一种ASE法提取山楂中金丝桃苷的方法与流程

本发明属于山楂中有效成分的提取领域，尤其是一种ASE法提取山楂中金丝桃苷的方法。

背景技术：

山楂叶为蔷薇科植物山里红(Crataegus pinnatifida Bge.var major N.E.Br.)，具有活血化瘀，理气通脉，用于气滞血瘀，胸闷憋气，心悸见忘，眩晕耳鸣。

研究结果表明山楂中金丝桃苷是已经被证实治疗心血管疾病，并有解痉镇痛，保护胃黏膜、肝组织及调节血脂，增强免疫力，抗抑郁及对心脑缺血的保护作用。

2015年版药典记载的提取及测定山楂中金丝桃苷的方法为：本品细粉约1g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流提取至提取液无色，弃去三氯甲烷液，药渣挥去三氯甲烷，加甲醇继续提取至无色(约4小时)，提取液蒸干，残渣加稀乙醇溶解，转移至50ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，作为供试品贮备液。在15000r/min下离心3min，取上清液。

本发明曾对快速溶剂萃取使用的溶剂进行考察，《中国药典》使用三氯甲烷除杂后，采用甲醇索提至无色，杂质较少。

而三氯甲烷毒性较大；另外，按照药典方法进行，耗时至少需4小时。

技术实现要素：

针对上述不足，本发明旨在提供一种毒性小、耗时短的ASE法提取山楂中金丝桃苷的方法。

为了实现上述技术效果，本发明提供的技术方案是这样的：一种ASE法提取山楂中金丝桃苷的方法，依次包括下述步骤：

步骤1：采用ASE萃取法对山楂粉末进行萃取，先用正己烷对山楂粉末进行除杂，再用乙醇萃取除杂后的样品，并收集乙醇萃取液；

步骤2：用乙醇将乙醇萃取液定容至50ml，离心，取上清液；

所述的除杂步骤的参数为：压力为1500psi，温度为80℃，时间为5min，次数为2次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s；

所述的萃取步骤的参数为：压力为1500psi，温度为110℃，时间为5min，次数为1次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s。

优选地，所述的步骤1包括下述子步骤：

步骤S1：将山楂样品粉碎，过三号筛，取1g与1g石英砂混合均匀；

步骤S2：在放有滤膜的10ml ASE萃取池中加1g硅藻土，再将步骤1所得的混合物倒入，并加石英砂至其低于池口2mm；

步骤S3：用25ml正己烷萃取除杂，再用25ml乙醇对其进行萃取提纯，收集乙醇萃取液。

优选地，所述的步骤2包括下述子步骤：

步骤SS1：将收集所得的乙醇萃取液用乙醇定容至50ml；

步骤SS2：在15000r/min下离心3min，取上清液。

本发明与传统方法相比，具有以下优点：

1.本发明曾对快速溶剂萃取使用的溶剂进行考察，《中国药典》使用三氯甲烷除杂后，采用甲醇索提至无色，杂质较少。而三氯甲烷毒性较大，故采用极性相对较接近的正己烷作为除杂溶剂，甲醇、作为提取溶剂进行了溶剂考察，结果显示正己烷除杂，甲醇提取后金丝桃苷含量与2015年版《中国药典》含量一致，且杂质峰基本相同，故采用与药典一致的提取溶剂。

2.在除杂过程中，药典方法加入三氯甲烷索提取液无色，时间相对较长，且三氯甲烷毒性较大，我们采用了多次萃取除杂的方式，发现80℃，提取5min，2次即可达到除去大部分杂质，再多的提取时间和次数已经无明显影响，而相对高的温度对提取效果影响不大，故最终确定最佳除杂工艺组合为提取温度80℃，提取时间5min，提取次数2次。提取过程中采用110℃，提取5min，提取1次即可达到与药典含量接近，更多的提取时间、温度、次数对结果已经无明显影响。

最终确定最佳提取工艺组合为提取温度110℃，提取时间5min，提取次数1次。

附图说明

图1为药典方法提取山楂叶中金丝桃苷的色谱图；

图2为ASE法萃取山楂叶中金丝桃苷的色谱图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，对本发明的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何在本发明权利要求保护范围内所做的有限次的修改，仍在本发明的权利要求保护范围之内。

实施例1

1、仪器设备及试剂

1.1仪器：

电子分析天平(XA205DU)、ASE350快速溶剂萃取仪(美国DIONEX公司)。

1.2试剂：试剂与溶液(除特别注明外，本实验所用试剂均为分析纯)

水：符合GB/T 6682规定的一级水；正己烷(C₆H₁₄)：分析纯；乙醇(C₂H₆O)：分析纯；乙腈(C₂H₃N)：色谱纯(液相色谱用)；磷酸(H₃PO₄)：分析纯；石英砂：粒径约2mm。

2、方法

2.1 2015年版药典方法

本品细粉约1g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流提取至提取液无色，弃去三氯甲烷液，药渣挥去三氯甲烷，加甲醇继续提取至无色(约4小时)，提取液蒸干，残渣加稀乙醇溶解，转移至50ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，在15000r/min下离心3min，取上清液。

2.2快速溶剂萃取法(ASE)

样品经粉碎机粉碎，过三号筛，约1.0g，精密称定，与1g石英砂混合均匀，待用，在预先放好过滤膜的10ml萃取池中先加入1g硅藻土，后加入混合均匀的样品，再加入适量石英砂，轻轻振摇使之与池口在同一水平线下2mm处，拧紧萃取池上盖。萃取(包括除杂和提取2步，见ASE条件方法)结束后，把萃取液转移于50ml容量瓶中，用烯乙醇稀释至刻度，在15000r/min下离心3min，取上清液。

2.3 ASE萃取条件

所述的除杂步骤的参数为：压力为1500psi，温度为80℃，时间为5min，次数为2次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s；

所述的萃取步骤的参数为：压力为1500psi，温度为110℃，时间为5min，次数为1次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s。

3.结果

取相同批号的样品1.0g，共4份，精密称定，按ASE提取方法提取供试品溶液，进样量为1μL，进行平行试验，测得样品中金丝桃苷的含量见表1，RSD为3.9％.

试验表明ASE提取方法重复性良好。

表1重现性试验结果

表2可以看出采用ASE仪器1、ASE仪器2和药典方法提取后的结果以及ASE仪器之间的重复性均良好。

表2样品采用药典方法与ASE方法测定含量的结果对比

4.讨论

ASE提取溶剂的选择：本发明曾对快速溶剂萃取使用的溶剂进行考察，《中国药典》使用三氯甲烷除杂后，采用甲醇索提至无色，杂质较少。而三氯甲烷毒性较大，故采用极性相对较接近的正己烷作为除杂溶剂，甲醇、作为提取溶剂进行了溶剂考察，结果显示正己烷除杂，甲醇提取后金丝桃苷含量与2015年版《中国药典》含量一致，且杂质峰基本相同，故采用与药典一致的提取溶剂。

ASE提取条件的优化：在除杂过程中，药典方法加入三氯甲烷索提取液无色，时间相对较长，且三氯甲烷毒性较大，我们采用了多次萃取除杂的方式，发现80℃，提取5min，2次即可达到除去大部分杂质，再多的提取时间和次数已经无明显影响，而相对高的温度对提取效果影响不大，故最终确定最佳除杂工艺组合为提取温度80℃，提取时间5min，提取次数2次。提取过程中采用110℃。提取5min，提取1次即可达到与药典含量接近，更多的提取时间、温度、次数对结果已经无明显影响。最终确定最佳提取工艺组合为提取温度110℃，提取时间5min，提取次数1次。

以上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。