本发明涉及天然药物提取技术领域，具体涉及一种从威灵仙中提取苷元的方法及应用。
背景技术：
威灵仙为常用中药之一，具有祛风除湿，通络止痛之功效。《中国药典》2015年版收载的威灵仙为毛茛科植物威灵仙Clematis chinensis Osbeck.、棉团铁线莲Clematis hexapetala Pall.或东北铁线莲Clematis manshurica Rupr.的干燥根及根茎。
威灵仙别名有铁脚威灵仙、铁扫帚、风车等，味辛，咸，性温，归膀胱经，作为传统中药，在我国本草著作中记载其具有祛风湿、通经络、止痹痛、消骨鲠等功效，主要用于治疗风湿痹痛，肢体麻木，筋脉拘挛，关节屈伸不利，以及诸骨鲠咽，是中医治疗风湿痹症的最常用中药，而以威灵仙为原料的多个中成药也已相继被成功研发上市，如“颈复康胶囊”等。
威灵仙和东北铁线莲主要含皂苷类成分，而棉团铁线莲主要含黄酮类成分，与前两者差别很大，同时威灵仙和东北铁线莲所含的皂苷也存在差别，根据文献报道及我们前期研究发现，威灵仙及东北铁线莲中含有大量的三萜皂苷，其结构特点为：1.苷元为常春藤皂苷元型及齐顿果酸型；2.大部分具有双糖链，一条糖链以酯键的方式连接在苷元28位；另一条糖链连在苷元的3位；3.3位糖链上常连接异阿魏酰基，对苷元的活性有较大影响。
研究表明，常春藤皂苷元具有降低NO、PGE2、TNF-α、IL-1β以及IL-6等炎症信号因子表达的作用，从而抑制炎症信号传导，达到对炎症反应的抑制及调控作用；而齐墩果酸在临床上常用于治疗传染性急性黄疸型肝炎，具有明显的降低谷丙转氨酶及退黄效果，改善病毒性和慢性迁延性肝炎患者的症状，体征和肝功能；还可用于银屑病、风湿性关节炎、肾炎水肿、肝硬化腹水、急慢性肝炎、胃痛淋浊、血崩、跌打损伤、痈肿、腰膝酸软、胎动不安等症。
通常情况下，齐墩果酸和常春藤皂苷元以糖苷形式存在与多种植物中，这给两者的开发利用带来了不便。
技术实现要素：
针对现有技术中的上述不足，本发明提供一种从威灵仙中提取苷元的方法，目的是提供一种便于提取威灵仙中苷元的方法。
为解决上述的技术问题，本发明采用的技术方案为：
一种从威灵仙中提取苷元的方法，包括以下步骤：
(1)将威灵仙粉碎，过60～80目筛，向粉末中加入70％～95％乙醇，于30～50℃回流提取1～2h，冷却过滤，得总皂苷提取物；其中，威灵仙粉末质量与乙醇体积比为1～3:40～50；
(2)向步骤(1)所得总皂苷提取物中加入浓度为1～5mol/L的盐酸溶液，于60～100℃水解0.5～2.5h，得水解液；其中，酸液与总皂苷提取物体积比为1～5:1～3；
(3)按体积比为1:1的比例向步骤(2)所得水解液中加入石油醚，萃取2～3次，分离石油醚层与水层，再按体积比为1～1.5:1～2的比例向水层中加入乙酸乙酯，萃取2～3次，于60℃以下进行浓缩，制得浓缩产物。
(4)向浓缩产物中加入甲醇溶解，再用制备液相进行分离，流动相为水和甲醇，分段收集流出液，得到苷元。
进一步地，步骤(1)中乙醇质量浓度为70％乙醇。
进一步地，步骤(1)中威灵仙粉末质量与乙醇体积比为1:50。
进一步地，步骤(2)中酸液为盐酸、硫酸、草酸或硼酸。
进一步地，步骤(2)中水解条件为：于100℃、浓度为2mol/L的酸液中，水解1h。
进一步地，步骤(2)中酸液与总皂苷体积比为1.2:1。
进一步地，步骤(3)中乙酸乙酯与水层体积比为1:1。
进一步地，步骤(4)中制备液相分离梯度为：流动相为水和甲醇，柱温为室温，0～30min，60％～90％甲醇、40％～10％水；流速5mL/min。
上述方法制备得到的苷元。
上述苷元在类风湿性关节炎药物制备中的应用。
本发明的有益效果为：
总皂苷提取物经水解后产生大量苷元，便于后续对苷元进行提取分离。
石油醚萃取可除去水解液中的脂类杂质，然后再采用乙酸乙酯对水解液进行萃取，不仅提高了乙酸乙酯的萃取效率，还提升了苷元的提取纯度，有利于提取收集高纯度的苷元。
附图说明
图1为本发明制备得到的总皂苷提取物的液相图谱。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式进行描述，以便于本技术领域的技术人员理解本发明，但应该清楚，本发明不限于具体实施方式的范围，对本技术领域的普通技术人员来讲，只要各种变化在所附的权利要求限定和确定的本发明的精神和范围内，这些变化是显而易见的，一切利用本发明构思的发明创造均在保护之列。
实施例1
一种从威灵仙中提取苷元的方法，包括以下步骤：
(1)将威灵仙粉碎为粉末，过65目筛，向粉末中加入70％乙醇，于45℃回流提取1h，冷却过滤，得总皂苷提取物；其中，威灵仙粉末质量与乙醇体积比为1:50；
(2)向步骤(1)所得总皂苷提取物中加入浓度为2mol/L的盐酸溶液，于100℃水解1h，得水解液；其中，酸液与总皂苷提取物体积比为1.2:1；
(3)按体积比为1:1的比例向步骤(2)所得水解液中加入石油醚，萃取2次，分离石油醚层与水层，再按体积比为1:1的比例向水层中加入乙酸乙酯，萃取2次，于60℃以下进行浓缩；
(4)向浓缩产物中加入甲醇溶解，定容至10mL，得到提取液。
实施例2
一种从威灵仙中提取苷元的方法，包括以下步骤：
(1)将威灵仙粉碎为粉末，过60目筛，向粉末中加入95％乙醇，于30℃回流提取2h，冷却过滤，得总皂苷提取物；其中，威灵仙粉末质量与乙醇体积比为3:40；
(2)向步骤(1)所得总皂苷提取物中加入浓度为1mol/L的盐酸溶液，于60℃水解0.5h，得水解液；其中，酸液与总皂苷提取物体积比为1:3；
(3)按体积比为1:1的比例向步骤(2)所得水解液中加入石油醚，萃取3次，分离石油醚层与水层，再按体积比为1:2的比例向水层中加入乙酸乙酯，萃取3次，于60℃以下进行浓缩；
(4)向浓缩产物中加入甲醇溶解，定容至10mL，得到提取液。
实施例3
一种从威灵仙中提取苷元的方法，包括以下步骤：
(1)将威灵仙粉碎为粉末，过80目筛，向粉末中加入80％乙醇，于50℃回流提取2h，冷却过滤，得总皂苷提取物；其中，威灵仙粉末质量与乙醇体积比为1:40；
(2)向步骤(1)所得总皂苷提取物中加入浓度为5mol/L的盐酸溶液，于80℃水解2.5h，得水解液；其中，酸液与总皂苷提取物体积比为5:3；
(3)按体积比为1:1的比例向步骤(2)所得水解液中加入石油醚，萃取2次，分离石油醚层与水层，再按体积比为1.5:2的比例向水层中加入乙酸乙酯，萃取2次，于60℃以下进行浓缩；
(4)向浓缩产物中加入甲醇溶解，定容至10mL，得到提取液。
实施例4
一种从威灵仙中提取苷元内的方法，包括以下步骤：
(1)将威灵仙粉碎为粉末，过65目筛，向粉末中加入70％乙醇，于50℃回流提取1h，冷却过滤，得总皂苷提取物；其中，威灵仙粉末质量与乙醇体积比为1:50；
(2)向步骤(1)所得总皂苷提取物中加入浓度为3mol/L的盐酸溶液，于70℃水解1.5h，得水解液；其中，酸液与总皂苷提取物体积比为1.2:1；
(3)按体积比为1:1的比例向步骤(2)所得水解液中加入石油醚，萃取2次，分离石油醚层与水层，再按体积比为1:1的比例向水层中加入乙酸乙酯，萃取2次，于60℃以下进行浓缩；
(4)向浓缩产物中加入甲醇溶解，定容至10mL，得到提取液。
实施例5
一种从威灵仙中提取苷元的方法，包括以下步骤：
(1)将威灵仙粉碎为粉末，过65目筛，向粉末中加入90％乙醇，于50℃回流提取1.5h，冷却过滤，得总皂苷提取物；其中，威灵仙粉末质量与乙醇体积比为1:50；
(2)向步骤(1)所得总皂苷提取物中加入浓度为4mol/L的盐酸溶液，于90℃水解2h，得水解液；其中，酸液与总皂苷提取物体积比为4:1.5；
(3)按体积比为1:1的比例向步骤(2)所得水解液中加入石油醚，萃取3次，分离石油醚层与水层，再按体积比为1:1的比例向水层中加入乙酸乙酯，萃取2次，于60℃以下进行浓缩；
(4)向浓缩产物中加入甲醇溶解，定容至10mL，得到提取液。
实施例6
采用制备液相对实施例1所得产物进行检测分离，色谱柱为YMC-PacK ODS-A(250mm*20mm)，检测条件见表1，色谱图见图1。
表1色谱检测条件
分别于12.2min、24.7min和51.2min收集流出液，减压浓缩，得到不同时间段的单体化合物，其成分见表2。
综上所述，本发明提供的从威灵仙提取苷元的方法有利于总皂苷水解，释放出苷元及侧链基团，所得苷元纯度高，过程简单，成本低，可大规模应用于工业化生产。