专利名称：一种槲皮素-7-o-鼠李糖苷的提取方法
技术领域：
本发明涉及一种从中药材地耳草中提取槲皮素-7-O-鼠李糖苷单体的方法。
槲皮素-7-O-鼠李糖苷的获得途径，可通过从药材地耳草中提取获得。但由于中药材中含有各种黄酮类，多糖类，鞣质，香豆素类等物质，而且黄酮类物质中也含有多种结构相近的物质。要得到槲皮素-7-O-鼠李糖苷单体，需要把槲皮素-7-O-鼠李糖苷与其它各种物质分离开来。以往的研究，未能提供一种可大量获得槲皮素-7-O-鼠李糖苷单体的可用于工业化生产的可行的提取方法。
槲皮素-7-O-鼠李糖苷的结构式如下式所示，式中R1＝鼠李糖，R2＝H； 槲皮素-7-O-鼠李糖苷本发明的槲皮素-7-O-鼠李糖苷提取方法的步骤包括①将含槲皮素-7-O-鼠李糖苷的药材，经过一至多次水提取，滤过，合并滤液；②滤液浓缩成浸膏，浸膏醇沉后上柱或直接上柱，进行柱分离，有机溶剂洗脱；③洗脱液挥干溶剂，得槲皮素-7-O-鼠李糖苷粗品；再进行二次柱分离，有机溶剂洗脱，洗脱液挥干溶剂，得槲皮素-7-O-鼠李糖苷单体(纯品)。
本发明方法所用的含槲皮素-7-O-鼠李糖苷的药材可以是地耳草。水提取前最好先把药材粉碎或切成饮片。
本发明方法中的水提取可以采用在室温～100℃条件下或/和超声波条件下进行；提取次数一般为一至三次，次数增加不限。水的用量为水至少能没过药材，水用量过多不限。提取时间一般为0.1-24小时，时间延长不限。加温或/和超声波条件下提取可缩短提取时间。
本发明方法中的浸膏醇沉所用的乙醇可以是无水乙醇或者各种浓度的乙醇；加入乙醇沉淀后，混合液体的乙醇最终浓度可以是5％至95％的各种浓度。
本发明方法中的柱分离，采用的柱填料可以为硅胶、氧化铝、聚酰胺或大孔树脂。通常，首次柱分离的柱填料可采用聚酰胺或大孔树脂离子交换树脂，二次柱分离的填料可采用硅胶或氧化铝。
本发明方法中的有机溶剂洗脱，有机溶剂可以采用乙醇，甲醇，氯仿，乙酸乙酯或石油醚等各种常用有机溶剂。有机溶剂的浓度可以采用各种浓度，包括浓度为100％的有机溶剂。通常，首次柱分离洗脱所用的有机溶剂可为包括浓度为10-100％的各种浓度的乙醇或甲醇的水溶液，二次柱分离所用的有机溶剂可为氯仿、乙酸乙酯、乙醇、甲醇或它们的混合液。
采用本发明的槲皮素-7-O-鼠李糖苷提取方法，从不同的含槲皮素-7-O-鼠李糖苷药材中提取槲皮素-7-O-鼠李糖苷单体(纯品)，提取得率均在80％以上，所得槲皮素-7-O-鼠李糖苷样品中槲皮素-7-O-鼠李糖苷单体的含量达到95％以上。
采用本发明方法所得到的槲皮素-7-O-鼠李糖苷单体(纯品)，经按《中华人们共和国药典》2000版一部高效液相色谱法进行测定，并以其高效液相三维图谱检测纯度。结果表明，样品中槲皮素-7-O-鼠李糖苷单体的含量高于95％。表明本发明工艺可行。
本发明的槲皮素-7-O-鼠李糖苷提取方法，具有提取工艺简单，提取率高，提取得到的槲皮素-7-O-鼠李糖苷单体纯度高等特点，适用于工业化生产。
图2是本发明方法所得到的槲皮素-7-O-鼠李糖苷单体的高效液相三维色谱图。
各实施例所涉及到的固体混合物中之固体，液体中之液体，以及液体中之固体的百分比分别是以wt/wt，vol/vol，wt/vol计算，除非另有说明。
实施例1地耳草药材切成饮片，加水8倍量，煎煮提取三次，每次一小时，滤过；滤液浓缩成浸膏，过聚酰胺柱，用40％乙醇洗脱后，再用70％乙醇洗脱；收集70％乙醇洗脱液，洗脱液回收乙醇，得沉淀，沉淀用硅胶混匀后，上硅胶柱，以乙酸乙酯洗脱，洗脱液回收乙酸乙酯，得槲皮素-7-O-鼠李糖苷单体。得率为82.3％。
实施例2地耳草药材粉碎，加100℃水没过药材，提取三次，每次1小时，滤过，合并滤液；滤液浓缩，加入无水乙醇至乙醇浓度为70％，放置过夜，滤过，上清液回收乙醇。浸膏过聚酰胺柱，先用40％乙醇洗脱，再用70％乙醇洗脱；收集70％乙醇洗脱液，洗脱液回收乙醇，得沉淀用硅胶混匀后，上硅胶柱，以乙酸乙酯洗脱，洗脱液回收乙酸乙酯，得槲皮素-7-O-鼠李糖苷单体。得率为84.5％。
实施例3地耳草药材切成饮片，经70℃水浸提两次，每次3小时，滤过，合并滤液；滤液浓缩成浸膏，浸膏加入95％乙醇至乙醇浓度为60％，静置过夜，产生沉淀，滤过，去沉淀，滤液回收乙醇，浸膏过聚酰胺柱，先用40％乙醇洗脱，再用70％乙醇洗脱；收集70％乙醇洗脱液，洗脱液回收乙醇，得沉淀用氧化铝混匀后，上氧化铝柱，以乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，得槲皮素-7-O-鼠李糖苷单体。得率为78.5％。
实施例4地耳草药材不粉碎，经超声波用水提取4次，每次30分钟，滤过，合并滤液；浓缩，得浸膏，过聚酰胺柱，用40％乙醇洗脱后，再用70％乙醇洗脱；收集70％乙醇洗脱液，洗脱液回收乙醇，得沉淀，沉淀用硅胶混匀后，上硅胶柱，以氯仿洗脱，洗脱液回收氯仿，得槲皮素-7-O-鼠李糖苷单体。得率为80.3％。
实施例5槲皮素-7-O-鼠李糖苷单体纯度测定实验取上述提取方法制备得到的槲皮素-7-O-鼠李糖苷单体适量，甲醇溶解定容于容量瓶中，再用微孔滤膜(0.45um)过滤后，注入高效液相色谱仪中，可以得到其高效液相色谱图(
图1)。进行三维图谱扫描，得到高效液相色谱三维色谱图(图2)。利用其三维图谱(图2)观测其纯度，利用归一化法计算其提取所得槲皮素-7-O-鼠李糖苷样品中槲皮素-7-O-鼠李糖苷单体的含量。从其三维图谱(图2)上我们可以观测到其在其高效液相色谱图(图1)上除槲皮素-7-O-鼠李糖苷的峰没有其他物质出现。
色谱条件Agilent1100高效液相色谱仪(自动进样器，真空脱气机，四元泵，柱温箱，二极管阵列检测器)；色谱柱MERKER ODS柱(5um，4.0×250mm)；流动相甲醇-冰醋酸-水(35∶4∶61)；检测波长370nm；柱温30℃；流速1ml/min；进样量5μl。
从结果看出，提取所得样品的高效液相一维及三维图谱中除槲皮素-7-O-鼠李糖苷外没有其他杂质峰，其中槲皮素-7-O-鼠李糖苷单体的含量高于95％。说明本发明的提取方法所得到的槲皮素-7-O-鼠李糖苷样品纯度高。
另外，对所得的槲皮素-7-O-鼠李糖苷单体进行了熔点测定，其熔点为274.0～274.5℃，其熔程只有0.5℃，也说明其纯度是很高的。
综上所述，说明本发明的槲皮素-7-O-鼠李糖苷提取方法，能有效地从含槲皮素-7-O-鼠李糖苷药材中提取得到槲皮素-7-O-鼠李糖苷单体，所得槲皮素-7-O-鼠李糖苷样品纯度高，含量均高于95％以上，而且工艺简单可行。
权利要求
1.一种槲皮素-7-O-鼠李糖苷的提取方法，依次包括以下步骤①将含槲皮素-7-O-鼠李糖苷的中药材，经过一至多次水提取，滤过，合并滤液；②滤液浓缩成浸膏，浸膏醇沉后上柱或直接上柱，进行柱分离，有机溶剂洗脱；③洗脱液挥干溶剂，得槲皮素-7-O-鼠李糖苷粗品；槲皮素-7-O-鼠李糖苷粗品再进行二次柱分离，有机溶剂洗脱，洗脱液挥干溶剂，得槲皮素-7-O-鼠李糖苷单体。
2.按照权利要求1所述的方法，其特征是水提取前先把药材粉碎或切成饮片。
3.按照权利要求1或2所述的方法，其特征是所说的含槲皮素-7-O-鼠李糖苷的中药材为地耳草。
4.按照权利要求1，2或3所述的方法，其特征是所说的水提取是在室温至100℃条件下或/和超声波条件下进行；提取次数为一至三次。
5.按照权利要求4所述的方法，其特征是所说水提取的提取时间为0.1-24小时。
6.按照权利要求1，2或3所述的方法，其特征是所说的浸膏醇沉所用的乙醇是无水乙醇或者各种浓度的乙醇；加入乙醇沉淀后，混合液体的乙醇最终浓度为5％至95％的各种浓度。
7.按照权利要求1，2或3所述的方法，其特征是所说的首次柱分离采用的柱填料为聚酰胺或大孔树脂离子交换树脂，二次柱分离采用的填料为硅胶或氧化铝。
8.按照权利要求1，2或3所述的方法，其特征是首次柱分离洗脱所用的有机溶剂为包括浓度为10-100％的各种浓度的乙醇或甲醇的水溶液，二次柱分离所用的有机溶剂为氯仿、乙酸乙酯、乙醇、甲醇或它们的混合液。
全文摘要
本发明涉及一种从含槲皮素－7－O－鼠李糖苷的中药材中提取槲皮素－7－O－鼠李糖苷单体的方法。该方法是将药材粉碎，经过一至多次水提取，滤过，合并滤液；滤液浓缩成浸膏，浸膏醇沉后上柱或直接上柱，进行二次柱分离，有机溶剂洗脱；洗脱液挥干溶剂，得槲皮素－7－O－鼠李糖苷单体。采用本发明方法，从不同的含槲皮素－7－O－鼠李糖苷药材中提取槲皮素－7－O－鼠李糖苷，提取得率均在80％以上，所得槲皮素－7－O－鼠李糖苷样品中槲皮素－7－O－鼠李糖苷单体的含量达到95％以上。因此，本发明方法具有提取工艺简单，提取率高，提取得到的槲皮素－7－O－鼠李糖苷单体纯度高，适用于工业化生产等特点。
文档编号C07H17/07GK1470518SQ0312699
公开日2004年1月28日 申请日期2003年6月26日 优先权日2003年6月26日
发明者苏薇薇, 王永刚, 彭维, 吴忠, 唐西, 杨立伟, 方铁铮, 宋晓虹 申请人:中山大学