本发明属于医药中间体的合成技术领域，具体涉及一种具有苯并1,4-二氧杂环己二烯酮结构的FSHR拮抗剂的制备方法。
背景技术：
促性腺激素在人体中表现出重要的生理机能，比如新陈代谢、体温调节和生殖过程。它是由下丘脑合成和分泌的，通过诱导垂体中促卵泡激素(FSH)/黄体生成激素(LH)的分泌，并进一步诱导卵巢中各级卵泡的生长发育及排卵。FSH是哺乳动物生殖过程中的核心激素，在胎儿性分化、胎儿期卵子峰发生和卵泡闭锁、性成熟期卵泡的发生发育和成熟、颗粒细胞芳香化酶活化和雄激素向雌激素的转化、生殖周期的调节中起到不可替代的关键作用。FSH对靶器官的作用主要由FSH受体(FSHR)所介导。研究表明，FSHR不仅只表达于性腺，也在骨骼、前列腺、卵巢表面上皮等其它组织的表达。FSH在体内水平过高，会导致骨质流失，一些激素依赖性疾病，如卵巢癌、前列腺癌、子宫内膜异位、卵巢过度刺激综合征等，都受FSH影响很大；通过抑制FSH的分泌，可以进而抑制性腺分泌性激素，导致血中疾病依赖性激素水平降低，抑制癌细胞的生长或预防、缓解、治疗其他病症；例如，西曲瑞克就是按照该机理对卵巢癌发挥抗增殖效应。本发明根据目前已有的FSH受体抑制剂药物分子，对其结构进行优化得到了一种具有苯并1,4-二氧杂环己二烯酮结构的FSH拮抗剂药物分子，并对其进行了相关活性测试。
技术实现要素：
本发明解决的技术问题是提供了一种合成方法简单、分子结构新颖且对FSH受体作用效果较好的新型FSHR拮抗剂的制备方法。
本发明为解决上述技术问题采用如下技术方案，该具有苯并1,4-二氧杂环己二烯酮结构的FSHR拮抗剂药物分子的结构为
一种具有苯并1,4-二氧杂环己二烯酮结构的FSH拮抗剂的制备方法，其特征在于具体步骤为：
A、2-溴-4-硝基苯甲酸甲酯和2-碘苯硼酸在催化剂四(三苯基膦)钯的作用下经过取代反应得到2’-碘-5-硝基联苯-2-甲酸甲酯；
B、2’-碘-5-硝基联苯-2-甲酸甲酯在催化剂还原铁粉的作用下经过硝基还原反应得到2’-碘-5-氨基联苯-2-甲酸甲酯；
C、2’-碘-5-氨基联苯-2-甲酸甲酯在催化剂亚硝酸钠的作用下经过氨基还原氧化反应得到2’-碘-5-羟基联苯-2-甲酸甲酯；
D、3-羟基-4-甲氧基甲苯和2-溴丙烷发生取代反应得到3-异丙氧基-4-甲氧基甲苯；
E、3-异丙氧基-4-甲氧基甲苯在催化剂铁粉的作用下发生1位和6位溴代反应得到3-异丙氧基-4-甲氧基-6-溴苄溴；
F、2’-碘-5-羟基联苯-2-甲酸甲酯与3-异丙氧基-4-甲氧基-6-溴苄溴在羟基氢活化催化剂钯/羟基磷灰石的作用下发生取代反应得到5-(2-溴-5-异丙氧基-4-甲氧基苯甲醇)-2’-碘联苯-2-甲酸甲酯；
G、5-(2-溴-5-异丙氧基-4-甲氧基苯甲醇)-2’-碘联苯-2-甲酸甲酯在苯环氢活化催化剂钯/羟基磷灰石的作用下进行分子内成环反应得到3-(2-碘苯)-8-异丙氧基-9-甲氧基-6H-二苯并吡喃-2-甲酸甲酯；
H、3-(2-碘苯)-8-异丙氧基-9-甲氧基-6H-二苯并吡喃-2-甲酸甲酯在碱性溶液中水解后再进行酸化得到3-(2-碘苯)-8-异丙氧基-9-甲氧基-6H-二苯并吡喃-2-甲酸；
I、3-(2-碘苯)-8-异丙氧基-9-甲氧基-6H-二苯并吡喃-2-甲酸在氢化铝锂的作用下经羧基氧化还原反应得到3-(2-碘苯)-8-异丙氧基-9-甲氧基-6H-二苯并吡喃-2-甲醇；
J、3-(2-碘苯)-8-异丙氧基-9-甲氧基-6H-二苯并吡喃-2-甲醇与对甲基磺酰氯进行羟基活化保护反应得到3-(2-碘苯)-8-异丙氧基-9-甲氧基-6H-二苯并吡喃-2-甲基对甲基磺酸酯；
K、3-(2-碘苯)-8-异丙氧基-9-甲氧基-6H-苯并吡喃-2-甲基对甲基磺酸酯在甲基活化催化剂碘化亚铜的作用下发生分子内成环反应得到8-异丙氧基-9-甲氧基-6H-苯并吡喃并苯基并环己烷并苯；
L、8-异丙氧基-9-甲氧基-6H-苯并吡喃并苯基并环己烷并苯在溴化锂的作用下脱去甲基和异丙基得到8,9-二羟基-6H-苯并吡喃并苯基并环己烷并苯；
M、8,9-二羟基-6H-苯并吡喃并苯基并环己烷并苯与氯乙酰氯在定位催化剂乙酸钙的作用下成环得到目标化合物。
进一步优选，所述的2’-碘-5-羟基联苯-2-甲酸甲酯的具体合成过程为：(1)在反应容器中将2-溴-4-硝基苯甲酸甲酯、2-碘苯硼酸和碳酸钾加入到体积比为10:1的DME与水的混合溶液中，氮气保护下于室温搅拌30min，再加入催化剂四(三苯基膦)钯，在氮气保护下搅拌均匀，升高温度至100℃反应直至TLC监控原料反应完全，在真空条件下蒸除溶剂，剩余物加入二氯甲烷中，再用纯净水洗涤两次，有机相经无水硫酸钠干燥后蒸除溶剂，再经硅胶柱层析分离提纯得到2’-碘-5-硝基联苯-2-甲酸甲酯；(2)在反应容器中将催化剂还原铁粉加入到冰乙酸中，升温至85℃后搅拌反应45min，在氮气保护下加入溶有2’-碘-5-硝基联苯-2-甲酸甲酯的冰乙酸溶液，滴加完后于85℃反应直至TLC监控原料反应完全，然后通过硅藻土过滤反应液，硅藻土用热的冰乙酸进行洗涤，在真空条件下蒸除反应溶剂，加入饱和碳酸氢钠，再用乙酸乙酯萃取反应液三次，合并有机相，有机相经无水硫酸钠干燥后蒸除溶剂，浓缩得到2’-碘-5-胺基联苯-2-甲酸甲酯；(3)在反应容器中于0℃将2’-碘-5-胺基联苯-2-甲酸甲酯加入到质量浓度为5％的稀硫酸中，搅拌10min后再滴加溶有氧化催化剂亚硝酸钠的水溶液，滴加完后保持温度继续反应1h，再升温至60℃反应直至TLC监控原料反应完全，然后冷却至室温，用乙酸乙酯萃取反应液三次，合并有机相，有机相经无水硫酸钠干燥后蒸除溶剂，经硅胶柱层析分离提纯得到2’-碘-5-羟基联苯-2-甲酸甲酯。
进一步优选，所述的3-异丙氧基-4-甲氧基-6-溴苄溴的具体合成过程为：(1)在反应容器中将3-羟基-4-甲氧基甲苯和2-溴丙烷加入到无水处理的DMF中，再加入碳酸钾，升温至回流反应直至TLC监控原料反应完全，在真空条件下蒸除溶剂，剩余物加入到水中，再用二氯甲烷萃取水相三次，合并有机相，最后蒸除溶剂后得到3-异丙氧基-4-甲氧基甲苯；(2)在反应容器中将3-异丙氧基-4-甲氧基甲苯加入到冰乙酸中，再加入定位催化剂铁粉，在室温条件下滴加溴素，30min滴加完，升温至40℃反应直至TLC监控原料反应完全，真空下蒸除溶剂冰乙酸，浓缩物中加入质量浓度为20％的氢氧化钠溶液，过滤反应液，滤液用二氯甲烷萃取三次，合并有机相，有机相再经过无水硫酸钠干燥后浓缩得到3-异丙氧基-4-甲氧基-6-溴-苄溴。
进一步优选，步骤F的具体合成过程为：在反应容器中将2’-碘-5-羟基联苯-2-甲酸甲酯和3-异丙氧基-4-甲氧基-6-溴苄溴加入到干燥的丙酮中，再加入羟基氢活化催化剂钯/羟基磷灰石，加热至回流反应直至TLC监控原料反应完全，在真空条件下蒸除反应溶剂，浓缩物加入到二氯甲烷中，再用纯净水洗涤有机相三次，分出有机相，在真空条件下蒸除溶剂后得到粗品，再经硅胶柱层析分离提纯得到纯品5-(2-溴-5-异丙氧基-4-甲氧基苯甲醇)-2’-碘联苯-2-甲酸甲酯。
进一步优选，步骤G的具体合成过程为：在反应容器中将5-(2-溴-5-异丙氧基-4-甲氧基苯甲醇)-2’-碘联苯-2-甲酸甲酯和碳酸钾加入到二甲基乙酰胺中，在N2保护下加入苯环氢活化催化剂钯/羟基磷灰石，往反应体系中持续通入N2，同时排出N2，使其保持一个稳定流通环境，室温搅拌30min后密闭反应容器，将反应容器放置在微波反应器中，加热到100℃反应直至TLC监控原料反应完全，从微波反应器中取出反应容器并加入纯净水淬灭反应，再用乙酸乙酯萃取反应液三次，合并有机相，再用无水硫酸钠干燥后蒸除溶剂，最后经硅胶柱层析分离提纯得到3-(2-碘苯)-8-异丙氧基-9-甲氧基-6H-二苯并吡喃-2-甲酸甲酯。
进一步优选，步骤H的具体合成过程为：在反应容器中将3-(2-碘苯)-8-异丙氧基-9-甲氧基-6H-二苯并吡喃-2-甲酸甲酯加入到乙醇中，再加入溶有氢氧化钠的水溶液，升温至70℃反应直至TLC监控原料反应完全，在真空条件下蒸除溶剂，剩余物加入到水中，再用乙酸乙酯洗涤水相三次，水相用稀盐酸溶解调节pH为3，再用二氯甲烷萃取水相三次，合并有机相后蒸除溶剂得到3-(2-碘苯)-8-异丙氧基-9-甲氧基-6H-二苯并吡喃-2-甲酸。
进一步优选，步骤I的具体合成过程为：在反应容器中将3-(2-碘苯)-8-异丙氧基-9-甲氧基-6H-二苯并吡喃-2-甲酸加入到无水THF中，反应温度降低至-60℃，滴加氢化铝锂的四氢呋喃溶液，保持温度继续反应2h，再升温至0℃反应2h，加入冰水淬灭反应，抽滤反应液，滤液用乙酸乙酯萃取多次，合并有机相蒸除溶剂后得到3-(2-碘苯)-8-异丙氧基-9-甲氧基-6H-二苯并吡喃-2-甲醇。
进一步优选，步骤J的具体合成过程为：在反应容器中将3-(2-碘苯)-8-异丙氧基-9-甲氧基-6H-二苯并吡喃-2-甲醇、对甲基磺酰氯和碳酸钾加入到DMF中，升温至80℃反应直至TLC监控原料反应完全，加入纯净水淬灭反应，再用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，有机相经无水硫酸钠干燥后蒸除溶剂，再经硅胶柱层析分离提纯得到3-(2-碘苯)-8-异丙氧基-9-甲氧基-6H-二苯并吡喃-2-甲基对甲基磺酸酯。
进一步优选，步骤K的具体合成过程为：在反应容器中将3-(2-甲基苯)-8-异丙氧基-9-甲氧基-6H-二苯并吡喃-2-甲基对甲基磺酸酯加入到乙腈中，再加入甲基活化催化剂碘化亚铜，氮气保护反应体系，搅拌升温至70℃反应直至TLC监控原料反应完全，减压蒸除溶剂乙腈，再加入甲基叔丁基醚，冷却至-5℃，搅拌过程中有大量固体析出，过滤反应液得到固体，并用冷甲苯洗涤，滤饼烘干后得到8-异丙氧基-9-甲氧基-6H-苯并吡喃并苯基并环己烷并苯。
进一步优选，步骤L的具体合成过程为：在反应容器中将8-异丙氧基-9-甲氧基-6H-苯并吡喃并苯基并环己烷并苯加入到二氯甲烷中，再加入溴化锂，于0℃搅拌反应直至TLC监控原料反应完全，然后蒸除反应溶剂得到8,9-二羟基-6H-苯并吡喃并苯基并环己烷并苯。
进一步优选，步骤M的具体合成过程为：在反应容器中将8,9-二羟基-6H-苯并吡喃并苯基并环己烷并苯和氯乙酰氯加入到二氯甲烷中，再加入碳酸钾和定位催化剂乙酸钙于0℃反应直至TLC监控原料反应完全，蒸除反应溶剂得到目标化合物。
本发明所述的具有苯并1,4-二氧杂环己二烯酮结构的FSH拮抗剂的合成路线为：
本发明合成工艺简单且成本低廉，经过活性测试可知制得的具有苯并1,4-二氧杂环己二烯酮结构的FSH拮抗剂药物分子对FSHR受体的作用效果较好，有望进一步推广应用。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明的上述内容做进一步详细说明，但不应该将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明上述内容实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1
在反应瓶中，把2-溴-4-硝基苯甲酸甲酯5.0g、2-碘苯硼酸4.0g和碳酸钾5g加入到体积比为10:1的DME与水的混合溶液120mL中，氮气保护下室温搅拌30min；，再加入催化剂四(三苯基膦)钯1g，在氮气保护下搅拌均匀，缓慢升高温度至100℃，反应14h后TLC监控原料反应完全，在真空条件下蒸除溶剂，剩余物加入二氯甲烷中，再用纯净水50mL洗涤两次，有机相经无水硫酸钠干燥后，蒸除溶剂，再经硅胶柱层析分离提纯得到纯净的2’-碘-5-硝基联苯-2-甲酸甲酯4.9g；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.41(s,1H),8.23(d,J＝2.4Hz,1H),8.16(d,J＝8.6Hz,1H),7.57-7.50(m,2H),7.41-7.31(m,2H),3.72(s,3H)。
实施例2
在反应瓶中，把还原铁粉5g加入到冰乙酸70mL中，升温至85℃后搅拌反应45min，在氮气保护下缓慢加入溶有2’-碘-5-硝基联苯-2-甲酸甲酯6g的冰乙酸溶液70mL，滴加完后在85℃条件下继续反应2h，TLC监控原料反应完全后通过硅藻土进行过滤反应液，硅藻土再用一定量的热的冰乙酸进行洗涤，在真空条件下蒸除反应溶剂，加入一定量的饱和碳酸氢钠，再用乙酸乙酯萃取反应液三次，合并有机相，有机相经无水硫酸钠干燥后蒸除溶剂，浓缩得到纯净的2’-碘-5-胺基联苯-2-甲酸甲酯5.1g；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.72(d,J＝8.6Hz,1H),7.41-7.35(m,1H),7.24(d,J＝8.6Hz,2H),7.18(s,1H),6.63(s,1H),6.45(s,1H),6.02(s,2H),3.54(s,3H)。
实施例3
在反应瓶中，在温度为0℃条件下，把2’-碘-5-胺基联苯-2-甲酸甲酯5.0g加入到质量浓度为5％的稀硫酸100mL中，搅拌10min后，再缓慢滴加溶有亚硝酸钠2.0g的水溶液20mL，滴加完后保持温度继续反应1h，再缓慢升温至60℃反应8h，TLC监控原料反应完全后冷却至室温，用乙酸乙酯萃取反应液三次，合并有机相，有机相经无水硫酸钠干燥后蒸除溶剂，经硅胶柱层析分离提纯得到纯净的2’-碘-5-羟基联苯-2-甲酸甲酯3.9g；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:10.45(s,1H),7.84(d,J＝8.6Hz,1H),7.45-7.38(m,1H),7.37-7.20(m,3H),6.92(d,J＝8.0Hz,1H),6.72(s,1H),3.59(s,3H)。
实施例4
在反应瓶中，把3-羟基-4-甲氧基甲苯10g和2-溴丙烷10g加入到无水处理的DMF100mL中，再加入碳酸钾15g，缓慢升温至回流反应24h，TLC监控原料反应完全，在真空条件下蒸除溶剂，剩余物加入到水中，再用二氯甲烷萃取水相三次，合并有机相，最后蒸除溶剂后得到产品3-异丙氧基-4-甲氧基甲苯13g；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.31-7.28(m,1H),7.17-7.12(m,2H),5.08-5.01(m,1H),4.57-4.47(m,2H),4.34(d,J＝8.0Hz,2H),3.75(s,3H),1.28(d,J＝8.0Hz,6H)。
实施例5
在反应瓶中，把3-异丙氧基-4-甲氧基甲苯15g加入到冰乙酸100mL中，再加入定位催化剂铁粉3g，在室温条件下缓慢滴加溴素8mL，约30min滴加完，升温至40℃后反应10h，TLC监控原料反应完全，真空下蒸除溶剂冰乙酸，浓缩物中加入一定量的质量浓度为20％的氢氧化钠溶液，过滤反应液，滤液用二氯甲烷萃取三次，合并有机相，有机相再经过无水硫酸钠干燥后浓缩得到3-异丙氧基-4-甲氧基-6-溴-苄溴23g；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.29(s,1H),7.20(s,1H),4.72(s,2H),4.61-4.53(m,1H),3.81(s,3H),1.28(d,J＝8.0Hz,6H)。
实施例6
在反应瓶中加入二氯化钯5g，再加入质量比为1:1的甲醇-水混合溶液250mL，再加入羧甲基纤维素钠1g，用碳酸钠调节体系的pH为4.5，加入羟基磷灰石50g，在室温下搅拌2h后放入高压釜中，在100KPa，100℃条件下搅拌加氢还原反应2h，减压抽滤，去离子水洗至中性且经硝酸银溶液检测无氯离子，在常压60℃条件下干燥3h得到钯/羟基磷灰石40g。
实施例7
在反应瓶中，把2’-碘-5-羟基联苯-2-甲酸甲酯10g和3-异丙氧基-4-甲氧基-6-溴苄溴15g加入到干燥的丙酮5000mL中，再加入羟基氢活化催化剂钯/羟基磷灰石1g，加热至回流反应4h，TLC监控原料反应完全，在真空条件下蒸除反应溶剂，浓缩物加入到二氯甲烷150mL中，再用纯净水100mL洗涤有机相三次，分出有机相，在真空条件下蒸除溶剂后得到产品粗品，再经硅胶柱层析分离提纯得到纯净的5-(2-溴-5-异丙氧基-4-甲氧基苯甲醇)-2’-碘联苯-2-甲酸甲酯15g；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.94(d,J＝8.0Hz,1H),7.47-7.41(m,1H),7.40(s,1H),7.34-7.18(m,5H),7.03(s,1H),5.18(s,2H),4.61-4.53(m,1H),3.81(s,3H),3.62(s,3H),1.28(d,J＝8.0Hz,6H)。
实施例8
在反应瓶中，把5-(2-溴-5-异丙氧基-4-甲氧基苯甲醇)-2’-碘联苯-2-甲酸甲酯10g和碳酸钾5g加入二甲基乙酰胺100mL中，在N2保护下加入苯环氢活化催化剂钯/羟基磷灰石1g，往反应体系中不停通入N2，同时排出N2，使其保持一个稳定流通环境，室温搅拌30min后密闭反应瓶，把其放置在微波反应器中，加热到100℃反应24h，TLC监控原料反应完全；从微波反应器中拿出反应瓶，加入一定量的纯净水淬灭反应，再用乙酸乙酯萃取反应液三次，合并有机相，再用无水硫酸钠干燥后蒸除溶剂，最后经硅胶柱层析分离提纯得到3-(2-碘苯)-8-异丙氧基-9-甲氧基-6H-二苯并吡喃-2-甲酸甲酯7.5g；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.57(d,J＝8.0Hz,1H),7.68-7.51(m,4H),7.43(s,1H),7.11-7.05(m,3H),5.20(s,2H),4.70(d,J＝12.0Hz,1H),3.89(s,3H),3.83(s,3H),1.25(d,J＝8.0Hz,6H)。
实施例9
在反应瓶中，把3-(2-碘苯)-8-异丙氧基-9-甲氧基-6H-二苯并吡喃-2-甲酸甲酯5g加入到乙醇30mL中，再加入溶有氢氧化钠2.5g的水溶液10mL，升温至70℃反应1h，TLC监控原料反应完全，在真空条件下蒸除溶剂，剩余物加入到水中，再用乙酸乙酯30mL洗涤水相三次，水相再用稀盐酸溶解调节pH为3，再用二氯甲烷萃取水相三次，合并有机相，最后蒸除溶剂后得到3-(2-碘苯)-8-异丙氧基-9-甲氧基-6H-二苯并吡喃-2-甲酸4.1g；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.56(d,J＝8.0Hz,1H),7.68-7.51(m,4H),7.43(s,1H),7.11-7.05(m,3H),5.22(s,2H),4.70(d,J＝12.0Hz,1H),3.81(s,3H),1.27(d,J＝8.0Hz,6H)。
实施例10
在反应瓶中，把3-(2-碘苯)-8-异丙氧基-9-甲氧基-6H-二苯并吡喃-2-甲酸10g加入到无水THF 200mL中，反应温度降低至-60℃，缓慢滴加氢化铝锂的四氢呋喃溶液30mL，保持温度继续反应2h，再缓慢升温至0℃，反应2h，加入一定量的冰水淬灭反应，抽滤反应液，滤液用乙酸乙酯萃取多次，合并有机相蒸除溶剂后得到3-(2-碘苯)-8-异丙氧基-9-甲氧基-6H-二苯并吡喃-2-甲醇7.7g；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.61(d,J＝8.0Hz,1H),7.71-7.57(m,4H),7.43-7.39(m,2H),7.11-7.15(m,2H),5.22(s,2H),4.70(s,1H),4.53(s,2H),3.81(s,3H),1.21(d,J＝8.0Hz,6H)。
实施例11
在反应瓶中，把3-(2-碘苯)-8-异丙氧基-9-甲氧基-6H-二苯并吡喃-2-甲醇10g、对甲基磺酰氯5g和碳酸钾20g加入到DMF，缓慢升温至80℃，反应8h后TLC监控原料反应完全，加入一定量的纯净水淬灭反应，再用乙酸乙酯50mL萃取三次，合并有机相，有机相经无水硫酸钠30g干燥后蒸除溶剂得到纯净的3-(2-碘苯)-8-异丙氧基-9-甲氧基-6H-二苯并吡喃-2-甲基对甲基磺酸酯8.4g；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.87-7.55(m,5H),7.39-7.09(m,3H),5.09(s,2H),4.56(s,1H),4.31(s,2H),3.79(s,3H),3.13(s,3H),1.25-1.20(m,6H)。
实施例12
在反应瓶中，把3-(2-甲基苯)-8-异丙氧基-9-甲氧基-6H-二苯并吡喃-2-甲基对甲基磺酸酯10g加入到乙腈150mL中，再加入催化剂碘化亚铜5g，氮气保护反应体系，机械搅拌加热升温至70℃，反应10h后经TLC监控原料反应完全，减压蒸出溶剂乙腈，再加入一定量的甲基叔丁基醚700mL，冷却至-5℃，搅拌过程中逐渐有大量固体析出，过滤反应液得到固体，并用一定量的冷甲苯200mL洗涤，滤饼烘干后得到8-异丙氧基-9-甲氧基-6H-苯并吡喃并苯基并环己烷并苯9.3g；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.95(d,J＝12.0Hz,2H),7.72(d,J＝12.0Hz,1H),7.55-7.48(m,4H),7.22-7.21(m,1H),5.17(s,2H),4.73(s,1H),3.84(s,3H),3.01-2.97(m,4H),1.27-1.22(m,6H)。
实施例13
在反应瓶中，把8-异丙氧基-9-甲氧基-6H-苯并吡喃并苯基并环己烷并苯15g加入到二氯甲烷300mL中，再加入溴化锂10g，在0℃条件下搅拌2h，TLC监控原料反应完全后，蒸除反应溶剂得到8,9-二羟基-6H-苯并吡喃并苯基并环己烷并苯；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.82-7.77(m,3H),7.55-7.48(m,4H),7.22-7.21(m,1H),5.37-5.35(m,2H),5.17(s,2H),3.06-3.02(m,4H)。
实施例14(缺少原料氯乙酰氯的加入，已补充)
在反应瓶中，把8,9-二羟基-6H-苯并吡喃并苯基并环己烷并苯15g加入到二氯甲烷300mL中，再加入碳酸钾10g和定位催化剂乙酸钙，在0℃条件下缓慢滴加氯乙酰氯30mL搅拌2h，TLC监控原料反应完全后，蒸除反应溶剂得到目标化合物13g.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.89-7.85(m,2H),7.68(d,J＝12.0Hz,1H),7.52-7.47(m,4H),7.21-7.20(m,1H),5.37-5.35(m,2H),5.17(s,2H),4.78(s,2H),3.06-3.02(m,4H)。
实施例15
抗肿瘤活性测试
收集生长期卵巢癌细胞OVCAR-3，以MTS法测定一下化合物的抗癌活性，将细胞以适当浓度(每毫升4×104个细胞)加到96孔细胞培养板中(含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液)，培养24小时后，在37℃、体积浓度为5％的CO2条件下与不同浓度的化合物作用72小时，然后将MTS(最终质量浓度2mg/mL)和DMS(最终摩尔浓度30μM)的混合物直接加入含细胞的培养基中，继续置培养箱孵育4h。作用4h后，弃去上清液，每孔加入150μLDMSO，振荡，细胞存活率通过其对MTS作用的代谢物在酶联免疫监测仪490nm波长下的吸收率测定，FSHR拮抗剂药物分子对该细胞的抑制率IC50为201μmol·L-1。
初步生物活性测试表明，该化合物在卵巢癌细胞OVCAR-3中对癌细胞均有抑制作用。
综上所述，本发明提供了一种具有苯并1,4-二氧杂环己二烯酮结构的FSHR拮抗剂及其制备方法，这是该类化合物该用途的首次发现，具有重大的研发潜力。
以上实施例描述了本发明的基本原理、主要特征及优点，本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明原理的范围下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进均落入本发明保护的范围内。