一种微生物发酵制备杀虫剂的方法，涉及到用市售短小芽孢杆菌、苏云杆菌和解淀粉芽孢杆菌h47冻干粉，以苦参为原料发酵制备杀虫剂的方法，属于生物工程及发酵技术领域。
背景技术：
苦参(sophoraflavescens)为豆科苦参属植物，落叶半灌木，高1.5-3m。根圆柱状，外皮黄白色。茎直立，多分枝，具纵沟；幼枝被疏毛，后变无毛。奇数羽状复叶，长20-25cm，互生；小叶15-29，叶片披针形至线状披针形，长3-4cm，宽1.2-2cm，先端渐尖，基部圆，有短柄，全缘，背面密生平贴柔毛；托叶线形。总状花序顶生，长15-20cm，被短毛，苞片线形；萼钟状，扁平，长6-7mm，5浅裂；花冠蝶形，淡黄白色；旗瓣匙形，翼瓣无耳，与龙骨瓣等长；雄蕊10，花丝分离；子房柄被细毛，柱头圆形。荚果线形，先端具长喙，成熟时不开裂，长5-8cm。种子间微缢缩，呈不明显的串珠状，疏生短柔毛。种子3-7颗，近球形，黑色。花期6-7月，果期7-9月。分布于全国各地，生于沙地或向阳山坡草丛中及溪沟边。苦参含有许多次生代谢产物，苦参醚提物及醇提物对金黄色葡萄球菌有较强的抑菌作用；苦参水浸剂对堇色毛癣菌、同心性毛癣菌、许兰毛癣菌、奥杜盎小芽孢癣菌等有抑制作用。苦参碱可麻痹神经中枢，使虫体蛋白质凝固，封闭虫体气孔，使害虫窒息而死。对各种作物上的菜青虫、蚜虫、红蜘蛛等害虫有明显的防治效果。但植物性杀虫剂多用有机溶剂或煎煮提取，1)不利于节能也有较大的环境风险；2)影响活性物质的稳定性和遗失活性物质；3)增加成本使得开发应用困难较大，作用效果缓慢，因此给植物源杀虫剂的研发和生产带来了巨大的经济困难。利用合适的植物促生菌发酵苦参，不仅有利于生理活性物质的提取，还不易造成活性物质的失活，促生菌本身还有较好的杀虫防病和促生作用。有利于改善植物生长和增强杀虫效果。有利于环境保护和苦参植物本身的有效利用。
技术实现要素：
本发明利用苦参的丰富资源，通过微生物进行发酵产生抗氧化因子及植物促生菌产生酶类、醇类及芳香物质等多类有义代谢产物从而提高杀虫剂的药效及其功能，本发明拥有着发酵时间短，有害微生物滋生少甚至没有，避免由于过长时间发酵而产生的病毒，以及能产生脂肽等生理活性物质等优点，从而提高杀虫防病的功效和植物生长的促生作用。
本发明配方及用法：
(1)挑选材料：选择新鲜、质量好的苦参为发酵主原料。
(2)材料的处理：先用自来水冲洗，再使用无锡百年尚水饮品有限公司提供的百年尚水清水洗两遍，最后再用0.9％的nacl溶液侵泡120秒，沥干备用。
(3)菌种培养：使用无锡百年尚水饮品有限公司提供的百年尚水配制lb培养基，将原保存菌株活化，培养约48小时得到的菌液备用；
(4)接种发酵：均按照接种比例2～4％，将市售短小芽孢杆菌、苏云杆菌和解淀粉芽孢杆菌h47按一定的比例接入发酵原液，各菌浓度为106cfu/ml，发酵3～9d，ph值5.0～8.0，温度25℃～35℃。
(5)后期处理制作：粗过滤，初步筛掉大颗粒残渣，避免苦参久放容易造成酸败，过滤条件：过滤筛数目为20～32目。细过滤：进一步滤掉小型颗粒残渣，使液态呈现较清澈的状态，过滤条件：过滤筛数目为80～100目，既得以苦参发酵原料的杀虫剂。
步骤(1)原料的制备方法包括如下步骤：
(11)所使用的工具、器具均要灭菌，无油腻。
(12)把苦参用纯净水洗净，再用纯净水或0.9％的盐水浸泡沥干。
(13)再将苦参置于已灭菌的容器中，后加入生活垃圾及淀粉类物质和纯净水，其中发酵原液中体积比苦参：生活垃圾：淀粉类物质:纯净水＝2～5:1～2:0.01:3～7，即得苦参发酵原液。
发明的有益效果：
本利用合适的植物促生菌发酵苦参，不仅有利于生理活性物质的提取，保持活性物质的稳定性，促生菌本身可通过优势菌株抑制了其他杂菌滋生从而有较好的杀虫防病和促生作用。有利于改善植物生长和增强杀虫效果。有利于环境保护和苦参植物本身的有效利用。提高杀虫剂的经济价值。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完善地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种以苦参为原料发酵制备杀虫剂的方法，包括以下步骤：
(1)选择新鲜、质量好的苦参做为发酵主要原料。
(2)纯净水清水洗两遍，最后再用0.9％的nacl溶液浸泡，低温杀菌，然后沥干，装入纯净水清洗好的容器中，大概占体积的20％，加入占总液体体积5％的生活垃圾及1％的淀粉类物质为发酵原液备用。
(3)配制lb培养基，将原保存菌株活化，80r/min振荡培养约48小时得到的发酵菌液备用；
(4)均按照接种比例3％，将市售短小芽孢杆菌、苏云杆菌和解淀粉芽孢杆菌h47按等比分别取接入发酵原液，100r/min振荡培养发酵6d，ph值7.0，温度25℃。
(5)先进行粗过滤，过滤筛数目为20～32目。然后细过滤，过滤筛数目为为80～100目，即得苦参为发酵原料的杀虫剂。
实施例2
一种以苦参为原料发酵制备杀虫剂的方法，包括以下步骤：
(1)选择新鲜、质量好的苦参做为发酵主要原料。
(2)纯净水清水洗两遍，最后再用0.9％的nacl溶液浸泡，低温杀菌，然后沥干，装入纯净水清洗好的容器中，大概占体积的30％，加入占总液体体积10％的生活垃圾及1％的淀粉类物质为发酵原液备用。
(3)配制lb培养基，将原保存菌株活化，100r/min振荡培养约48小时得到的发酵菌液备用；
(4)按照不同接种比例(市售短小芽孢杆菌：苏云杆菌：解淀粉芽孢杆菌＝2：1：1)，将接种量为4％市售短小芽孢杆菌：2％苏云杆菌：2％解淀粉芽孢杆菌h47分别取接入发酵原液，120r/min振荡发酵6d，ph值7.0，温度25℃。
(5)先进行粗过滤，过滤筛数目为20～32目。然后细过滤，过滤筛数目为为80～100目，即得苦参为发酵原料的杀虫剂。
实施例3
一种以苦参为原料发酵制备杀虫剂的方法，包括以下步骤：
(1)选择新鲜、质量好的苦参做为发酵主要原料。
(2)纯净水清水洗两遍，最后再用0.9％的nacl溶液浸泡，低温杀菌，然后沥干，装入纯净水清洗好的容器中，大概占体积的40％，加入占总液体体积15％的生活垃圾及1％的淀粉类物质为发酵原液备用。
(3)配制lb培养基，将原保存菌株活化，120r/min振荡培养约48小时得到的发酵菌液备用；
(4)按照不同的接种比例(市售短小芽孢杆菌：苏云杆菌：解淀粉芽孢杆菌＝1：2：1)，将接种量2％市售短小芽孢杆菌、4％苏云杆菌和2％解淀粉芽孢杆菌h47分别取接入发酵原液，150r/min振荡发酵6d，ph值7.0，温度25℃。
(5)先进行粗过滤，过滤筛数目为20～32目。然后细过滤，过滤筛数目为为80～100目，即得苦参为发酵原料的杀虫剂。
实施例4
一种以苦参为原料发酵制备杀虫剂的方法，包括以下步骤：
(1)选择新鲜、质量好的苦参做为发酵主要原料。
(2)纯净水清水洗两遍，最后再用0.9％的nacl溶液浸泡，低温杀菌，然后沥干，装入纯净水清洗好的容器中，大概占体积的50％，加入占总液体体积20％的生活垃圾及1％的淀粉类物质为发酵原液备用。
(3)配制lb培养基，将原保存菌株活化，150r/min振荡培养约48小时得到的发酵菌液备用；
(4)按照不同的接种比例(市售短小芽孢杆菌：苏云杆菌：解淀粉芽孢杆菌＝1：1：2)，将接种量为2％市售短小芽孢杆菌、2％苏云杆菌和4％解淀粉芽孢杆菌h47分别取接入发酵原液，200r/min振荡发酵6d，ph值7.0，温度25℃。
先进行粗过滤，过滤筛数目为20～32目。然后细过滤，过滤筛数目为为80～100目，即得苦参为发酵原料的杀虫剂。
本发明中的苦参含有丰富的次级代谢物质以及苦参醚提物及醇提物等对植物具有促生作用且药效明显，但是不仅仅限于此，可以根据实际情况，确定苦参的鲜重或是干重的添加量或者选择淀粉类物质及生活垃圾混合在一起，只要能达到杀虫剂配比合理、杀虫剂的药效就可以发挥明显作用。
另外发酵原液的选择和配比、接菌量也不限于实施例所举的组合，可根据实际情况选择不同的组合。
以上所述仅为本发明的较佳实例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的思路和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。