新的抗菌化合物的制作方法

本发明涉及新的抗菌化合物(antibacterialcompounds)、含有它们的药物组合物和它们作为抗微生物剂的用途。

背景技术：

dna拓扑异构酶是在复制或转录过程中参与dna-超螺旋的修饰的酶。这些酶结合单链或双链dna，并且它们切割所述dna的磷酸酯主链，使得所述dna链解开或展开。在复制或转录过程结束时，所述酶本身重新密封dna主链。

dna拓扑异构酶分为i型(当它们切割dna双螺旋的单链时)和ii型(当它们切割dna双螺旋的两条链时)。

细菌ii型拓扑异构酶包含dna促旋酶和拓扑异构酶iv(topoiv)，它们是并行地存在于几乎所有的原核细胞中的异四聚体酶。两种酶都是dna复制所必需的，且因此，是细菌细胞生长和分裂所必需的。

细菌ii型拓扑异构酶是经证实的抗细菌靶标，尤其是氟喹诺酮类的化合物的抗细菌靶标。

氟喹诺酮类是在细菌感染(特别是医院获得性感染)和其中怀疑对其它抗细菌药物类别具有抗性的感染的治疗中起重要作用的广谱抗细菌药物。氟喹诺酮类通过抑制革兰氏阴性细菌中的dna促旋酶和革兰氏阳性细菌中的拓扑异构酶iv而起作用。

但是，近年来由于改变药物靶标dna促旋酶和拓扑异构酶iv的活性位点或药物蓄积的突变而出现了对氟喹诺酮类的抗性。另外，对喹诺酮类的抗性可以由产生qnr蛋白的质粒介导，所述qnr蛋白保护喹诺酮靶标免于抑制(g.a.jacoby,cid,2005:41,增刊2,sd120-s126)。

根据世界卫生组织，抗微生物剂抗性(amr)是微生物对它最初敏感的抗微生物药物的抗性。有抗性的细菌能够抵抗抗生素和抗细菌药物的攻击，以致于标准治疗变得无效且感染持续，从而增加向其它对象传播的风险。

mitton-frym.j.等人(bioorg.med.chem.lett.,23,2010,2955-2961)开发了新的喹诺酮衍生物作为细菌dna促旋酶和拓扑异构酶iv的抑制剂。鉴于逐步靶标突变在氟喹诺酮类抗性的临床史中的重要性，所述作者强烈地意识到，提供topoiv以及dna促旋酶的抑制是关键性重要的。根据所述作者，这样的双靶向活性会减慢抗性在临床中出现的速率，因为突变dna促旋酶以避免抑制的生物仍然对通过topoiv抑制实现的杀死是敏感的。

surivetj.p.等人(j.med.chem.2013,56,7396-7415)报道了包含四氢吡喃核心的新的细菌双重dna促旋酶和topoiv抑制剂的设计，并证实，需要dna促旋酶和topoiv的双重抑制以使抗性发展速率最小化。

zayanemarwa等人(journalofenzymeinhibitionandmedicinalchemistry2016,31(6):1566-1575)报告了具有抗微生物、抗凝血和抗胆碱酯酶活性的4-甲基伞形酮衍生物的设计和合成。

wo2006/105289涉及杂环化合物，更具体地是吡唑化合物，测试了这些化合物的dna促旋酶和拓扑异构酶iv的抑制。

wo02/072572、wo2006/021448、wo2008/139288、wo2009/141398、wo2010/081874、wo2010/084152、wo2013/068948、wo2013/080156、wo2016/027249、wo2016/096631和wo2016/096686公开了具有抗微生物活性的杂环化合物。

wo96/10568和wo2012/003418公开了具有其它治疗活性的杂环化合物。

技术实现要素：

申请人认识到，强烈地和连续地需要克服抗性细菌问题的抗细菌药物。

申请人面临开发新的抗菌化合物的问题，所述新抗菌化合物使得可以克服抗细菌剂抗性的问题。

更具体地，申请人面临开发新的抗菌化合物的问题，所述新的抗菌化合物能够同时抑制细菌ii型拓扑异构酶，即dna促旋酶和拓扑异构酶iv。

并且，申请人面临开发具有广谱活性(即对革兰氏阳性的和/或革兰氏阴性的细菌是有用的)的新的抗菌化合物的问题。

因而，在第一个实施方案中，本发明涉及式(1)的化合物和所述式(1)化合物与药学上可接受的有机或无机酸或碱的加成盐、对映异构体、n-氧化物和季铵盐：

a-l1-y-l2-r-b(1)

其中

a是具有下式(i)、(ii)和(iii)之一的环状基团：

其中

g1是ch或n；

g2是cr1或n；

g3是ch或n(当虚线(dashedline)代表双键时)，或ch2、nh或o(当虚线代表单键时)；

g4是ch或n(当虚线代表双键时)，或ch2、nh或o(当虚线代表单键时)；

c1代表形成脂族或芳族6元环所必需的原子，所述6元环任选地包含一个或多个选自氮原子和氧原子的杂原子，所述环任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基选自卤素原子、(c1-3)烷基、氰基基团、氧代基团(＝o)和(c1-3)烷氧基；

r1是氢原子、卤素原子、氰基或(c1-3)烷氧基；

l1是σ键，或任选地被羟基基团取代的(c1-3)亚烷基(alkylenyl)基团；

y是选自哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、1-3环丁基、1-3环戊基、1-2环丙基、氮杂环丁基、氮杂双环-辛基、吗啉基和环己基环的环，所述环任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基选自羟基基团、(c1-3)亚烷基-oh基团、(c1-3)亚烷基-o-(c1-3)烷基、(c1-3)亚烷基-conr′r″基团和conr′r″基团，其中r′和r″是氢原子或(c1-3)烷基；

l2是σ键、-(c1-3)亚烷基基团、nr″′基团、nr″′-(c1-3)亚烷基基团、(c1-3)亚烷基-nr″′基团、nr″′-(c1-3)亚烷基-nr″′基团或(c1-3)亚烷基-nr″′-(c1-3)亚烷基基团，所述基团任选地被羟基基团取代，其中r″′是氢、(c1-3)烷基、(c1-3)亚烷基-oh、(c1-3)亚烷基-o-(c1-3)烷基或(c1-3)亚烷基-conr′r″，其中r′和r″是氢原子或(c1-3)烷基；

r是σ键或具有5个成员的杂环基团、脂族基团或芳族基团，所述成员含有一个或多个氮原子，所述基团任选地被ch2oh、ch2cn、cn或conr′r″取代，其中r′和r″是氢原子或(c1-3)烷基；且

b是具有下式(iv)至(ix)之一的环状基团：

其中

g5是ch或n；

g6是ch或n；

g7是ch或n；

g8是o或nr6；

r2是氢原子或卤素原子；

r3是氢原子或氰基基团；

r4和r5是氢原子，或者一起形成含有一个氧原子的6元脂族环；

r6是氢原子或(c1-3)烷基；

c2代表形成包含氧原子或氮原子的6元脂族或芳族杂环所必需的原子；

c3代表形成包含一个氧原子和任选的一个氮原子的6元脂族杂环所必需的原子，所述杂环任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基选自(c1-3)卤代烷基基团、酰氨基基团(-conh2)和氧代基团(＝o)；且

c4代表形成10元稠合双环所必需的原子，所述双环包含至少一个氮原子和至少一个选自氧原子和硫原子的其它杂原子，所述双环任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基选自卤素原子、(c1-3)烷基、氰基基团和氧代基团(＝o)；

前提条件是，当y是哌啶基环或哌嗪基环时，如果a由式(i)表示且b由式(v)或(vi)表示，那么g2仅是n。

在第二个实施方案中，本发明涉及包含至少一种式(1)的化合物的药物组合物。

在第三个实施方案中，本发明涉及用于药物中的式(1)的化合物。

在第四个实施方案中，本发明涉及用于治疗细菌感染的式(1)的化合物。

在第五个实施方案中，本发明涉及一种用于治疗细菌感染的方法，所述方法包括将式(1)化合物施用给有此需要的患者。

根据本发明的一个优选方面，g1是n。

根据本发明的一个优选方面，g2是cr1。

根据本发明的一个优选方面，g3是ch或n(当虚线代表双键时)，或o(当虚线代表单键时)。

根据本发明的一个优选方面，g4是n(当虚线代表双键时)，或o(当虚线代表单键时)。

优选地，r1是卤素原子、氰基基团或具有1-2个碳原子的烷氧基基团。

有利地，r1选自氟原子、氯原子、氰基基团和甲氧基。

优选地，r2是氢原子、氟原子、氯原子和溴原子。

有利地，r2选自氢原子和氟原子。

根据一个优选的实施方案，r3是氢原子或氰基基团，条件是，当r3是氰基基团时，a不同于式(iii)。

优选地，r4和r5是氢原子。

优选地，c1任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基选自氟或氯原子、甲基或乙基、甲氧基或丙氧基和氧代基团(＝o)。

有利地，l1是σ键或亚甲基(-ch2-)。

优选地，l2是σ键、(c1-3)亚烷基基团、nr″′基团、-nr″′-(c1-3)亚烷基基团、(c1-3)亚烷基-nr″′-基团、-nr″′-(c1-3)亚烷基-nr″′-基团或(c1-3)亚烷基-nr″′-(c1-3)亚烷基基团，所述基团任选地被一个或多个羟基基团取代。

更优选地，l2是σ键、(c1-2)亚烷基基团、nr″′基团、-nr″′-(c1-2)亚烷基基团、(c1-2)亚烷基-nr″′-基团、-nr″′-(c1-2)亚烷基-nr″′-基团或(c1-2)亚烷基-nr″′-(c1-2)亚烷基基团，所述基团任选地被一个羟基基团取代。

优选地，r″′是氢、(c1-2)烷基、(c1-2)亚烷基-oh、(c1-2)亚烷基-o-(c1-2)烷基或(c1-2)亚烷基-conr′r″，其中r′和r″是氢原子或(c1-2)烷基。

优选地，r″′是氢、甲基、ch2-oh或ch2conr′r″，其中r′和r″是氢原子或甲基。

优选地，r是σ键或具有5个成员的芳族杂环，所述成员含有一个或多个氮原子，所述芳族杂环任选地被ch2cn或cn取代。

有利地，r是σ键、1h-咪唑-4-基或1h-吡咯-2-基，其任选地被ch2cn或cn取代。

优选地，c3任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基选自(c1-3)氟代烷基、酰氨基基团(-conh2)或氧代基团(＝o)。更优选地，所述(c1-3)氟代烷基是三氟甲基。

优选地，c4任选地被一个或多个取代基取代，所述取代基选自氟原子、甲基、氰基基团或氧代基团(＝o)。

根据本发明的一个优选方面，a是具有下式之一的环状基团：

根据本发明的一个优选方面，y是具有下式之一的环：

根据本发明的一个优选方面，b是具有下式之一的环状基团：

在本说明书中和在后面的权利要求书中，术语“(c1-6)烷基”是指包含1-6个碳原子的直链或支链烷基链，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、仲戊基、叔戊基、新戊基、3-戊基、己基、异己基。

在本说明书中和在后面的权利要求书中，术语“(c1-3)烷基”是指包含1-3个碳原子的直链或支链烷基链，例如甲基、乙基、丙基、异丙基。

在本说明书中和在后面的权利要求书中，术语“(c1-6)亚烷基”是指包含1-6个碳原子的二价直链或支链烷基链，例如亚甲基(-ch2-)、亚乙基(-ch2ch2-)、亚丙基(-ch2ch2ch2-)或亚丁基(-ch2ch2ch2ch2-)。

在本说明书中和在以下权利要求中，术语“(c4-5)亚环烷基”是指包含4或5个碳原子的二价环烷基，诸如亚环丁基和亚环戊基。

在本说明书中和在后面的权利要求书中,术语“(c1-3)烷氧基”是指包含1-3个碳原子的直链或支链烷氧基链，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基。

在本说明书中和在后面的权利要求书中,术语“(c1-3)卤代烷基基团”是指包含1-3个碳原子的直链或支链卤代烷基链，其中一个或多个氢原子被卤原子取代，例如、氟甲基、氯甲基、三氟甲基、三氯甲基、氟乙基、氯乙基、五氟乙基、五氯乙基、氟丙基、氯丙基、六氟丙基(esafluoropropyl)和六氯异丙基。

本发明的某些化合物可以以互变异构形式存在，本发明包括这些化合物的所有这样的互变异构形式，除非另外指出。

除非另有说明，否则在本文中描绘的结构也意图包括所述结构的所有立体化学形式；即，每个不对称中心的r和s构型。因而，本发明化合物的单个立体化学异构体以及对映异构体和非对映异构体混合物包括在本发明范围内。因而，本发明包括基本上不含有其它异构体(基于摩尔，>90％，和优选地>95％，不含有其它立体异构体)的每种非对映异构体或对映异构体以及这样的异构体的混合物。

可以如下得到特定光学异构体：通过根据常规方法拆分外消旋混合物，例如，通过形成非对映异构的盐，通过用光学活性的酸或碱处理。适当的酸的例子是酒石酸、二乙酰基酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、二甲苯酰基酒石酸和樟脑磺酸，并然后通过结晶分离非对映异构体的混合物，随后从这些盐释放光学活性的碱。一种不同的分离光学异构体的方法包括使用手性色谱柱，其经过最佳选择以使对映异构体的分离最大化。另一种方法包括如下合成共价非对映异构体：使本发明的化合物与活化形式的光学纯的酸或光学纯的异氰酸酯反应。可以将合成的非对映异构体通过常规方式诸如色谱法、蒸馏、结晶或升华进行分离，然后水解以获得对映异构纯的化合物。

通过使用活性起始原料可以得到本发明的光学活性化合物。这些异构体可以呈游离酸、游离碱、酯或盐的形式。

本发明的化合物可以以放射性地标记的形式存在，即，所述化合物可以含有一个或多个其原子质量或质量数不同于在自然界中常见的原子质量或质量数的原子。氢、碳、磷、氟和氯的放射性同位素分别包括³h、¹⁴c、³²p、³⁵s、¹⁸f和³⁶cl。含有那些放射性同位素和/或其它原子的其它放射性同位素的本发明化合物包括在本发明的范围内。氚代(即，³h)和碳-14(即，¹⁴c)放射性同位素因为它们的容易制备和可检测性是特别优选的。

放射性地标记的本发明化合物通常可以通过本领域技术人员众所周知的方法来制备。方便地，通过进行本文中公开的操作，但是用容易得到的放射性地标记的试剂替换未放射性标记的试剂，可以制备这样的放射性地标记的化合物。

在第二个实施方案中，本发明涉及一种药物组合物，其至少包含如上所述的式(1)的化合物、其与药学上可接受的有机或无机酸或碱的盐、或其对映异构体、或其n-氧化物、或其季铵盐以及至少一种药学上可接受的赋形剂。

优选地，以合适的剂型制备本发明的药物组合物。

合适的剂型的例子是：用于口服施用的片剂、胶囊剂、包衣片剂、颗粒剂、溶液剂和糖浆剂；用于局部施用的溶液剂、润发油和软膏剂；用于透皮施用的含药贴剂；用于直肠施用的栓剂和可注射的无菌的溶液。其它合适的剂型是具有持续释放的那些和用于口服、注射或透皮施用的基于脂质体的那些。本发明的药物组合物还可以通过鼻气雾剂或吸入来施用或通过植入(例如，外科手术地)来递送，诸如用可植入或内在装置如支架。

其它合适的剂型是具有持续释放的那些和用于口服、注射或透皮施用的基于脂质体的那些。

本发明的药物组合物的剂型可以通过药物化学家熟知的技术来制备，且包括混合、制粒、压缩、溶解、灭菌等。

通常，在本发明的药物组合物中的式(1)化合物或其药学上可接受的季铵盐、n-氧化物和盐的量将是在0.01mg至1,500mg之间，优选地在0.1mg至500mg之间，和更优选地在1mg至200mg之间。

通常，在本发明的药物组合物中的式(1)化合物的量将会确保0.001-20mg/kg/天的施用水平。优选地，所述施用水平是0.01-7.5mg/kg/天，更优选地0.1-5mg/kg/天，且最优选地0.5-2.5mg/kg/天。

技术人员会明白，可能需要比上面列举的那些更低或更高的剂量。用于任何特定患者的具体剂量和治疗方案将取决于多种因素，包括使用的具体化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、施用时间、排泄速率、药物组合、疾病的严重程度和进程、和患者的疾病倾向以及治疗医师的判断。

可以口服、胃肠外、通过吸入喷雾、局部、直肠、经鼻、含服、阴道或经由植入储库施用本发明的药物组合物。本文中使用的术语“胃肠外”包括皮下的、皮内的、静脉内的、肌肉内的、关节内的、滑膜内的、胸骨内的、鞘内的、病灶内的和颅内的注射或输注技术。

如上所述，取决于取代基的性质，式(1)的化合物可以与药学上可接受的有机或无机酸或碱形成加成盐。

合适的生理上可接受的无机酸的典型例子是盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸和硝酸。

合适的生理上可接受的有机酸的典型例子是乙酸、抗坏血酸、苯甲酸、柠檬酸、富马酸、乳酸、马来酸、甲磺酸、草酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、琥珀酸、鞣酸和酒石酸。

合适的生理上可接受的无机碱的典型例子是铵、钙、镁、钠和钾的氢氧化物、碳酸盐和碳酸氢盐，例如氢氧化铵、氢氧化钙、碳酸镁、碳酸氢钠和碳酸氢钾。

合适的生理上可接受的有机碱的典型例子是：精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、n,n-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、n-乙基吗啉、n-乙基哌啶、n-甲基还原葡糖胺、还原葡糖胺、葡糖胺、组氨酸、n-(2-羟基乙基)-哌啶、n-(2-羟基乙基)吡咯烷、异丙胺、赖氨酸、甲基还原葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺和氨丁三醇。

如本文中所述的，本发明的药物组合物包含本发明的化合物以及药学上可接受的赋形剂，如本文中使用的，所述赋形剂包括任意的和所有的溶剂、稀释剂或其它媒介物、分散或悬浮助剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂或乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂等。它们适合于所希望的特定剂型。

可以充当药学上可接受的赋形剂的材料的一些例子包括、但不限于：糖诸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；黄蓍胶粉末；麦芽；明胶；滑石；赋形剂诸如可可脂和栓剂蜡；油诸如花生油、棉籽油；红花油；芝麻油；橄榄油；玉米油和大豆油；二醇类；诸如丙二醇；酯诸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂诸如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；无热原水；等渗盐水；林格氏溶液；乙醇和磷酸盐缓冲溶液，其它无毒的相容的润滑剂诸如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁、着色剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、矫味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂。

术语“药学上可接受的”和“生理上可接受的”意指没有任何特殊限制地定义适合用于制备要施用给生物(livingbeing)的药物组合物的任何材料。

在第三个实施方案中，本发明涉及用于药物中的式(1)的化合物。

在第四个实施方案中，本发明涉及用于治疗细菌感染的式(1)的化合物。

在第五个实施方案中，本发明涉及一种用于治疗细菌感染的方法，所述方法包括将式(1)化合物施用给有此需要的患者。

优选地，所述细菌感染是皮肤感染、粘膜感染、妇科感染、呼吸道感染(rti)、cns感染、胃肠感染、骨感染、心血管感染、性传播的感染或泌尿道感染。

更具体地，所述细菌感染是慢性支气管炎(aceb)的急性恶化、急性中耳炎、急性鼻窦炎、由药物抗性细菌造成的感染、导管相关的脓毒症、软下疳、衣原体病、社区获得性肺炎(cap)、合并的皮肤和皮肤结构感染(complicatedskinandskinstructureinfection)、不复杂的皮肤和皮肤结构感染(uncomplicatedskinandskinstructureinfection)、心内膜炎、发热性嗜中性粒细胞减少症、淋球菌性宫颈炎、淋球菌性尿道炎、医院获得性肺炎(hap)、骨髓炎、脓毒症、梅毒、呼吸器相关性肺炎、腹内感染、淋病、脑膜炎、破伤风或结核病。

甚至更具体地，所述细菌感染可以是与幽门螺杆菌或肺炎衣原体感染有关的动脉粥样硬化或心血管疾病；血液和组织感染，包括心内膜炎和骨髓炎，其由金黄色葡萄球菌(s.aureus)、溶血性葡萄球菌(s.haemolyticus)、粪肠球菌(e.faecalis)、屎肠球菌(e.faecium)、耐久肠球菌(e.durans)引起，包括对已知的抗细菌剂具有抗性的菌株，所述抗细菌剂是例如，但不限于，β-内酰胺类、万古霉素、氨基糖苷类、喹诺酮类、氯霉素、四环素类和大环内酯类；支气管炎；导管相关的脓毒症；软下疳；衣原体病；社区获得性肺炎；与鸟分枝杆菌(mycobacteriumavium)或细胞内分枝杆菌(mycobacteriumintracellulare)感染有关的播散性鸟复合分枝杆菌(mac)疾病；心内膜炎；发热性嗜中性粒细胞减少症；与产气荚膜梭菌(clostridiumperfringens)或拟杆菌属种(bacteroidesspp)感染有关的气性坏疽；胃肠炎感染；与酿脓链球菌(streptococcuspyogenes)、c和g群链球菌、白喉棒杆菌(corynebacteriumdiphtheriae)或溶血放线杆菌感染有关的肾小球肾炎；淋球菌性宫颈炎；淋球菌性尿道炎；妇科感染；医院获得性肺炎(hap)；由药物抗性细菌造成的感染；由结核分枝杆菌(mycobacteriumtuberculosis)、麻风分枝杆菌(m.leprae)、副结核分枝杆菌(m.paratuberculosis)、堪萨斯分枝杆菌(m.kansasii)或龟亚科分枝杆菌(m.chelonei)造成的感染；与隐孢子虫属种(cryptosporidiumspp)感染有关的肠原生动物；与布氏疏螺旋体(borreliaburgdorferi)感染有关的莱姆病；与沙眼衣原体(chlamydiatrachomatis)、淋病奈瑟球菌(neisseriagonorrhoeae)、金黄色葡萄球菌、肺炎葡萄球菌(s.pneumoniae)、化脓链球菌(s.pyogenes)、流感嗜血菌(h.injluenzae)或李斯特菌属种(listeriaspp.)感染有关的结膜炎、角膜炎和泪囊炎；与肺炎链球菌、流感嗜血菌、粘膜炎莫拉菌(moraxellacatarrhalis)、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、屎肠球菌、酪黄肠球菌(e.casseliflavus)、表皮葡萄球菌(s.epidermidis)、溶血性葡萄球菌或消化链球菌属种(peptostreptococcusspp)感染有关的乳突炎；与草绿色链球菌(viridansstreptococci)感染有关的牙源性感染；骨髓炎；中耳炎；与百日咳博德特氏菌(bordetellapertussis)感染有关的持续咳嗽；咽炎；与金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性的葡萄球菌酿脓链球菌、无乳链球菌(streptococcusagalactiae)、c-f群链球菌(微小菌落链球菌)、草绿色链球菌、极小棒杆菌(corynebacteriumminutissimum)、梭菌属种(clostridiumspp.)或横塞氏巴尔通氏体(bartonellahenselae)感染有关的产后发热；与肺炎支原体(mycoplasmapneumoniae)、嗜肺军团菌(legionellapneumophila)、肺炎链球菌(streptococcuspneumoniae)、流感嗜血菌(haemophilusinjluenzae)或肺炎衣原体(chlamydiapneumoniae)感染有关的呼吸道感染；风湿热；脓毒症；与沙眼衣原体(chlamydiatrachomatis)、杜氏嗜血菌(haemophilusducreyi)、苍白密螺旋体(treponemapallidum)、解脲尿支原体(ureaplasmaurealyticum)或淋病奈瑟氏菌(neiseriagonorrhoeae)感染有关的性传播疾病；鼻窦炎；梅毒；与回归热疏螺旋体(borreliarecurrentis)感染有关的全身发热综合征；扁桃体炎；与金黄色葡萄球菌感染有关的毒素疾病(食物中毒和中毒性休克综合征)或与a、b和c群链球菌有关的毒素疾病；与幽门螺杆菌(helicobacterpylori)感染有关的溃疡；与金黄色葡萄球菌凝固酶阴性的葡萄球菌种或肠球菌属种感染有关的不复杂的急性泌尿道感染；不复杂的皮肤和软组织感染和脓肿；尿道炎和宫颈炎；泌尿道感染；中枢神经系统感染；由葡萄球菌造成的装置相关感染；由葡萄球菌造成的肌肉骨骼感染；产生志贺毒素的大肠杆菌(e.coli)；流感嗜血菌(haemophilusinfluenzae)(侵袭性疾病)；军团杆菌病；鹦鹉热/鹦鹉衣原体鸟病(psittacosis/ornithosisclamydiapsittaci)；由沙门氏菌属种(salmonellaspp)造成的沙门菌病；由志贺氏菌属种(shigellaspp)造成的志贺氏菌病；链球菌中毒性休克综合征；葡萄球菌中毒性休克综合征；和由伤寒沙门氏菌(salmonellatyphi)造成的伤寒。

所述细菌感染可以是由不动杆菌属种(acinetobacterspp)、拟杆菌属种(bacteroidesspp)、伯克霍尔德氏菌属种(burkholderiaspp)、弯曲杆菌属种(campylobacterspp)、衣原体属种(chlamydiaspp)、衣原体属种(chlamydophilaspp)、梭菌属种(clostridiumspp)、肠杆菌属种(enterobacterspp)、肠球菌属种(enterococcusspp)、埃希氏菌属种(escherichiaspp)、加德那菌属种(gardnerellaspp)、嗜血菌属种(haemophilusspp)、螺杆菌属种(helicobacterspp)、克雷伯氏菌属种(klebsiellaspp)、军团菌属种(legionellaspp)、莫拉菌属种(moraxellaspp)、摩根氏菌属种(morganellaspp)、支原体属种(mycoplasmaspp)、奈瑟球菌属种(neisseriaspp)、消化链球菌属种(peptostreptococcusspp)、变形菌属种(proteusspp)、假单胞菌属种(pseudomonasspp)、沙门氏菌属种(salmonellaspp)、沙雷氏菌属种(serratiaspp)、葡萄球菌属种(staphylococcusspp)、链球菌属种(streptoccocusspp)、寡养单胞菌属种(stenotrophomonasspp)、尿支原体属种(ureaplasmaspp)、需氧菌、专性厌氧菌、兼性厌氧菌、革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌、革兰氏不定细菌和非典型呼吸道病原体引起的感染。

更具体地，所述细菌感染可以是由鲍氏不动杆菌(acinetobacterbaumanii)、溶血不动杆菌(acinetobacterhaemolyticus)、琼氏不动杆菌(acinetobacterjunii)、约氏不动杆菌(acinetobacterjohnsonii)、鲁氏不动杆菌(acinetobacterlwoffi)、双道拟杆菌(bacteroidesbivius)、脆弱拟杆菌(bacteroidesfragilis)、洋葱伯克霍尔德氏菌(burkholderiacepacia)、空肠弯曲杆菌(campylobacterjejuni)、肺炎衣原体(chlamydiapneumoniae)、解脲衣原体(chlamydiaurealyticus)、肺炎衣原体(chlamydophilapneumoniae)、难辨梭菌(clostridiumdifficile)、产气肠杆菌(enterobacteraerogenes)、阴沟肠杆菌(enterobactercloacae)、粪肠球菌(enterococcusfaecalis)、屎肠球菌(enterococcusfaecium)、大肠杆菌(escherichiacoli)、阴道加德那菌(gardnerellavaginalis)、副流感嗜血菌(haemophilusparainfluenzae)、流感嗜血菌(haemophilusinfluenzae)、幽门螺杆菌(helicobacterpylori)、肺炎克雷伯氏菌(klebsiellapneumoniae)、嗜肺军团菌(legionellapneumophila)、甲氧西林抗性的金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)、甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)、粘膜炎莫拉菌(moraxellacatarrhalis)、摩氏摩根氏菌(morganellamorganii)、肺炎支原体(mycoplasmapneumoniae)、淋病奈瑟球菌(neisseriagonorrhoeae)、青霉素抗性的肺炎链球菌(streptococcuspneumoniae)、青霉素敏感的肺炎链球菌(streptococcuspneumoniae)、大消化链球菌(peptostreptococcusmagnus)、微小消化链球菌(peptostreptococcusmicros)、厌氧消化链球菌(peptostreptococcusanaerobius)、不解糖消化链球菌(peptostreptococcusasaccharolyticus)、普氏消化链球菌(peptostreptococcusprevotii)、四联消化链球菌(peptostreptococcustetradius)、阴道消化链球菌(peptostreptococcusvaginalis)、奇异变形菌(proteusmirabilis)、铜绿假单胞菌(pseudomonasaeruginosa)、喹诺酮抗性的金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)、喹诺酮抗性的表皮葡萄球菌(staphylococcusepidermis)、伤寒沙门氏菌(salmonellatyphi)、副伤寒沙门氏菌(salmonellaparatyphi)、肠炎沙门氏菌(salmonellaenteritidis)、鼠伤寒沙门氏菌(salmonellatyphimurium)、粘质沙雷氏菌(serratiamarcescens)、金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)、表皮葡萄球菌(staphylococcusepidermidis)、腐生葡萄球菌(staphylococcussaprophyticus)、无乳链球菌(streptococcusagalactiae)、肺炎链球菌(streptococcuspneumoniae)、酿脓链球菌(streptococcuspyogenes)、嗜麦芽糖寡养单胞菌(stenotrophomonasmaltophilia)、解脲尿支原体(ureaplasmaurealyticum)、万古霉素抗性的屎肠球菌(enterococcusfaecium)、万古霉素抗性的粪肠球菌(enterococcusfaecalis)、万古霉素抗性的金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)和万古霉素抗性的表皮葡萄球菌(staphylococcusepidermis)引起的感染。

在下面表1中提供了根据本发明的化合物的例子。

表1

可以如下面合成实施例中所解释的制备以上化合物。

关于对于本发明的化合物(包括含有a、l1、y、l2、r和b的不同选择的化合物)的合成、回收和表征有用的合成策略、保护基以及其它材料和方法的指导，本领域技术人员具有非常确定的杂环和其它有关化学转化的文献，要利用的回收和纯化技术，以及在下面的实施例中所含的信息。

多个合成方案可以用于生产本文所述化合物，包括在下面示意地描绘的那些方案。本领域技术人员会明白，可以在这些方案中使用保护基。“保护基”是这样的部分：其用于暂时阻断在潜在反应部位(例如，胺、羟基、巯基、醛等)处的化学反应，使得反应可以在多官能化合物的另一个部位处选择性地进行。在优选的实施方案中，保护基以良好收率选择性地反应以产生适合用于计划的反应的受保护底物；所述保护基应当可以通过容易得到的、优选地无毒的试剂以良好收率选择性地除去，所述试剂不会不适当地攻击存在的其它官能团；所述保护基优选地形成可容易地分离的衍生物(更优选地不产生新立体中心)；且所述保护基优选地具有额外官能团的最小值以避免其它反应位点的复杂化。多种保护基以及用于布置和除去它们的策略、试剂和条件是本领域已知的。

并且，可以选择富含期望的同位素(例如氚替代氢)的试剂以制备含有这样的同位素的本发明的化合物。含有在一个或多个位置的氚以替代氢或者含有c、n、p和o的各种同位素的化合物包含在本发明范围内，且可以用于，例如，研究化合物的代谢和/或组织分布或改变代谢的速率或途径或生物学功能的其它方面。

使用下面描述的方法以及合成有机化学领域已知的合成方法，或通过本领域技术人员会明白的对它们的变化，可以合成本发明的化合物。优选的方法包括、但不限于下面描述的那些。在对于采用的试剂和材料而言适当且适合于所要实现的转化的溶剂中进行所述反应。有机合成领域的技术人员会理解，存在于分子上的官能团应当与提议的转化相一致。这有时要求某种判断从而修改合成步骤的次序或选择一个特定工艺方案(相对于另一个)以便得到期望的本发明的化合物。

如在下文所述的合成途径中所示和经由本领域技术人员已知的标准方法，可以制备本发明的化合物。

实施例

在下文所述的合成途径中使用的缩写的列表：

boc:氨基甲酸叔丁酯

chex环己烷

cv柱体积

dbu:1,5-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-5-烯

dcm:二氯甲烷

dipean,n-二异丙基乙胺

dme:1,2-二甲氧基乙烷

dmf:n,n-二甲基甲酰胺

et2o:乙醚

etoac:乙酸乙酯

ms:质谱法

tea:三乙胺

tfa:三氟乙酸

thf:四氢呋喃

pd/c:活性炭载钯

pd(oh)2/c:活性炭载氢氧化钯

r.t.:室温

uplc:超高效液相色谱法

化合物157的制备

如下文中所述制备化合物157。

步骤1-5-氟-2-羟基苯甲酸甲酯的合成：

在0℃，向5-氟水杨酸(25g,160mmol)在meoh(250ml)中的搅拌溶液中，缓慢地加入浓硫酸(20ml)。将得到的反应混合物回流48h，然后在减压下浓缩并将得到的粗制物用饱和nahco3碱化至ph8.0。将混合物用1.5nhcl溶液中和，并用etoac萃取。将有机层经无水na2so4干燥并浓缩以得到作为浅棕色液体的5-氟-2-羟基苯甲酸甲酯(22.8g,83％收率)。gc-ms(acq方法hp-1ms.m):170.1(m)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δppm10.29(s,1h),7.51-7.49(m,1h),7.42-7.41(m,1h),7.03-7.01(m,1h),3.89(s,3h)。

步骤2-5-氟-2-羟基苯甲酰胺的合成：

将5-氟-2-羟基苯甲酸甲酯(22g,129mmol)和氨的甲醇溶液(methanolicammonia)(250ml)的混合物在高压釜中在50℃加热10h。将反应混合物在减压下浓缩，将得到的粗制物与甲苯一起共蒸馏并干燥以得到作为棕色固体的5-氟-2-羟基苯甲酰胺(18.5g,92％收率)。lc-msm/z:154.0(m-h⁺)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δppm12.74(s,1h),8.40(s,1h),8.03(s,1h),7.73-7.71(m,1h),7.31-7.29(m,1h),6.91-6.90(m,1h)。

步骤3-6-氟-2h-1,3-苯并嗪-2,4(3h)-二酮的合成：

在0℃，向5-氟-2-羟基苯甲酰胺(8.0g,51.6mmol)在无水thf(80ml)中的搅拌溶液中加入1,1'-羰基二咪唑(10.9g,67.09mmol)。将混合物在室温搅拌14h，然后在减压下浓缩。将得到的粗制物用meoh处理，并用乙醚洗涤。将得到的白色固体干燥并不经进一步纯化地用于下一步(5.1g,55％收率，白色固体)。lc-msm/z:180.0(m-h⁺)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δppm12.19(s,1h),7.68-7.67(m,2h),7.50-7.48(m,1h)。

步骤4-4-氯-6-氟-2h-1,3-苯并嗪-2-酮的合成：

在0℃，向6-氟-2h-1,3-苯并嗪-2,4(3h)-二酮(0.5g,2.76mmol)在无水1,2-二氯乙烷(2.5ml)中的搅拌溶液中加入五氯化磷(0.69g,3.31mmol)。将得到的混合物回流6h，然后在减压下浓缩。将dcm(15ml)加入得到的粗制物中，用水(2ml)洗涤并经无水na2so4干燥。在减压下浓缩溶剂以得到作为灰白色固体的4-氯-6-氟-2h-1,3-苯并嗪-2-酮(0.46g,84％收率)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δppm7.69-7.67(m,2h),7.50-7.49(m,1h)。

步骤5-4-(3-氯-2-羟丙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的合成：

向哌嗪-1-甲酸叔丁酯(6.0g,32.2mmol)在乙醇(100ml)中的溶液中，加入表氯醇(epichlorohydrine)(14.8g,161.0mmol)，并将溶液在室温搅拌15h。反应结束以后，将混合物在减压下浓缩并将得到的粗产物(无色厚液体,8.9g,99％收率)原样用在后续步骤中。lc-msm/z:279.2(m+1)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ1.40(s,9h),2.27-2.42(m,6h),3.21-3.32(m,4h),3.52-3.56(m,1h),3.62-3.67(m,1h),3.79-3.89(m,1h),5.04(d,j＝4.9hz,1h)。

步骤6-4-(3-叠氮基-2-羟丙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的合成：

向4-(3-氯-2-羟丙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(8.9g,32mmol)在dmf(80ml)中的溶液中，加入叠氮化钠(3.12g,48mmol)。将混合物在85℃搅拌5h，然后用乙酸乙酯(300ml)稀释，并用水洗涤。将有机层经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将得到的粗制物在硅胶(60-120目)柱色谱法(0-10％的甲醇在二氯甲烷中的溶液)上纯化以得到作为淡黄色厚液体的4-(3-叠氮基-2-羟丙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(8.2g,89％收率)。lc-ms:286.2(m+1)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ1.40(s,9h),2.29-2.42(m,6h),3.15-3.20(m,1h),3.24-3.32(m,5h),3.79-3.82(m,1h),5.04(d,j＝4.9hz,1h)。

步骤7-4-(3-氨基-2-羟丙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的合成：

向4-(3-叠氮基-2-羟丙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.5g,5.2mmol)在乙醇(40ml)中的溶液中，加入10％炭载钯(0.15g)，并将混合物在氢气氛下在室温搅拌3h。将反应混合物穿过硅藻土床过滤，并将滤液在减压下浓缩以得到作为淡黄色固体的4-(3-氨基-2-羟丙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.25g,85％收率)。lc-msm/z:260.6(m+1)。¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ1.39(s,9h),2.22-2.43(m,8h),2.58-2.66(m,2h),3.48-3.52(m,4h),3.88-3.90(m,1h)。

步骤8-4-(3-((6-氟-2-氧代-2h-苯并[e][1,3]嗪-4-基)氨基)-2-羟丙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的合成：

在室温向4-氯-6-氟-2h-苯并[e][1,3]嗪-2-酮(0.89g,4.5mmol)和dipea(2.9g,22.5mmol)在乙腈(50ml)中的搅拌溶液中加入4-(3-氨基-2-羟丙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.39g,5.4mmol)。将混合物在相同温度搅拌过夜。将固体过滤，用水洗涤和干燥。将粗产物在硅胶柱色谱法(0-20％的甲醇在二氯甲烷中的溶液)上纯化以得到作为灰白色固体的标题化合物(0.4g,21％收率)。lc-msm/z:423.2(m+1)。¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ1.38(s,9h),2.27-2.50(m,6h),3.28-3.39(m,4h),3.66-3.71(m,1h),3.98(br.s,1h),4.97(brs,1h),7.35-7.40(m,1h),7.59-7.65(m,1h)8.07-8.10(d,j＝6.3hz,1h),9.10-9.11(m,1h)。

步骤9-6-氟-4-((2-羟基-3-(哌嗪-1-基)丙基)氨基)-2h苯并[e][1,3]嗪-2-酮盐酸盐的合成：

将4-(3-((6-氟-2-氧代-2h-苯并[e][1,3]嗪-4基)氨基-2-羟丙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(100mg,0.023mmol)在hcl.二烷(4.5n溶液,5ml)中的溶液在室温搅拌4h。将反应混合物在减压下浓缩并将得到的产物(灰白色固体,100mg,定量收率)原样用在下一步中。

步骤10-6-氟-4-({2-羟基-3-[4-(2,7-萘啶-1-基)哌嗪-1-基]丙基}氨基)-2h-1,3-苯并嗪-2-酮(化合物157)的合成：

向6-氟-4-((2-羟基-3-(哌嗪-1-基)丙基)氨基)-2h苯并[e][1,3]嗪-2-酮盐酸盐(200mg,0.56mmol)和tea(0.18ml,0.85mmol)在dmf(2ml)中的溶液中加入1-氯-2,7-萘啶(60mg,0.37mmol)。将反应混合物在80℃搅拌8h，然后冷却并在减压下浓缩。将得到的粗制物通过快速柱色谱法(5-15％的meoh在dcm中的溶液)纯化以得到作为浅棕色固体的标题化合物(35mg,14％收率)。lc-msm/z:451.2(m+1)。¹hnmr(dmsod6):2.49-2.78(m,4h),3.07-3.31(m,6h),3.02-3.04(m,2h),4.37-4.38(m,1h),6.08(s,1h)7.32-7.49(m,2h),7.48-7.49(m,1h),7.65-7.71(m,1h),8.12-8.18(m,1h),8.31-8.32(m,1h),8.64-8.66(m,1h),9.32-9.43(m,1h),9.93-9.94(m,1h)。

化合物160的制备

如下文中所述制备化合物160。

步骤1-[1-(7-氟异喹啉-1-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯的合成：

在室温将碳酸钾(2.9g,21mmol)加入1-氯-7-氟异喹啉(2.6,14mmol)和哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(5.2g,28mmol)在dmso(20ml)中的搅拌溶液中。将得到的混合物在120℃搅拌过夜，然后将其冷却至室温，并在etoac(300ml)和水(300ml)之间分配。将有机层分离，用1m柠檬酸溶液(100ml)和盐水(70ml)洗涤并经硫酸钠干燥。在减压下蒸发溶剂，并将得到的残余物通过硅胶上的快速色谱法(snap100，从cy至cy/乙酸乙酯8:2)纯化以得到[1-(7-氟异喹啉-1-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯(4.3g,12.4mmol,88％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝346.5

步骤2-1-(7-氟异喹啉-1-基)哌啶-4-胺的合成：

将tfa(10ml)加入4-(7-氟异喹啉-1-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(4.3g,12.4mmol)在二氯甲烷(30ml)中的溶液，并将得到的混合物在室温搅拌过夜。将挥发物在减压下蒸发，将残余物溶解在二氯甲烷(20ml)中并在减压下蒸发。将得到的残余物溶解在meoh中并加载到预调节的scx柱(cartridge)(50g)上。将scx用meoh和2m的氨在甲醇中的溶液洗脱。将碱性级分在减压下蒸发以得到3.1g(y＝定量)的1-(7-氟异喹啉-1-基)哌啶-4-胺。lc-ms(m-h⁺)＝246.3

步骤3-2-(吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-甲醛的合成：

向[2-(吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基]甲醇(1g,5.7mmol)在无水dcm(30ml)中的悬浮液中逐份加入戴斯-马丁过碘烷(3.1g,1.3当量)。将混浊的混合物在室温搅拌1.5h，然后用饱和nahco3和10％na2s2o3溶液处理。搅拌30min以后，将有机相分离，经na2so4干燥，过滤并蒸发以回收730mg粗制的2-(吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-甲醛，将其不经进一步纯化和表征用于下一步。

步骤4-1-(7-氟异喹啉-1-基)-n-{[2-(吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基]甲基}哌啶-4-胺(甲酸盐,化合物160)的合成：

将2-(吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-甲醛(100mg,0.57mmol)溶解在无水dcm(20ml)中并用1-(7-氟异喹啉-1-基)哌啶-4-胺(140mg,0.57mmol)和2滴乙酸处理。搅拌30min以后，一次性加入nabh(oac)3(180mg,0.86mmol)并将反应混合物搅拌过夜。将反应物在dcm和饱和nahco3之间分配。将有机相蒸发并通过反相色谱法(h2o/mecn+0.1％hcooh从100/0至85/15)纯化以得到作为甲酸盐的1-(7-氟异喹啉-1-基)-n-{[2-(吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基]甲基}哌啶-4-胺(56mg,0.125mmol,21.9％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝403.4。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δppm1.95-2.08(m,2h),2.35(dd,j＝11.74,1.47hz,2h),3.06(t,j＝12.00hz,2h),3.40-3.50(m,1h),3.86(d,j＝12.00hz,2h),4.34(s,2h),7.37-7.41(m,1h),7.41-7.47(m,2h),7.55(td,j＝8.80,2.45hz,1h),7.75(dd,j＝10.27,2.45hz,1h),7.86-7.99(m,2h),8.06-8.11(m,2h),8.44(s,1h),8.63(d,j＝4.40hz,1h)。

化合物164的制备

如下文中所述制备化合物164。

步骤1-8-氯-2,7-萘啶2-氧化物的合成：

向1-氯-2,7-萘啶(0.15g,0.9mmol)在dcm中的溶液中，加入m-cpba(55％,472mg,1.4mmol)。将混合物在室温搅拌3h，然后将有机层用饱和碳酸钾溶液、水、盐水溶液洗涤并经硫酸钠干燥。在减压下除去溶剂，以得到作为淡黄色固体的8-氯-2,7-萘啶2-氧化物(120mg,73％)。lc-msm/z:181.0(m+1)。¹hnmr(400mhz,dmsod6):δ7.94(d,j＝5.6hz,1h),8.11(d,j＝7.12hz,1h),8.43-8.39(m,1h),8.49-8.46(m,1h),8.95(s,1h)。

步骤2-8-(4-(3-((6-氟-2-氧代-2h-苯并[e][1,3]嗪-4-基)氨基)-2-羟丙基)哌嗪-1-基)-2,7-萘啶2-氧化物(化合物164)的合成：

使用8-氯-2,7-萘啶2-氧化物根据关于化合物157(步骤10)描述的操作执行合成(23％收率)。lc-msm/z:467.0(m+1)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ2.74-2.60(m,5h),3.16-3.09(m,1h),3.42-3.21(m,5h),3.72-3.70(m,1h),4.06-4.05(m,1h),5.01(d,j＝4.4hz,1h),7.39-7.36(m,2h),7.65-7.60(m,1h),7.91(d,j＝6.8hz,1h),8.13-8.10(m,1h),8.18(d,j＝5.6hz,1h),8.31(d,j＝7.2hz,1h),8.64(s,1h),9.14-9.12(m,1h)。

化合物165的制备

如下文中所述制备化合物165。

步骤1-4-(3-((6-氟-2-氧代-2h-苯并[e][1,3]嗪-4-基)氨基)-2-羟丙基)-1-(2,7-萘啶-1-基)哌嗪1-氧化物(化合物165)的合成：

在室温向化合物157(30mg,0.06mmol)在ipa(3ml)中的溶液中加入单过氧酞酸镁六水合物(32mg,0.06mmol)。将反应混合物回流6h，然后冷却并在减压下浓缩。将得到的粗制物通过快速柱色谱法(8-10％的meoh/nh3在dcm中的溶液)纯化以得到标题化合物(3.5mg,11.2％收率)。lc-msm/z:465.2(m-1)。¹hnmr(cdcl3+meoh-d4):δ1.28(t,j＝6.8hz,3h),3.35-3.29(m,2h),3.71-3.56(m,5h),3.86-3.78(m,2h),4.03-3.98(m,2h),4.61-4.59(m,1h),7.22-7.20(m,2h),7.35-7.30(m,1h),7.58-7.56(m,1h),7.70(d,j＝6hz,1h),8.22(d,j＝5.6hz,1h),8.53(d,j＝4.8hz,1h),9.31(s,1h)。

化合物180和181的制备

如下文中所述制备化合物180和181。

4-氧代-1,4-二氢[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-甲醛的合成：

从4-羟基-2h-1-苯并吡喃-2-酮开始根据关于8-氟-4-氧代-1,4-二氢[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-甲醛(化合物193,步骤1-4)的合成描述的操作制备标题中间体。lc-msm/z:212.0(m-h^-)。¹hnmr(dmsod6):δ12.61(s,1h),9.76(s,1h),8.38-8.36(m,1h),7.70(d,j＝2.0hz,1h),7.61(d,j＝1.6,1h),7.43-7.41(m,2h)。

步骤1-3-羟基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的合成：

在0℃向3-氧代吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(5.2g,26.9mmol)在meoh/thf1:1(50ml)中的搅拌溶液中逐份加入硼氢化钠(2.05g,53.9mmol)。将反应混合物在室温搅拌40min，然后用冰猝灭。将溶剂在减压下浓缩，将得到的残余物用etoac(100ml)稀释，并用水(50ml)和盐水(50ml)洗涤。将有机层经硫酸钠干燥并浓缩以得到作为异构体混合物的标题化合物(5.1g,98％收率)。¹hnmr(cdcl3):δ4.86(d,j＝4.8hz,1h),4.20(s,1h),2.25-2.23(m,3h),3.11-3.01(m,1h),1.83-1.81(m,2h),1.39(s,9h)。

步骤2-3-[(甲磺酰基)氧基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的合成：

在室温向3-羟基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(异构体的混合物,5.1g,27.2mmol)在dcm(75ml)中的搅拌溶液中加入tea(5.9ml,42.7mmol)。将混合物冷却至0℃，然后逐滴加入甲烷磺酰氯(2.62ml,32.7mmol)。将得到的溶液在室温搅拌1h，然后用dcm(100ml)稀释，并用水(50ml)和盐水(50ml)洗涤。将有机层经硫酸钠干燥并浓缩以得到作为异构体混合物的标题化合物(7.15g,99％收率)，将其不经任何进一步纯化用于下一步。¹hnmr(cdcl3):δ5.30-5.27(m,1h),3.60-3.58(m,4h),3.05(s,3h),2.19-2.16(m,1h),2.13-2.12(m,1h),1.39(s,9h)。

步骤3-3-氰基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的合成：

向3-[(甲磺酰基)氧基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(异构体的混合物,6.1g,23.0mmol)在dmf(40ml)中的搅拌溶液中加入nacn(3.38g,69.0mmol)。将反应混合物在100℃搅拌16h，然后冷却至室温，并用etoac(75ml)稀释。将有机层用水(2×40ml)洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。将得到的粗制物通过柱色谱法(硅胶:230-400,25％的etoac在石油醚中的溶液)纯化以得到作为异构体混合物的标题化合物(3.1g,15.8mmol,69％收率，无色液体)。¹hnmr(cdcl3):δ3.69-3.59(m,4h),3.12-3.09(m,1h),2.27-2.25(m,2h),1.48(s,9h)。

步骤4-3-(氨基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的合成：

在氮气下向3-氰基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(异构体的混合物,3.1g,15.8mmol)和tea(1.3ml,9.4mmol)在etoh(90ml)中的搅拌溶液中加入阮内镍(2.04g,23.7mmol)。将反应混合物在30psi氢气压强下在室温搅拌16h，然后穿过硅藻土过滤，用乙醇(50ml)洗涤。将溶液在减压下浓缩以得到作为异构体混合物的标题化合物(2.6g,82％收率，黄色液体)。lc-ms(elsd)m/z:201.2(m+h⁺)。¹hnmr(cdcl3):δ3.49-3.41(m,4h),3.00-2.99(m,1h),2.73(m,2h),2.23-2.22(m,1h),2.00(m,1h),1.46(s,9h)。

步骤5-3-({[(苄氧基)羰基]氨基}甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的合成：

在室温向3-(氨基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(异构体的混合物,2.5g,12.4mmol)在1,4-二烷(50ml)中的搅拌溶液中加入饱和碳酸钠溶液(14ml)。将反应混合物冷却至0-5℃，然后缓慢地加入氯甲酸苄酯(50％在甲苯中，5.5ml,16mmol)。在室温搅拌5h以后，将反应混合物用水(50ml)稀释，并用etoac(3×60ml)萃取。将合并的有机层用盐水(50ml)洗涤，经硫酸钠干燥和在真空下蒸发。将粗制物通过柱色谱法(硅胶:200-400,12-15％的etoac在石油醚中的溶液)纯化以得到作为异构体混合物的标题化合物(2.4g,57.5％收率，无色液体)。lc-msm/z:235.1(m+h⁺-boc)。¹hnmr(cdcl3):δ7.36-7.27(m,5h),5.11(s,2h),4.87-4.85(m,1h),3.50-3.05(m,6h),3.00-2.97(m,1h),2.35-2.20(m,1h),2.05-1.97(m,1h),1.46(s,9h)。

步骤6-[(吡咯烷-3-基)甲基]氨基甲酸苄酯盐酸盐的合成：

在0-5℃向3-({[(苄氧基)羰基]氨基}甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(异构体的混合物,2.4g,7.1mmol)在1,4-二烷(30ml)中的搅拌溶液中，加入hcl(4n在1,4-二烷中的溶液,30ml)。将反应混合物在室温搅拌2h，然后在减压下浓缩。将得到的粗制物用石油醚处理，过滤并在减压下干燥以得到作为异构体混合物的标题化合物(1.7g,粗制物)，将其不经任何进一步纯化用于下一步。lc-msm/z:235.2(m-h⁺)。

步骤7-{[1-(7-氟异喹啉-1-基)吡咯烷-3-基]甲基}氨基甲酸苄酯的合成：

向[(吡咯烷-3-基)甲基]氨基甲酸苄酯盐酸盐(异构体的混合物,957mg,3.5mmol)在nmp(15ml)中的搅拌溶液中加入tea(1.1g,11.0mmol)。在室温搅拌15min以后，加入1-氯-7-氟异喹啉(400mg,2.2mmol)。将反应混合物在140℃搅拌24h，然后冷却，在减压下浓缩并用etoac(50ml)稀释。将有机相用水(2×25ml)和盐水(20ml)洗涤，经硫酸钠干燥并在真空下蒸发。将得到的粗制物通过柱色谱法(硅胶:200-400目,30-40％的etoac在石油醚中的溶液)纯化以得到作为异构体混合物的标题化合物(500mg,60％收率)。lc-msm/z:380.2(m+h)。

步骤8-1-[1-(7-氟异喹啉-1-基)吡咯烷-3-基]甲胺的合成：

向{[1-(7-氟异喹啉-1-基)吡咯烷-3-基]甲基}氨基甲酸苄酯(异构体的混合物,500mg,1.3mmol)在甲醇(50ml)中的搅拌溶液中，加入10％pd/c(100mg,50％湿的)。将反应混合物在氢气氛下搅拌3h，然后在硅藻土床上过滤，用甲醇(50ml)洗涤。将滤液在减压下浓缩以得到作为异构体混合物的标题化合物(310mg,1.3mmol,97％收率)。lc-msm/z:246.1(m+h)。

步骤9-2-[({[1-(7-氟异喹啉-1-基)吡咯烷-3-基]甲基}氨基)甲基][1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮的对映异构体(化合物180和181)的合成：

在室温向1-[1-(7-氟异喹啉-1-基)吡咯烷-3-基]甲胺(异构体的混合物,320mg,1.3mmol)和4-氧代-1,4-二氢色烯并(dihydrochromeno)[4,3-b]吡咯-2-甲醛(330mg,1.56mmol)在dce(5ml)和dmf(2ml)中的搅拌溶液中加入acoh(0.1ml)。在50℃搅拌20h以后，将混合物冷却至室温并加入三乙酰氧基硼氢化钠(553mg,2.6mmol)。将反应混合物在室温搅拌3h，然后用水(30ml)稀释，并用dcm(3×30ml)萃取。将合并的有机层用水(2×20ml)和盐水(20ml)洗涤，经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将得到的粗制物通过快速色谱法(硅胶:200-400,3-5％的meoh在dcm中的溶液)纯化以得到2-[({[1-(7-氟异喹啉-1-基)吡咯烷-3-基]甲基}氨基)甲基][1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮的异构混合物。将混合物通过手性hplc纯化以得到2种对映异构体。

化合物180(未指定立体化学):29.2mg,5％收率。lc-msm/z:443.1(m+h)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ12.56(brs,1h),8.06(d,j＝7.56hz,1h),7.93-7.80(m,3h),7.55-7.50(m,1h),7.45-7.36(m,2h),7.34-7.32(m,1h),7.05(d,j＝5.6hz,1h),6.55(s,1h),3.85-3.69(m,5h),3.58(t,j＝9.6hz,1h),2.66-2.50(m,2h),2.43-2.41(m,2h),2.09-2.06(m,1h),1.70-1.68(m,1h)。

化合物181(未指定立体化学):21.4mg,3.7％收率。lc-msm/z:443.1(m+h⁺)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ12.46(brs,1h),8.05(d,j＝7.76hz,1h),7.93-7.82(m,3h),7.53(t,j＝8.5hz,1h),7.46-7.33(m,3h),7.05(d,j＝5.2hz,1h),6.54(s,1h),3.82-3.71(m,5h),3.59(t,j＝9.08hz,1h),3.01-3.00(m,2h),2.66-2.61(m,1h),2.43-2.32(m,1h),2.07-2.05(m,1h),1.70-1.68(m,1h)。

化合物182和183的制备

如下文中所述制备化合物182和183。

步骤1-2-{[(甲磺酰基)氧基]甲基}吗啉-4-甲酸叔丁酯的合成：

使用2-(羟基甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯根据关于3-[(甲磺酰基)氧基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的合成描述的操作(参见化合物180-181,步骤2)制备作为异构体混合物的标题中间体(92％收率)。lc-ms(elsd)m/z:196.0(m+h⁺-boc)。¹hnmr(cdcl3):δ4.25(d,j＝4.8hz,2h),3.93-3.73(m,3h),3.69-3.67(m,1h),3.58-3.55(m,1h),3.10(s,3h),2.98-2.85(m,1h),2.80-2.75(m,1h),1.43(s,9h)。

步骤2-2-(叠氮基甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯的合成：

在室温向2-{[(甲磺酰基)氧基]甲基}吗啉-4-甲酸叔丁酯(异构体的混合物,2.5g,8.46mmol)在dmf(25ml)中的搅拌溶液中加入叠氮化钠(4.64g,42.3mmol)和碘化钠(253mg,1.6mmol)。将反应混合物在60℃搅拌20h，然后用水(20ml)稀释并用etoac(2×50ml)萃取。将有机层用盐水(50ml)洗涤，经硫酸钠干燥并在真空下浓缩。将得到的粗制物通过柱色谱法(硅胶:200-400,20％的etoac在石油醚中的溶液)纯化以得到作为异构体混合物的标题化合物(1.8g,87％收率)。lc-ms(elsd)m/z:143.2(m+h-boc)。¹hnmr(cdcl3):δ4.05-3.85(m,3h),3.65-3.45(m,2h),3.35-3.00(m,2h),3.00-2.90(m,1h),2.89-2.79(m,1h),1.45(s,9h)。

步骤3-2-(氨基甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯的合成：

使用2-(叠氮基甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯根据关于1-[1-(7-氟异喹啉-1-基)吡咯烷-3-基]甲胺的合成描述的操作(参见化合物180-181,步骤8)制备作为异构体混合物的标题中间体(93％收率)。lc-ms(elsd):m/z217.3(m+h)。

步骤4-2-({[(苄氧基)羰基]氨基}甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯的合成：

使用2-(氨基甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯根据关于3-({[(苄氧基)羰基]氨基}甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的合成描述的操作(参见化合物180-181,步骤5)制备作为异构体混合物的标题中间体(54％收率)。lc-msm/z:251.3(m+h⁺-boc)；¹hnmr(cdcl3):δ7.39-7.33(m,5h),5.13(s,2h),3.88-3.86(m,3h),3.73-3.71(m,1h),3.55-3.47(m,3h),3.18-2.88(m,1h),2.68-2.65(m,1h),1.48(s,9h)。

步骤5-[(吗啉-2-基)甲基]氨基甲酸苄酯盐酸盐的合成：

使用2-({[(苄氧基)羰基]氨基}甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯根据关于[(吡咯烷-3-基)甲基]氨基甲酸苄酯盐酸盐的合成描述的操作(参见化合物180-181,步骤6)制备作为异构体混合物的标题中间体(99％收率)。lc-msm/z:251.1(m+h⁺)。

步骤6-{[4-(7-氟异喹啉-1-基)吗啉-2-基]甲基}氨基甲酸苄酯的合成：

使用[(吗啉-2-基)甲基]氨基甲酸苄酯盐酸盐根据关于{[1-(7-氟异喹啉-1-基)吡咯烷-3-基]甲基}氨基甲酸苄酯的合成描述的操作(参见化合物180-181,步骤7)制备作为异构体混合物的标题中间体(37％收率)。lc-msm/z:396.2(m+h⁺)。

步骤7-1-[4-(7-氟异喹啉-1-基)吗啉-2-基]甲胺的合成：

使用{[4-(7-氟异喹啉-1-基)吗啉-2-基]甲基}氨基甲酸苄酯根据关于1-[1-(7-氟异喹啉-1-基)吡咯烷-3-基]甲胺的合成描述的操作(参见化合物180-181,步骤8)制备作为异构体混合物的标题中间体(84％收率)。lc-msm/z:262.1(m+h⁺)。

步骤8-2-[({[4-(7-氟异喹啉-1-基)吗啉-2-基]甲基}氨基)甲基][1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮的对映异构体(化合物182和183)的合成：

使用1-[4-(7-氟异喹啉-1-基)吗啉-2-基]甲胺的异构混合物根据关于化合物180和181(步骤9)描述的操作制备化合物182和183。

化合物182(未指定立体化学):9.9mg,2.6％收率。lc-msm/z:459.2(m+h⁺)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ12.35(brs,1h),8.11(d,j＝5.6hz,1h),8.04-7.99(m,2h),7.76(d,j＝10.2hz,1h),7.66-7.62(m,1h),7.47-7.32(m,4h),6.53(s,1h),3.96-3.83(m,5h),3.64-3.48(m,2h),3.01(t,j＝10.2hz,1h),2.82-2.76(m,1h),2.70-2.67(m,2h)。

化合物183(未指定立体化学):12.9mg,3.3％收率。lc-msm/z:459.2(m+h⁺)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ12.50(brs,1h),8.12(d,j＝5.6hz,1h),8.05-8.00(m,2h),7.79-7.76(m,1h),7.68-7.63(m,1h),7.48-7.34(m,4h),6.57(s,1h),3.97-3.86(m,5h),3.64-3.61(m,1h),3.52-3.49(m,1h),3.03-3.00(m,1h),2.83-2.51(m,3h)。

化合物193的制备

如下文中所述制备化合物193。

步骤1-4-氯-6-氟-2-氧代-2h-1-苯并吡喃-3-甲醛的合成：

在0℃将pocl3(25.8ml)一次性加入dmf(40ml)中。将得到的混合物在50℃加热0.5h，然后在50℃加入6-氟-4-羟基香豆素(10g,55.5mmol)在dmf(30ml)中的溶液。将反应混合物进一步在60℃加热过夜。将混合物在真空中浓缩，用甲苯(2×50ml)处理和蒸发。加入dcm(400ml)，将得到的混合物倒在冰上并搅拌10min，同时保持温度在0℃左右。将有机相分离，干燥和在真空中蒸发以得到12.5g粗产物。将标题中间体不经进一步纯化和表征用于下一步。

步骤2-8-氟-4-氧代-1,4-二氢[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-甲酸乙酯的合成：

将4-氯-6-氟-2-氧代-2h-色烯-3-甲醛(12.5g,粗制物质)和甘氨酸乙酯盐酸盐(8.1g,58.3mmol)悬浮于无水乙醇(120ml)中。在0℃加入tea(3当量)，然后将得到的混合物在相同温度搅拌1小时并在80℃搅拌24小时。将混合物在真空中浓缩，溶解在dcm(400ml)中，并用饱和nahco3(200ml)洗涤。将有机相经na2so4干燥和在真空中蒸发。将粗制物质用etoh(10ml)处理以得到标题化合物(7.9g,28.7mmol,经两个步骤51％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝276.0

步骤3-8-氟-2-(羟基甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮的合成：

将8-氟-4-氧代-1,4-二氢[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-甲酸酯(7.9g,28.7mmol)溶解在无水thf(240ml)中。将溶液冷却至-10℃，然后缓慢地加入lialh4(1m的在thf中的溶液，38.2ml)。将反应混合物在0℃搅拌4小时，然后通过加入na2so4·10h2o而猝灭。将无机盐滤出并将溶剂蒸发以回收标题产物(3.2g,13.7mmol,48％收率)，将其不经任何进一步纯化用于下一步。lc-ms(m-h⁺)＝234.1

步骤4-8-氟-4-氧代-1,4-二氢[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-甲醛的合成：

向8-氟-2-(羟基甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(1.2g,5.15mmol)在dmso(12ml)中的溶液中，加入戴斯-马丁过碘烷(2.4g,5.66mmol)。将混合物在室温搅拌30min，然后加入饱和nahco3/10％na2s2o31:1的水溶液。将沉淀物过滤，用水洗涤并用mecn(4ml)和乙醚(10ml)处理以得到标题中间体(1.1g,4.76mmol,92％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝232.1

步骤5-3-氨基-5-氟吡啶-2(1h)-酮的合成：

将5-氟-3-硝基吡啶-2-醇(10g,63.3mmol)溶解在乙醇(300ml)中，加入10％pd/c(1.8g)，并将混合物在氢气气压下在室温搅拌2h。通过过滤除去pd/c，并在真空中蒸发溶剂以得到作为灰白色固体的标题化合物(7,5g,58.5mmol,y＝92％)。lc-ms(m-h⁺)＝129.0

步骤6-{4-[(5-氟-2-羟基吡啶-3-基)氨基]环己基}氨基甲酸叔丁酯的合成：

将3-氨基-5-氟吡啶-2(1h)-酮(3.7g,28.9mmol)和(4-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯(8g,37.6mmol)溶解在dmf(213ml)中。逐滴加入tfa(18.4ml,240mmol)，随后加入三乙酰氧基硼氢化钠(9.19g,43.4mmol)。将混合物在室温搅拌1.5h，然后将反应物用饱和nahco3猝灭。将混合物用乙酸乙酯萃取，经na2so4干燥并在减压下蒸发。将残余物通过快速色谱法(snapc-18400g,从100％水+0.1％甲酸至50:50水+0.1％甲酸/乙腈+0.1％甲酸)纯化以得到作为甲酸盐的标题化合物。将该物质溶解在乙酸乙酯中，用饱和nahco3饱和溶液洗涤，经na2so4干燥和在减压下蒸发以得到作为异构体混合物的目标化合物的游离碱(5.8g,17.8mmol,60％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝326.3

步骤7-[4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基甲酸叔丁酯的合成：

向{4-[(5-氟-2-羟基吡啶-3-基)氨基]环己基}氨基甲酸叔丁酯(5.8g,17.8mmol)和碳酸钾(9.9g,71.3mmol)在dmf(110ml)中的悬浮液中加入氯乙酰氯(3.1ml,39.2mmol)。将混合物在室温搅拌30分钟，然后加热至80℃保持5h。将混合物冷却至0℃，然后加入饱和nahco3(50ml)，随后加入乙酸乙酯(200ml)。将有机相分离，经na2so4干燥和在真空中蒸发。将粗产物通过硅胶柱(从100％的cy至cy/乙酸乙酯50:50)纯化以得到作为异构体混合物的标题化合物(3.79g,10.4mmol,58％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝366.4

步骤8-1-(反式-4-氨基环己基)-7-氟-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮的合成：

将[4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基甲酸叔丁酯(3.79g,10.4mmol)溶解在dcm(70ml)中，在0℃加入tfa(10ml)。然后将混合物在室温搅拌2h。将溶剂在真空中蒸发，并将残余物通过scx柱纯化，并然后在碱性条件(0.1％(v/v)氨水溶液/乙腈)下通过制备型hplc纯化以得到反式非对映异构体(1.15g,4.3mmol,41％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝266.0

步骤9-8-氟-2-({[反式-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(盐酸盐,化合物193)的合成：

将8-氟-4-氧代-1,4-二氢[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-甲醛(158mg,0.41mmol)和1-(反式-4-氨基环己基)-7-氟-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮(100mg,0.37mmol)悬浮于无水二氯甲烷(20ml)中。加入2滴乙酸。将混合物在50℃搅拌2小时，然后一次性加入nabh(oac)3(195mg,0.925mmol)。将混合物在室温搅拌3h，然后在dcm(50ml)和饱和nahco3(20ml)之间分配。将有机相经na2so4干燥、过滤并在真空中蒸发。将粗产物通过scx柱纯化，将得到的游离碱溶解在dcm/meoh(20:1,12ml)中，将混合物冷却至0℃并加入hcl(1m的在乙醚中的溶液)。在室温搅拌10min以后，将溶剂在真空中蒸发，并将固体用乙醚处理和干燥以得到170mg(0.29mmol,78％收率)标题产物。lc-ms(m-h⁺)＝481.3。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm1.55-1.73(m,2h),1.86(d,j＝10.74hz,2h),2.26(d,j＝11.51hz,2h),2.34-2.47(m,2h),3.24(br.s.,1h),4.03-4.17(m,1h),4.37(br.s.,2h),4.72(s,2h),6.95(s,1h),7.37(td,j＝8.77,2.96hz,1h),7.53(dd,j＝9.10,4.60hz,1h),7.82-7.90(m,2h),7.97(dd,j＝9.92,2.47hz,1h),9.33(br.s.,2h),13.40(br.s.,1h)。

化合物194的制备

如下文中所述制备化合物194。

步骤1-8-氟-4-氧代-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1,4-二氢[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-甲醛的合成：

将8-氟-4-氧代-1,4-二氢[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-甲醛(参见化合物193,3.5g,15.2mmol)溶解在无水thf(120ml)中并冷却至0℃。加入tea(4.2ml,30.3mmol)和sem-cl(3.2ml,18.2mmol)。在相同温度搅拌45min以后，在0℃加入nahco3饱和溶液，随后加入乙酸乙酯。将有机相分离，用饱和nh4cl和盐水洗涤，经na2so4干燥和在真空中蒸发。将粗制物质通过si-柱snap100纯化，用95:5至7:3的环己烷/乙酸乙酯洗脱。将得到的残余物用乙醚处理和过滤以得到标题化合物(860mg,2.4mmol,16％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝362.3

步骤2-8-氟-2-[(e)-2-甲氧基乙烯基]-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮的合成：

将(甲氧基甲基)三苯基氯化鏻(1.2g,3.6mmol)在thf(20ml)中的溶液冷却至-78℃。加入lihmds(1m的在thf中的溶液，3.6ml)，并将混合物温热至0℃。将混合物再次冷却至-78℃，并逐滴加入8-氟-4-氧代-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1,4-二氢[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-甲醛(645mg,1.8mmol)在thf(10ml)中的溶液。在-78℃搅拌2小时以后，加入饱和nh4cl，将得到的混合物用乙酸乙酯稀释并将有机相分离、干燥和在真空中蒸发。将粗制物质通过si-柱纯化，用cy至cy/乙酸乙酯7:3洗脱以得到作为顺/反异构体混合物的标题中间体(600mg,1.5mmol,83％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝390.4

步骤3-(8-氟-4-氧代-1,4-二氢[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-基)乙醛的合成：

将tfa(1.5ml)加入8-氟-2-[(e)-2-甲氧基乙烯基]-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(100mg,0.26mmol)在dcm(6ml)中的溶液中。将得到的混合物在40℃搅拌3小时，然后用甲苯(60ml)稀释并在真空下蒸发以得到标题中间体，将其不经进一步纯化用于下一步。lc-ms(m-h⁺)＝246.3

步骤4-4-[(5-氟-2-羟基吡啶-3-基)氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成：

使用4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯根据关于中间体{4-[(5-氟-2-羟基吡啶-3-基)氨基]环己基}氨基甲酸叔丁酯的制备描述的操作(参见化合物193,步骤6)执行合成(51％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝312.3

步骤5-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成：

使用4-[(5-氟-2-羟基吡啶-3-基)氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯根据关于中间体[4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基甲酸叔丁酯的制备描述的操作(参见化合物193,步骤7)执行合成(46％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝352.3

步骤6-7-氟-1-(哌啶-4-基)-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮的合成：

使用4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯根据关于中间体1-(反式-4-氨基环己基)-7-氟-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮的制备描述的操作(参见化合物193,步骤8)执行合成(87％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝252.3

步骤7-8-氟-2-{2-[4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)哌啶-1-基]乙基}[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(化合物194)的合成：

使用(8-氟-4-氧代-1,4-二氢[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-基)乙醛和7-氟-1-(哌啶-4-基)-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮根据关于8-氟-2-({[反式-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮的合成描述的操作(化合物193,步骤9)制备标题化合物(39％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝481.3。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δppm1.70(d,j＝9.74hz,2h),2.18(t,j＝11.40hz,2h),2.44-2.61(m,2h),2.65-2.73(m,2h),2.90(t,j＝7.48hz,2h),3.02(d,j＝11.39hz,2h),3.95-4.08(m,1h),4.71(s,2h),6.50(s,1h),7.29(td,j＝8.71,3.02hz,1h),7.47(dd,j＝8.70,4.53hz,1h),7.75-7.93(m,3h),12.39(br.s.,1h)。

化合物197的制备

如下文中所述制备化合物197。

步骤1-4-[(6-甲氧基-3-硝基吡啶-2-基)氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成：

将4-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.34g,11.7mmol)、2-氯-6-甲氧基-3-硝基吡啶(3g,10.6mmol)和k2co3(1.47g,10.6mmol)在mecn(60ml)和dmf(15ml)中的混合物在60℃加热3h。将混合物过滤并在真空中浓缩。将残余物悬浮于乙醚/水1:1中，将有机相经mgso4干燥并浓缩。将残余物通过快速色谱法(硅胶)纯化以得到标题化合物(2.3g,6.5mmol,61％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝353.3

步骤2-4-[(3-氨基-6-甲氧基吡啶-2-基)氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成：

将4-[(6-甲氧基-3-硝基吡啶-2-基)氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.3g,6.5mmol)溶解在乙酸乙酯/乙醇1:1(60ml)中，加入pd/c(10％wt,0.2g)，并将混合物在氢气气压下在室温搅拌24h。通过过滤除去pd/c，并在真空中蒸发溶剂。将得到的残余物通过si-柱纯化，用cy至cy/乙酸乙酯1:1洗脱以得到标题产物(1.2g,3.7mmol,57％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝323.4。

步骤3-4-({3-[(2-乙氧基-2-氧代乙基)氨基]-6-甲氧基吡啶-2-基}氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成：

将4-[(3-氨基-6-甲氧基吡啶-2-基)氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.2g,3.7mmol)溶解在dmf/mecn1:2(30ml)中，加入碳酸钾(513mg,3.7mmol)，随后加入溴乙酸乙酯(0.43ml,3.8mmol)。将混合物在室温搅拌过夜，然后加入乙酸乙酯，随后加入水。将有机相分离，用盐水洗涤，干燥和在真空中蒸发。将粗制物质通过si-柱纯化，用cy至cy/乙酸乙酯7:3洗脱以得到标题中间体(1.4g,3.4mmol,92％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝409.5

步骤4-4-(6-甲氧基-3-氧代-2,3-二氢吡啶并[2,3-b]吡嗪-4(1h)-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成：

将4-({3-[(2-乙氧基-2-氧代乙基)氨基]-6-甲氧基吡啶-2-基}氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(500mg,1.2mmol)和催化剂乙酸(0.1ml)在甲苯(25ml)中的溶液回流过夜。将反应混合物浓缩，将残余物溶解在dcm(20ml)中并用mno2(2g)在室温处理2小时。将固体过滤并在真空中蒸发溶剂。将粗制物质通过si-柱纯化，用cy至cy/乙酸乙酯8:2洗脱，以得到标题化合物(137mg,0.38mmol,32％收率)。lc-ms(m-na⁺)＝383.3

步骤5-6-甲氧基-4-(哌啶-4-基)吡啶并[2,3-b]吡嗪-3(4h)-酮的合成：

使用4-(6-甲氧基-3-氧代-2,3-二氢吡啶并[2,3-b]吡嗪-4(1h)-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯根据关于中间体1-(反式-4-氨基环己基)-7-氟-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮的制备描述的操作(参见化合物193,步骤8)执行合成(98％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝261.3

步骤6-8-氟-2-{2-[4-(6-甲氧基-3-氧代吡啶并[2,3-b]吡嗪-4(3h)-基)哌啶-1-基]乙基}[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮的合成：

使用(8-氟-4-氧代-1,4-二氢[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-基)乙醛和6-甲氧基-4-(哌啶-4-基)吡啶并[2,3-b]吡嗪-3(4h)-酮根据关于8-氟-2-({[反式-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮的合成描述的操作(化合物193,步骤9)制备标题化合物(11％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝490.5。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δppm1.62(d,j＝10.43hz,2h),2.13(t,j＝11.05hz,2h),2.66-2.77(m,2h),2.85-3.01(m,4h),3.12(d,j＝11.39hz,2h),3.92(s,3h),5.25(br.s.,1h),6.52(s,1h),6.84(d,j＝8.64hz,1h),7.29(td,j＝8.71,3.02hz,1h),7.48(dd,j＝9.06,4.53hz,1h),7.81(dd,j＝8.92,3.02hz,1h),8.07(s,1h),8.12(d,j＝8.64hz,1h),12.40(br.s.,1h)。

化合物200的制备

如下文中所述制备化合物200。

步骤1-3-氯-6-甲氧基吡嗪-2-胺的合成：

向6-甲氧基吡嗪-2-胺(3g,24mmol)在无水dmf(35ml)中的溶液中，加入n-氯琥珀酰亚胺(3.2g,24mmol)。将反应混合物在室温搅拌16h，然后倒入冰和盐水(130ml)中。将水溶液用乙酸乙酯(3×120ml)萃取，将有机相用5％licl溶液洗涤，经na2so4干燥和在减压下蒸发。将粗制物通过snap-340-nh(从95:5直到8:2的环己烷/乙酸乙酯)和通过snap100-si-oh(用dcm洗脱)纯化以得到标题中间体(1.98g,12.5mmol,52％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝160.1

步骤2-4-[(3-氯-6-甲氧基吡嗪-2-基)氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成：

在0℃将氯化钛(iv)溶液(1m在二氯甲烷中的溶液，5.8ml)逐滴加入3-氯-6-甲氧基吡嗪-2-胺(1.85g,11.6mmol)、4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.55g,12.8mmol)和三乙胺(4.85ml,34.8mmol)在无水二氯甲烷(58ml)中的搅拌溶液中。将反应混合物缓慢地温热至室温并搅拌过夜。然后在室温向得到的混合物中加入氰基硼氢化钠(2.18g,34.8mmol)在meoh(23ml)中的溶液。4小时以后，将反应混合物用3mnaoh溶液(180ml)猝灭。然后加入etoac(600ml)，并将混合物在硅藻土垫(10cm直径,3cm高度)上过滤。分离各相，并将有机层用碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，经硫酸钠干燥并在减压下蒸发。将粗制物通过快速色谱法(biotagekp-sil100gsnap柱，从100％dcm至dcm/meoh95:5的洗脱液)纯化以得到标题化合物(1g,2.9mmol,25％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝343.4

步骤3-4-({3-[(1e)-3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基]-6-甲氧基吡嗪-2-基}氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成：

将4-[(3-氯-6-甲氧基吡嗪-2-基)氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.764g,2.23mmol)、pd(ptbu3)3(0.08g,0.156mmol,7％mol)和丙烯酸乙酯(0.29ml,2.67mmol)悬浮于三乙胺(5.0ml)中。将得到的混合物在130℃搅拌90min，然后冷却并在水和etoac之间分配。将水层用etoac萃取2次，将合并的有机层用盐水洗涤，经na2so4干燥并在真空下浓缩。将得到的粗制物通过sio2上的柱色谱法(从9:1至1:1的环己烷/etoac)纯化以得到标题化合物(448mg,1.1mmol,49％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝407.5

步骤4-4-(3-甲氧基-6-氧代吡啶并[2,3-b]吡嗪-5(6h)-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成：

将中间体4-({3-[(1e)-3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基]-6-甲氧基吡嗪-2-基}氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.34g,0.85mmol)溶解在meoh(17ml)中，加入碳酸钾(234mg,1.69mmol)并将混合物在65℃搅拌24h。将挥发物在真空下除去，将残余物在etoac和h2o之间分配并将水层用etoac萃取。将合并的有机层用盐水洗涤并经na2so4干燥。在真空下除去溶剂以得到粗制物，将其通过柱色谱法(从环己烷/etoac7:3至etoac)纯化以得到标题化合物(177mg,0.49mmol,58％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝361.4

步骤5-3-甲氧基-5-(哌啶-4-基)吡啶并[2,3-b]吡嗪-6(5h)-酮的合成：

使用4-(3-甲氧基-6-氧代吡啶并[2,3-b]吡嗪-5(6h)-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯根据关于中间体1-(反式-4-氨基环己基)-7-氟-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮的制备描述的操作(参见化合物193,步骤8)执行合成(92％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝261.3

步骤6-8-氟-2-{2-[4-(6-甲氧基-3-氧代吡啶并[2,3-b]吡嗪-4(3h)-基)哌啶-1-基]乙基}[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(盐酸盐,化合物200)的合成：

使用(8-氟-4-氧代-1,4-二氢[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-基)乙醛和3-甲氧基-5-(哌啶-4-基)吡啶并[2,3-b]吡嗪-6(5h)-酮根据关于8-氟-2-({[反式-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮的合成描述的操作(化合物193,步骤9)制备标题化合物(12％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝490.4。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δppm2.08(d,j＝13.69hz,2h),3.32-3.43(m,6h),3.55-3.66(m,2h),3.87(d,j＝10.76hz,2h),4.18(s,3h),5.87(br.s.,1h),6.64-6.78(m,2h),7.24(td,j＝8.56,2.93hz,1h),7.45(dd,j＝9.29,4.40hz,1h),7.64(dd,j＝8.31,2.93hz,1h),7.96(d,j＝9.29hz,1h),8.21(s,1h)。

化合物201的制备

如下文中所述制备化合物201。

步骤1-{反式-4-[(6-甲氧基-3-硝基吡啶-2-基)氨基]环己基}氨基甲酸叔丁酯的合成：

向(反式-4-氨基环己基)氨基甲酸叔丁酯(1.7g,8mmol)和tea(1.1ml,8mmol)在乙腈(53ml)中的溶液中，加入2-氯-6-甲氧基-3-硝基吡啶(1.5g,7.95mmol)。将反应混合物在90℃加热过夜，然后冷却，过滤，并将滤液浓缩。将残余物用50ml热的乙酸乙酯处理，过滤并浓缩。将残余物溶解在dcm中，并用饱和nh4cl洗涤。将有机相经na2so4干燥并浓缩以得到标题化合物(1.5g,6.7mmol,84％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝367.4

步骤2-{反式-4-[(3-氨基-6-甲氧基吡啶-2-基)氨基]环己基}氨基甲酸叔丁酯的合成：

使用{反式-4-[(6-甲氧基-3-硝基吡啶-2-基)氨基]环己基}氨基甲酸叔丁酯根据关于4-[(3-氨基-6-甲氧基吡啶-2-基)氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成描述的操作(参见化合物197,步骤2)制备标题化合物(94％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝337.4

步骤3-n-[2-({反式-4-[(叔丁氧基羰基)氨基]环己基}氨基)-6-甲氧基吡啶-3-基]甘氨酸乙酯的合成：

使用{反式-4-[(3-氨基-6-甲氧基吡啶-2-基)氨基]环己基}氨基甲酸叔丁酯根据关于4-({3-[(2-乙氧基-2-氧代乙基)氨基]-6-甲氧基吡啶-2-基}氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成描述的操作(参见化合物197,步骤3)制备标题化合物(62％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝423.5

步骤4-[反式-4-(6-甲氧基-3-氧代吡啶并[2,3-b]吡嗪-4(3h)-基)环己基]氨基甲酸叔丁酯的合成：

使用n-[2-({反式-4-[(叔丁氧基羰基)氨基]环己基}氨基)-6-甲氧基吡啶-3-基]甘氨酸乙酯根据关于4-(6-甲氧基-3-氧代-2,3-二氢吡啶并[2,3-b]吡嗪-4(1h)-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成描述的操作(参见化合物197,步骤4)制备标题化合物(51％收率)。lc-ms(m-na⁺)＝397.5

步骤5-4-(反式-4-氨基环己基)-6-甲氧基吡啶并[2,3-b]吡嗪-3(4h)-酮的合成：

使用[反式-4-(6-甲氧基-3-氧代吡啶并[2,3-b]吡嗪-4(3h)-基)环己基]氨基甲酸叔丁酯根据关于1-(反式-4-氨基环己基)-7-氟-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮的合成描述的操作(参见化合物193,步骤8)制备标题化合物(87％收率)。lc-ms(m-na⁺)＝275.3

步骤6-8-氟-2-({[反式-4-(6-甲氧基-3-氧代吡啶并[2,3-b]吡嗪-4(3h)-基)环己基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(甲酸盐,化合物201)的合成：

使用4-(反式-4-氨基环己基)-6-甲氧基吡啶并[2,3-b]吡嗪-3(4h)-酮根据关于8-氟-2-({[反式-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮的合成描述的操作(化合物193,步骤9)制备标题化合物(17％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝490.3。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δppm1.21-1.32(m,2h),1.67(d,j＝10.27hz,2h),2.10(d,j＝11.98hz,2h),2.41-2.56(m,1h),2.72(br.s.,2h),3.83-3.96(m,5h),4.96-5.49(m,1h),6.58(s,1h),6.83(d,j＝8.56hz,1h),7.29(td,j＝8.80,2.93hz,1h),7.48(dd,j＝9.05,4.65hz,1h),7.95(dd,j＝9.05,2.93hz,1h),8.00-8.07(m,1h),8.10(d,j＝8.56hz,1h),8.22(s,1h),12.61(br.s,2h)。

化合物202的制备

如下文中所述制备化合物202。

步骤1-n-(6-氯吡啶-2-基)-2,2-二甲基丙酰胺的合成：

在0℃向2-氨基-6-氯吡啶(10.7g,83.5mmol)在甲苯(103ml)中的溶液中加入nahco3(14g,167mmol)和新戊酰氯(15.4ml,125.2mmol)。将得到的混合物在室温搅拌5小时，然后将悬浮液过滤，并将固体用dcm洗涤。将滤液在真空下浓缩，然后加入庚烷(22ml)，并将得到的混合物浓缩。将固体过滤，用庚烷(15ml)洗涤和在真空下干燥以得到标题中间体(15.4g,72.4mmol,87％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝213.2

步骤2-n-(6-氯-3-甲酰基吡啶-2-基)-2,2-二甲基丙酰胺的合成：

向n-(6-氯吡啶-2-基)-2,2-二甲基丙酰胺(10.6g,50mmol)在thf(100ml)中的溶液中，加入正丁基锂(2.5m在己烷中的溶液，50ml,125mmol)。将得到的混合物在-20℃搅拌3h。加入dmf(4ml)以后，将反应混合物温热至室温并然后用0.5mhcl猝灭。加入乙酸乙酯，将有机相用水、饱和k2co3和盐水洗涤。将粗制物质通过si-柱纯化，用cy至cy/乙酸乙酯7:3洗脱，以得到标题产物(6.7g,27.8mmol,56％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝241.3

步骤3-3-[6-氯-2-(2,2-二甲基丙烷酰氨基)吡啶-3-基]-3-羟基丙酸叔丁酯的合成：

给烘干的烧瓶装入thf(80ml)和二异丙胺(8.2ml,58.4mmol)。将溶液冷却至-78℃，然后加入正丁基锂(2.5m在己烷中的溶液，23.3ml,58.3mmol)。将混合物搅拌15min，然后加入乙酸叔丁酯(7.8ml,58.3mmol)在thf(2ml)中的溶液。在-78℃搅拌20min以后，加入n-(6-氯-3-甲酰基吡啶-2-基)-2,2-二甲基丙酰胺(6.7g,27.8mmol)在thf(5ml)中的溶液。将混合物温热至室温，然后倒入饱和nh4cl中。将得到的混合物用乙酸乙酯萃取并将有机相干燥和在真空中蒸发以得到标题化合物(9.4g,26.4mmol,95％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝357.3

步骤4-7-氯-1,8-萘啶-2(1h)-酮的合成：

将中间体3-[6-氯-2-(2,2-二甲基丙烷酰氨基)吡啶-3-基]-3-羟基丙酸叔丁酯(4g,11mmol)溶解在1mhcl/二烷1:1(50ml)中并回流过夜。将冰加入混合物并将得到的固体过滤和干燥以得到标题产物(1.7g,9.4mmol,86％收率)，将其不经任何进一步纯化地使用。lc-ms(m-h⁺)＝181.1

步骤5-7-甲氧基-1,8-萘啶-2(1h)-酮的合成：

向7-氯-1,8-萘啶-2(1h)-酮(700mg,3.9mmol)在meoh(15ml)中的悬浮液中，加入naome(25％的在meoh中的溶液,20ml)。将得到的溶液回流搅拌15h，然后在真空中除去溶剂。加入水(100ml)和etoac(80ml)，分离各相，并将水层用etoac(8×80ml)萃取。将合并的有机层用盐水(50ml)洗涤，经mgso4干燥、过滤并在减压下浓缩以得到标题化合物(630mg,3.6mmol,92％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝177.2

步骤6-4-(7-甲氧基-2-氧代-1,8-萘啶-1(2h)-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成：

将cs2co3(828mg,2.6mmol)和4-溴哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.35g,5.1mmol)依次加入7-甲氧基-1,8-萘啶-2(1h)-酮(150mg,0.85mmol)在dmf(15ml)中的溶液中。将反应混合物在50℃搅拌过夜，然后在etoac和水之间分配。将有机相经na2so4干燥、过滤并在真空中蒸发。将粗制物质通过硅胶色谱法(从100:0至50:50的环己烷/etoac)纯化以得到标题产物(70mg,0.2mmol,22％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝360.4

步骤7-7-甲氧基-1-(哌啶-4-基)-1,8-萘啶-2(1h)-酮的合成：

使用4-(7-甲氧基-2-氧代-1,8-萘啶-1(2h)-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯根据关于1-(反式-4-氨基环己基)-7-氟-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮的合成描述的操作(参见化合物193,步骤8)制备标题中间体(72％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝260.3

步骤8-8-氟-2-{2-[4-(7-甲氧基-2-氧代-1,8-萘啶-1(2h)-基)哌啶-1-基]乙基}[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(盐酸盐,化合物202)的合成：

使用(8-氟-4-氧代-1,4-二氢[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-基)乙醛和7-甲氧基-1-(哌啶-4-基)-1,8-萘啶-2(1h)-酮根据关于8-氟-2-({[反式-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮的合成描述的操作(化合物193,步骤9)制备标题化合物(11％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝489.3。¹hnmr(500mhz,甲醇-d4)δppm1.95-2.11(m,2h),3.30-3.40(m,6h),3.55-3.63(m,2h),3.81-3.88(m,2h),4.08(s,3h),6.03(br.s.,1h),6.50(d,j＝9.39hz,1h),6.69(s,1h),6.75(d,j＝8.41hz,1h),7.22(td,j＝8.71,2.93hz,1h),7.43(dd,j＝9.10,4.40hz,1h),7.62(dd,j＝8.61,2.93hz,1h),7.83(d,j＝9.39hz,1h),7.98(d,j＝8.61hz,1h)。

化合物204和205的制备

如下文中所述制备化合物204和205。

步骤1-{4-[(2-溴-5-氟吡啶-3-基)氨基]环己基}氨基甲酸叔丁酯的合成：

使用2-溴-5-氟吡啶-3-胺按照关于中间体{4-[(5-氟-2-羟基吡啶-3-基)氨基]环己基}氨基甲酸叔丁酯的制备描述的操作(参见化合物193,步骤6)得到作为异构体混合物的标题化合物(98％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝388.2

步骤2-(2e)-3-[3-({4-[(叔丁氧基羰基)氨基]环己基}氨基)-5-氟吡啶-2-基]丙-2-烯酸乙酯的合成：

使用{4-[(2-溴-5-氟吡啶-3-基)氨基]环己基}氨基甲酸叔丁酯按照关于中间体4-({3-[(1e)-3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基]-6-甲氧基吡嗪-2-基}氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备描述的操作(参见化合物200,步骤3)得到作为异构体混合物的标题化合物(66％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝408.5

步骤3-4-({3-[(1e)-3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基]-6-甲氧基吡嗪-2-基}氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成：

使用(2e)-3-[3-({4-[(叔丁氧基羰基)氨基]环己基}氨基)-5-氟吡啶-2-基]丙-2-烯酸乙酯按照关于中间体4-(3-甲氧基-6-氧代吡啶并[2,3-b]吡嗪-5(6h)-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备描述的操作(参见化合物200,步骤4)得到作为异构体混合物的标题化合物(17％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝374.3

步骤4-1-(4-氨基环己基)-7-甲氧基-1,5-萘啶-2(1h)-酮的合成：

使用4-({3-[(1e)-3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基]-6-甲氧基吡嗪-2-基}氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯按照关于中间体1-(反式-4-氨基环己基)-7-氟-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮的制备描述的操作(参见化合物193,步骤8)得到作为异构体混合物的标题化合物(73％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝274.1

步骤5-8-氟-2-({[反式-4-(7-甲氧基-2-氧代-1,5-萘啶-1(2h)-基)环己基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(盐酸盐,化合物204)和8-氟-2-({[顺式-4-(7-甲氧基-2-氧代-1,5-萘啶-1(2h)-基)环己基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(盐酸盐,化合物205)的合成：

使用作为异构体混合物的1-(4-氨基环己基)-7-甲氧基-1,5-萘啶-2(1h)-酮根据关于8-氟-2-({[反式-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮的合成描述的操作(化合物193,步骤9)制备标题化合物。

通过制备型hplc(a＝0.1％氨水溶液,b＝乙腈，从98:2a:b至100％b)纯化，随后在以前描述的条件下用hcl处理，得到反式(20％收率)和顺式(15％收率)非对映异构体。

化合物204:lc-ms(m-h⁺)＝489.2；¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm1.62-1.91(m,4h),2.20-2.40(m,2h),2.67(br.s.,2h),3.28(br.s.,1h),4.01(s,3h),4.34-4.86(m,3h),6.60(d,j＝9.59hz,1h),6.95(d,j＝1.57hz,1h),7.38(td,j＝8.75,3.03hz,1h),7.53(dd,j＝9.10,4.50hz,1h),7.63(br.s.,1h),7.78-7.92(m,2h),8.32(d,j＝2.15hz,1h),9.33(br.s.,2h),13.41(br.s.,1h)。

化合物205:lc-ms(m-h⁺)＝489.2；¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm1.65(d,j＝11.74hz,2h),2.00(m,j＝13.89hz,2h),2.17(d,j＝14.28hz,2h),2.76(m,j＝12.13hz,2h),3.40-3.56(m,1h),4.01(s,3h),4.39-4.51(m,2h),4.59-4.92(m,1h),6.62(d,j＝9.59hz,1h),6.99(d,j＝1.76hz,1h),7.38(td,j＝8.75,3.03hz,1h),7.53(dd,j＝9.10,4.60hz,1h),7.67(s,1h),7.78-7.92(m,2h),8.33(d,j＝2.15hz,1h),9.23(br.s.,2h),13.49(s,1h)。

化合物206的制备

如下文中所述制备化合物206。

步骤1-[4-(5-氰基-2-碘苯胺基)环己基]氨基甲酸叔丁酯的合成：

使用3-氨基-4-碘苄腈按照关于中间体{4-[(5-氟-2-羟基吡啶-3-基)氨基]环己基}氨基甲酸叔丁酯的制备描述的操作(参见化合物193,步骤6)得到作为异构体混合物的标题化合物(24％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝442.2

步骤2-(2e)-3-[2-({4-[(叔丁氧基羰基)氨基]环己基}氨基)-4-氰基苯基]丙-2-烯酸乙酯的合成：

使用[4-(5-氰基-2-碘苯胺基)环己基]氨基甲酸叔丁酯按照关于中间体4-({3-[(1e)-3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基]-6-甲氧基吡嗪-2-基}氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备描述的操作(参见化合物200,步骤3)得到作为异构体混合物的标题化合物(88％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝414.4

步骤3-3-[2-({4-[(叔丁氧基羰基)氨基]环己基}氨基)-4-氰基苯基]丙酸乙酯的合成：

将(2e)-3-{2-[(4-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}环己基)氨基]-4-氰基苯基}丙-2-烯酸乙酯(37.9g,91.7mmol)溶解在乙酸乙酯(379ml)中，加入10％pd/c(7.6g)并将混合物在氢气氛下(1个大气压)搅拌过夜。通过过滤除去催化剂，并在真空中蒸发溶剂以得到作为异构体混合物的标题中间体(35.7g,85.9mmol,y＝94％,lc-ms(m-h⁺)＝416.4

步骤4-3-[2-({4-[(叔丁氧基羰基)氨基]环己基}氨基)-4-氰基苯基]丙酸的合成：

将3-{2-[(4-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}环己基)氨基]-4-氰基苯基}丙酸乙酯(43.5g,0.11mol)溶解在thf/h2o(455/136ml)中，加入lioh·h2o(8.8g,0.21mol)并将混合物在室温搅拌过夜。将溶剂在真空中蒸发，将残余物用乙腈处理，过滤并在真空中浓缩。将粗制的标题产物(异构体的混合物)不经任何进一步纯化地用于下一步。

步骤5-[反式-4-(7-氰基-2-氧代-3,4-二氢喹啉-1(2h)-基)环己基]氨基甲酸叔丁酯的合成：

将3-[2-({4-[(叔丁氧基羰基)氨基]环己基}氨基)-4-氰基苯基]丙酸(0.11mol来自前一步)溶解在dmf(910ml)中，加入tea(30.5ml,0.22mol)并将混合物冷却至0℃。在相同温度加入hatu(41.6g,0.11mol)，并使混合物缓慢地达到室温。搅拌过夜以后，将混合物在水(1l)和etoac(500ml)之间分配。将有机相用盐水洗涤和经na2so4干燥。将挥发物在真空下除去并将粗残余物通过si-柱(从8:2至1:1的环己烷/乙酸乙酯)纯化以得到标题反式非对映异构体(14.4g,39mmol,经两个步骤35％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝370.2

步骤6-[反式-4-(7-氰基-2-氧代喹啉-1(2h)-基)环己基]氨基甲酸叔丁酯的合成：

将[反式-4-(7-氰基-2-氧代-3,4-二氢喹啉-1(2h)-基)环己基]氨基甲酸叔丁酯(13.7g37.2mmol)溶解在dce(274ml)中，加入n-溴琥珀酰亚胺(8.6g,48.4mmol)和2,2′-偶氮双(2-甲基丙腈)(917mg,5.6mmol)并将混合物在80℃搅拌4h。加入水(100ml)，将有机相分离，用盐水(80ml)洗涤和在真空中蒸发以得到粗制的标题产物，将其不经任何进一步纯化地用于下一步。lc-ms(m-h⁺)＝368.3

步骤7-1-(反式-4-氨基环己基)-2-氧代-1,2-二氢喹啉-7-甲腈的合成：

使用[反式-4-(7-氰基-2-氧代喹啉-1(2h)-基)环己基]氨基甲酸叔丁酯根据关于1-(反式-4-氨基环己基)-7-氟-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮的合成描述的操作(参见化合物193,步骤8)制备标题中间体(定量收率)。lc-ms(m-h⁺)＝268.2

步骤8-1-(反式-4-{[(8-氟-4-氧代-1,4-二氢[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-基)甲基]氨基}环己基)-2-氧代-1,2-二氢喹啉-7-甲腈(盐酸盐,化合物206)的合成：

使用1-(反式-4-氨基环己基)-2-氧代-1,2-二氢喹啉-7-甲腈根据关于8-氟-2-({[反式-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮的合成描述的操作(化合物193,步骤9)制备标题化合物(12％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝483.3。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δppm1.66-1.90(m,4h),2.19-2.40(m,2h),2.61-2.82(m,2h),3.08-3.42(m,1h),4.40(br.s.,2h),4.64(br.s.,1h),6.70(d,j＝8.51hz,1h),6.96(br.s.,1h),7.37(td,j＝8.71,2.88hz,1h),7.53(dd,j＝9.13,4.60hz,1h),7.66(d,j＝8.10hz,1h),7.85-7.93(m,2h),7.96(d,j＝9.61hz,1h),8.40(br.s.,1h),9.44(br.s.,1h),13.53(br.s.,1h)。

化合物207的制备

如下文中所述制备化合物207。

步骤1-{4-[(2-溴-5-氟吡啶-3-基)氨基]环己基}氨基甲酸叔丁酯的合成：

使用2-溴-5-氟吡啶-3-胺按照关于中间体{4-[(5-氟-2-羟基吡啶-3-基)氨基]环己基}氨基甲酸叔丁酯的制备描述的操作(参见化合物193,步骤6)得到作为异构体混合物的标题化合物(98％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝388.2

步骤2-(2e)-3-[3-({4-[(叔丁氧基羰基)氨基]环己基}氨基)-5-氟吡啶-2-基]丙-2-烯酸乙酯的合成：

使用{4-[(2-溴-5-氟吡啶-3-基)氨基]环己基}氨基甲酸叔丁酯按照关于中间体4-({3-[(1e)-3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基]-6-甲氧基吡嗪-2-基}氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备描述的操作(参见化合物200,步骤3)得到作为异构体混合物的标题化合物(66％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝408.5

步骤3-3-[3-({4-[(叔丁氧基羰基)氨基]环己基}氨基)-5-氟吡啶-2-基]丙酸乙酯的合成：

使用(2e)-3-[3-({4-[(叔丁氧基羰基)氨基]环己基}氨基)-5-氟吡啶-2-基]丙-2-烯酸乙酯按照关于中间体3-[2-({4-[(叔丁氧基羰基)氨基]环己基}氨基)-4-氰基苯基]丙酸乙酯的制备描述的操作(参见化合物206,步骤3)得到作为异构体混合物的标题化合物(97％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝410.5

步骤4-[反式-4-(7-氟-2-氧代-3,4-二氢-1,5-萘啶-1(2h)-基)环己基]氨基甲酸叔丁酯的合成：

将3-[3-({4-[(叔丁氧基羰基)氨基]环己基}氨基)-5-氟吡啶-2-基]丙酸酯(1.8g,4.5mmol)溶解在thf(20ml)中，加入t-buona(0.87g,9mmol)并将混合物在50℃搅拌4h。加入乙酸乙酯，随后加入水。将有机相分离，经na2so4干燥和在真空中蒸发。将粗制物通过si-柱(cy至cy/乙酸乙酯1:1)纯化以得到180mg标题反式非对映异构体(0.18g,0.5mmol,11％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝364.4

步骤5-[反式-4-(7-氟-2-氧代-1,5-萘啶-1(2h)-基)环己基]氨基甲酸叔丁酯的合成：

使用[反式-4-(7-氟-2-氧代-3,4-二氢-1,5-萘啶-1(2h)-基)环己基]氨基甲酸叔丁酯按照关于中间体[反式-4-(7-氰基-2-氧代喹啉-1(2h)-基)环己基]氨基甲酸叔丁酯的合成描述的操作(参见化合物206,步骤6)制备标题化合物(96％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝362.2

步骤6-1-(反式-4-氨基环己基)-7-氟-1,5-萘啶-2(1h)-酮的合成：

使用[反式-4-(7-氟-2-氧代-1,5-萘啶-1(2h)-基)环己基]氨基甲酸叔丁酯按照关于中间体1-(反式-4-氨基环己基)-7-氟-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮的制备描述的操作(参见化合物193,步骤8)得到标题化合物(98％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝262.2

步骤7-8-氟-2-({[反式-4-(7-氟-2-氧代-1,5-萘啶-1(2h)-基)环己基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(甲酸盐,化合物207)的合成：

使用1-(反式-4-氨基环己基)-7-氟-1,5-萘啶-2(1h)-酮根据关于8-氟-2-({[反式-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮的合成描述的操作(化合物193,步骤9)制备标题化合物(18％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝477.2；¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm1.28-1.46(m,2h),1.56-1.70(m,2h),1.93-2.12(m,2h),2.57(br.s.,2h),3.90(s,2h),4.45(br.s.,1h),6.59(s,1h),6.72(d,j＝9.29hz,1h),7.28(td,j＝8.80,2.93hz,1h),7.46(dd,j＝9.05,4.65hz,1h),7.86(d,j＝9.29hz,1h),7.94(dd,j＝8.80,2.93hz,1h),8.18(s,1h),8.28(d,j＝9.78hz,1h),8.52(d,j＝1.96hz,1h),12.62(br.s.,1h)。

化合物208的制备

如下文中所述制备化合物208。

步骤1-[反式-4-(5-甲氧基-2-硝基苯胺基)环己基]氨基甲酸叔丁酯的合成：

在密闭试管中将2-氯-4-甲氧基-1-硝基苯(2.0g,10.7mmol)、n-boc-反式-1,4-环己烷二胺(2.3g,10.7mmol)和三乙胺(1.8ml,12.8mmol)在乙腈(80ml)中的悬浮液在130℃加热3天。将混合物冷却至室温，将挥发物在真空下除去，并将粗制物通过柱色谱法(从环己烷/etoac85:15至环己烷/etoac/meoh6:3:1)纯化以得到标题化合物(1.2g,3.3mmol,31％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝366.4

步骤2-[反式-4-(2-氨基-5-甲氧基苯胺基)环己基]氨基甲酸叔丁酯的合成：

使用[反式-4-(5-甲氧基-2-硝基苯胺基)环己基]氨基甲酸叔丁酯和作为溶剂的meoh，根据关于4-[(3-氨基-6-甲氧基吡啶-2-基)氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成描述的操作(参见化合物197,步骤2)制备标题化合物(94％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝336.4

步骤3-n-[2-({反式-4-[(叔丁氧基羰基)氨基]环己基}氨基)-4-甲氧基苯基]甘氨酸乙酯的合成：

使用[反式-4-(2-氨基-5-甲氧基苯胺基)环己基]氨基甲酸叔丁酯根据关于4-({3-[(2-乙氧基-2-氧代乙基)氨基]-6-甲氧基吡啶-2-基}氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成描述的操作(参见化合物197,步骤3)制备标题化合物(63％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝422.5

步骤4-[反式-4-(7-甲氧基-2-氧代喹喔啉-1(2h)-基)环己基]氨基甲酸叔丁酯的合成：

使用n-[2-({反式-4-[(叔丁氧基羰基)氨基]环己基}氨基)-4-甲氧基苯基]甘氨酸乙酯根据关于4-(6-甲氧基-3-氧代-2,3-二氢吡啶并[2,3-b]吡嗪-4(1h)-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成描述的操作(参见化合物197,步骤4)制备标题化合物(59％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝374.4

步骤5-1-(反式-4-氨基环己基)-7-甲氧基喹喔啉-2(1h)-酮的合成：

使用[反式-4-(7-甲氧基-2-氧代喹喔啉-1(2h)-基)环己基]氨基甲酸叔丁酯根据关于1-(反式-4-氨基环己基)-7-氟-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮的合成描述的操作(参见化合物193,步骤8)制备标题化合物(96％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝274.3

步骤6-8-氟-2-({[反式-4-(7-甲氧基-2-氧代喹喔啉-1(2h)-基)环己基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(甲酸盐,化合物208)的合成：

使用1-(反式-4-氨基环己基)-7-甲氧基喹喔啉-2(1h)-酮根据关于8-氟-2-({[反式-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮的合成描述的操作(化合物193,步骤9)制备标题化合物(20％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝489.2。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm1.31-1.50(m,2h),1.69(d,j＝10.63hz,2h),2.07(d,j＝10.85hz,2h),2.52-2.70(m,3h),3.91(s,3h),3.94(s,2h),4.58(br.s.,1h),6.62(s,1h),7.01(dd,j＝8.82,2.36hz,1h),7.20(br.s.,1h),7.30(td,j＝8.74,3.01hz,1h),7.47(dd,j＝9.10,4.60hz,1h),7.74(d,j＝8.88hz,1h),7.88-8.00(m,2h),8.18(s,1h),12.72(br.s.,1h)。

化合物209和210的制备

如下文中所述制备化合物209和210。

步骤1-n-(5-氟-3-硝基吡啶-2-基)甘氨酸乙酯的合成：

使用n-(5-氟-3-硝基吡啶-2-基)甘氨酸盐根据关于中间体4-({3-[(2-乙氧基-2-氧代乙基)氨基]-6-甲氧基吡啶-2-基}氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备描述的操作(参见化合物197,步骤3)执行合成(95％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝244.2

步骤2-4-[(3-氨基-6-甲氧基吡啶-2-基)氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成：

使用5-氟-3-硝基吡啶-2-胺根据关于中间体4-[(3-氨基-6-甲氧基吡啶-2-基)氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备描述的操作(参见化合物197,步骤2)执行合成(47％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝214.0

步骤3-n-[3-({4-[(叔丁氧基羰基)氨基]环己基}氨基)-5-氟吡啶-2-基]甘氨酸乙酯的合成：

使用4-[(3-氨基-6-甲氧基吡啶-2-基)氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯按照关于中间体{4-[(5-氟-2-羟基吡啶-3-基)氨基]环己基}氨基甲酸叔丁酯的制备描述的操作(参见化合物193,步骤6)得到作为异构体混合物的标题化合物(69％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝411.4

步骤4-[4-(7-氟-2-氧代吡啶并[2,3-b]吡嗪-1(2h)-基)环己基]氨基甲酸叔丁酯的合成：

使用n-[3-({4-[(叔丁氧基羰基)氨基]环己基}氨基)-5-氟吡啶-2-基]甘氨酸乙酯按照关于中间体4-(6-甲氧基-3-氧代-2,3-二氢吡啶并[2,3-b]吡嗪-4(1h)-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备描述的操作(参见化合物197,步骤4)得到作为异构体混合物的标题化合物(43％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝363.4

步骤5-1-(4-氨基环己基)-7-氟吡啶并[2,3-b]吡嗪-2(1h)-酮的合成：

使用[4-(7-氟-2-氧代吡啶并[2,3-b]吡嗪-1(2h)-基)环己基]氨基甲酸叔丁酯按照关于中间体1-(反式-4-氨基环己基)-7-氟-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮(参见化合物193,步骤8)的制备描述的操作得到作为异构体混合物的标题化合物(94％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝263.1

步骤6-8-氟-2-({[反式-4-(7-氟-2-氧代吡啶并[2,3-b]吡嗪-1(2h)-基)环己基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(甲酸盐,化合物209)和8-氟-2-({[顺式-4-(7-氟-2-氧代吡啶并[2,3-b]吡嗪-1(2h)-基)环己基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(甲酸盐,化合物210)的合成：

使用作为异构体混合物的1-(4-氨基环己基)-7-氟吡啶并[2,3-b]吡嗪-2(1h)-酮根据关于8-氟-2-({[反式-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(化合物193,步骤9)的合成描述的操作制备标题化合物。

通过制备型hplc(a＝0.1％氨水溶液,b＝乙腈，从98:2a:b至100％b)纯化，得到反式(10％收率)和顺式(6％收率)非对映异构体。

化合物209:lc-ms(m-h⁺)＝478.4。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm1.41(m,j＝11.80hz,2h),1.70(d,j＝11.29hz,2h),2.06(d,j＝10.29hz,2h),2.51-2.58(m,2h),2.67(br.s.,1h),3.96(s,2h),4.47-4.79(m,1h),6.63(s,1h),7.30(td,j＝8.78,3.01hz,1h),7.48(dd,j＝9.03,4.52hz,1h),7.95(dd,j＝9.03,3.01hz,1h),8.21(s,1h),8.29(s,1h),8.45(d,j＝11.04hz,1h),8.58(d,j＝2.26hz,1h)。

化合物210:lc-ms(m-h⁺)＝478.4。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm1.50(d,j＝9.39hz,2h),1.67(t,j＝12.91hz,2h),1.95(d,j＝14.09hz,2h),2.69-2.80(m,2h),2.92(br.s.,1h),3.90(s,2h),4.92(br.s.,1h),6.65(s,1h),7.21-7.31(m,1h),7.45(dd,j＝9.00,4.70hz,1h),7.87(dd,j＝9.00,3.13hz,1h),8.19(s,1h),8.33(s,1h),8.47(d,j＝10.56hz,1h),8.54(d,j＝2.35hz,1h)。

化合物211的制备

从2,4-二氟-1-硝基苯开始，根据关于化合物208的合成描述的操作，制备化合物8-氟-2-({[反式-4-(7-氟-2-氧代喹喔啉-1(2h)-基)环己基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(甲酸盐,化合物211)。

lc-ms(m-h⁺)＝477.4。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm1.32-1.50(m,2h),1.68(d,j＝10.56hz,2h),2.05(d,j＝11.35hz,2h),2.37-2.64(m,3h),3.93(s,2h),4.56(br.s.,1h),6.62(s,1h),7.24(td,j＝8.41,2.35hz,1h),7.29(td,j＝8.71,2.93hz,1h),7.47(dd,j＝9.00,4.70hz,1h),7.86(dd,j＝8.80,6.46hz,2h),7.95(dd,j＝9.19,2.93hz,1h),8.06(s,1h),8.23(s,1h),10.48-13.49(m,2h)。

化合物212和213的制备

如下文中所述制备化合物212和213。

步骤1-[4-(7-甲氧基-2-氧代吡啶并[2,3-b]吡嗪-1(2h)-基)环己基]氨基甲酸叔丁酯的合成：

将200mg(0.55mmol)如前面所述(在化合物209和210的合成中的步骤4，异构体的混合物)制备的[4-(7-氟-2-氧代吡啶并[2,3-b]吡嗪-1(2h)-基)环己基]氨基甲酸叔丁酯溶解在meoh(10ml)中。加入naome(25wt％的在meoh中的溶液，25ml)并将混合物在50℃搅拌3h。将溶剂在真空中蒸发，加入dcm，并将溶液用饱和nahco3洗涤。将有机相分离，经na2so4干燥并在真空中浓缩以得到210mg(0.55mmol,定量收率)标题产物，将其不经任何进一步纯化用于下一步。lc-ms(m-h⁺)＝375.4

步骤2-1-(4-氨基环己基)-7-甲氧基吡啶并[2,3-b]吡嗪-2(1h)-酮的合成：

使用[4-(7-甲氧基-2-氧代吡啶并[2,3-b]吡嗪-1(2h)-基)环己基]氨基甲酸叔丁酯按照关于中间体1-(反式-4-氨基环己基)-7-氟-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮的制备描述的操作(参见化合物193,步骤8)得到作为异构体混合物的标题化合物(82％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝275.2

步骤3-8-氟-2-({[反式-4-(7-甲氧基-2-氧代吡啶并[2,3-b]吡嗪-1(2h)-基)环己基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(盐酸盐,化合物212)和8-氟-2-({[顺式-4-(7-甲氧基-2-氧代吡啶并[2,3-b]吡嗪-1(2h)-基)环己基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(盐酸盐,化合物213)的合成：

使用作为异构体混合物的1-(4-氨基环己基)-7-甲氧基吡啶并[2,3-b]吡嗪-2(1h)-酮，根据关于8-氟-2-({[反式-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮的合成描述的操作(化合物193,步骤9)制备标题化合物。

通过制备型hplc(a＝0.1％氨水溶液,b＝乙腈，从98:2a:b至100％b)纯化，随后在标准条件下形成盐酸盐，得到反式(43％收率)和顺式(10％收率)非对映异构体。

化合物212:lc-ms(m-h⁺)＝490.1。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm1.69-1.79(m,2h),1.84(d,j＝10.98hz,2h),2.25-2.34(m,2h),2.56-2.71(m,2h),3.17-3.35(m,1h),4.03(s,3h),4.37-4.45(m,2h),4.67(br.s.,1h),6.96(d,j＝1.65hz,1h),7.38(td,j＝8.78,3.02hz,1h),7.53(dd,j＝9.19,4.53hz,1h),7.69-7.81(m,1h),7.88(dd,j＝8.65,2.88hz,1h),8.16(s,1h),8.35(d,j＝2.47hz,1h),9.42(br.s.,2h),13.54(br.s.,1h)。

化合物213:lc-ms(m-h⁺)＝490.1。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm1.69(d,j＝10.96hz,2h),2.01(m,j＝13.59hz,2h),2.18(d,j＝14.03hz,2h),2.66-2.80(m,2h),3.49(br.s.,1h),4.03(s,3h),4.40-4.45(m,2h),4.62-4.78(m,1h),6.99(d,j＝1.75hz,1h),7.38(td,j＝8.77,3.07hz,1h),7.53(dd,j＝9.21,4.38hz,1h),7.76(d,j＝2.19hz,1h),7.87(dd,j＝8.33,3.07hz,1h),8.18(s,1h),8.36(d,j＝2.19hz,1h),9.25(br.s.,2h),13.49(s,1h)。

化合物214和215的制备

如下文中所述制备化合物214和215。

步骤1-(氨基氧基)(6-羟基-5-硝基吡啶-3-基)甲酮的合成：

将6-羟基-5-硝基吡啶-3-甲酸(3.3g,17.9mmol)溶解在dmf(16ml)中。在室温逐份加入cdi(3.2g,19.7mmol)。将得到的混合物在60℃搅拌2小时，然后冷却至室温。加入30％氨水(23ml)并将得到的混合物搅拌20min。将沉淀物过滤，用水(5ml)洗涤并干燥以得到标题产物(2.85g,15.5mmol,86％收率)，将其不经任何进一步纯化用于下一步。lc-ms(m-h⁺)＝184.1

步骤2-6-羟基-5-硝基吡啶-3-甲腈的合成：

在0℃将氯氧化磷(v)(0.66ml,7.1mmol)加入dmf(11ml)中，并将得到的混合物在相同温度搅拌15min。逐份加入中间体(氨基氧基)(6-羟基-5-硝基吡啶-3-基)甲酮(1.1g,6.0mmol)。将反应混合物在50℃加热1小时，然后冷却至0℃。加入水(12ml)，将沉淀物通过过滤进行收集并用另外的水(6ml)洗涤。将乙腈加入固体并在真空下蒸发几次以除去残余的水。将得到的标题化合物(0.74g,4.5mmol,75％收率)不经任何进一步纯化地用于下一步。lc-ms(m-h⁺)＝166.1

步骤3-5-氨基-6-羟基吡啶-3-甲腈的合成：

使用6-羟基-5-硝基吡啶-3-甲腈和作为溶剂的meoh/dmf，根据关于4-[(3-氨基-6-甲氧基吡啶-2-基)氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成描述的操作(参见化合物197,步骤2)制备标题化合物(96％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝136.1

步骤4-{4-[(5-氰基-2-羟基吡啶-3-基)氨基]环己基}氨基甲酸叔丁酯的合成：

使用5-氨基-6-羟基吡啶-3-甲腈按照关于中间体{4-[(5-氟-2-羟基吡啶-3-基)氨基]环己基}氨基甲酸叔丁酯的制备描述的操作(参见化合物193,步骤6)得到作为异构体混合物的标题化合物(15％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝333.3

步骤5-[4-(7-氰基-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基甲酸叔丁酯的合成：

将dipea(4.0ml,23.4mmol)和氯乙酰氯(934μl,11.7mmol)加入{4-[(5-氰基-2-羟基吡啶-3-基)氨基]环己基}氨基甲酸叔丁酯(390mg,1.17mmol)在dmf(24ml)中的搅拌溶液中。将反应混合物在密封烧瓶中在150℃加热1小时，然后冷却并在etoac和盐水与饱和nahco3的1/1混合物之间分配。将水层用etoac萃取3次，并将合并的有机层用盐水洗涤。将挥发物在真空下除去并将残余物通过硅胶上的柱色谱法(从环己烷/etoac85:15至环己烷/etoac/meoh6:3:1)纯化。通过nh-sio2上的柱色谱法(从6:4至0:100的环己烷/etoac)进一步纯化，得到作为异构体混合物的标题产物(208mg,1mmol,48％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝373.3

步骤6-1-(4-氨基环己基)-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-7-甲腈的合成：

使用[4-(7-氰基-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基甲酸叔丁酯根据关于1-(反式-4-氨基环己基)-7-氟-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮的合成描述的操作(参见化合物193,步骤8)制备作为异构体混合物的标题中间体(98％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝273.3

步骤7-1-(反式-4-{[(8-氟-4-氧代-1,4-二氢[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-基)甲基]氨基}环己基)-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-7-甲腈(甲酸盐,化合物214)和1-(顺式-4-{[(8-氟-4-氧代-1,4-二氢[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-基)甲基]氨基}环己基)-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-7-甲腈(甲酸盐,化合物215)的合成：

使用作为异构体的混合物的1-(4-氨基环己基)-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-7-甲腈，根据关于8-氟-2-({[反式-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮的合成描述的操作(化合物193,步骤9)制备标题化合物。

通过制备型hplc(a＝0.1％氨水溶液,b＝乙腈，从98:2a:b至100％b)纯化，随后在标准条件下形成甲酸盐，得到反式(21％收率)和顺式(15％收率)非对映异构体。

化合物214:lc-ms(m-h⁺)＝488.2。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm1.35(q,j＝11.74hz,2h),1.75(d,j＝10.96hz,2h),2.06(d,j＝11.35hz,2h),2.25-2.40(m,2h),2.61-2.71(m,1h),3.99(s,2h),4.04-4.14(m,1h),4.83(s,2h),6.65(s,1h),7.30(td,j＝8.71,2.93hz,1h),7.47(dd,j＝9.00,4.70hz,1h),7.95(dd,j＝9.00,3.13hz,1h),8.21(s,1h),8.31(d,j＝1.56hz,1h),8.35(d,j＝1.96hz,1h),12.35-13.58(m,1h)。

化合物215:lc-ms(m-h⁺)＝488.2。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm1.46(d,j＝10.27hz,2h),1.57(t,j＝13.69hz,2h),1.86(d,j＝13.69hz,2h),2.51-2.61(m,2h),2.81(br.s.,1h),3.86(s,2h),4.29(t,j＝11.98hz,1h),4.87(s,2h),6.61(s,1h),7.28(td,j＝8.80,2.93hz,1h),7.46(dd,j＝9.05,4.65hz,1h),7.87(dd,j＝9.05,3.18hz,1h),8.17(s,1h),8.30(d,j＝1.96hz,1h),8.35(d,j＝1.96hz,1h),12.58(br.s.,1h)。

化合物216的制备

从5-氟-2-碘苯胺开始，根据关于化合物206的合成描述的操作制备化合物8-氟-2-({[反式-4-(7-氟-2-氧代喹啉-1(2h)-基)环己基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(盐酸盐,化合物216)。

lc-ms(m-h⁺)＝476.1。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm1.43-1.79(m,4h),2.18(br.s.,2h),2.57-2.77(m,2h),2.80-3.13(m,1h),4.19(br.s.,2h),4.32-5.63(m,1h),6.47(d,j＝5.87hz,1h),6.81(br.s.,1h),7.13(td,j＝8.44,2.20hz,1h),7.34(td,j＝8.56,2.93hz,1h),7.51(dd,j＝9.05,4.65hz,1h),7.66-7.81(m,2h),7.86(d,j＝9.29hz,1h),7.91(dd,j＝8.80,2.93hz,1h),8.32-10.31(m,1h),13.13(br.s.,1h)。

化合物217的制备

如下文中所述制备化合物217。

步骤1-1-[(二苯基亚甲基)氨基]-4-氧代环己烷-1,3-二甲酸二乙酯的合成：

将n-(二苯基亚甲基)甘氨酸乙酯(10g,37mmol)溶解在thf(100ml)中，并将溶液在n2气氛下在0℃冷却。加入t-buok(20.9g,187mmol)并将混合物在0℃搅拌20min。然后逐滴加入丙烯酸乙酯(20.3ml,187mmol)并将反应混合物在0℃搅拌3h。加入饱和nh4cl溶液，将有机相分离，经na2so4干燥并在真空中浓缩。将含有标题中间体的残余物不经进一步纯化和表征用于下一步。

步骤2-1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-氧代环己烷-1,3-二甲酸二乙酯的合成：

将来自步骤1的残余物溶解在thf(80ml)中并用hcl(2m溶液,50ml)处理。加入乙酸乙酯，将有机层抛弃并将水相用k2co3(ph8)碱化。加入thf，随后加入二碳酸二叔丁酯(1当量)并将得到的混合物在室温搅拌过夜。加入乙酸乙酯，将有机相分离，经na2so4干燥和在真空中蒸发。将粗制物质通过si-柱(cy至cy/etoac1:1)纯化以得到2.8g(7.8mmol，经两个步骤21％收率)标题产物。lc-ms(m-h⁺)＝358.4

步骤3-1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-氧代环己烷-1-甲酸乙酯的合成：

将1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-氧代环己烷-1,3-二甲酸二乙酯(300mg,0.84mmol)溶解在dmso(1ml)中，加入氯化钠(200mg,3.4mmol)和水(0.05ml)并将反应混合物在150℃搅拌4h。将混合物冷却并用乙酸乙酯稀释。将有机层用水洗涤，经mgso4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过si-柱(cy至cy/etoac7:3)纯化以得到185mg(0.64mmol,76％收率)标题产物。lc-ms(m-h⁺)＝286.3

步骤4-反式-1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-[(5-氟-2-羟基吡啶-3-基)氨基]环己烷-1-甲酸乙酯的合成：

使用1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-氧代环己烷-1-甲酸乙酯根据关于中间体{4-[(5-氟-2-羟基吡啶-3-基)氨基]环己基}氨基甲酸叔丁酯的制备描述的操作(参见化合物193,步骤6)执行合成。通过c-18色谱法(从水+0.1％甲酸至水+0.1％甲酸/乙腈+0.1％甲酸8:2)纯化，得到标题化合物(25％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝398.4

步骤5-反式-1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-[(5-氟-2-羟基吡啶-3-基)氨基]环己烷-1-甲酸的合成：

使用反式-1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-[(5-氟-2-羟基吡啶-3-基)氨基]环己烷-1-甲酸乙酯根据关于中间体3-[2-({4-[(叔丁氧基羰基)氨基]环己基}氨基)-4-氰基苯基]丙酸的制备描述的操作(参见化合物206,步骤4)执行合成(98％收率)。lc-ms(m-h^-)＝368.4

步骤6-{反式-1-氨甲酰基-4-[(5-氟-2-羟基吡啶-3-基)氨基]环己基}氨基甲酸叔丁酯的合成：

将中间体反式-1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-[(5-氟-2-羟基吡啶-3-基)氨基]环己烷-1-甲酸(340mg,0.9mmol)溶解在dmf(20ml)中。加入dipea(0.8ml,4.6mmol)和氯化铵(199mg,3.7mmol)并将混合物冷却至0℃。在相同温度加入hatu(426mg,1.1mmol)并使混合物缓慢地达到室温。6小时以后加入水，将混合物用乙酸乙酯萃取，将有机相分离，经na2so4干燥并在真空中浓缩。将得到的粗制物质通过si-柱(从dcm至dcm/meoh8:2)纯化以得到标题化合物(233mg,0.63mmol,68％收率)。lc-ms(m-h-)＝369.3

步骤7-[反式-1-氨甲酰基-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基甲酸叔丁酯的合成：

使用{反式-1-氨甲酰基-4-[(5-氟-2-羟基吡啶-3-基)氨基]环己基}氨基甲酸叔丁酯根据关于中间体[4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基甲酸叔丁酯的制备描述的操作(参见化合物193,步骤7)执行合成(47％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝409.2

步骤8-反式-1-氨基-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己烷-1-甲酰胺的合成：

使用[反式-1-氨甲酰基-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基甲酸叔丁酯根据关于中间体1-(反式-4-氨基环己基)-7-氟-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮的制备描述的操作(参见化合物193,步骤8)执行合成(62％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝309.2

步骤9-反式-1-{[(8-氟-4-氧代-1,4-二氢[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-2-基)甲基]氨基}-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己烷-1-甲酰胺(甲酸盐,化合物217)的合成：

使用反式-1-氨基-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己烷-1-甲酰胺根据关于8-氟-2-({[反式-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮的合成描述的操作(化合物193,步骤9)制备标题化合物(10％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝524.3。¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δppm1.53(td,j＝13.21,3.91hz,2h),1.57-1.66(m,2h),2.24(d,j＝12.23hz,2h),2.41-2.56(m,2h),3.72(s,2h),4.27-4.54(m,1h),4.74(s,2h),6.58(s,1h),7.27-7.33(m,2h),7.48(dd,j＝9.05,4.65hz,1h),7.53(s,1h),7.82(dd,j＝10.03,2.69hz,1h),7.86(d,j＝2.45hz,1h),7.94(dd,j＝9.05,3.18hz,1h),8.18(s,1h),12.40(br.s.,1h)。

化合物219的制备

从2-溴-5-甲氧基苯胺开始，根据关于化合物206的合成描述的操作制备化合物8-氟-2-({[反式-4-(7-甲氧基-2-氧代喹啉-1(2h)-基)环己基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(甲酸盐,化合物219)。

lc-ms(m-h⁺)＝488.3。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm1.32-1.48(m,2h),1.64(d,j＝10.74hz,2h),2.09(d,j＝8.11hz,2h),2.53-2.76(m,3h),3.87(s,3h),3.95(s,2h),4.38(br.s.,1h),6.32(d,j＝7.78hz,1h),6.62(s,1h),6.90(dd,j＝8.61,2.03hz,1h),7.11(d,j＝1.75hz,1h),7.30(td,j＝8.74,3.01hz,1h),7.48(dd,j＝9.10,4.71hz,1h),7.62(d,j＝8.66hz,1h),7.74(d,j＝9.32hz,1h),7.96(dd,j＝9.10,2.96hz,1h),8.18(s,1h),12.83(br.s.,1h)。

化合物220的制备

如下文中所述制备化合物220。

步骤1-{反式-4-[(5-氟-2-羟基吡啶-3-基)氨基]-1-(羟基甲基)环己基}氨基甲酸叔丁酯的合成：

将1.0g(2.5mmol)中间体反式-1-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-[(5-氟-2-羟基吡啶-3-基)氨基]环己烷-1-甲酸乙酯(如在化合物217的合成的步骤4中所述制备)溶解在thf(20ml)中。将溶液冷却至-10℃，然后逐滴加入lialh4(1m的在thf中的溶液，2.5ml,2.5mmol)。搅拌2h以后，将反应物通过加入na2so4·10h2o而猝灭。将混合物过滤并在真空中浓缩。将粗制物质溶解在乙酸乙酯中，并用饱和nh4cl洗涤。将有机相分离，经na2so4干燥并在真空中浓缩以得到标题产物(614mg,1.8mmol,69％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝356.2

步骤2-{反式-1-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-4-[(5-氟-2-羟基吡啶-3-基)氨基]环己基}氨基甲酸叔丁酯的合成：

向{反式-4-[(5-氟-2-羟基吡啶-3-基)氨基]-1-(羟基甲基)环己基}氨基甲酸叔丁酯(344mg,0.96mmol)在dmf(5ml)中的溶液中，加入咪唑(165mg,2.14mmol)，随后加入tbdmscl(581mg,3.87mmol)。将混合物在室温搅拌过夜，然后加入乙酸乙酯，随后加入水。将有机相分离，经na2so4干燥并在真空中浓缩。将粗制物质通过si-柱(从cy至cy/乙酸乙酯1:1)纯化以得到标题化合物(300mg,0.64mmol,67％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝470.4

步骤3-[反式-1-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基甲酸叔丁酯的合成：

向{反式-1-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-4-[(5-氟-2-羟基吡啶-3-基)氨基]环己基}氨基甲酸叔丁酯(253mg,0.54mmol)和碳酸钾(224mg,1.62mmol)在dmf(5.2ml)中的悬浮液中加入氯乙酰氯(52μl,0.65mmol)。将混合物在80℃搅拌6h，然后冷却至0℃。加入饱和nahco3，随后加入乙酸乙酯。将有机相分离，经na2so4干燥，并将溶剂在真空中蒸发以得到标题中间体(220mg,0.43mmol,80％收率)，将其不经任何进一步纯化用于下一步。lc-ms(m-h⁺)＝510.4

步骤4-1-[反式-4-氨基-4-(羟基甲基)环己基]-7-氟-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮的合成：

向[反式-1-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基甲酸叔丁酯(220mg,0.43mmol)在meoh(1.7ml)中的搅拌溶液中加入hcl(4m在二烷中，2.74ml)。将混合物在室温搅拌4h，然后在减压下浓缩。将残余物通过scx柱纯化以得到标题化合物(98mg,0.33mmol,77％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝296.1

步骤5-8-氟-2-({[反式-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)-1-(羟基甲基)环己基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(盐酸盐,化合物220)的合成：

使用1-[反式-4-氨基-4-(羟基甲基)环己基]-7-氟-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮根据关于8-氟-2-({[反式-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮的合成描述的操作(化合物193,步骤9)制备标题化合物(30％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝511.2。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm1.66-1.96(m,4h),2.02-2.19(m,2h),2.46(br.s.,2h),3.93(s,2h),4.00(br.s.,1h),4.36(br.s.,2h),4.73(s,2h),6.92(d,j＝1.97hz,1h),7.37(td,j＝8.77,3.07hz,1h),7.52(dd,j＝9.21,4.60hz,1h),7.77-8.03(m,3h),9.04(br.s.,2h),13.49(br.s.,1h)。

化合物221的制备

如下文中所述制备化合物221。

步骤1-8-氟-2-({[反式-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基}甲基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮的合成：

将1-(4-氨基环己基)-7-氟-1h,2h,3h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2-酮(133mg,0.5mmol,参见化合物193的合成中的步骤8)悬浮于无水二氯乙烷(20ml)中。在室温加入8-氟-4-氧代-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1h,4h-色烯并[4,3-b]吡咯-2-甲醛(200mg,0.55mmol,参见化合物194的合成中的步骤1)，随后加入冰醋酸(催化量，2滴)。将反应混合物在50℃搅拌4小时，然后冷却至室温。加入三乙酰氧基硼氢化钠(264mg,1.25mmol)，并将得到的悬浮液在室温搅拌过夜。将反应混合物在二氯甲烷和饱和nahco3水溶液之间分配。将两个层分离并将有机相经na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。将残余物通过快速色谱法(silican-h,28g柱,从70:30至50:50的环己烷/乙酸乙酯)纯化以得到作为灰白色固体的标题化合物(127mg,0.2mmol,41％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝611.3

步骤2-2-({(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)[反式-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基}甲基)-8-氟-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮的合成：

向8-氟-2-({[反式-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基}甲基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(56mg,0.09mmol)在无水二氯乙烷(2ml)中的溶液中加入2-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]乙醛(0.034ml,0.18mmol)和冰醋酸(1滴)。将反应混合物在40℃加热1h，然后加入nabh(oac)3(38mg,0.18mmol)并将得到的混合物搅拌过夜。将混合物在二氯甲烷和饱和nahco3水溶液之间分配。将两个层分离并将有机相经na2so4干燥、过滤并在真空中浓缩。将粗制物质通过1gscx柱用甲醇和2n的nh3在甲醇中的溶液洗脱。蒸发溶剂得到标题中间体(50mg,0.065mmol,72％收率)，将其不经任何进一步纯化用于下一步。lc-ms(m-h⁺)＝769.6

步骤3-8-氟-2-({[反式-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基](2-羟基乙基)氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(甲酸盐,化合物221)的合成：

使用2-({(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)[反式-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基}甲基)-8-氟-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮根据关于中间体1-(反式-4-氨基环己基)-7-氟-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮的制备描述的操作(参见化合物193,步骤8)执行合成(77％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝525.3。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm1.58-2.45(m,8h),2.83-2.91(m,2h),3.52(br.s.,2h),3.88-4.17(m,4h),4.64-4.72(m,2h),6.68(br.s.,1h),7.26(td,j＝8.71,2.93hz,1h),7.44(dd,j＝9.00,4.70hz,1h),7.74(dd,j＝9.98,2.54hz,1h),7.80(d,j＝2.74hz,1h),7.92(dd,j＝9.00,3.13hz,1h),8.12(s,1h)。

化合物301的制备

如下文中所述制备化合物301。

步骤1-3-(3-羟基吡啶-2-基)-3-氧代丙酸乙酯的合成：

将在碳酸二乙酯(20ml)和甲苯(20ml)的混合物中的1-(3-羟基吡啶-2-基)乙烷-1-酮(2.50g,18.2mmol)用nah(60％,3.3g,82mmol)逐份处理并在室温搅拌1h。加入甲苯的另一部分(10ml)并继续搅拌另外5h。将反应混合物加入饱和nh4cl水溶液和etoac的混合物中。将水相用etoac萃取并将合并的有机级分用盐水洗涤，经na2so4干燥和蒸发。将残余物通过fcc(0-10％的etoac在dcm中的溶液)纯化以得到作为淡黄色油的标题化合物(3.27g,86％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝210。¹hnmr(400mhz,cdcl3):δ11.28(s,1h),8.22(dd,j＝1.4,4.2hz,1h),7.43(dd,j＝4.2,8.5hz,1h),7.35(dd,j＝1.4,8.5hz,1h),4.22(s,2h),4.21(q,j＝7.1hz,2h),1.26(t,j＝7.1hz,3h)。

步骤2-4-羟基-2h-吡喃并[3,2-b]吡啶-2-酮的合成：

将在二甲苯(100ml)中的3-(3-羟基吡啶-2-基)-3-氧代丙酸乙酯(3.27g,15.6mmol)用nah(60％,63mg,1.6mmol)处理。将反应混合物加热至回流并将一些溶剂(～15ml)蒸馏出。继续在回流下加热7h。冷却至室温以后，将固体通过过滤进行收集，用甲苯洗涤并在真空下干燥以得到作为棕色固体的标题化合物(2.16g,85％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝164。¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ8.55(dd,j＝1.2,4.4hz,1h),7.80(dd,j＝1.2,8.4hz,1h),7.64(dd,j＝4.4,8.4hz,1h),5.58(s,1h)。

步骤3-4-氯-2-氧代-2h-吡喃并[3,2-b]吡啶-3-甲醛的合成：

将磷酰氯(1.7ml,18mmol)加入冰冷却的4-羟基-2h-吡喃并[3,2-b]吡啶-2-酮(1.00g,6.13mmol)和dmf(5ml)的混合物中。将混合物在室温搅拌10min，然后在60℃加热1.5h。将反应物冷却至室温，倒在冰上，并用dcm(×3)萃取。将合并的有机萃取物用水洗涤，然后干燥(na2so4)和蒸发以得到作为棕色固体的标题化合物(1.69g,定量收率)。lc-ms(m-cl+h2o⁺)＝192。¹hnmr(400mhz,cdcl3):δ10.42(s,1h),8.81(dd,j＝1.4,4.3hz,1h),7.76(dd,j＝1.4,8.5hz,1h),7.69(dd,j＝4.3,8.5hz,1h)。

步骤4-4-氧代-1,4-二氢吡咯并[2',3':4,5]吡喃并[3,2-b]吡啶-2-甲醛的合成：

将4-氯-2-氧代-2h-吡喃并[3,2-b]吡啶-3-甲醛(76％,0.513g,1.86mmol)溶解在乙醇(10ml)中并用氨基乙醛二甲基缩醛(0.215g,2.05mmol)处理，随后用et3n(0.54ml,3.9mmol)处理。将反应物在70℃搅拌50min。将反应混合物冷却，加入甲苯并然后蒸发。将残余物在etoac和水之间分配。将水相用乙酸乙酯萃取。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，干燥(na2so4)和蒸发。将得到的固体溶解在acoh(20ml)中。加入水(0.8ml)并将反应物在110℃搅拌50min。将反应混合物冷却，加入甲苯和蒸发(×2)。将残余物通过fcc(etoac，然后10％的meoh在dcm中的溶液)纯化以得到作为黄色固体的标题化合物(0.248g,62％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝215。

步骤5-2-(反式-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基}甲基)吡咯并[2',3':4,5]吡喃并[3,2-b]吡啶-4(1h)-酮(化合物301)的合成：

使用4-氧代-1,4-二氢吡咯并[2',3':4,5]吡喃并[3,2-b]吡啶-2-甲醛根据关于8-氟-2-({[反式-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮的合成描述的操作(化合物193,步骤9)制备标题化合物(75％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝464.3。¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ8.54(dd,j＝1.3,4.6hz,1h),7.88-7.83(m,3h),7.50(dd,j＝4.6,8.4hz,1h),6.63(s,1h),4.68(s,2h),4.06-3.99(m,1h),3.85(s,2h),2.48-2.41(m,1h),2.34-2.24(m,2h),1.99-1.93(m,2h),1.72-1.67(m,2h),1.30-1.20(m,2h)。

化合物302的制备

如下文中所述制备化合物302。

步骤1-2-氯-5-甲氧基吡啶-3-醇的合成：

将2-氯-5-甲氧基吡啶-3-基硼酸(1.0g,5.35mmol)悬浮于甲醇(20ml)中并冷却至0℃。向得到的悬浮液中逐滴加入50％过氧化氢水溶液(2.5ml)并将反应混合物在室温搅拌5小时。将反应物冷却至0℃并用饱和硫代硫酸钠水溶液(5ml)处理，随后用水(50ml)处理，并用二氯甲烷萃取。将合并的有机萃取物蒸发至干燥。将得到的残余物通过快速柱色谱法纯化，用0-100％乙酸乙酯/异己烷洗脱，以得到标题化合物(506mg,60％收率)。¹hnmr(400mhz,dmso):δ10.75(s,1h),7.67(d,j＝2.8hz,1h),6.97(d,j＝2.8hz,1h),3.84(s,3h)。

步骤2-[反式-4-(2-氯乙酰氨基)环己基]氨基甲酸叔丁酯的合成：

将(反式-4-氨基环己基)氨基甲酸叔丁酯(10.7g,50mmol)溶解在dcm(200ml)中，冷却至0℃并用三乙胺(6.1g,60.4mmol)处理。然后历时10-15分钟逐滴加入氯乙酰氯(5.65g,50mmol)，并将反应物在室温搅拌过夜。将反应物用水(100ml)猝灭，将各相分离并将合并的dcm级分经mgso4干燥、过滤和蒸发。将得到的残余物用异己烷洗涤，过滤并在真空中干燥以得到标题化合物(11.12g,76％收率)。¹hnmr(400mhz,cdcl3):δ6.37(d,j＝7.3hz,1h),4.40-4.39(m,1h),4.02(s,2h),3.79-3.69(m,1h),3.50-3.43(m,1h),2.08-1.98(m,4h),1.45(s,9h),1.42-1.20(m,4h)。

步骤3-[反式-4-(7-甲氧基-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基甲酸叔丁酯的合成：

将2-氯-5-甲氧基吡啶-3-醇(506mg,3.18mmol)溶解在dmf(20ml)中并加入[反式-4-(2-氯乙酰氨基)环己基]氨基甲酸叔丁酯(926mg,1当量)和cs2co3(2.5g,2.4当量)。将反应混合物在120℃加热18h。冷却至室温以后，将混合物过滤并蒸发至干燥。将残余物通过快速柱色谱法纯化，用0-100％乙酸乙酯/异己烷洗脱以得到标题化合物(756mg,63％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝378。¹hnmr(400mhz,dmso):δ7.63(d,j＝2.5hz,1h),7.39(d,j＝2.5hz,1h),6.85(d,j＝7.1hz,1h),4.68(s,2h),4.16-4.06(m,1h),3.90(s,3h),2.47-2.34(m,2h),1.90(d,j＝11.1hz,2h),1.77(d,j＝10.1hz,2h),1.44(s,11h)。

步骤4-1-[反式-4-氨基环己基]-7-甲氧基-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮(盐酸盐)的合成：

将[反式-4-(7-甲氧基-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基甲酸叔丁酯(756mg,2.01mmol)溶解在1,4-二烷(15ml)中。加入4n的hcl在二烷中的溶液(15ml)并将反应混合物在室温搅拌1h，随后加入另外15ml的4n的hcl在二烷中的溶液。将反应混合物在室温搅拌1h，用乙醚稀释并过滤以产生白色固体。将沉淀物用乙醚洗涤并在真空中干燥以得到作为hcl盐的标题化合物(675mg,96％收率)。¹hnmr(400mhz,dmso):δ8.16(d,j＝1.6hz,3h),7.60(d,j＝2.5hz,1h),7.41(d,j＝2.5hz,1h),4.64(s,2h),4.13-4.05(m,1h),3.85(s,3h),3.11(d,j＝4.4hz,1h),2.42-2.32(m,2h),2.05(d,j＝11.4hz,2h),1.78(d,j＝10.5hz,2h),1.61-1.50(m,2h)。

步骤5-8-氟-2-({[反式-4-(7-甲氧基-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基}甲基)[1]苯并吡喃并[4,3-b]吡咯-4(1h)-酮(化合物302)的合成：

将1-[反式-4-氨基环己基]-7-甲氧基-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮hcl(307mg,878μmol)溶解在甲醇(10ml)中并用三乙胺(354mg,4当量)处理，随后用分子筛(500mg)和8-氟-4-氧代-1,4-二氢色烯并[4,3-b]吡咯-2-甲醛(231mg,1当量)处理。将反应混合物在60℃搅拌18h，冷却至室温并用nabh4(134mg,4当量)处理。将得到的混合物在室温搅拌18h，然后冷却，穿过硅藻土过滤并将合并的滤液蒸发。将得到的物质通过快速柱色谱法纯化，用0-100％乙酸乙酯/异己烷洗脱，随后用0-100％甲醇/乙酸乙酯洗脱，以得到123mg粗产物。将该物质与dmf一起研磨，随后与乙醚一起研磨，过滤并在真空中干燥以得到标题化合物(52mg,12.1％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝493。¹hnmr(400mhz,dmso):δ13.35(bs,1h),9.30(bs,1h),7.88(dd,j＝2.6,8.5hz,1h),7.60(d,j＝2.3hz,1h),7.53(dd,j＝4.5,9.1hz,1h),7.44-7.35(m,2h),6.92(s,1h),4.65(s,2h),4.34-4.34(m,2h),4.11(m,1h),3.85(s,3h),3.19(m,1h),2.41(d,j＝11.4hz,2h),2.23(m,2h),1.87(d,j＝1.3hz,2h),1.64-1.63(m,2h)。

化合物303的制备

如下文中所述制备化合物303。

步骤1-4-(2-氯乙酰氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成：

在0℃向4-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.5g,12.5mmol)在二氯甲烷(30ml)和三乙胺(2.25ml,16.1mmol)中的溶液中加入氯乙酰氯(1.1ml,13.8mmol)。将反应混合物温热至室温并继续搅拌1小时。将反应物通过加入饱和nahco3溶液猝灭，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机萃取物蒸发并将残余物通过快速柱色谱法纯化，用乙酸乙酯洗脱，以得到标题化合物(3.5g,100％收率)。¹hnmr(400mhz,cdcl3):δ6.46(d,j＝6.1hz,1h),4.08-4.05(m,1h),4.04(s,2h),4.00-3.89(m,2h),2.88(dd,j＝12.2,12.2hz,2h),1.96-1.89(m,2h),1.46(s,9h),1.44-1.29(m,2h)。

步骤2-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成：

将4-(2-氯乙酰氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.02g,7.31mmol)和2-氯-5-氟吡啶-3-醇(1.08g,7.32mmol)溶解在dmf(70ml)中。加入碳酸铯(4.88g,15mmol)，并将混合物加热至100℃保持18小时。冷却至室温以后，将混合物在乙酸乙酯和水之间分配，并将有机相用水洗涤。然后将有机层在二氧化硅(silica)上蒸发和通过快速柱色谱法纯化，用20-100％乙酸乙酯/异己烷洗脱，以得到标题化合物(2.19g,85％收率)。¹hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.80(d,j＝2.5hz,1h),7.23(dd,j＝2.7,9.0hz,1h),4.70(s,2h),4.43-4.29(m,3h),2.81(m,2h),2.50-2.37(m,2h),1.74(dd,j＝1.5,11.6hz,2h),1.50(s,9h)。

步骤3-7-氟-1-(哌啶-4-基)-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮盐酸盐的合成：

将4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.19g,6.23mmol)溶解在meoh(3ml)中并用2n的hcl在乙醚中的溶液(6ml)在室温处理18小时。将混合物蒸发以得到标题化合物(1.6g)，将其不经进一步纯化地用在下一步中。¹hnmr(400mhz,dmso):δ9.26-9.20(m,1h),8.69-8.67(m,1h),8.02(dd,j＝2.6,10.1hz,1h),7.90(d,j＝2.5hz,1h),4.76(s,2h),4.43-4.34(m,1h),3.37(d,j＝12.3hz,2h),3.12-3.00(m,2h),2.79-2.66(m,2h),1.91(d,j＝12.7hz,2h)。

步骤4-1-[1-(3-氨基-2-羟丙基)哌啶-4-基]-7-氟-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮的合成：

将7-氟-1-(哌啶-4-基)-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮盐酸盐(1.6g,6.23mmol)和2-(氧杂环丙烷-2-基甲基)异吲哚啉-1,3-二酮(1.28g,6.3mmol)悬浮于乙腈(60ml)中并加入三乙胺(4ml)。将混合物在70℃加热20小时，然后冷却至室温并蒸发至干燥。在密闭试管中将残余物(2.8g,6.23mmol)用甲胺(20ml,33％在乙醇中)在50℃处理3小时。将混合物蒸发并通过反相制备型hplc纯化以得到标题化合物(119mg)。lc-ms(m-h⁺)＝325

步骤5-三氟甲磺酸6-氟-2-氧代-2h-1-苯并吡喃-4-基酯的合成：

在0℃在氮气下向6-氟-4-羟基-2h-色烯-2-酮(720mg,4mmol)和三乙胺(1.4ml,10mmol)在二氯甲烷(30ml)中的溶液中，逐滴加入三氟甲磺酸酐(0.74ml,4.4mmol)。使反应物温热至室温并搅拌过夜。然后将混合物倒入乙醚/异己烷(1:1,600ml)中并穿过二氧化硅塞过滤。将滤液蒸发以得到标题化合物(647mg,52％收率)，将其不经进一步纯化地用在下一步中。

步骤6-7-氟-1-(1-{3-[(6-氟-2-氧代-2h-1-苯并吡喃-4-基)氨基]-2-羟丙基}哌啶-4-基)-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮(化合物303)的合成：

在密闭试管中将1-(1-(3-氨基-2-羟丙基)哌啶-4-基)-7-氟-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮(95mg,277μmol)和三氟甲磺酸6-氟-2-氧代-2h-色烯-4-基酯(320mg,1mmol)溶解在乙腈(10ml)和三乙胺(1ml)中并加热至80℃保持2小时。将反应混合物冷却至室温和蒸发至干燥。将粗制物质通过反相制备型hplc纯化以得到标题化合物(25mg,18％收率)。¹hnmr(400mhz,dmso):δ8.07(dd,j＝2.8,10.1hz,1h),7.91(m,2h),7.74(dd,j＝5.6,5.6hz,1h),7.56-7.50(m,1h),7.43(dd,j＝4.8,9.1hz,1h),5.38(s,1h),4.98(d,j＝4.5hz,1h),4.78(s,2h),4.14-4.06(m,1h),3.98-3.93(m,1h),3.44-3.48(m,1h),3.29-3.20(m,1h),3.04(dd,j＝11.5,25.1hz,2h),2.67-2.58(m,1h),2.50-2.38(m,2h),2.25(dd,j＝11.7,15.5hz,2h),1.74-1.68(m,2h)。

化合物314的制备

如下文中所述制备化合物314。

步骤1-5-(苄氧基)-2-(羟基甲基)吡啶-4(1h)-酮的合成：

将5-(苄氧基)-2-(羟基甲基)-4h-吡喃-4-酮(53.2g,229mmol)在ims(75ml)和nh4oh水溶液(400ml)中的悬浮液在70℃搅拌18h。将冷却的溶液用水(400ml)稀释，冷却至5℃并将悬浮液搅拌30min。将固体过滤和在真空下干燥以剩下作为淡棕色固体的标题化合物(42.5g,80％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝232。¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ11.08(brs,1h),7.51-7.28(m,6h),6.16(brs,1h),5.56(brs,1h),5.01(s,2h),4.34(s,2h)。

步骤2-5-(苄氧基)-3-溴-2-(羟基甲基)吡啶-4(1h)-酮的合成：

将5-(苄氧基)-2-(羟基甲基)吡啶-4(1h)-酮(11.6g,50.0mmol)和nbs(10.2g,57.5mmol)在acoh(75ml)中的悬浮液在40℃搅拌1h。将冷却的悬浮液过滤，将固体用acoh(25ml)洗涤和在真空下干燥以剩下作为淡黄色固体的标题化合物(13.7g,89％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝310-312。¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ7.56(s,1h),7.47-7.30(m,5h),5.12(s,2h),4.56(s,2h)。

步骤3-5-溴-6-(羟基甲基)吡啶-3,4-二醇盐酸盐的合成：

将5-(苄氧基)-3-溴-2-(羟基甲基)吡啶-4(1h)-酮(3.07g,9.90mmol)在水(10ml)和浓hcl水溶液(10ml)中的悬浮液在100℃搅拌2h。将混合物冷却至0℃，然后将悬浮液过滤。将固体用etoac(10ml)洗涤然后在真空下干燥以剩下棕色固体(1.93g,76％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝220-222。¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ7.88(s,1h),4.63(s,2h),2.42(s,1h)。

步骤4-(8-溴-2,3-二氢[1,4]二氧杂环己烯并(dioxino)[2,3-c]吡啶-7-基)甲醇的合成：

将5-溴-6-(羟基甲基)吡啶-3,4-二醇盐酸盐(1.93g,7.52mmol)、1,2-二溴乙烷(2.12g,11.3mmol)和k2co3(1.56g,11.3mmol)在dmf(5ml)中的悬浮液在75℃搅拌5h。将冷却的悬浮液在真空下浓缩，然后悬浮于dcm-meoh(98:2,25ml)中并穿过硅藻土过滤。将滤饼用dcm-meoh(98:2,50ml)洗涤，然后将合并的有机层在真空下浓缩以剩下淡棕色结晶固体(1.30g,70％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝246-248。¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ8.08(s,1h),4.66(s,2h),4.50-4.46(m,2h),4.35-4.30(m,2h)。

步骤5-8-溴-2,3-二氢[1,4]二氧杂环己烯并[2,3-c]吡啶-7-甲醛的合成：

将(8-溴-2,3-二氢-[1,4]二氧杂环己烯并[2,3-c]吡啶-7-基)甲醇(1.25g,5.08mmol)和mno2(4.42g,51mmol)在二烷(25ml)中的悬浮液在90℃搅拌5h。将悬浮液冷却至室温，然后穿过硅藻土过滤，并将滤饼用温二烷(40℃,25ml)洗涤。将合并的有机层在真空下浓缩以剩下淡橙色固体(715mg,58％收率)。¹hnmr(300mhz,cdcl3):δ10.16(s,1h),8.29(s,1h),4.54-4.49(m,2h),4.43-4.39(m,2h)。

步骤6-2,3-二氢-9h-[1,4]二氧杂环己烯并[2,3-d]吡咯并[3,2-b]吡啶-8,9-二甲酸9-叔丁基8-甲基酯的合成：

在室温向8-溴-2,3-二氢-[1,4]二氧杂环己烯并[2,3-c]吡啶-7-甲醛(715mg,2.93mmol)和n-boc-2-膦酰基甘氨酸三甲酯(1.09g,3.66mmol)在dcm(20ml)中的溶液中加入dbu(558mg,3.66mmol)，并将得到的混合物在室温搅拌30min。加入柠檬酸水溶液(10％,20ml)，然后将水层用dcm(20ml)萃取。将合并的有机层穿过疏水玻璃料并在真空下浓缩至～3ml体积。fcc(10-35％的etoac在异己烷中的溶液)得到作为灰白色固体的中间体(z)-3-(8-溴-2,3-二氢-[1,4]二氧杂环己烯并[2,3-c]吡啶-7-基)-2-((叔丁氧基羰基)-氨基)丙烯酸甲酯(835mg,69％收率，lc-ms(m-h⁺)＝415-417)。用n2在中间体、k3po4(862mg,4.06mmol)和ms(400mg)在t-buoh(40ml)中的悬浮液中在50℃鼓泡30min。加入brettphospdg3(cas:1470372-59-8；92mg,0.10mmol)，然后将烧瓶抽真空并用n2净化3次。将混合物在85℃搅拌4.5h。将冷却的悬浮液用etoac(40ml)稀释，然后将混合物穿过硅藻土过滤。将滤饼用etoac(40ml)洗涤，然后将合并的有机层在真空下浓缩以剩下胶质(gum)(810mg)。fcc(10-60％的etoac在异己烷中的溶液)得到结晶性的橙色固体(543mg,80％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝335。¹hnmr(300mhz,cdcl3):δ8.22(s,1h),7.26(s,1h),4.47-4.42(m,2h),4.41-4.36(m,2h),3.93(s,3h),1.64(s,9h)。

步骤7-2,3-二氢-9h-[1,4]二氧杂环己烯并[2,3-d]吡咯并[3,2-b]吡啶-8-甲酸甲酯的合成：

将2,3-二氢-9h-[1,4]二氧杂环己烯并[2,3-d]吡咯并[3,2-b]吡啶-8,9-二甲酸9-(叔丁基)8-甲基酯(543mg,1.62mmol)在tfa(2ml)和dcm(10ml)中的溶液回流搅拌1h。将冷却的溶液在真空下浓缩，溶解在meoh(3ml)中，应用于scx-2柱(10g)，并用meoh(40ml)洗涤。将产物用2m的nh3在meoh中的溶液(40ml)洗脱；在真空下浓缩，剩下作为淡黄色固体的标题产物(346mg,91％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝235。¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ12.22(1h,brs),8.08(1h,s),7.12(1h,s),4.50-4.44(2h,m),4.41-4.35(2h,m),3.85(3h,s)。

步骤8-(2,3-二氢-9h-[1,4]二氧杂环己烯并[2,3-d]吡咯并[3,2-b]吡啶-8-基)甲醇的合成：

在0℃在n2下向2,3-二氢-9h-[1,4]二氧杂环己烯并[2,3-d]吡咯并[3,2-b]吡啶-8-甲酸甲酯(344mg,1.47mmol)在无水thf(20ml)中的悬浮液中逐滴加入氢化铝锂(1m的在thf中的溶液，2.9ml,2.9mmol)。将悬浮液在0℃搅拌5min，并然后在室温搅拌1h。将悬浮液冷却至0℃，然后依次加入水(0.12ml)、naoh水溶液(15％、0.12mmol)、水(0.36ml)和na2so4。将悬浮液在室温搅拌30min，然后穿过硅藻土过滤。将滤饼用dcm-meoh(9:1,50ml)洗涤，然后将合并的有机层在真空下浓缩以剩下作为淡黄色固体的标题化合物(110mg,36％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝207。¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ11.18(brs,1h),7.86(s,1h),6.28(s,1h),5.16(t,j＝4.6hz,1h),4.55(d,j＝4.6hz,2h),4.47-4.42(m,2h),4.34-4.29(m,2h)。

步骤9-2,3-二氢-9h-[1,4]二氧杂环己烯并[2,3-d]吡咯并[3,2-b]吡啶-8-甲醛的合成：

将(2,3-二氢-9h-[1,4]二氧杂环己烯并[2,3-d]吡咯并[3,2-b]吡啶-8-基)甲醇(108mg,0.524mmol)和mno2(228mg,2.62mmol)在二烷(5ml)中的悬浮液在90℃搅拌2h。将悬浮液冷却至～50℃，然后穿过硅藻土过滤。将滤饼用二烷(10ml)洗涤，然后将合并的有机层在真空下浓缩以剩下作为黄色固体的标题化合物(84mg,79％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝205。¹hnmr(300mhz,dmso-d6):δ12.32(brs,1h),9.83(s,1h),8.13(s,1h),7.38(s,1h),4.51-4.45(m,2h),4.43-4.37(m,2h)。

步骤10-1-[反式-4-{[(2,3-二氢-9h-[1,4]二氧杂环己烯并[2,3-d]吡咯并[3,2-b]吡啶-8-基)甲基]氨基}环己基]-7-氟-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮(化合物314)的合成：

将1-(反式-4-氨基环己基)-7-氟-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮(106mg,0.400mmol)、2,3-二氢-9h-[1,4]二氧杂环己烯并[2,3-d]吡咯并[3,2-b]吡啶-8-甲醛(82mg,0.40mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(340mg,1.6mmol)和acoh(46μl,0.80mmol)在mecn(10ml)中的溶液在室温搅拌7h。将混合物在真空下浓缩，悬浮于水和饱和nahco3水溶液(1:1,10ml)的混合物中，并用dcm-meoh(19:1,2×10ml)萃取。将合并的有机层穿过疏水玻璃料并在真空下浓缩以剩下橙黄色胶质。fcc(15μm硅胶,2-6％[2m的nh3在meoh中的溶液]在dcm中)，随后与温mecn(50℃)一起研磨，得到作为灰白色固体的标题化合物(89mg,49％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝454.3。¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ11.09(brs,1h),7.86-7.82(m,3h),6.28(s,1h),4.68(s,2h),4.48-4.44(m,2h),4.34-4.31(m,2h),4.01(tt,j＝3.6,12.1hz,1h),3.82(s,2h),2.42(tt,j＝3.5,11.0hz,1h),2.27(dq,j＝2.9,12.6hz,2h),2.14(brs,1h),1.96(明显的brd,j＝11.9hz,2h),1.69(明显的brd,j＝11.9hz,2h),1.24(dq,j＝3.4,12.3hz,2h)。

化合物343的制备

如下文中所述制备化合物343。

步骤1-甲磺酸[(2s)-3,8-二氧代-1,2-二氢-3h,8h-2a,5,8a-三氮杂苊(triazaacenaphthylen)-2-基]甲酯的合成：

向冰冷却的(2s)-2-(羟基甲基)-1,2-二氢-3h,8h-2a,5,8a-三氮杂苊-3,8-二酮(如在wo2009/141398中制备，0.500g,2.28mmol)在dcm(35ml)中的悬浮液中加入et3n(0.48ml,3.4mmol)，然后历时3min加入甲磺酰氯(0.21ml,2.7mmol)。将混合物在室温搅拌45min，然后直接通过fcc(2-10％的meoh在dcm中的溶液)纯化以得到标题化合物(0.64g,94％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝298。¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ7.88(d,j＝9.6hz,1h),7.79(s,1h),6.27(d,j＝9.6hz,1h),5.36-5.30(m,1h),4.86(dd,j＝3.5,11.2hz,1h),4.62(dd,j＝2.4,11.2hz,1h),4.43(dd,j＝10.1,12.0hz,1h),4.25(dd,j＝5.1,12.1hz,1h),3.21(s,3h)。

步骤2-4-氯-6-氟-2h-1-苯并吡喃-2-酮的合成：

将et3n(3.5ml,25mmol)历时5min加入6-氟-4-羟基-2h-1-苯并吡喃-2-酮(3.0g,16.7mmol)在pocl3(42ml,450mmol)中的悬浮液中。将混合物在室温搅拌10min，然后回流加热16h。将反应物冷却至室温，并然后在减压下浓缩。加入甲苯并蒸发。将残余物在dcm和碳酸氢钠水溶液之间分配。将水相用dcm萃取，然后将合并的有机萃取物用水洗涤，经na2so4干燥和蒸发。将残余物通过fcc(2-6％的etoac在甲苯中的溶液)纯化以得到标题化合物(3.082g,93％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝199。¹hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.57(dd,j＝2.4,8.2hz,1h),7.39-7.32(m,2h),6.67(s,1h)。

步骤3-4-{2-[(6-氟-2-氧代-2h-1-苯并吡喃-4-基)氨基]-1-羟基乙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成：

将et3n(1.0ml,7.2mmol)加入4-(2-氨基-1-羟基乙基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.818g,3.34mmol)在etoh(25ml)中的溶液中。加入4-氯-6-氟-2h-1-苯并吡喃-2-酮(0.65g,3.27mmol)，并将混合物在室温搅拌5min，然后在70℃加热7.5h。将反应混合物冷却并然后蒸发。将残余物通过fcc(2-8％[2m的nh3在meoh中的溶液]在dcm中)纯化以得到标题化合物(0.859g,65％收率)。lc-ms(m-na⁺)＝429。¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ8.01(dd,j＝2.9,10.0hz,1h),7.55(brt,j＝5.3hz,1h),7.50-7.45(m,1h),7.37(dd,j＝4.9,9.1hz,1h),5.23(s,1h),4.95(d,j＝5.3hz,1h),4.04-3.91(m,2h),3.62-3.57(m,1h),3.36-3.30(m,1h,在水峰下),3.18-3.11(m,1h),2.74-2.53(m,2h),1.77-1.69(m,1h),1.61-1.53(m,2h),1.39(s,9h),1.32-1.13(m,2h)。

步骤4-6-氟-4-{[2-羟基-2-(哌啶-4-基)乙基]氨基}-2h-1-苯并吡喃-2-酮的合成：

将tfa(7.5ml)加入冰冷却的4-{2-[(6-氟-2-氧代-2h-1-苯并吡喃-4-基)氨基]-1-羟基乙基}哌啶-1-甲酸叔丁酯(0.859g,2.11mmol)在dcm(30ml)中的溶液中。将混合物在室温搅拌1h。加入甲苯并蒸发。将残余物溶解在meoh(25ml)中，应用于scx-2柱，并用meoh洗涤。将产物用2m的nh3在meoh中的溶液洗脱并蒸发，得到标题化合物(0.502g,78％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝307。¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ8.03(dd,j＝2.9,10.1hz,1h),7.57(t,j＝5.4hz,1h),7.50-7.45(m,1h),7.37(dd,j＝4.8,9.1hz,1h),5.20(s,1h),4.88(brs,1h),3.56-3.51(m,1h),3.18-3.08(m,2h),2.99-2.90(m,2h),2.46-2.37(m,2h),1.70-1.65(m,1h),1.55-1.41(m,2h),1.31-1.13(m,2h)。

步骤5-(2r)-2-[(4-{2-[(6-氟-2-氧代-2h-1-苯并吡喃-4-基)氨基]-1-羟基乙基}哌啶-1-基)甲基]-1,2-二氢-3h,8h-2a,5,8a-三氮杂苊-3,8-二酮(化合物343,非对映异构体混合物)的合成：

将甲磺酸(s)-(3,8-二氧代-1,2-二氢-3h,8h-2a,5,8a-三氮杂苊-2-基)甲酯(0.300g,1.01mmol)、6-氟-4-{[2-羟基-2-(哌啶-4-基)乙基]氨基}-2h-1-苯并吡喃-2-酮(0.464g,1.51mmol)、吡啶(0.33ml,4.0mmol)和i-proh(20ml)的混合物在密封瓶中在120℃搅拌2.5h。将冷却的混合物蒸发至干燥并经由fcc(2-14％[2m的nh3在meoh中的溶液]在dcm中)纯化以得到作为灰白色固体的标题化合物(0.167g,33％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝508.4。¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ8.01(dd,j＝2.9,10.0hz,1h),7.85(d,j＝9.6hz,1h),7.73(s,1h),7.52(t,j＝5.0hz,1h),7.50-7.45(m,1h),7.37(dd,j＝4.9,9.1hz,1h),6.25(d,j＝9.5hz,1h),5.21(s,1h),5.08-5.02(m,1h),4.88(dd,j＝1.0,5.4hz,1h),4.33(dd,j＝9.4,11.8hz,1h),4.25(dd,j＝5.0,11.7hz,1h),3.57-3.51(m,1h),3.32-3.28(m,1h),3.15-3.08(m,1h),3.03-2.95(m,2h),2.78(dd,j＝8.9,12.6hz,1h),2.71-2.65(m,1h),2.18-2.00(m,2h),1.75-1.66(m,1h),1.59-1.51(m,1h),1.39-1.18(m,3h)。

化合物354的制备

如下文中所述制备化合物354。

步骤1-(2-{[反式-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基]氨基}乙基)氨基甲酸叔丁酯的合成：

将反式-1-(4-氨基环己基)-7-氟-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮(296mg,1.12mmol)、n-boc-2-氨基乙醛(178mg,1.12mmol)和ms在meoh(8ml)中的混合物在室温搅拌18h。加入nabh4(80mg,2.1mmol)，并将混合物在室温搅拌24h。将混合物穿过硅藻土过滤，将滤饼用meoh和dcm洗涤，然后将合并的有机层在真空下浓缩以剩下残余物。fcc(0-5％[2n的nh3在meoh中的溶液]在dcm中)得到标题中间体(180mg,39％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝409。¹hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.78(d,j＝2.6hz,1h),7.19(dd,j＝2.5,9.0hz,1h),4.89(brs,1h),4.07(tt,j＝3.8,12.6hz,1h),3.22(q,j＝5.8hz,2h),2.77(t,j＝5.9hz,2h),2.57(tt,j＝3.7,11.1hz,1h),2.41(dq,j＝3.3,12.9hz,2h),2.10(明显的brd,j＝12.8hz,2h),1.83(明显的brd,j＝12.8hz,2h),1.51-1.45(m,11h),1.30-1.16(m,2h)。

步骤2-1-{反式-4-[(2-氨基乙基)氨基]环己基}-7-氟-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮的合成：

将(2-反式-4-(7-氟-2-氧代-2,3-二氢-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-1-基)环己基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(180mg,0.44mmol)在tfa(0.50ml)和dcm(2ml)中的混合物在室温搅拌1.5h。将混合物应用于scx-2柱，用meoh洗涤，并然后用nh3在meoh中的溶液(2n)洗脱；在真空下浓缩，剩下棕色固体(113mg,83％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝309。¹hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.78(d,j＝2.6hz,1h),7.20(dd,j＝2.6,9.0hz,1h),4.67(s,2h),4.06(tt,j＝3.9,12.3hz,1h),2.83(dd,j＝5.3,6.2hz,2h),2.71(dd,j＝5.2,6.4hz,2h),2.58(tt,j＝3.7,11.1hz,1h),2.43(dq,j＝3.4,12.9hz,2h),2.15-2.09(m,2h),1.87-1.81(m,2h),1.25(ddt,j＝3.6,12.5,12.3hz,2h)。

步骤3-7-氟-1-[反式-4-({2-[(6-氟-2-氧代-2h-1-苯并吡喃-4-基)氨基]乙基}氨基)环己基]-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮(化合物354)的合成：

向1-{反式-4-[(2-氨基乙基)氨基]环己基}-7-氟-1h-吡啶并[2,3-b][1,4]嗪-2(3h)-酮(110mg,0.36mmol)和et3n(43mg,0.43mmol)在mecn(3ml)中的溶液中加入三氟甲磺酸6-氟-2-氧代-2h-色烯-4-基酯，并将混合物在室温搅拌2h。将混合物在水和etoac之间分配，然后将水相用etoac萃取。将合并的有机层干燥(mgso4)、过滤并在真空下浓缩以剩下粗产物。fcc(15μm二氧化硅,0-3.5％[2m的nh3在meoh中的溶液]在dcm中)得到灰白色固体。将固体与mecn(1ml)一起研磨以剩下湿固体，将其在真空下在60℃干燥以得到标题化合物(46mg,27％收率)。lc-ms(m-h⁺)＝471.3。¹hnmr(400mhz,dmso-d6):δ7.98(dd,j＝2.9,10.0hz,1h),7.87-7.81(m,2h),7.55(s,1h),7.48(ddd,j＝2.9,8.0,9.0hz,1h),7.37(dd,j＝4.8,9.1hz,1h),5.25(s,1h),4.70(s,2h),4.04(tt,j＝3.7,11.9hz,1h),3.32(2h,在水峰下的亚甲基信号),2.82(t,j＝6.5hz,2h),2.50(1h,在溶剂峰下的次甲基信号),2.35(dq,j＝2.9,12.7hz,2h),1.94(d,j＝11.9hz,2h),1.71(d,j＝11.4hz,2h),1.28-1.16(m,2h)。

生物学测定

实施例1

大肠杆菌(e.coli)和金黄色葡萄球菌(s.aureus)中的dna促旋酶和topoiv的抑制

如下试验以上化合物：根据下述方法，在革兰氏阳性的和革兰氏阴性的细菌中，在促旋酶超螺旋测定中试验酶dna促旋酶的抑制和在解连环(decatenation)测定中试验酶拓扑异构酶iv的抑制。

根据从以下文章修改的方案方法进行两种所述测定：blanchef,等人“differentialbehaviorsofstaphylococcusaureusandescherichiacolitypeiidnatopoisomerases”,antimicrob.agentschemother.,1996,第40卷,第12期第2714-2720页。

一式两份地在单一浓度(200、100或50μm)筛选所述化合物。

分别在200和50μm的单一浓度，将环丙沙星和新生霉素用作参照化合物。

dna促旋酶超螺旋测定

使用来自金黄色葡萄球菌和大肠杆菌促旋酶超螺旋测定试剂盒(inspiralis,uk)的试剂。用下述试剂制备具有对于要进行的反应数目而言足够的总体积的主混合物：5×测定缓冲液，松弛的pbr322底物(0.5μg/反应)，无rna酶-dna酶的水。将该混合物的等分试样分配在每个试管中，然后将10×化合物储备溶液或媒介物对照(dmso)加入每个反应试管中。

用大肠杆菌(2u/反应)或金黄色葡萄球菌(1u/反应)促旋酶酶添加开始反应。

将加入了等体积的稀释缓冲液的样品用作阴性对照(不含酶)。

将反应试管轻轻涡旋并在37℃温育30分钟。通过加入30μl停止缓冲液和30μl氯仿/异戊醇(24/1)来停止每个反应，简单涡旋5-10秒并在20000×g离心2分钟。将样品加载到1％琼脂糖凝胶上并在tae(40mmtris-乙酸盐,2mmedta)中在80v恒定电压进行电泳1小时。

数据采集和分析。用含有dna促旋酶的松弛的pbr322处理，将松弛的拓扑异构体(不同连接数目的dna)转化成质粒的超螺旋形式，其在琼脂糖凝胶上更快地迁移。上面的泳带也可能是可见的，其由开环(带切口的)dna组成，所述dna存在于松弛的底物中，但是与一些松弛的拓扑异构体共同迁移。

通过溴化乙锭染色(稀释度1:20000)观察泳带30分钟，随后在蒸馏水中脱色10分钟。

为了评价化合物对酶的活性，根据生产商的说明书用数字成像系统imagequantlas4000(gehealthcare)拍摄凝胶中的超螺旋dna的泳带的照片。

通过imagequanttl软件分析每个泳带的荧光强度，并将它表示为体积(通过使用滚球方法减去背景强度以后，图像特征中的未校准量的材料的体积)。

在相同凝胶上将每个泳带强度与媒介物样品泳带强度(其充当阳性对照)进行对比，作为百分比。

将抑制活性表示为相对于阳性对照的抑制百分比。

结果总结在下面表2中。

拓扑异构酶iv解连环测定

使用金黄色葡萄球菌和大肠杆菌拓扑异构酶iv解连环试剂盒(inspiralis,uk)。用下述试剂制备具有对于要执行的反应数目而言足够的总体积的主混合物：5×测定缓冲液(50mmhepes-koh(ph7.6),100mm谷氨酸钾,10mm醋酸镁,10mmdtt,1mmatp,50μg/ml白蛋白),kdna底物(200ng/反应),无rna酶-dna酶的水。将该混合物的等分试样分配在每个试管中，然后将10×化合物储备溶液或媒介物对照(dmso)加入每个反应试管中。

用拓扑异构酶iv酶(0.5u/反应)添加开始反应。

将加入了等体积的稀释缓冲液的样品用作阴性对照(不含酶)。

将反应试管轻轻涡旋并在37℃温育30分钟。通过加入30μl停止缓冲液和30μl氯仿/异戊醇(24/1)来停止每个反应，简单涡旋5-10秒并在20000×g离心2分钟。将取自上面相的样品加载到1％琼脂糖凝胶中并在tae(40mmtris-乙酸盐,2mmedta)中在80v恒定电压进行电泳1小时。

数据采集和分析。由于高分子质量，kdna在正常电泳条件下不可进入琼脂糖凝胶中，而是保留在孔中。在有topoiv拓扑异构酶存在下，微环(2.5kb)通过解连环而从kdna释放并在相对较高的电压快速地和容易地溶解在凝胶中。

通过溴化乙锭染色(稀释度1:20000)观察泳带30分钟，随后在蒸馏水中脱色10分钟。

对于单个浓度筛选测定，为了评价化合物对酶的活性，根据生产商的说明书用数字成像系统imagequantlas4000(gehealthcare)拍摄凝胶中解连环的(decatenated)dna的泳带的照片。

通过imagequanttl软件分析每个泳带的荧光强度，并将它表示为体积(通过使用滚球方法减去背景强度以后，图像特征中的未校准量的材料的体积)。

在相同凝胶上将每个泳带强度与媒介物样品泳带强度(其充当阳性对照)进行对比，作为百分比。

将抑制活性表示为相对于阳性对照的抑制百分比。

结果总结在下面表2中。

表2

n/a＝无活性

以上结果表明，举例说明的化合物有效地抑制大肠杆菌(其为革兰氏阳性细菌)和/或金黄色葡萄球菌(其为革兰氏阴性细菌)的dna促旋酶和topoiv。

实施例2

ic50的确定

为了确定ic50，在浓度-响应曲线(在0.1-300μm范围内的8个半对数浓度)中进一步测定在以上实施例1中表现出抑制活性的化合物。

如下分析如在实施例1中所述得到的超螺旋的或解连环的dna泳带。

将泳带通过凝胶归档设备(syngene,cambridge,uk)进行分析，并使用syngenegenetools软件量化。将从syngene,genetools凝胶分析软件收集的原始凝胶数据(荧光泳带体积)转化成100％对照(完全超螺旋的或解连环的dna泳带)的百分比。使用sigmaplot12.3版(2013)分析这些数据。使用总曲线拟合非线性回归工具，通过从指数式衰减方程式类别选择单个、2参数拟合函数来计算ic50数据。

结果报告在下表3中。

表3

实施例3

ic50的确定

为了确定ic50，按照在实施例2中描述的操作，在浓度-响应曲线(在0.1-300μm范围内的8个半对数浓度)中测定了化合物301-303、314、343和354。

结果报告在下表4中。

表4

表3的数据是与表2的数据可比较的，并证实了化合物301-303、314、343和354的有效地抑制大肠杆菌和/或金黄色葡萄球菌的dna促旋酶和topoiv的活性。