一种银耳多糖及其制备方法与流程

本发明属于银耳加工技术领域，尤其涉及一种银耳多糖及其制备方法。

背景技术：

银耳，又名白木耳，为担子菌纲银耳科银耳的干燥子实体，为食药两用菌，含有丰富的多糖和蛋白等物质。银耳多糖，其主链为1-3连接的甘露糖组成；在主链的2，4和6位具有分支点，连接着由葡萄糖、甘露糖、木糖、岩藻糖组成的侧链；其非还原末端主要为葡萄糖醛酸构成，包括酸性杂多糖、中性杂多糖、胞壁多糖、胞外多糖和酸性低聚糖等多种组分，具有保湿性能、增稠稳定性能和抗氧化性能，富含天然特性胶质-果胶；果胶能够促进粪便中脂肪、中性类固醇及胆汁的排泄，而增加中性类固醇的排泄有利于降低与性激素有关癌症的患病率；果胶还能促进胃肠道中的铅、汞、锰及铍的排放，是高档的天然食品添加济和保健品，在食品上可作为胶凝剂、增稠剂、稳定剂、悬浮剂、乳化剂、增香增效剂；在医药保健品上可显著降低血糖，血脂，减少胆固醇，疏通血管，对糖尿病、高血压、便秘，解除铅中毒都存有明显作用，还可用于化妆品，对保护皮肤，防止紫外线辐射，冶疗创口，美容养颜都存在一定的作用，长期使用有很好的润肤功效，是一种优良的化妆品添加剂，在日化领域受到广泛的重视，合理地利用银耳资源和研究银耳多糖的提取纯化工艺具有重要意义，

银耳多糖是一种结构复杂的大分子多糖，所以银耳多糖的提取及纯化就是现在面临的一个难题，提取不当或纯化不当，银耳多糖很容易失去活性。现有的银耳多糖的制备方法多采用热水浸取法、溶剂提取法、酸碱或微波提取，从银耳子实体或孢子中提取银耳多糖，这些方法是通过破坏银耳细胞而使胞内多糖溶出，得到的粗多糖中含有大量的蛋白质，为提高多糖纯度，还需要再采用sevag法除去多糖中的蛋白质，这些提取方法存在提取效率低、溶剂残留，设备要求高、能耗高、成本高、多糖纯度低、破坏多糖结构、易变性失活、多糖收率低，不利于工业化生产等问题，因此，现在迫切地需要提供一种新的技术方案来解决上述问题。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种银耳多糖及其制备方法，本发明提供的方法简单易于操作，获得的银耳多糖纯度较高，且收率较高。

本发明提供了一种银耳多糖的制备方法，包括以下步骤：

a)将银耳预处理后与纤维素酶混合进行酶解，然后热水浸提；

b)将得到的浸提液过滤之后纯化；

c)将纯化后的产物进行浓缩、醇沉、脱色后真空干燥、粉碎，得到银耳多糖。

本发明采用酶处理结合热水煮提的方法提取银耳多糖，不仅可以节约成本、减少污染，而且可以去除银耳细胞壁，便于深层次提取；后续再通过过滤、葡聚糖凝胶柱纯化，获得的银耳多糖纯度可达93％以上，总糖含量在95％以上，其中醛酸含量在20％～35％之间，蛋白含量在2％以下，果胶含量2％～10％。本发明提供的方法在中性条件下进行提取，便于银耳膳食纤维、银耳蛋白等的回收再利用，可将提取过的残渣进行降解或高温处理，进行不同分子量规格的提取；也可将提取过的残渣直接做为动物饲料或植物肥料使用，从而有效地利用资源和最大限度的减少环境污染；此外，本发明提供的方法提取过程中没有使用酸碱和其他有机化学试剂，省去了大量的溶剂回收工序，具有节能、环保的优点。本发明提供的提取方法简单、易于操作，不需要特殊设备，便于工业化生产，而且，本发明提供的方法提取率高、耗时短，获得的银耳多糖纯度高。

本发明首先对银耳进行预处理，然后对银耳进行酶解和热水浸提。其中，所述预处理具体为：

将银耳用水浸泡1～3次，每次1～2小时清洗干净，然后粉碎至1～3公分。

预处理的目的是将银耳子实体进行清洗和粉碎，便于后续操作。预处理完毕后，将获得的银耳粉与纤维素酶和水混合进行酶解，所述酶解的温度为45℃～55℃，时间为40～60min；所述纤维素酶的加入量为银耳粉的0.5～1wt％；所述水的用量为银耳粉用量的30～70倍。

酶解完毕后，升温进行热水浸提，所述浸提在搅拌条件下浸提；所述浸提的温度为80～100℃，时间为1～4h。

浸提完毕后，将得到的浸提液过滤之后纯化，其中，所述过滤具体包括：

将得到的浸提液经100目～400目滤布过滤后经过0.1～1μm的过滤器过滤。

具体而言，所述过滤具体包括：

将得到的浸提液依次经100目、200目、400目的滤布过滤后经过0.1～1μm的过滤器过滤。

过滤完毕后，将得到的浸提物经过葡聚糖凝胶柱纯化，采用去离子水和氯化钠溶液进行混合梯度洗脱。其中，所述葡聚糖凝胶柱的填料选自sephadexg-200、sephadexs-200、sephacryls-400或sephacryls-500。上柱完成后，用去离子水与3mol/l的氯化钠溶液混合梯度洗脱，最后用去离子水洗脱，洗脱至流出液检测不到多糖，停止洗脱，收集洗脱液，洗脱条件为：柱大小为2～5cm×20～90cm，流速为30～90ml/小时；洗脱程序为：

经过酶解、热水浸提、过滤和纯化后，保留了银耳中的多糖、蛋白和果胶等营养物质，再对其进行浓缩、醇沉、脱色后干燥、粉碎，即可得到纯度较高的银耳多糖。

具体而言，将纯化后的滤液使用单效浓缩器浓缩至比重为1：3～1：7，然后加入乙醇或甲醇进行醇沉，将得到的沉淀用乙醇脱色后，40～80℃热风干燥或真空干燥，粉碎后得到银耳多糖。

参见图1，图1为本发明实施例提供的银耳多糖的一个典型处理工艺流程图，首先将银耳浸泡、粉碎后，加0.5wt％～1wt5的纤维素酶，45℃～55℃酶解40min～60min；再加入30～70倍80～100℃热水浸提1～4h，然后经过100目～400目滤布粗滤，0.22μm滤芯精滤，再经过葡聚糖凝胶柱梯度洗脱纯化，单效浓缩器浓缩、甲醇或乙醇沉淀、乙醇脱色、真空干燥、粉碎，得到银耳多糖。其中，银耳浸泡次数为1～3次，粉碎后提及为3～5公分；梯度洗脱采用去离子水与3mol/l的氯化钠溶液不同比例洗脱，最后用水将银耳多糖洗脱下来；单效浓缩器浓缩提及为原来体积的三分之一至七分之一。

本发明还提供了一种上述技术方案所述的制备方法制备得到的银耳多糖。所述银耳多糖的纯度为93％以上，总糖含量为95％以上，优选95％～99％，醛酸含量为20％～35％，蛋白含量为2％以下，优选1％～2％，果胶含量为2％～10％。

本发明采用酶处理结合热水煮提的方法提取银耳多糖，不仅可以节约成本、减少污染，而且可以去除银耳细胞壁，便于深层次提取。实验结果表明，本发明提供的方法获得的银耳多糖纯度可达93％以上，总糖含量在95％以上，其中醛酸含量在20％～35％之间，蛋白含量在2％以下，果胶含量2％～10％。另外，本发明提供的方法获得的银耳多糖的提取率在15％以上(以干银耳计)。

附图说明

图1为本发明实施例提供的银耳多糖的一个典型处理工艺流程图；

图2为本发明实施例6提供的银耳多糖的一个典型处理工艺流程图。

具体实施方式

实施例1

将干燥的银耳子实体用水浸泡1次，清洗干净，打碎至1～3公分大小；将粉碎的原料放入提取罐中，加30倍于干料的水，加入0.5wt％的纤维素酶，40℃水温下搅拌酶解60min，将温度升至80℃，搅拌浸提1小时，依次经100目、200目、400目的滤布过滤，滤液最终经0.1μm的过滤器过滤；将滤液经sephadexg-200纯化，用去离子水与3mol/l的氯化钠溶液混合梯度洗脱，洗脱至流出液检测不到多糖，停止洗脱，收集洗脱液，洗脱条件为：柱大小为2.6cm×30cm，流速为90ml/小时，洗脱程序如下：

将滤液使用单效浓缩器浓缩至1:3；均匀搅拌下，将浓缩液和乙醇充分混匀，使混合液体的乙醇终浓度为50％，收集沉淀，用纯乙醇脱水脱色，收集沉淀；40℃真空干燥，粉碎，得到银耳多糖。

银耳多糖收率在15.1％(以干银耳重量计)，数均分子量115.24万；

银耳多糖纯度93.2％，其中，总糖含量95.6％，醛酸含量22.3％，蛋白含量1.63％，果胶2.6％。

实施例2

将干燥的银耳子实体用水浸泡2次，清洗干净，打碎至1～3公分大小；将粉碎的原料放入提取罐中，加50倍于干料的水，加入0.7％的纤维素酶，50℃水温下搅拌酶解50min，将温度升至100℃，搅拌浸提2小时，依次经100目、200目、400目的滤布过滤，滤液最终经0.5μm的过滤器过滤；将滤液经sephadexs-200纯化，用去离子水与3mol/l的氯化钠溶液混合梯度洗脱，洗脱至流出液检测不到多糖，停止洗脱，收集洗脱液，洗脱条件为：柱大小为3cm×50cm，流速为70ml/小时，洗脱程序如下：

将滤液使用单效浓缩器浓缩至1:5；均匀搅拌下，将浓缩液和甲醇充分混匀，使混合液体的甲醇终浓度为80％，收集沉淀，用95％乙醇脱水脱色，收集沉淀；80℃热风干燥，粉碎，得到银耳多糖。

银耳多糖收率在24.6％(以干银耳重量计)，数均分子量124.07万；

银耳多糖纯度97.1％，其中，总糖含量96.2％，醛酸含量25.8％，蛋白含量1.20％，果胶3.1％。

实施例3

将干燥的银耳子实体用水浸泡2次，清洗干净，打碎至1～3公分大小；将粉碎的原料放入提取罐中，加70倍于干料的水，加入1％的纤维素酶，60℃水温下搅拌酶解60min，将温度升至100℃，搅拌浸提4小时，依次经100目、200目、400目的滤布过滤，滤液最终经1μm的过滤器过滤；将滤液经sephacryls-400纯化，用去离子水与3mol/l的氯化钠溶液混合梯度洗脱，洗脱至流出液检测不到多糖，停止洗脱，收集洗脱液，洗脱条件为：柱大小为5cm×30cm，流速为50ml/小时，洗脱程序如下：

将滤液使用单效浓缩器浓缩至1:7；均匀搅拌下，将浓缩液和乙醇充分混匀，使混合液体的乙醇终浓度为70％，收集沉淀，用纯乙醇脱水脱色，收集沉淀；60℃真空干燥，粉碎，得到银耳多糖。

银耳多糖收率在20.6％(以干银耳重量计)，数均分子量120.43万；

银耳多糖纯度93.6％，其中，总糖含量96.4％，醛酸含量26.9％，蛋白含量1.89％，果胶2.9％。

实施例4

将干燥的银耳子实体用水浸泡3次，清洗干净，打碎至1～3公分大小；将粉碎的原料放入提取罐中，加60倍于干料的水，加入0.7％的纤维素酶，50℃水温下搅拌酶解40min，将温度升至90℃，搅拌浸提3小时，依次经100目、200目、400目的滤布过滤，滤液最终经0.7μm的过滤器过滤；将滤液经sephacryls-500纯化，用去离子水与3mol/l的氯化钠溶液混合梯度洗脱，洗脱至流出液检测不到多糖，停止洗脱，收集洗脱液，洗脱条件为：柱大小为3.8cm×60cm，流速为40ml/小时，洗脱程序如下：

将滤液使用单效浓缩器浓缩至1:6；均匀搅拌下，将浓缩液和乙醚充分混匀，使混合液体的乙醚终浓度为80％，收集沉淀，用95％乙醇脱水脱色，收集沉淀；70℃热风干燥，粉碎，得到银耳多糖。

银耳多糖收率在23.5％(以干银耳重量计)，数均分子量122.71万；

银耳多糖纯度96.2％，其中，总糖含量97.5％，醛酸含量29.1％，蛋白含量2.01％，果胶4.8％。

实施例5

将干燥的银耳子实体用水浸泡1次，清洗干净，打碎至1～3公分大小；将粉碎的原料放入提取罐中，加50倍于干料的水，加入0.5％的纤维素酶，50℃水温下搅拌酶解60min，将温度升至80℃，搅拌浸提4小时，依次经100目、200目、400目的滤布过滤，滤液最终经0.3μm的过滤器过滤；将滤液经sephacryls-500纯化，用去离子水与3mol/l的氯化钠溶液混合梯度洗脱，洗脱至流出液检测不到多糖，停止洗脱，收集洗脱液，洗脱条件为：柱大小为2.6cm×70cm，流速为90ml/小时，洗脱程序如下：

将滤液使用单效浓缩器浓缩至1:3；均匀搅拌下，将浓缩液和乙醇充分混匀，使混合液体的乙醇终浓度为80％，收集沉淀，用纯乙醇脱水脱色，收集沉淀；80℃热风干燥，粉碎，得到银耳多糖。

银耳多糖收率在20.8％(以干银耳重量计)，数均分子量120.1万；

银耳多糖纯度93.8％，其中，总糖含量96.8％，醛酸含量21.7％，蛋白含量1.43％，果胶4.3％。

实施例6

参见图2，图2为本发明实施例6提供的银耳多糖的一个典型处理工艺流程图，首先将银耳浸泡、粉碎后，加0.8wt％的纤维素酶，45℃酶解50min；再加入60倍90℃热水浸提3h，然后经过200目滤布和400目滤布粗滤，0.22μmmpe折叠滤芯精滤，再经过sephacryls-400葡聚糖凝胶柱梯度洗脱纯化，20万分子量超滤浓缩、3倍体积乙醇沉淀、1倍体积乙醇脱色、40℃真空干燥、粉碎，得到银耳多糖。

其中，银耳浸泡次数为三次；浸提为将银耳加入到水温到达90℃的热水中浸提；梯度洗脱是采用去离子水与3mol/l的氯化钠溶液不同比例洗脱。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。