本发明涉及中药提取加工
技术领域：
，具体涉及一种提取鸡骨草多糖的方法。
背景技术：
：鸡骨草为豆科植物相思子abruscantoniensis的干燥全株，中药鸡骨草为豆科相思子属植物，以全株入药，具有利湿退黄，清热解毒，疏肝止痛之功效，是临床常用中药，用于黄疸，胁肋不好，胃脘胀痛，急慢性肝炎、乳腺炎，亦是我国出品中草药品种之一。全草含相思子碱(abrine，即n‐甲基色氨酸)、胆碱(choline)、腺苷类、甾醇类、三萜皂苷类、黄酮类、氨基酸、糖类。多糖是一类天然高分子化合物，存在于一切细胞膜结构中，参与细胞的各种生理活动，是维持生命活动正常运转的基本物质之一。多糖也是中药活性成分之一，具有许多药理活性和药效功能。目前，国内外为对鸡骨草这一中药资源的研究，集中于成分鉴定、生物碱类和黄酮类的含量测定、药理活性等方面，然而对于鸡骨草中多糖的研究相对较少。专利公开号cn103254325a公开了一种鸡骨草多糖的制备方法:称取干燥鸡骨草切段后粉碎，加入去离子水，使料液比在1:20-1:40，回流提取2-3次，提取温度60-95℃，提取1.5-3h/次，合并提取液过滤，除去不溶性杂质，然后中性蛋白酶处理滤液、透析带透析后，减压蒸馏浓缩，浓缩液边搅拌边加入无水乙醇，使含醇量达到75％-80％，静置，过滤，收集沉淀，干燥后得到鸡骨草多糖。但该方法鸡骨草多糖类组分提取率仅为6-10％。该方法多糖提取率较低，未充分利用鸡骨草中的多糖，造成不必要的浪费。技术实现要素：为解决上述技术问题，本发明提供了一种提取鸡骨草多糖的方法。本发明是通过以下技术方案予以实现的:一种提取鸡骨草多糖的方法，该方法包括以下步骤:s1:鸡骨草烘干、粉碎，在温度≤-5℃条件下进行液氮打浆得鸡骨草浆液，将鸡骨草浆液与1-烷基-3-甲基咪唑氯盐、1-乙基-3-甲基咪唑醋酸盐以重量比为1:10-23:16-27的比例混合均匀，用碱溶液调节ph7.0-8.5,在微波功率为400-600w，温度为65-87℃条件下提取25-50min，制得鸡骨草提取液，然后经活性炭脱色除杂，取滤液；s2:步骤s1中滤液调节ph至中性，灭菌，加入中性蛋白酶搅拌均匀并反应15-30min，再加入乙醇溶液，过滤取沉淀；s3:步骤s2中沉淀用3-5倍重量的碱溶液溶解，然后再加入乙醇溶液沉淀，重复2-3次后取沉淀干燥得鸡骨草多糖。所述步骤s1中烘干温度为40-60℃，烘干时间为10-15h，然后粉碎至粒径为60-180目的鸡骨草粉。所述碱溶液为氢氧化钠或氢氧化钾溶液的一种或两种。所述碱溶液浓度为0.08-2.5mol/l。所述步骤s2中活性炭脱色除杂时间为40-80min。所述步骤s2中加入的中性蛋白酶量为滤液重量的0.02-1.7％。所述乙醇溶液浓度65-80％。所述步骤s2中沉淀过滤为离心过滤，转速为1000-2500r/min。所述步骤s3中干燥为低温真空干燥，温度为38-58℃。所述步骤s3中鸡骨草多糖含水率为0.3-1.5％。本发明的有益效果在于:本方法将鸡骨草粉碎后与离子液体混匀，然后微波提取，再经酶解、醇沉后低温真空干燥制得鸡骨草多糖，相对常规的水提、醇提法，具有提取率、纯度高的特点；鸡骨草中的多糖主要为酸性多糖，因此在碱几天条件理处理，可以提高鸡骨草的多糖提取率；在提取中加入中性蛋白酶可以除去提取液中的蛋白质，确保多糖的纯度；使用本方法提取的鸡骨草多糖提取率达14.36-16.58％。具体实施方式以下结合实施例对本发明的技术方案作进一步描述，但要求保护的范围并不局限于所述。实施例一一种提取鸡骨草多糖的方法，该方法包括以下步骤:s1:鸡骨草烘干、粉碎，在温度-5℃条件下进行液氮打浆得鸡骨草浆液，将鸡骨草浆液与1-烷基-3-甲基咪唑氯盐、1-乙基-3-甲基咪唑醋酸盐以重量比为1:10:27的比例混合均匀，用碱溶液调节ph7.0,在微波功率为400w，温度为65℃条件下提取25min，制得鸡骨草提取液，然后经活性炭脱色除杂，取滤液；s2:步骤s1中滤液调节ph至中性，灭菌，加入中性蛋白酶搅拌均匀并反应15min，再加入乙醇溶液，过滤取沉淀；s3:步骤s2中沉淀用3倍重量的碱溶液溶解，然后再加入乙醇溶液沉淀，重复2次后取沉淀干燥得鸡骨草多糖。步骤s1中烘干温度为40℃，烘干时间为10h，然后粉碎至粒径为60目的鸡骨草粉。使用的碱溶液为氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸氢钾等的一种或多种，所用溶液浓度为0.08mol/l，加入后搅拌10min。步骤s2中活性炭脱色除杂时间为40min。步骤s2中调节ph使用稀盐酸或醋酸溶液。步骤s2中加入的中性蛋白酶量为滤液重量的0.02％，中性蛋白酶为枯草孢芽杆菌。使用的乙醇溶液浓度65％。步骤s2中沉淀过滤为离心过滤，转速为1000r/min。步骤s3中干燥为低温真空干燥，温度为38℃。所述步骤s3中鸡骨草多糖含水率为0.3％。实施例二一种提取鸡骨草多糖的方法，该方法包括以下步骤:s1:鸡骨草烘干、粉碎，在温度-7℃条件下进行液氮打浆得鸡骨草浆液，将鸡骨草浆液与1-烷基-3-甲基咪唑氯盐、1-乙基-3-甲基咪唑醋酸盐以重量比为1:14:19的比例混合均匀，用碱溶液调节ph7.3,在微波功率为450w，温度为71℃条件下提取32min，制得鸡骨草提取液，然后经活性炭脱色除杂，取滤液；s2:步骤s1中滤液调节ph至中性，灭菌，加入中性蛋白酶搅拌均匀并反应19min，再加入乙醇溶液，过滤取沉淀；s3:步骤s2中沉淀用4倍重量的碱溶液溶解，然后再加入乙醇溶液沉淀，重复3次后取沉淀干燥得鸡骨草多糖。步骤s1中烘干温度为60℃，烘干时间为10h，然后粉碎至粒径为90目的鸡骨草粉。使用的碱溶液为氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸氢钾等的一种或多种，所用溶液浓度为1.2mol/l，加入后搅拌12min。步骤s2中活性炭脱色除杂时间为58min。步骤s2中调节ph使用稀盐酸或醋酸溶液。步骤s2中加入的中性蛋白酶量为滤液重量的0.08％，中性蛋白酶为枯草孢芽杆菌。使用的乙醇溶液浓度70％。步骤s2中沉淀过滤为离心过滤，转速为2500r/min。步骤s3中干燥为低温真空干燥，温度为42℃。步骤s3中鸡骨草多糖含水率为0.6％。实施例三一种提取鸡骨草多糖的方法，该方法包括以下步骤:s1:鸡骨草烘干、粉碎，在温度-9℃条件下进行液氮打浆得鸡骨草浆液，将鸡骨草浆液与1-烷基-3-甲基咪唑氯盐、1-乙基-3-甲基咪唑醋酸盐以重量比为1:18:23的比例混合均匀，用碱溶液调节ph7.8,在微波功率为530w，温度为76℃条件下提取42min，制得鸡骨草提取液，然后经活性炭脱色除杂，取滤液；s2:步骤s1中滤液调节ph至中性，灭菌，加入中性蛋白酶搅拌均匀并反应26min，再加入乙醇溶液，过滤取沉淀；s3:步骤s2中沉淀用4倍重量的碱溶液溶解，然后再加入乙醇溶液沉淀，重复3次后取沉淀干燥得鸡骨草多糖。步骤s1中烘干温度为55℃，烘干时间为12h，然后粉碎至粒径为100目的鸡骨草粉。使用的碱溶液为氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸氢钾等的一种或多种，所用溶液浓度为1.5mol/l，加入后搅拌15min。步骤s2中活性炭脱色除杂时间为68min。步骤s2中调节ph使用稀盐酸或醋酸溶液。步骤s2中加入的中性蛋白酶量为滤液重量的0.05％，中性蛋白酶为米曲霉。使用的乙醇溶液浓度66％。步骤s2中沉淀过滤为离心过滤，转速为1500r/min。步骤s3中干燥为低温真空干燥，温度为46℃。所述步骤s3中鸡骨草多糖含水率为0.9％。实施例四一种提取鸡骨草多糖的方法，该方法包括以下步骤:s1:鸡骨草烘干、粉碎，在温度-10℃条件下进行液氮打浆得鸡骨草浆液，将鸡骨草浆液与1-烷基-3-甲基咪唑氯盐、1-乙基-3-甲基咪唑醋酸盐以重量比为1:23:25的比例混合均匀，用碱溶液调节ph8.2,在微波功率为560w，温度为83℃条件下提取47min，制得鸡骨草提取液，然后经活性炭脱色除杂，取滤液；s2:步骤s1中滤液调节ph至中性，灭菌，加入中性蛋白酶搅拌均匀并反应30min，再加入乙醇溶液，过滤取沉淀；s3:步骤s2中沉淀用5倍重量的碱溶液溶解，然后再加入乙醇溶液沉淀，重复2次后取沉淀干燥得鸡骨草多糖。步骤s1中烘干温度为55℃，烘干时间为13h，然后粉碎至粒径为150目的鸡骨草粉。使用的碱溶液为氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸氢钾等的一种或多种，所用溶液浓度为1.8mol/l，加入后搅拌16min。步骤s2中活性炭脱色除杂时间为72min。步骤s2中调节ph使用稀盐酸。步骤s2中加入的中性蛋白酶量为滤液重量的0.06％，中性蛋白酶为毛霉。使用的乙醇溶液浓度68％。步骤s2中沉淀过滤为离心过滤，转速为2000r/min。步骤s3中干燥为低温真空干燥，温度为53℃。步骤s3中鸡骨草多糖含水率为1.5％。实施例五一种提取鸡骨草多糖的方法，该方法包括以下步骤:s1:鸡骨草烘干、粉碎，在温度-15℃条件下进行液氮打浆得鸡骨草浆液，将鸡骨草浆液与1-烷基-3-甲基咪唑氯盐、1-乙基-3-甲基咪唑醋酸盐以重量比为1:10:27的比例混合均匀，用碱溶液调节ph8.5,在微波功率为600w，温度为87℃条件下提取50min，制得鸡骨草提取液，然后经活性炭脱色除杂，取滤液；s2:步骤s1中滤液调节ph至中性，灭菌，加入中性蛋白酶搅拌均匀并反应30min，再加入乙醇溶液，过滤取沉淀；s3:步骤s2中沉淀用5倍重量的碱溶液溶解，然后再加入乙醇溶液沉淀，重复2次后取沉淀干燥得鸡骨草多糖。步骤s1中烘干温度为60℃，烘干时间为15h，然后粉碎至粒径为180目的鸡骨草粉。使用的碱溶液为氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸氢钾等的一种或多种，所用溶液浓度为2.5mol/l，加入后搅拌20min。步骤s2中活性炭脱色除杂时间为80min。步骤s2中调节ph使用醋酸溶液。步骤s2中加入的中性蛋白酶量为滤液重量的0.08％，中性蛋白酶为毛霉。使用的乙醇溶液浓度70％。步骤s2中沉淀过滤为离心过滤，转速为2500r/min。步骤s3中干燥为低温真空干燥，温度为58℃。步骤s3中鸡骨草多糖含水率为0.3％。实验例一使用专利公开号cn103254325a实施例一的方法制备鸡骨草多糖:第一步将鸡骨草原料干燥后，用植物粉碎机粉碎得鸡骨草粉，过100目筛，加入去离子水，使料液质量比达到1:20，60℃回流提取3次，每次1.5h，合并提取液；第二步上一步中所得提取液经4500r/min高速离心除去不溶性杂质；第三步步骤二所得清液中加入0.5wt％的枯草芽孢杆菌中性蛋白酶(unikneutrals)反应18min，反应温度45℃，冷却后离心，上清液经透析带流水透析24h，收集截留液；透析带的孔径为3500da。第三步截留液经旋转蒸发仪减压浓缩至原体积的1/5(旋转蒸发仪的真空度控制在0.08～0.09mpa之间，温度控制在55±3℃)，浓缩液中边搅拌边加入无水乙醇，使乙醇质量含量达到75％，静置30min，4500r/min离心10min，收集沉淀。沉淀物经预冻3h，真空干燥12h后，即得片状鸡骨草多糖粗品。鸡骨草多糖提取率为6.32％。实验例二使用专利公开号cn103254325a实施例二的方法制备鸡骨草多糖:第一步将鸡骨草原料干燥后，用植物粉碎机粉碎得鸡骨草粉，过100目筛，加入去离子水，使料液质量比达到1:40，80℃回流提取2次，每次2h；第二步上一步中所得提取液经真空抽滤除去不溶性杂质；第三步步骤二所得清液中加入0.4wt％的枯草杆菌中性蛋白酶(sukaprone)反应22min，反应温度50℃，冷却后离心，上清液经透析带磁力搅拌(300r/min)透析36h，收集截留液；透析带的孔径为3000da。第三步截留液经旋转蒸发仪减压浓缩至原体积的1/4(旋转蒸发仪的真空度控制在0.08～0.09mpa之间，温度控制在55±3℃)，浓缩液中边搅拌边加入无水乙醇，使乙醇质量含量达到75％，静置30min，4500r/min离心10min，收集沉淀。沉淀物经预冻3h，真空干燥12h后，即得片状鸡骨草多糖产品。取鸡骨草1.4kg，平均分成7份，每份200g，分别按实施例一、实施例二、实施例三、实施例四、实施例五、实验例一、实验例二的方法提取多糖，提取结果如表1所示。表1鸡骨草多糖提取率情况编号鸡骨草多糖提取率％实施例一14.36实施例二16.58实施例三16.39实施例四15.18实施例五14.45实验例一6.32实验例二8.91从上表可知，使用本发明的方法来提取鸡骨草多糖其提取率为14.36-16.58％，而实验例的提取率为6.32-8.91％。因此，本方法提取鸡骨草中的多糖相较现有技术有较大的提升，效果显著，有较大的应用价值。当前第1页12