本发明属于医药技术领域，具体涉及一种吡唑类杂环化合物。本发明还涉及该化合物的制备方法、其药物组合物及其用于制备预防或治疗骨质疏松的药物的用途。
背景技术：
骨质疏松症(osteoporosis)是一种以骨组织微结构破坏为特征的全身性骨量显著减少的病症，其导致骨骼脆性增加及病理性骨折。骨量受各种因素影响，例如遗传、营养、激素水平的改变、运动和生活方式的差异等，并且已知骨质疏松的主要原因是老化、运动不足、体重过轻、吸烟、低钙饮食摄入、绝经、卵巢切除术等。对于大多数人，骨量在14-18岁达到峰值，并且在老年时每年减少约1％。目前，我国50岁以上人群中骨质疏松症总患病率为15.7％，随着人口寿命的延长，这一比例在逐步增加。特别地，在女性的情况下，骨流失在30岁后持续发生，并且在绝经期间由于激素平衡的改变而快速发展。即在女性到达绝经期时，雌激素水平迅速降低。这时，形成大量B-淋巴细胞，看起来通过白介素＝7(IL-7)发生，并且前B细胞在骨髓中积累，结果引起IL-6水平升高，因此导致破骨细胞的活性增加且最终骨量水平降低。因此，骨质疏松对于老年人特别是绝经期后的妇女是不可避免的疾病状况。
骨质疏松症治疗药物的研究虽取得了很大进展，但目前临床上使用的治疗药物缺乏特异性，普遍存在较严重的副作用。例如，最常用作骨质疏松的治疗剂但尚未证实其实际效力的雌激素不利地需要终生给药，并且其长期给药可能导致不良副作用，例如乳腺癌或子宫癌的风险增加。阿仑膦酸盐则是胃肠道吸收缓慢，并且是胃肠道和食道粘膜炎症的发病机理。已知钙制品具有较少的副作用和极好的效力，但是它是预防剂而不是治疗剂。此外，已知维生素D制品如降钙素，但是尚未充分研究它们的效力和副作用。因此，需要开发新的骨质疏松治疗剂，其具有较少的副作用和极好的效力。
作为解决上述问题和研制抗骨质疏松症的有效的治疗药物的深入研究和实验的结果，本发明的发明人成功地合成了新型吡唑类杂环化合物，并且发现这些化合物对骨质疏松症的治疗和预防具有优异的效果。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种对于骨质疏松具有优异预防和治疗作用的吡唑类杂环化合物。
进一步地，本发明的目的是提供制备所述吡唑类杂环化合物的方法。
进一步地，本发明的目的是提供用于预防或治疗骨质疏松的、包含有吡唑类杂环化合物的药物组合物。
进一步地，本发明的目的是提供用于预防或治疗骨质疏松的方法，其包括向有需要的个体给予有效量的吡唑类杂环化合物，并且提供本发明的吡唑类杂环化合物在制备用于预防或治疗骨质疏松的药物的用途。
本发明提供由如式I表示的吡唑类杂环化合物，及其药学上可接受的盐：
其中：
X1选自O、S或NH；
各个X2可以相同或不同，各自独立地选自N或CR1；
各个X3可以相同或不同，各自独立地选自N或CR2，并且所述X3中至少有一个是N；
R1、R2各自独立地选自氢、卤素、烷基、烷氧基、烷硫基、氰基、羟基、硝基、NR3R4、CONR3R4、取代或非取代的芳基、取代或非取代的芳烷基、取代或非取代的杂芳基、取代或非取代的杂芳烷基；
各个Ra可以相同或不同，各个Rb可以相同或不同，并且Ra、Rb各自独立地选自氢、卤素、烷基、烷氧基、烷硫基、氰基、羟基、硝基、NRaR4、CONRaR4、取代或非取代的芳基、取代或非取代的芳烷基、取代或非取代的杂芳基、取代或非取代的杂芳烷基；
其中，R3、R4各自独立地选自氢或烷基，或者R3和R4共同形成取代或非取代的杂环基。
本发明的优选方案中，所述取代的芳基、取代的芳烷基、取代的杂芳基、取代的杂芳烷基、取代的杂环基中的取代基选自卤素、烷基、羟基、氰基、硝基或NR5R6，其中所述R5、R6各自独立地选自氢或烷基。
本发明的优选方案中，所述卤素包括氟、氯、溴、碘，优选为氯或溴。
本发明的优选方案中，所述烷基包括C1-C6的直链或支链烷基，优选C1-C4的直链或支链烷基，更优选为甲基、乙基、异丙基、正丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、正己基、异己基的任一种。
本发明的优选方案中，所述芳基包括C6-C10芳基，优选为苯基、萘基、四氢萘基的任一种。
本发明的优选方案中，所述杂芳基包括含有一至三个选自N、O、S的杂原子的5-、6-或7-元芳香基团，优选为噻吩基、呋喃基、吡咯基、吡啶基、嘧啶基、咪唑基、吡嗪基、噻唑基的任一种。
本发明的优选方案中，所述杂环基包括饱和的或未饱和的5-、6-或7一元环状基团，所述杂环基除了所连接的N原子外，还包含有1或2个选自N、O和S的杂原子；所述杂环基优选为四氢吡咯基、哌啶基、高哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、二噻烷基、哒嗪基、吡嗪基或三嗪基的任一种。
本发明的优选方案中，所述化合物选自：
1-(吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-基苯并呋喃-2-羧酸酯(化合物1)；
3-甲基-4-苯基-1-(吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-基苯并呋喃-2-羧酸酯(化合物2)；
3-(哌啶-1-基)-1-(吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-基苯并噻吩-2-羧酸酯(化合物3)；
4-乙基-(嘧啶-2-基)-1H-吡唑-5-基噻吩[2，3-b]吡啶-2-羧酸酯(化合物4)；
4-吗啉基-1-(嘧啶-2-基)-1H-吡唑-5-基苯并噻吩-2-羧酸酯(化合物5)；
1-(吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-基5-苯基-苯并噻吩-2-羧酸酯(化合物6)；
1-(吡嗪-2-基)-1H-吡唑-5-基5-二甲氨基-苯并噻吩-2-羧酸酯(化合物7)；
1-(吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-基6-氯-1H吲哚-2-羧酸酯(化合物8)；
3-甲基-1-(吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-基7-氟-3(1H-吡咯-1-基)-苯并呋喃-2-羧酸酯(化合物9)。
就本发明的式I化合物而言，所述药学上可接受的盐是指具有药学上可接受的游离酸的盐。所述游离酸可以是无机酸或有机酸。无机酸的实例包括盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸。有机酸的实例包括柠檬酸、醋酸、乳酸、酒石酸、富马酸、甲酸、丙酸、草酸、三氟乙酸、甲磺酸、苯磺酸、马来酸、苯甲酸、葡萄糖酸、乙醇酸、琥珀酸、4-吗啉乙磺酸、樟脑磺酸、4-硝基苯磺酸、羟基-O-磺酸、对甲苯磺酸、半乳糖醛酸、双羟萘酸、谷氨酸和天冬氨酸。优选地，所述无机酸为盐酸，而有机酸为甲磺酸。
本发明提供一种制备所述式I所示的吡唑类杂环化合物或其药学可接受的盐的方法，所述方法包括：
步骤1)将式II所示的化合物和式III所示的化合物滴加入极性有机溶剂中；以及加热包含式II所示的化合物和式III所示的化合物的极性有机溶剂，以获得式IV所示的化合物：
步骤2)将式V所示的化合物、式VI所示的化合物置于非质子溶剂中，加入无机碱，搅拌反应后，制得式VII所示的化合物：
步骤3)将式VII所示的化合物在碱性水溶液中水解后，在二氯亚砜作用下，加热回流形成酰氯，再在低温下，加入缚酸剂得到混合液；常温下将该混合液与式IV所示的化合物反应得到目标化合物I；
步骤4)必要的时候，将式I所示的化合物转化为其药学上可接受的盐。
其中，X1、X2、X3、Ra、Rb的定义如上所述，R为C1-C4烷基，M为OH或NO2，Rx为C1-C4烷氧基，X为卤素或巯基，优选氯或溴。
本发明的优选方案中，所述极性有机溶剂选自C1-C4醇如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇或叔丁醇，乙酸或者它们的混合物，并且优选乙醇或乙酸。
本发明的优选方案中，所述非质子溶剂为DMF或DMSO。
本发明的优选方案中，所述无机碱包括氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐，优选为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾。
本发明的优选方案中，所述碱性水溶液为氢氧化钠水溶液、或者氢氧化钾水溶液。
本发明的优选方案中，所述缚酸剂为叔胺如三乙胺。
本发明的另一目的在于提供一种用于预防或治疗骨质疏松的药物组合物，其含有治疗有效量的本发明所述的吡唑类杂环化合物或其药用盐与药学上可接受的载体。
本发明的优选技术方案中，所述吡唑类杂环化合物或其药用盐在药物组合物中的含量为0.1wt.％-99.5wt.％，优选为0.5wt.％-95wt.％。
本发明组合物可为本领域熟知的各种剂型，适合于本发明的剂型选自口服制剂、外用制剂或注射剂，优选为口服制剂。口服制剂选自片剂、颗粒剂、胶囊剂、散剂、丸剂、滴丸、糖浆剂、露剂、泡腾剂、口服液、悬浮剂等；外用制剂选自凝胶剂、膏剂、搽剂、洗剂、涂抹剂、霜剂、软膏剂等；注射剂选自针剂、输液或冻干粉针等。可采用本领域熟知的制剂技术手段制备得到本发明的组合物。
本发明所述药学上可接受的载体为本领域熟知的用于制备上述制剂的常用赋形剂或辅料。口服制剂或外用制剂常用的赋形剂或辅料包括但不仅限于填充剂、稀释剂、润滑剂、分散剂、湿润剂、粘合剂、调节剂、增溶剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂、崩解剂等，例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、乳糖、糖粉、糊精、微粉硅胶、硬脂酸镁、滑石粉、氢氧化铝、淀粉及其衍生物、聚乙烯吡咯烷酮、十二烷基硫酸钠、水或醇等。
本发明所述注射剂常用的赋形剂或辅料包括但不仅限于：抗氧剂、抑菌剂、调节剂、乳化剂、增溶剂等，例如亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、0.5％苯酚、0.3％甲酚、盐酸、枸橼酸、聚山梨酯-80、卵磷酯、豆磷脂、吐温-80、胆汁、甘油等。
有益效果
本发明通过体内试验发现所述吡唑类杂环化合物能够抑制去卵巢引起的骨转化率增强和骨质破坏，同时可以提高血钙浓度，有利于骨的沉积，因此具有显著的预防和治疗骨质疏松的作用。
具体实施方式
在下文中更详细地描述了本发明以有助于对本发明的理解。
应当理解的是，在说明书和权利要求书中使用的术语或词语不应当理解为具有在字典中限定的含义，而应理解为在以下原则的基础上具有与其在本发明上下文中的含义一致的含义：术语的概念可以适当地由发明人为了对本发明的最佳说明而限定。
实施例1：1-(吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-基苯并呋喃-2-羧酸酯(化合物1)
步骤1)将3-氧代-丙酸乙酯(2.32g，20.0mmol)和乙醇(20mL)置于圆底烧瓶中，并且在0℃下缓慢地滴加入用乙醇(20mL)稀释的2-肼基吡啶(2.58g，23.6mmol)。将所得的溶液在回流下于100℃下加热3天。通过在减压下蒸馏来去除溶剂，将所得的固体用己烷和乙酸乙酯洗涤并真空干燥，得到白色固体1-(吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-醇2.91g，收率90％。
ESI-MS：162.06[M+H]+
步骤2)冰浴条件下，将2-羟基-苯甲醛(2.68g，22.0mmol)和无水K2CO3(4.4g，31.2mmol)溶解于DMF(40ml)中，缓慢滴加溴代乙酸乙酯(4.1g，26.0mmol)。滴加完毕，-5℃搅拌30分钟，然后在50℃油浴中反应12小时。把反应液倒入冰水中，过滤，氯仿溶解固体，无水Na2SO4干燥，过滤，旋干溶剂后，经硅胶柱层析分离，得到黄色固体苯并呋喃-2-羧酸乙酯3.52g，收率为84％。
ESI-MS：191.06[M+H]+
步骤3)将苯并呋喃-2-羧酸乙酯(1.90g，10.0mmol)溶于二氧六环(20ml)中，加入1N的氢氧化钠溶液(12ml)，常温搅拌2小时溶解，将二氧六环蒸干，剩余液体倾入冰水中，用二氯甲烷洗涤，调pH值至2，过滤，收集固体，将其溶于二氯亚砜(30ml)中，加入三乙胺0.5ml，搅拌后，加入1-(吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-醇(1.93g，12.0mmol)，加热回流1小时，减压蒸除多余二氯亚砜，将其降温至0℃，加入含有N，N-二甲基乙二胺(0.77g)和三乙胺(0.5ml)的二氯甲烷溶液(20ml)中，常温搅拌4h，得到化合物1：1-(吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-基苯并呋喃-2-羧酸酯2.61g，产率86％。
ESI-MS：305.10[M+H]+
元素分析：理论值/实测值，C(67.10/67.02)，H(3.97/4.03)，N(18.41/18.34)，0(10.52/10.61)
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.40(d，1H)，8.05(m，1H)，7.32-7.86(m，8H)，6.35(m，1H)。
实施例2：3-甲基-4-苯基-1-(吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-基苯并呋喃-2-羧酸酯(化合物2)
步骤1)将3-氧代-2-苯基-丙酸乙酯(4.12g，20.0mmol)和乙醇(20mL)置于圆底烧瓶中，并且在0℃下缓慢地滴加入用乙醇(20mL)稀释的2-肼基吡啶(2.58g，23.6mmol)。将所得的溶液在回流下于100℃下加热3天。通过在减压下蒸馏来去除溶剂，将所得的固体用己烷和乙酸乙酯洗涤并真空干燥，得到白色固体3-甲基-4-苯基-1-(吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-醇4.42g，收率88％。
ESI-MS：252.11[M+H]+
步骤2)冰浴条件下，将2-羟基-苯甲醛(2.68g，22.0mmol)和无水K2CO3(4.4g，31.2mmol)溶解于DMF(40ml)中，缓慢滴加溴代乙酸乙酯(4.1g，26.0mmol)。滴加完毕，-5℃搅拌30分钟，然后在50℃油浴中反应12小时。把反应液倒入冰水中，过滤，氯仿溶解固体，无水Na2SO4干燥，过滤，旋干溶剂后，经硅胶柱层析分离，得到黄色固体苯并呋喃-2-羧酸乙酯3.52g，收率为84％。
ESI-MS：191.06[M+H]+
步骤3)将苯并呋喃-2-羧酸乙酯(1.90g，10.0mmol)溶于二氧六环(20ml)中，加入1N的氢氧化钠溶液(12ml)，常温搅拌2小时溶解，将二氧六环蒸干，剩余液体倾入冰水中，用二氯甲烷洗涤，调pH值至2，过滤，收集固体，将其溶于二氯亚砜(30ml)中，加入三乙胺0.5ml，搅拌后，加入3-甲基-4-苯基-1-(吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-醇(3.01g，12.0mmol)，加热回流1小时，减压蒸除多余二氯亚砜，将其降温至0℃，加入含有N，N-二甲基乙二胺(0.77g)和三乙胺(0.5ml)的二氯甲烷溶液(20ml)中，常温搅拌4h，得到化合物1：3-甲基-4-苯基-1-(吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-基苯并呋喃-2-羧酸酯3.16g，产率80％。
ESI-MS：396.13[M+H]+
元素分析：理论值/实测值，C(72.90/72.79)，H(4.33/4.41)，N(10.63/10.58)，0(12.14/12.22)
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.40(d，1H)，8.05(m，1H)，7.32-7.86(m，12H)，2.05(s，3H)。
实施例3：3-(哌啶-1-基)-1-(吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-基苯并噻吩-2-羧酸酯(化合物3)
步骤1)将3-氧代-3-(哌啶-1-基)-丙酸乙酯(4.02g，20.0mmol)和乙醇(20mL)置于圆底烧瓶中，并且在0℃下缓慢地滴加入用乙醇(20mL)稀释的2-肼基吡啶(2.58g，23.6mmol)。将所得的溶液在回流下于100℃下加热3天。通过在减压下蒸馏来去除溶剂，将所得的固体用己烷和乙酸乙酯洗涤并真空干燥，得到白色固体3-(哌啶-1-基)-1-(吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-醇3.91g，收率81％。
ESI-MS：245.13[M+H]+
步骤2)冰浴条件下，将2-硝基-苯甲醛(3.02g，20mmol)和无水K2CO3(4.4g，31.2mmol)溶解于DMF(40ml)中，缓慢滴加巯基乙酸乙酯(2.40g，20mmol)。滴加完毕，0℃搅拌30分钟，然后在50℃油浴中反应8小时。把反应液倒入冰水中，过滤，氯仿溶解固体，无水Na2SO4干燥，过滤，旋干溶剂后，经硅胶柱层析分离，得到黄色固体苯并噻吩-2-羧酸乙酯2.67g，收率为75％。
ESI-MS：179.01[M+H]+
步骤3)将苯并噻吩-2-羧酸乙酯(1.78g，10.0mmol)溶于二氧六环(20ml)中，加入1N的氢氧化钠溶液(12ml)，常温搅拌2小时溶解，将二氧六环蒸干，剩余液体倾入冰水中，用二氯甲烷洗涤，调pH值至2，过滤，收集固体，将其溶于二氯亚砜(30ml)中，加入三乙胺0.5ml，搅拌后，加入3-(哌啶-1-基)-1-(吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-醇(2.93g，12.0mmol)，加热回流1小时，减压蒸除多余二氯亚砜，将其降温至0℃，加入含有N，N-二甲基乙二胺(0.77g)和三乙胺(0.5ml)的二氯甲烷溶液(20ml)中，常温搅拌4h，得到化合物1：3-(哌啶-1-基)-1-(吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-基苯并噻吩-2-羧酸酯3.16g，产率80％。
ESI-MS：305.13[M+H]+
元素分析：理论值/实测值，C(65.33/65.18)，H(4.98/4.91)，N(13.85/13.96)，0(7.91/7.90)，S(7.93/8.05)
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.42(d，1H)，8.32(s，1H)，8.02(m，1H)，7.32-7.86(m，6H)，6.35(m，1H)，3.70(t，4H)，1.50(m，6H)。
实施例4：4-乙基-(嘧啶-2-基)-1H-吡唑-5-基噻吩[2，3-b]吡啶-2-羧酸酯(化合物4)
步骤1)将3-氧代-2-乙基-丙酸乙酯(2.90g，20.0mmol)和乙醇(20mL)置于圆底烧瓶中，并且在0℃下缓慢地滴加入用乙醇(20mL)稀释的2-肼基嘧啶(2.50g，24mmol)。将所得的溶液在回流下于100℃下加热2天。通过在减压下蒸馏来去除溶剂，将所得的固体用己烷和乙酸乙酯洗涤并真空干燥，得到白色固体2-乙基-1-(吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-醇2.85g，收率75％。
ESI-MS：190.09[M+H]+
步骤2)冰浴条件下，将2-硝基-烟碱(3.02g，20mmol)和无水K2CO3(4.4g，31.2mmol)溶解于DMF(40ml)中，缓慢滴加巯基乙酸乙酯(2.40g，20mmol)。滴加完毕，0℃搅拌30分钟，然后在50℃油浴中反应8小时。把反应液倒入冰水中，过滤，氯仿溶解固体，无水Na2SO4干燥，过滤，旋干溶剂后，经硅胶柱层析分离，得到黄色固体噻吩[2，3-b]吡啶-2-羧酸乙酯2.51g，收率为70％。
ESI-MS：180.01[M+H]+
步骤3)将噻吩[2，3-b]吡啶-2-羧酸乙酯(1.79g，10.0mmol)溶于二氧六环(20ml)中，加入1N的氢氧化钠溶液(12ml)，常温搅拌2小时溶解，将二氧六环蒸干，剩余液体倾入冰水中，用二氯甲烷洗涤，调pH值至2，过滤，收集固体，将其溶于二氯亚砜(30ml)中，加入三乙胺0.5ml，搅拌后，加入2-乙基-1-(吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-醇(2.30g，12.0mmol)，加热回流1小时，减压蒸除多余二氯亚砜，将其降温至0℃，加入含有N，N-二甲基乙二胺(0.77g)和三乙胺(0.5ml)的二氯甲烷溶液(20ml)中，常温搅拌4h，得到化合物1：4-乙基-(嘧啶-2-基)-1H-吡唑-5-基噻吩[2，3-b]吡啶-2-羧酸酯2.91g，产率83％。
ESI-MS：352.18[M+H]+
元素分析：理论值/实测值，C(58.11/58.21)，H(3.73/3.68)，N(19.93/19.85)，0(9.11/9.04)，S(9.13/9.32)
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.85-8.31(m，5H)，7.71(S，1H)，7.36(S，1H)，7.40(S，1H)，2.52(m，2H)，1.25(t，3H)。
实施例5-9：按照类似的方法合成以下化合物5-9，区别在于用相应的原料化合物进行替换。
表1
生物活性测定实施例：本发明化合物的抗骨质疏松作用的检测
1、材料与方法
将十周龄健康SD雌鼠随机分成11组，每组10只：实施例化合物1-9组、假手术组(Sham)、卵巢切除模型组(OVX)。饲养条件：温度为(23±2)℃，光照∶黑暗为12∶12。让各组大鼠适应环境2周后开始骨质疏松造模手术：各组大鼠均经腹腔注射20％乌拉坦麻醉(6ml/kg体重)，Sham组开腹后关腹，其余各组行双侧卵巢切除术。术后第4周起，Sham组和OVX组每天进食标准饲料和去离子水，化合物1-9组每天进食标准饲料和去离子水，同时分别灌胃给与化合物1-9各10mg/kg，连续3个月，每周称一次体重。实验结束后，用乌拉坦麻醉，摘取眼球采血，2000r/min离心，吸取上清(即血清)。摘除大鼠子宫，迅速称重。取出大鼠双侧股骨和双侧胫骨，剔除软组织。两胫骨经800℃高温炉中灰化8h，冷却后称灰重。用研钵碾碎成灰状，取0.1g骨灰溶于1ml，6mol/l盐酸中，测骨钙和骨磷时取0.2ml用超纯水稀释至1ml，用全自动生化分析仪检测骨钙和骨磷含量。左股骨用骨密度仪测量骨密度(BMD)。血清生化指标测定：取血清0.5ml，用全自动生化分析仪检测血清碱性磷酸酶(ALP)、钙(Ca)和磷(P)。
2、结果
1)血清ALP、血清Ca和血清P
表2本发明化合物对双侧卵巢切除大鼠血清ALP、血清Ca和血清P的影响
*P＜0.05，**P＜0.01，VS OVX组
从表2的结果可以看出，当大鼠的卵巢被去除后，OVX组大鼠血清碱性磷酸酶活性增加。这是由于当去卵巢后，大鼠体内雌激素缺乏，导致骨转化率增加，其与绝经后妇女的高转化型骨质疏松症一致。与之相反，化合物1-9组的试验结果表明，当给予本发明化合物3个月后，碱性磷酸酶活性显著下降，意味着本发明化合物可以抑制去卵巢引起的骨转化率的增加，减少骨质的破坏。表中数据还显示与Sham组相比，OVX组大鼠血清钙明显下降，而化合物1-9组则显示出显著提升的血清钙浓度，表明本发明化合物具有提升血清钙浓度的作用。而血清钙是骨形成的重要标记物，这说明本发明可以有效逆转由于卵巢切除导致的血清钙的降低，有利于骨的形成。
2)骨密度(BMD)
表3本发明化合物对双侧卵巢切除大鼠左股骨BMD的影响
*P＜0.05，**P＜0.01，VS OVX组
表3的结果显示，去卵巢后OVX组大鼠左股骨骨密度较Sham组显著下降，给予本发明化合物3个月后，大鼠骨密度显著增加。
3)双侧胫骨参数
表4本发明化合物对双侧卵巢切除大鼠双侧胫骨参数的影响
*P＜0.05，**P＜0.01，VS OVX组
表4的结果显示，与Sham组相比，OVX组大鼠双胫骨灰重显著降低，而化合物1-9组较OVX组显著升高。此外，化合物1-9也能显著升高骨钙和骨磷含量。
综上，本发明的吡唑类杂环化合物能够抑制去卵巢引起的骨转化率增强和骨质破坏，同时可以提高血钙浓度，有利于骨的沉积。对于由于雌激素缺乏导致的骨质疏松具有防治作用，并且无雌激素样副作用。因此可以用于骨质疏松的预防和治疗。
以上描述了本发明优选实施方式，然其并非用以限定本发明。本领域技术人员对在此公开的实施方案可进行并不偏离本发明范畴和精神的改进和变化。