本发明涉及与肿瘤相关的药物学领域，具体涉及一类o-苄基取代的异羟肟酸衍生物及其制备方法和药物的用途。
背景技术：
：恶性肿瘤是一种复杂的疾病，目前已成为继心脑血管疾病后威胁人类生命健康的第二大杀手。由于恶性肿瘤发病机制的多样性以及其容易转移及复发的特性，使其治疗成为一大难题。恶性肿瘤通过多种遗传和分子的改变影响细胞的增殖、分化及功能，表观遗传学修饰在肿瘤的发生发展中发挥重要作用；组蛋白修饰作为表观遗传学的重要研究内容，主要包括组蛋白末端的乙酰化、甲基化、磷酸化、泛素化和adp核糖基化修饰等。其中组蛋白去乙酰化酶是表观遗传学研究的热点，组蛋白乙酰化受一对功能相互拮抗的蛋白酶组蛋白乙酰化转移酶(histoneacetyltransferases,hats)和组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylases,hdacs)调控。正常细胞中，这一对酶处于动态平衡状态，hats的作用使组蛋白末段乙酰化，舒展核小体结构、激活基因转录，而hdacs的功能相反，抑制基因转录，目前已证实其功能异常与肿瘤的发生和发展有直接关系，许多hdacs家族成员的表达和活性在多种肿瘤病例中都有上调表现，如大肠癌、胃癌、霍奇金淋巴瘤、早幼粒细胞白血病，表明hdacs与肿瘤的发生发展密切相关，因而hdacs成为抗肿瘤药物研究的重要靶酶之一。hdacs抑制剂一直都是在抗肿瘤药物研究领域的热点之一，其中异羟肟酸类是目前研究较多较深入的一类，如2006年,2009年和2015年美国食品药物管理局（fda）分别批准用于皮肤t细胞淋巴瘤治疗的药物伏立诺他（saha），罗米地辛（fk228）和用于多发性骨髓瘤的帕比司他(panobinostat)均为异羟肟酸类hdacs抑制剂。本发明涉及结构新颖的o-苄基取代的异羟肟酸衍生物，其对hdacs有明显的抑制作用，同时对白血病和肺癌有明显的活性。技术实现要素：本发明的目的是提供一类o-苄基取代的异羟肟酸衍生物，其可药用盐、水合物、前药或以任何形式代谢形成的代谢产物；本发明同时还提供o-苄基取代的异羟肟酸衍生物在制备方法，治疗由组蛋白去乙酰化酶介导的疾病的药物中的应用。本发明的目的是这样来实现的，一类o-苄基取代的异羟肟酸衍生物的通式（ⅰ）为：（ⅰ）式中r选自氢、卤素、烷基、烷氧基、羟基、氰基、硝基，其中所述烷基、烷氧基任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、氰基、硝基所取代。优选的本发明具有通式（ⅰ）的化合物，所述化合物选自：1-苄氧基-3-（2-(5-甲氧基-1h-吲哚-3-基)乙基脲（ⅰ-1）1-(3-甲基苄氧基)-3-（2-(5-甲氧基-1h-吲哚-3-基)乙基脲（ⅰ-2）1-(4-甲基苄氧基)-3-（2-(5-甲氧基-1h-吲哚-3-基)乙基脲（ⅰ-3）1-(2-氟苄氧基)-3-（2-(5-甲氧基-1h-吲哚-3-基)乙基脲（ⅰ-4）1-(3-氟苄氧基)-3-（2-(5-甲氧基-1h-吲哚-3-基)乙基脲（ⅰ-5）1-(4-氟苄氧基)-3-（2-(5-甲氧基-1h-吲哚-3-基)乙基脲（ⅰ-6）1-(2-氯苄氧基)-3-（2-(5-甲氧基-1h-吲哚-3-基)乙基脲（ⅰ-7）1-(3-氯苄氧基)-3-（2-(5-甲氧基-1h-吲哚-3-基)乙基脲（ⅰ-8）1-(4-氯苄氧基)-3-（2-(5-甲氧基-1h-吲哚-3-基)乙基脲（ⅰ-9）1-(4-溴苄氧基)-3-（2-(5-甲氧基-1h-吲哚-3-基)乙基脲（ⅰ-10）。本发明提供的化合物是新型o-苄基取代的异羟肟酸衍生物，其具有组蛋白乙酰化酶(hdacs)抑制作用，因而可用于与这种酶有关的疾病的治疗。为此，本发明还特别涉及上述的具有通式（ⅰ）的化合物，其可药用盐、水合物、前药或以任何形式代谢形成的代谢产物在制备治疗由组蛋白乙酰化酶介导的疾病中的应用。本发明采取的又一技术方案是：一种用于治疗由组蛋白乙酰化酶介导的疾病的药物组合物，其有效成分至少含有上述的通式的化合物，其可药用盐、水合物、前药或以任何形式代谢形成的代谢产物根据本发明，所述的组蛋白乙酰化酶介导的疾病包括恶性肿瘤，恶性肿瘤包括但不限于白血病、肝癌、结肠癌、胃癌、肾癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌、神经胶质瘤、淋巴瘤、纤维肉瘤、卵巢癌、宫颈癌、黑色素瘤和前列腺癌等。本发明同时涉及所述的化合物在制备治疗肿瘤药物中的应用。本发明所述通式（ⅰ）的化合物可通过式（ⅱ）的化合物与式（ⅲ）的化合物反应来制备：其中，r如通式（ⅰ）中所述。该反应在一种溶剂中进行，所述溶剂例如为乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷、二甲基甲酰胺、四氢呋喃、丙酮、二甲亚砜，反应温度为0℃至溶剂的回流温度，反应采用式（ⅱ）和式（ⅲ）等摩尔质量；在碱存在下进行，所述的碱包括无机碱和有机碱，所述的无机碱可以提及例如，碱金属碳酸盐类例如碳酸钠、碳酸钾、碳酸銫等；碱金属碳酸盐类如碳酸氢钾等；碱金属氢氧化物例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂等；所述的有机碱可以提及例如三乙胺、吡啶、二甲基吡啶、正丁基锂、叔丁醇钾等。本发明中化合物的抗hdacs活性及抗肿瘤细胞活性可以通过使用如下所述的测定方法测定。以下生物学测试实施例描述解释本发明。本发明测试例中具体条件的实验方法通常按常规条件或按照商品制造厂商所建议的条件。未注明具体来源的试剂，为市场购买的常用试剂。测试例1本发明化合物对hdacs的抑制活性可以通过使用如下所述的测定方法测定：将hela细胞提取物与buffer按照1：2的体积比进行稀释；用buffer将化合物稀释成5×终浓度；用buffer将底物稀释50倍(1mm，2×终浓度)；colordelystmdeveloper检测试剂在使用前30min内配置：首先用预冷的buffer将colordelystmdeveloper稀释20倍(如，50µl加950µl的buffer)，然后用新鲜配制的developer溶液将tsa稀释100倍；96孔板中，每孔分别加入15µl稀释后的酶和10µl待测化合物，37℃孵育5min，加入25µl的底物(空白孔不加酶及化合物，加buffer代替；对照孔化合物用buffer代替)，将96孔板置于37℃摇床中孵育30min；每孔加入50µl现配制的colordelystmdeveloper，继续孵育30min；酶标仪上测定405nm条件下的紫外吸光度值，通过测定对照组和目标化合物组的405nm吸光度，可计算化合物的抑制率并求得ic50值，结果见表1。表1：hdacs抑制活性化合物编号ic50(µm)化合物编号ic50(µm)ⅰ-10.95±0.03ⅰ-76.84±1.10ⅰ-22.01±0.41ⅰ-81.49±0.14ⅰ-31.23±0.17ⅰ-94.52±0.66ⅰ-47.38±0.99ⅰ-100.21±0.01ⅰ-50.37±0.02saha(对照药物)1.65±0.22ⅰ-68.63±1.02结论：本发明所有化合物对hdacs具有明显的抑制作用，其中ⅰ-1、ⅰ-3、ⅰ-5、ⅰ-8、ⅰ-10对hdacs的抑制作用强于对照药物saha。测试例2本发明中化合物的抗肿瘤活性可以采用如下的测定方法测定：每种化合物在使用前溶于dmso中，然后用含1%dmso与5%新鲜小牛血清的rpmi-1640稀释为5～6个浓度梯度。将处于对数生长期的肿瘤细胞,调整至适宜细胞密度，接种于96孔培养板内，同时加入稀释药液或阴性对照液10µl/孔，均设五复孔。另外，每块培养板上另设两个调零孔。将96孔板移入37℃、5%co2、饱和湿度的培养箱内，培养2d后，加入5mg/mlmtt试液20µl/孔，于37℃、5%co2、饱和湿度条件下继续培养4h后，终止培养。然后加入三联溶解液100µl/孔，于37℃放置过夜。用空白对照组调零，在酶标仪上于570nm波长处测定各孔吸光度od值。根据结果计算ic50。结果见表2表2：优选化合物对肿瘤细胞的活性结论：本发明化合物对白血病和结肠癌有明显活性。具体实施方式下面结合实施例对本发明作进一步说明。需要说明的是，下述实施例仅是用于说明，而并非用于限制本发明。本领域技术人员根据本发明的教导所做出的各种变化均就在本申请权利要求所要求的保护范围之内。实施例1n-[2-（5-甲氧基-3-吲哚）乙基]-氨基甲酸-4-硝基苯酯（ⅱ）5-甲氧基色胺19.02g(0.1mol)悬浮于干燥的二氯甲烷200ml和吡啶8.00ml(0.2mol)中，冰浴搅拌。称取4-硝基氯甲酸苯酯20.16g(0.1mol)预溶于100ml干燥二氯甲烷中，缓慢滴加至上述悬浮液，冰浴搅拌反应4h,反应液用水(3×150ml)洗涤，经无水硫酸镁干燥后，减压抽滤得黄色粘稠物，加入100ml乙醇溶解，冰箱析晶4h，有大量固体析出，过滤，并用乙醚洗涤，置红外灯下干燥，得到黄色粉末状固体,称量为28.01g,收率78.90%,mp.167～170℃。1hnmr(600mhz,cdcl3)δ3.85(s,3h,ch3)；5.19(s,1h,nh)；7.97(s,1h,nh)；3.03(t,j=6.6hz,2h,ch2)；3.62(q,j=6.6hz,2h,ch2)；8.22(m,2h,arh);7.21(m,3h,arh);7.06(d,j=2.4hz,2h,arh)；7.02(m,1h,arh)。ir(kbr)cm-1:3400.3(nh)，3305.8(nh)，1722.3(c=o).esi-ms:378.20[m+na]+。实施例2o-苄基-羟胺盐酸盐（ⅲ-1）将装有150ml精制无水乙醇的圆底烧瓶放在冰浴中，后称取7.00g(0.3mol)金属钠，分批投入到圆底烧瓶中，并不断搅拌。待钠全部溶解后，将21.93g(0.3mol)丙酮肟预溶于100ml精制无水乙醇中，滴加到乙醇钠溶液中，并室温搅拌2h。量取氯化苄34.60ml(37.97g,0.3mol),缓慢滴加到反应混合液中，室温搅拌6h后，有大量白色固体生成，加入30ml水淬灭，用乙醚150ml×3进行萃取，合并3次浅黄色的萃取液，经无水硫酸镁干燥后抽滤，滤液经常压蒸馏、旋蒸后得黄色油状液体1a。将所得的黄色油状液体1a缓慢滴加到60ml浓盐酸中，室温搅拌过夜。旋蒸至有大量白色固体析出，放冷后抽滤，滤饼用适量无水乙醇和乙酸乙酯交替洗涤，母液回收同法进行二次析晶，合并两次收集的固体，置红外灯下干燥，得白色固体23.46g,收率49.17%,mp.204～205℃。实施例31-苄氧基-3-（2-(5-甲氧基-1h-吲哚-3-基)乙基脲（ⅰ-1）o-苄基-羟胺盐酸盐15.96g(0.1mol)悬浮于200ml干燥的二氯甲烷和27.88ml(0.2mol)三乙胺中。称取n-[2-（5-甲氧基-3-吲哚）乙基]-氨基甲酸-4-硝基苯酯35.50g(0.1mol)预溶于200ml干燥二氯甲烷中，加入上述混悬液中，45℃搅拌反应6h后，依次用1mhcl(200ml)、h2o(2×200ml)、1mnahco3(200ml)、h2o(2×200ml)洗涤，有机相过柱，得白色固体(略带浅黄色),置红外灯下干燥后称量为21.22g,收率62.59%,mp.89～92℃。1hnmr(600mhz,cdcl3)δ3.87(s,3h,ch3)；5.75(s,1h,nh)；7.93(s,1h,nh)；2.92(t,j=6.6hz,2h,ch2)；3.55(q,j=6.6hz,2h,ch2)；4.60(s,2h,ch2)；7.30(m,4h,arh);7.17(m,2h,arh);7.24(d,j=2.4hz,1h,arh);7.06(t,j=9.8hz,1h,arh)；6.98(s,1h,arh)；6.90(m,1h,arh)。13cnmr(151mhz,dmso)δ160.13；153.46；136.97；131.90；129.13；128.45；128.09；123.73；112.45；112.03；111.52；100.78；77.72；55.83；40.56；26.24；ir(kbr)cm-13419.6(nh),3195.8(nh),1651.0(c=o)。hrms-esi:340.1661([m+h]+，calcdforc19h22n3o3:340.1662)。实施例41-(3-甲基苄氧基)-3-（2-(5-甲氧基-1h-吲哚-3-基)乙基脲（ⅰ-2）合成方法同ⅰ-1，得白色固体23.81g,收率67.45%,mp.106～108℃。1hnmr(600mhz,cdcl3)δ3.87(s,3h,ch3);2.32(s,3h,ch3)；5.76(s,1h,nh)；7.88(s,1h,nh)；2.92(t,j=6.6hz,2h,ch2)；3.56(q,j=6.6hz,2h,ch2)；4.60(s,2h,ch2)；7.26(s,1h,arh);7.19(s,1h,arh);7.07(m,2h,arh)；6.98(s,j=8.0hz,1h,arh)；6.88(q,j=2.4hz,2h,arh)。13cnmr(151mhz,cdcl3)δ154.13；138.41；135.15；131.48；129.84；129.53；128.59；127.83；126.12；122.75；112.79；112.52；111.95；100.57；78.60；55.92；39.85；25.61；21.30；ir(kbr)cm-13435.0(nh),3074.3(nh)，1624.0(c=o)。hrms-esi:354.1803([m+h]+，calcdforc20h24n3o3:354.1818)。实施例51-(4-甲基苄氧基)-3-（2-(5-甲氧基-1h-吲哚-3-基)乙基脲（ⅰ-3）合成方法同ⅰ-1，得白色固体24.99g,收率70.80%,mp.103～106℃。1hnmr(600mhz,cdcl3)δ3.87(s,3h,ch3)；5.74(s,1h,nh)；7.94(s,1h,nh)；2.90(t,j=6.6hz,2h,ch2)；3.54(q,j=6.6hz,2h,ch2)；4.60(s,2h,ch2)；7.29(s,1h,arh);7.06(dt,j=7.2hz,5h,arh);6.99(s,1h,arh)；6.89(m,1h,arh)。13cnmr(151mhz,dmso)δ160.12；153.46；137.72；133.88；131.92；129.27；129.22；128.08；123.74；112.45；112.02；111.52；100.78；77.61；55.83；40.56；26.23；21.27；ir(kbr)cm-13415.7(nh)，3319.3(nh)，3197.8(nh)，1596.9(c=o)。hrms-esi:354.1796([m+h]+，calcdforc20h24n3o3:354.1818)。实施例61-(2-氟苄氧基)-3-（2-(5-甲氧基-1h-吲哚-3-基)乙基脲（ⅰ-4）合成方法同ⅰ-1，得白色固体22.11g,收率61.92%,mp.156～159℃。1hnmr(600mhz,cdcl3)δ3.87(s,3h,ch3)；5.24(s,1h,nh)；7.87(s,1h,nh)；2.97(t,j=6.6hz,2h,ch2)；3.60(q,j=6.6hz,2h,ch2)；4.77(s,2h,ch2)；7.41(s,1h,arh);7.11(s,1h,arh);7.24(d,j=2.4hz,1h,arh);7.05(d,j=2.4hz,2h,arh)；6.92(s,1h,arh)；6.86(q,j=2.4hz,1h,arh);6.05(s,1h,arh)。13cnmr(151mhz,dmso)δ153.44；131.89；131.09；128.06；124.62；123.68；115.56；115.42；112.42；112.07；111.51；100.79；55.84；48.00；40.62；40.55；26.39；ir(kbr)cm-13411.8(nh),3062.7(nh),1215.1(cf),1539.1(c=o)。hrms-esi:358.1552([m+h]+，calcdforc19h21n3o3f:358.1567)。实施例71-(3-氟苄氧基)-3-（2-(5-甲氧基-1h-吲哚-3-基)乙基脲（ⅰ-5）合成方法同ⅰ-1，得白色固体22.58g,收率63.25%,mp.98～101℃。1hnmr(600mhz,cdcl3)δ3.87(s,3h,ch3)；5.74(s,1h,nh)；7.98(s,1h,nh)；2.93(t,j=6.6hz,2h,ch2)；3.57(q,j=6.6hz,2h,ch2)；4.60(s,2h,ch2)；7.29(s,1h,arh);7.27(s,1h,arh);7.24(d,j=2.4hz,1h,arh);7.05(d,j=2.4hz,1h,arh)；6.99(s,1h,arh)；6.94(d,j=7.2hz,1h,arh)；6.88(q,j=2.4hz,2h,arh);7.28(d,j=7.8hz,2h,arh);7.17(d,j=7.8hz,2h,arh)。13cnmr(151mhz,cdcl3)δ154.15；131.51；130.28；130.23；127.82；124.54；122.74；115.83；115.74；115.69；115.61；112.71；112.56；112.01；100.56；77.54；55.91；39.86；25.51；ir(kbr)cm-13411.8(nh),3199.7(nh)，3064.7(nh)，1220.9(ccl),1651.0(c=o)。hrms-esi:358.1568([m+h]+，calcdforc19h21n3o3f:358.1567)。实施例81-(4-氟苄氧基)-3-（2-(5-甲氧基-1h-吲哚-3-基)乙基脲（ⅰ-6）合成方法同ⅰ-1，得白色固体25.06g,收率70.20%,mp.138～140℃。1hnmr(600mhz,cdcl3)δ3.87(s,3h,ch3)；5.73(s,1h,nh)；7.96(s,1h,nh)；2.93(t,j=6.6hz,2h,ch2)；3.57(q,j=6.6hz,2h,ch2)；4.60(s,2h,ch2)；7.29(s,1h,arh);7.27(s,1h,arh);7.24(d,j=2.4hz,1h,arh);7.05(d,j=2.4hz,1h,arh)；7.02(m,1h,arh)；6.99(s,1h,arh)；6.95(d,j=7.5hz,1h,arh)；6.88(q,j=2.4hz,2h,arh)。13cnmr(151mhz,dmso)δ160.10；153.46；133.24；133.22；131.90；131.45；131.39；128.09；123.73；115.50；115.35；112.46；112.02；111.53；100.77；76.84；55.83；40.56；26.23；ir(kbr)cm-13413.8(nh),3186.2(nh)，3068.5(nh)，1211.2(cf),1604.7(c=o)。hrms-esi:358.1549([m+h]+，calcdforc19h21n3o3f:358.1567)。实施例91-(2-氯苄氧基)-3-（2-(5-甲氧基-1h-吲哚-3-基)乙基脲（ⅰ-7）合成方法同ⅰ-1，得白色固体22.57g,收率60.44%,mp.108～110℃。1hnmr(600mhz,cdcl3)δ3.87(s,3h,ch3)；δ3.87(s,3h,ch3)；5.74(s,1h,nh)；8.00(s,1h,nh)；2.93(t,j=6.6hz,2h,ch2)；3.57(q,j=6.6hz,2h,ch2)；4.58(s,2h,ch2)；7.29(m,2h,arh);7.20(m,2h,arh);7.03(m,2h,arh);6.99(s,1h,arh)；6.88(q,j=2.4hz,1h,arh).13cnmr(151mhz,cdcl3)δ159.66；154.11；137.26；131.51；129.96；128.99；128.88；127.82；127.10；122.76；112.68；122.52；112.03；100.58；77.57；58.48；55.93；39.83；25.50；ir(kbr)cm-13408.0(nh),3195.8(nh)，3057.0(nh)，709.7(ccl),1633.6(c=o)。hrms-esi:374.1267([m+h]+，calcdforc19h21n3o3cl:374.1271)实施例101-(3-氯苄氧基)-3-（2-(5-甲氧基-1h-吲哚-3-基)乙基脲（ⅰ-8）合成方法同ⅰ-1，得白色固体24.94g,收率66.77%,mp.105～107℃。1hnmr(600mhz,cdcl3)δ3.87(s,3h,ch3)；5.74(s,1h,nh)；7.97(s,1h,nh)；2.93(t,j=6.6hz,2h,ch2)；3.57(q,j=6.6hz,2h,ch2)；4.58(s,2h,ch2)；7.30(m,2h,arh);7.21(m,2h,arh);7.05(m,2h,arh);7.05(d,j=2.4hz,1h,arh)；6.99(s,1h,arh)；6.88(q,j=2.4hz,2h,arh)。13cnmr(151mhz,dmso)δ160.10；153.51；139.68；133.41；131.95；130.51；128.76；128.29；128.14；127.58；123.69；112.44；112.11；111.51；100.92；76.73；55.91；40.52；26.25；ir(kbr)cm-13409.9(nh),3305.8(nh)，3203.5(nh)，3055.0(arh)，707.0(ccl),1633.6(c=o)。hrms-esi:374.1263([m+h]+，calcdforc19h21n3o3cl:374.1271)。实施例111-(4-氯苄氧基)-3-（2-(5-甲氧基-1h-吲哚-3-基)乙基脲（ⅰ-9）合成方法同ⅰ-1，得白色固体22.34g,收率59.81%,mp.135～138℃。1hnmr(600mhz,cdcl3)δ3.87(s,3h,ch3)；5.30(s,1h,nh)；7.94(s,1h,nh)；2.93(t,j=6.6hz,2h,ch2)；3.55(q,j=6.6hz,2h,ch2)；4.57(s,2h,ch2)；7.30(s,1h,arh);7.26(s,2h,arh);6.99(s,1h,arh)；6.90(m,,1h,arh)；7.05(m,3h,arh)；13cnmr(151mhz,dmso)δ160.09；153.46；136.06；133.06；131.90；130.98；128.63；128.09；123.73；112.45；112.03；111.52；100.77；76.73；55.83；40.56；26.22；ir(kbr)cm-13427.3(nh),3408.8(nh)，3357.8(nh)，3078(arh)，709.8(ccl),1614.3(c=o)。hrms-esi:374.1282([m+h]+，calcdforc19h21n3o3cl:374.1271)。实施例121-(4-溴苄氧基)-3-（2-(5-甲氧基-1h-吲哚-3-基)乙基脲（ⅰ-10）合成方法同ⅰ-1，得白色固体25.05g,收率59.93%,mp.114～115℃。1hnmr(600mhz,cdcl3)δ3.87(s,3h,ch3)；5.68(s,1h,nh)；7.94(s,1h,nh)；2.93(t,j=6.6hz,2h,ch2)；3.55(q,j=6.6hz,2h,ch2)；4.55(s,2h,ch2)；7.39(m,2h,arh);7.26(s,1h,arh);7.05(d,j=2.4hz,1h,arh)；6.89(d,j=2.4hz,3h,arh)；6.99(d,j=8.5hz,1h,arh)。13cnmr(151mhz,cdcl3)δ154.18；131.80；130.72；122.76；112.77；112.59；111.96；100.59；77.66；55.92；39.88；25.48；ir(kbr)cm-13413.8(nh),3319.3(nh)，3192.0(nh)，544.7(cbr),1654.8(c=o)。hrms-esi:420.0711([m+h]+，calcdforc19h21n3o3br:420.0702)。以上对本发明做了详尽的描述，其目的在于让熟悉此领域技术的人员能够了解本发明的内容并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明的精神实质所做的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。当前第1页12