原能力逐渐变小，原因可能是在4h后酶解液中具还原能力的基团和位点更多地暴露出来，但随着水解程度的加深，分活性结构被破坏，酶解出的活性基团和位点其具有的还原能力不足以弥补被破坏的活性结构所具有的还原能力。因此在上述酶解条件下，4h为制备抗氧化大豆多肽的最适时间。

清除过氧化氢能力的测定：按照试剂盒所述的方法进行过氧化氢能力的测定，或者采用Adom的方法。由附图2可知，豆蛋白酶解液清除过氧化氢的能力远大于未经酶解的大豆蛋白清除能力，且在酶解4h时酶解液清除过氧化氢的能力达到最大，未酶解大豆蛋白的6.45倍，后逐渐变小。因此经4h酶解，可得到对过氧化氢有较强清除能力的大豆多肽。