一种用于检测紫杉醇亚细胞分布动力学的方法及模型建立与流程

文档序号:12412555阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于检测紫杉醇亚细胞分布动力学的方法及模型的建立方法,其特征在于,包括如下步骤:

S1. 细胞培养;

S2. 对步骤S1的细胞进行不同时间点给药后收样;

S3. 对步骤S2收样得到的细胞进行细胞亚结构提取物的制备;

S4. 对步骤S3得到的提取物进行蛋白定量;

S5. 检测步骤S3得到的提取物的紫杉醇含量;

S6. 通过分析紫杉醇含量和蛋白定量的比值,筛选出合适的给药时间及紫杉醇浓度,建立检测紫杉醇亚细胞分布动力学的方法及模型。

2.根据权利要求1所述的用于检测紫杉醇亚细胞分布动力学的方法及模型的建立方法,其特征在于,步骤S1所述细胞培养为:取对数生长期细胞接种至细胞培养皿中,连续培养。

3.根据权利要求1所述的用于检测紫杉醇亚细胞分布动力学的方法及模型的建立方法,其特征在于,步骤S2是对S1连续培养过程中的细胞进行不同时间点给药后收样处理。

4.根据权利要求1所述的用于检测紫杉醇亚细胞分布动力学的方法及模型的建立方法,步骤S3进行细胞亚结构提取物的制备时,根据细胞膜/细胞器、细胞质、细胞骨架、细胞核的蛋白溶解性不同,从细胞中提取不同细胞蛋白;且细胞贴壁培养,在提取细胞不同部分的过程中细胞依旧贴壁,防止提取过程中四部分混合。

5.根据权利要求1所述的用于检测紫杉醇亚细胞分布动力学的方法及模型的建立方法,其特征在于,步骤S4是利用BCA蛋白定量分析试剂盒对步骤S3得到的提取物进行蛋白定量。

6.根据权利要求1所述的用于检测紫杉醇亚细胞分布动力学的方法及模型的建立方法,其特征在于,步骤S5是利用UPLC-MS/MS方法检测步骤S3得到的提取物的紫杉醇含量。

7.根据权利要求1所述的用于检测紫杉醇亚细胞分布动力学的方法及模型的建立方法,其特征在于,步骤S1所述细胞为非小细胞肺癌A549细胞株。

8.根据权利要求1所述的用于检测紫杉醇亚细胞分布动力学的方法及模型的建立方法,其特征在于,步骤S6筛选出的合适的给药时间为:5min、10min、20min、0.5h、1h、1.5h、2h、3h。

9.根据权利要求1所述的用于检测紫杉醇亚细胞分布动力学的方法及模型的建立方法,其特征在于,步骤S6筛选出的最适紫杉醇浓度为0.1μg/mL。

10.一种考察某化合物是否能够影响紫杉醇的细胞药动学过程的方法,其特征在于,细胞培养后,分别进行两种给药方式:(1)0.1μg/mL紫杉醇,(2)0.1μg/mL紫杉醇和10μg/mL某化合物;然后按照不同时间点5min、10min、20min、0.5h、1h、1.5h、2h、3h,同一时间收样处理,制备细胞亚结构提取物,进行UPLC-MS/MS分析紫杉醇含量,利用0.1μg/mL紫杉醇和10μg/mL某化合物处理后紫杉醇在细胞亚结构提取物中随时间分布变化图与单独给药0.1μg/mL紫杉醇处理后紫杉醇在细胞亚结构提取物中随时间分布变化图相比较,分析紫杉醇在细胞骨架的分布有无提高,即可说明待测某化合物是否可提高紫杉醇在细胞骨架的分布。

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