细胞富集芯片的制作方法

本实用新型涉及一种细胞富集芯片，主要适用于细胞的分选，属于生物技术领域。

背景技术：

循环稀有细胞包括三个主要亚型，分别是循环肿瘤细胞（Circulating Tumor Cells, CTCs），循环干细胞（Circulating Stem Cells, CSCs），及循环胎儿细胞（Circulating Fetal Cells,CFCs）。通过标准化、GMP级的生物试剂分离循环稀有细胞，这样可获得高纯度和高活性的CRCs，用于下游蛋白表征，基因分析和细胞分析。有效的单细胞分离和收集，为CRCs在诊断和制药工业开辟了新的应用范围，而有效的单细胞分离和收集就需要有一种免疫捕获和分选的载体，即细胞富集芯片。

技术实现要素：

本实用新型的目的在于提供一种结构设计合理、分选效果好的细胞富集芯片。

本实用新型解决上述问题所采用的技术方案是：该细胞富集芯片包括上盖、下盖、硅胶膜和玻片，其特征在于：所述的硅胶膜贴合在玻片上，所述的硅胶膜和玻片放置在上盖和下盖之间；所述硅胶膜贴合玻片的一面设置有甬道，甬道是硅胶膜上的凹陷结构；所述的甬道内有多个凸起，所述凸起的高度小于甬道的深度。所述细胞富集芯片的玻片和硅胶膜贴合的一面上包被有能和循环稀有细胞特异性结合的物质，用于捕获循环稀有细胞，主要是循环肿瘤细胞；凸起使样本流过甬道时增加了阻力，但不影响样本溶液向前流动，可使能与循环稀有细胞特异性结合的物质和循环稀有细胞充分接触，提高捕获效率。

本实用新型优选所述的甬道至少有两条。所述的甬道优选为一条分为两条、由两条分为四条、由四条分为八条，共八条通路，样本溶液在甬道中分流，充分与玻片上的与循环稀有细胞特异性结合的物质接触，提高了循环稀有细胞捕获效率。

本实用新型所述凸起的高度依液体流动方向逐渐增大。有层次的结构可达到梯度过滤的效果，减少了体积较大的目标细胞的流失。细胞团或体积大的细胞会被分步挡住，而循环稀有细胞的体积大于正常的血液细胞，并且会形成细胞团，这样的结构利于正常血液细胞通过，同时将循环稀有细胞拦截留在细胞富集芯片中，和与循环稀有细胞特异性结合的物质协同作用，提高了循环稀有细胞捕获效率。

本实用新型所述的多个凸起均呈人字形，且方向一致、间距相等，呈规则排列。规则排列的人字形凸起共同构成鲱鱼骨型结构，利于样本溶液翻滚流动，充分与玻片上的循环稀有细胞捕获物质接触。

本实用新型所述的多个凸起中，每单个凸起为完整的条状结构。

本实用新型所述的多个凸起中，每单个凸起由多个凸起的点组成条状结构。

实际情况中，凸起可以是完整的条状结构或者由多个点组成的条状结构；所述的条状结构可呈上述的人字形，也可呈波浪形、圆弧形等。

本实用新型具有以下优点和效果：具有鲱鱼骨型结构的硅胶膜和循环稀有细胞特异性结合的物质联合使用，提高了循环稀有细胞的捕获效率，具有很好的分离效果；并且在此基础上，有层次的结构还能进一步起到过滤、按细胞体积分选循环稀有细胞的效果。本实用新型用于人外周血中稀有细胞的分离与鉴定，可得到高纯度和具活性的稀有细胞，应用于下游蛋白质表征、基因分析和细胞检测，联合检测结果具有疾病的诊断、预防、监护等临床辅助诊断作用。

附图说明

图1是本实用新型的整体结构示意图。

图2是本实用新型的拆分结构示意图。

图3是本实用新型硅胶膜贴合玻片一面的结构示意图。

图4是图3其中一条甬道的A-A截面局部示意图。

图中：细胞富集芯片1，硅胶膜11，玻片12，上盖13，下盖14，甬道111，凸起112。

具体实施方式

下面结合附图并通过实施例对本实用新型作进一步说明。

实施例一。

参见图1-4，本实施例包括：细胞富集芯片1，硅胶膜11，玻片12，上盖13，下盖14，甬道111和凸起112。

参见图1-4，在本实施例中，细胞富集芯片1为四层结构，从上至下为上盖13、硅胶膜11、玻片12和下盖14，其中，硅胶膜11贴合在玻片12的上面，上盖13盖在下盖14上，形成一个空腔，硅胶膜11和玻片12放置在这个空腔内；硅胶膜11贴合玻片12的一面即硅胶膜11的下表面上有甬道111，甬道111为凹陷的细长条状结构，甬道111内有凸起112，凸起112的高度小于甬道111的深度；硅胶膜11为PDMS（聚二甲基硅氧烷）材料，甬道111和凸起112采用蚀刻工艺加工而成；玻片12贴合硅胶膜11的一面上包被有能和循环稀有细胞特异性结合的物质，在样本流经甬道111时，样本中的循环稀有细胞会被捕获留在细胞富集芯片1中。

在本实施例中，甬道111由一分二、由二分四、由四分八，共形成八条通路，提高效率；八条通路中均有凸起112，凸起112为完整的条状结构，且所有凸起112均呈人字形结构、方向一致、相邻间距相等，共同构成鲱鱼骨型结构；同时，依液体流动方向，从液体入口到出口，凸起112的高度逐渐增加，形成一种有层次的鲱鱼骨型结构，可达到梯度过滤的效果，即细胞团或体积大的细胞会被分步挡住，而循环稀有细胞的体积大于正常的血液细胞，并且会形成细胞团，这样的结构利于正常血液细胞通过，同时将循环稀有细胞拦截留在细胞富集芯片1中。

本实用新型的工作过程如下：

样本注入，样本缓慢流过细胞富集芯片1，由于有层次的鲱鱼骨型结构和能与循环稀有细胞特异性结合的物质两者联合作用，循环稀有细胞被捕获和富集在细胞富集芯片1中；注入清洗液，再注入细胞染色前处理剂，细胞染色预处理完成；注入清洗液再注入染色剂，孵育，细胞染色完成；可直接采用倒置荧光显微镜观察。另外，循环稀有细胞被捕获完成后，也可注入清洗液清洗后拆开细胞富集芯片1，即拆分上盖13和下盖14，分离硅胶膜11和玻片12，循环稀有细胞被捕获在玻片12上和甬道111中，可进行后续染色观察或挑取活细胞进行进一步培养和分析。

本说明书中没有详细描述的部分均采用本领域技术人员所公知的结构和原理，均为现有技术。

通过上述描述，本领域的技术人员已能实施。

此外，需要说明的是，本说明书中所描述的具体实施例，只要其部件未明确说明具体规格的，则该部件可以为与其功能相适应的任何规格；同时，部件所取的名称也可以不同。凡依本实用新型构思所述的构造、特征及原理所做的等效或简单变化，均包括于本实用新型专利的保护范围内。