鸭疫里默氏杆菌血清1型铁载体受体蛋白SRP及其基因工程突变菌株的构建方法与流程

文档序号:12092191阅读:来源:国知局

技术特征:

1.鸭疫里默氏杆菌血清1型铁载体受体蛋白SRP,其特征在于:氨基酸序列如SEQ ID NO:1 所示。

2.编码权利要求1所述的鸭疫里默氏杆菌血清1型铁载体受体蛋白SRP的核苷酸序列。

3.根据权利要求2所述的核苷酸序列,其特征在于:核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

4.鸭疫里默氏杆菌血清1型铁载体受体蛋白SRP基因工程突变菌株的构建方法,包括如下步骤:

(1)以权利要求2或3所述的核苷酸序列为目的缺失基因,分别设计SRP左臂基因片段的上、下游引物、SRP右臂基因片段的上、下游引物以及抗性基因的上、下游引物,其中所述SRP左臂基因片段的上游引物与所述SRP右臂基因片段的上游引物均具有相同的限制性内切酶的酶切位点;

(2)采用步骤(1)所述的SRP左臂基因片段的上、下游引物扩增SRP左臂基因片段,SRP右臂基因片段的上、下游引物扩增SRP右臂基因片段,抗性基因的上、下游引物扩增抗性基因;

(3)采用步骤(1)所述的SRP左臂基因片段的上游引物、SRP右臂基因片段上游引物和抗性基因的上、下游引物组成的引物组,以SRP左臂基因片段、SRP右臂基因片段和抗性基因为模板,重叠延伸扩增将SRP左臂基因片段、抗性基因、SRP右臂基因片段串联,构建出缺失SRP基因的片段,记为ΔSRP

(4)将步骤(3)制备得到ΔSRP基因片段和自杀性质粒pDS132分别用步骤(1)所述的限制性内切酶进行酶切,并将酶切后的自杀性质粒pDS132 用CIAP 去磷酸化后,用T4 DNA 连接酶连接,得到pDS132::ΔSRP 自杀性质粒;

(5)将步骤(4)制备的得到的pDS132::ΔSRP 自杀性质粒转入鸭疫里默氏杆菌血清1 型GDGZ 菌株感受态细胞,氯霉素抗性平板筛选重组突变菌株即为鸭疫里默氏杆菌血清1 型SRP基因工程突变菌株。

5.根据权利要求4所述的鸭疫里默氏杆菌血清1型SRP基因工程突变菌株的构建方法,其特征在于:步骤(3)所述的模板浓度比为SRP左臂基因片段:SRP右臂基因片段:抗性基因=1:1:1。

6.根据权利要求4所述的鸭疫里默氏杆菌血清1型SRP基因工程突变菌株的构建方法,其特征在于:所述的抗性基因为氨苄抗性基因。

7.根据权利要求4所述的鸭疫里默氏杆菌血清1型SRP基因工程突变菌株的构建方法,其特征在于:所述的限制性内切酶为SalⅠ。

8.根据权利要求4所述的鸭疫里默氏杆菌血清1型SRP基因工程突变菌株的构建方法,其特征在于:所述SRP左臂基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO:3 所示,SRP右臂基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示,所述ΔSRP基因片段核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。

9.一种鸭疫里默氏杆菌血清1 型铁载体受体蛋白SRP基因工程突变菌株,其特征在于:采用权利要求4所述的构建方法构建而成。

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