一种用于鉴定米象和玉米象的试剂盒及其检测方法与流程

文档序号:12413058阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于鉴定米象和玉米象的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括以下两对引物对中的至少一对:引物对1由序列1和序列2两条单链脱氧核糖核酸组成,序列1:5’-TTGATTACTTCCACCCTCC-3’,序列2:5’-AAGTATAGTGATTGCTCCT-3’;引物对2由序列3和序列4两条单链脱氧核糖核酸组成,序列3:5’-TTATTAGTTACGAAAGAGGA-3’序列4:5’-ATCAAAGGGATGTAGGAGAA-3’;所述序列1由20个核苷酸组成,序列2由20个核苷酸组成,序列3由19个核苷酸组成;序列4由19个核苷酸组成。

2.根据权利要求1所述的一种用于鉴定米象和玉米象的试剂盒,其特征在于:所述试剂盒还包括聚合酶链式反应缓冲液、脱氧核糖核酸聚合酶和4种脱氧核糖核苷三磷酸。

3.根据权利要求1所述的一种用于鉴定米象和玉米象的试剂盒,其特征在于:所述引物对1和引物对2中的两条单链脱氧核糖核酸的摩尔数相等。

4.根据权利要求1所述的一种用于鉴定米象和玉米象的试剂盒,其特征在于:所述引物对1特异于米象,引物对2特异于玉米象。

5.一种如权利要求1-4任一项所述的试剂盒应用于鉴定米象和玉米象的方法,其特征在于,具体步骤如下:

(1)提取米象或玉米象的基因组脱氧核糖核酸,将提取的脱氧核糖核酸置于-20℃下,备用;

(2)以步骤(1)中备用的脱氧核糖核酸为模板,分别对引物对1和引物对2进行聚合酶链式反应,即可得到相应的聚合酶链式反应产物;

(3)将步骤(2)中的聚合酶链式反应产物分别进行琼脂糖凝胶电泳检测,溴化乙锭染色后,在凝胶成像系统中观察并成像分析。

6.根据权利要求5所述的一种鉴定米象和玉米象的方法,其特征在于:聚合酶链式反应体系由2.5μL的浓度为2.5mmol/L的脱氧核糖核苷三磷酸,0.2μL的浓度为2.5U/μL的脱氧核糖核酸聚合酶,1μL的基因组脱氧核糖核酸,16.8μL的双蒸水,1μL的浓度为10μmol/L的引物对,2.5μL含镁离子的缓冲液组成。

7.根据权利要求5所述的一种鉴定米象和玉米象的方法,其特征在于:聚合酶链式反应条件为:95℃预变性5min,95℃变性30s;引物对1在60℃的条件下退火30s,引物对2在58℃的条件下退火30s;72℃延伸1min;将此过程进行35个循环。

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