本发明涉及基因工程技术领域，特别是涉及一种山杏叶角鲨烯的制备方法。
背景技术：
随着生活水平的提高，人们对自身的健康日益关注，全球居民的健康消费水平逐年攀升。由于天然营养保健食品不以治病为目的，能调节人体机能、有特定保健功能，适合于特定人群食用。所以，保健品市场需求十分旺盛。国家卫生部限定的保健食品功能，包括：增强免疫力、改善睡眠、改善营养性贫血、改善生长发育、缓解体力疲劳、提高缺氧耐受力、对辐射危害有辅助保护功能、辅助改善记忆、辅助降血脂、辅助降血糖、辅助降血压、促进消化、减肥、抗氧化、调节肠道菌群、通便等27种。世界各国对保健食品的开发都非常重视，新功能、新产品、新造型和新的食用方法不断出现。
角鲨烯是在黑鲨鱼肝油中发现的一种高度不饱和烃类化合物，是一种重要的生物活性物质，具有增强免疫力、抗癌、防癌及保湿养颜作用，广泛应用于化妆品、医药、保健品、食品等许多行业。目前提取角鲨烯，多以大鲨鱼肝为原料，资源短缺。因此，寻找新的角鲨烯原料资源是提高角鲨烯产量、降低产品价格的必要途径。
技术实现要素：
本发明为了克服上述技术问题的不足，提供了一种山杏叶角鲨烯的制备方法，可以很大程度上扩大角鲨烯原料资源。
解决上述技术问题的技术方案如下：
一种山杏叶角鲨烯的制备方法，包括以下步骤：
(1)原料准备：选取无破损、颜色均匀的山杏叶，阴干，粉碎成山杏叶粉；
(2)固体发酵：向步骤(1)的山杏叶粉内加入活化好的酵母菌液体菌种，进行固体发酵得到山杏叶发酵物；
(3)有机溶剂浸提：在山杏叶发酵物中加入有机溶剂浸提1～2次；
(4)水浴加热：将步骤(3)中浸提的液体在50～70℃水浴环境下加热1～4小时，优选2～3小时，促进山杏叶发酵物中角鲨烯释放，该步骤中需要保持角鲨烯不被氧化；
(5)过滤：对浸提液进行抽滤过滤，去除山杏叶发酵物残渣，留滤液；
(6)浓缩：将步骤(5)所述的滤液通过旋转蒸发去除有机溶剂，获得山杏叶角鲨烯粗提物。
进一步地说，步骤(1)所述的山杏叶为秋天落叶，粉碎至80～120目，优选粉碎至90～110目。
进一步地说，步骤(2)所述的活化好的酵母菌液体菌种为酿酒酵母菌在pda液体培养基中培养30h，在活化好的酵母菌液体菌种加入之前，加入麸皮和红糖的混合物，接入活化好的酵母菌液体菌种量为山杏叶粉、麸皮和红糖混合物总质量的5～30％，优选为10～20％，所述的固体发酵为25～30℃下发酵培养6～15天，优选为28～30℃下发酵培养10～15天。
进一步地说，步骤(3)中所述的有机溶剂为30～60℃的石油醚、60～90℃的石油醚或环己烷中任意一种，优选为60～90℃的石油醚。
进一步地说，步骤(3)中山杏叶发酵物和有机溶剂的质量比为1:2～10。
进一步地说，步骤(4)中所述的需要保持角鲨烯不被氧化是通过控制温度不超过70℃实现。
进一步地说，步骤(6)中所述的旋转蒸发是在60～90℃真空条件下进行，优选为60～80℃真空条件下进行。
该山杏叶角鲨烯的应用是可以将山杏叶角鲨烯粗提物生产保健食品。
本发明的有益效果是：
本发明提供了一种从山杏叶提取角鲨烯的方法，工艺简单，成本较低，制备的角鲨烯纯度好，开辟了角鲨烯的新原料源，具有较强的实用性。
我国有山杏面积3000多万亩，据估算每年山杏叶的产量为12000多万t。但总体来说，山杏叶的利用率极低，研究发现，山杏叶中含有五环三萜类化合物、黄酮类化合物等生物活性物质，山杏叶提取物具有很高的抗氧化生物活性。对山杏叶提取物进行gc-ms分析，发现其中角鲨烯含量较高。另据报道，酵母菌中角鲨烯含量相对较高，借助酵母菌发酵山杏叶，将山杏叶的纤维素分解，促进角鲨烯释放，同时酵母菌生长合成角鲨烯。
本发明以秋天山杏落叶为原料，经酵母发酵，促进山杏叶角鲨烯的释放，同时酵母菌生长合成角鲨烯，利用石油醚或环己烷非极性高的特点，溶解山杏叶中的角鲨烯，使其充分释放出来，大大提高了成品中角鲨烯含量。在操作过程中，是直接将山杏叶发酵物与石油醚或者环己烷混合，通过水浴加热处理加速有效成分的释放，简单高效；山杏叶角鲨烯不含任何化学成分和有毒物质，是一种新型、纯天然的保健品前原料。在加入活化好的酵母菌液体菌种之前加入了麸皮和红糖，其作用是让酵母菌能够在培养液中良好生长。经gc-ms定性检测，检测结果如图1所示，图1中，上部分是角鲨烯标准品图，下部分是山杏叶提取物图，经过比对，确定提取物为角鲨烯。经过gc-ms定性检测和后期气相色谱法定量分析(如图2或3所示，5分钟左右的峰是角鲨烯的峰)，确定本发明获得的提取物角鲨烯含量为3.67％。
附图说明
下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
图1为角鲨烯标品(上图)及山杏叶提取物(下图)gc-ms检测图；
图2为角鲨烯标品气相色谱图；
图3为山杏叶提取物气相色谱图；
具体实施方式
实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购获得的常规产品。
实施例1：
一种山杏叶角鲨烯的制备方法，包括以下步骤：
(1)原料准备：选取无破损、颜色均匀的山杏叶，阴干至含水量为10％～15％，粉碎成山杏叶粉；山杏叶为秋天(每年阳历8月底到11月初)落叶，粉碎至80目，取100g。
(2)固体发酵：向步骤(1)的山杏叶粉内加入1g麸皮和1.5g红糖，接入活化好的酵母菌液体菌种，进行固体发酵得到山杏叶发酵物；接入活化好的酵母菌液体菌种量为山杏叶粉、麸皮和红糖混合物总质量的5％，固体发酵为25℃下发酵培养6天。
(3)有机溶剂浸提：在山杏叶发酵物中加入有机溶剂浸提1次；有机溶剂为30～60℃的石油醚，山杏叶发酵物和有机溶剂的质量比为1:2。
(4)水浴加热：将步骤(3)中浸提的液体(包括山杏叶发酵物和有机溶剂混合物料)在50℃水浴环境下加热1小时，促进山杏叶发酵物中角鲨烯释放，该步骤中需要保持角鲨烯不被氧化；
(5)过滤：对浸提液进行抽滤过滤，去除山杏叶发酵物残渣，留滤液；
(6)浓缩：将步骤(5)所述的滤液通过旋转蒸发去除有机溶剂，获得山杏叶角鲨烯粗提物0.20g，旋转蒸发是在60℃真空条件下进行。
该山杏叶角鲨烯粗提物可以用来生产保健食品。
实施例2：
一种山杏叶角鲨烯的制备方法，包括以下步骤：
(1)原料准备：选取无破损、颜色均匀的山杏叶，阴干至含水量为10％～15％，粉碎成山杏叶粉；山杏叶为秋天(每年阳历8月底到11月初)落叶，粉碎至120目，取100g。
(2)固体发酵：向步骤(1)的山杏叶粉内加入1g麸皮和1.5g红糖，接入活化好的酵母菌液体菌种，进行固体发酵得到山杏叶发酵物；接入酵母菌液体菌种量为山杏叶粉、麸皮和红糖混合物总质量的30％，固体发酵为30℃下发酵培养15天。
(3)有机溶剂浸提：在山杏叶发酵物中加入有机溶剂浸提2次；有机溶剂为60～90℃的石油醚。山杏叶发酵物和有机溶剂的质量比为1:10。
(4)水浴加热：将步骤(3)中浸提的液体(包括山杏叶发酵物和有机溶剂混合物料)在70℃水浴环境下加热4小时，促进山杏叶发酵物中角鲨烯释放，该步骤中需要保持角鲨烯不被氧化，一旦温度超过70℃，角鲨烯会迅速氧化，保证温度不可以超过70℃为宜；
(5)过滤：对浸提液进行抽滤过滤，去除山杏叶发酵物残渣，留滤液；
(6)浓缩：将步骤(5)所述的滤液通过旋转蒸发去除有机溶剂，获得山杏叶角鲨烯粗提物0.25g，旋转蒸发是在90℃真空条件下进行。
该山杏叶角鲨烯粗提物可以用来生产保健食品。
实施例3：
一种山杏叶角鲨烯的制备方法，包括以下步骤：
(1)原料准备：选取无破损、颜色均匀的山杏叶，阴干至含水量为10％～15％，粉碎成山杏叶粉；山杏叶为秋天(每年阳历8月底到11月初)落叶，粉碎至100目，取100g。
(2)固体发酵：向步骤(1)的山杏叶粉内加入1g麸皮和1.5g红糖，接入活化好的酵母菌液体菌种，进行固体发酵得到山杏叶发酵物；接入酵母菌液体菌种量为山杏叶粉、麸皮和红糖混合物总质量的20％，固体发酵为28℃下发酵培养10天。
(3)有机溶剂浸提：在山杏叶发酵物中加入有机溶剂浸提1次；有机溶剂为环己烷。山杏叶发酵物和有机溶剂的质量比为1:6。
(4)水浴加热：将步骤(3)中浸提的液体(包括山杏叶发酵物和有机溶剂混合物料)在60℃水浴环境下加热3小时，促进山杏叶发酵物中角鲨烯释放，该步骤中需要保持角鲨烯不被氧化；
(5)过滤：对浸提液进行抽滤过滤，去除山杏叶发酵物残渣，留滤液；
(6)浓缩：将步骤(5)所述的滤液通过旋转蒸发去除有机溶剂，获得山杏叶角鲨烯粗提物0.28g，旋转蒸发是在80℃真空条件下进行。
该山杏叶角鲨烯粗提物可以用来生产保健食品。
实施例4：
一种山杏叶角鲨烯的制备方法，包括以下步骤：
(1)原料准备：选取无破损、颜色均匀的山杏叶，阴干至含水量为10％～15％，粉碎成山杏叶粉；山杏叶为秋天(每年阳历8月底到11月初)落叶，粉碎至90目，取100g。
(2)固体发酵：向步骤(1)的山杏叶粉内加入1g麸皮和1.5g红糖，接入活化好的酵母菌液体菌种，进行固体发酵得到山杏叶发酵物；接入酵母菌液体菌种量为山杏叶粉、麸皮和红糖混合物总质量的20％，固体发酵为28℃下发酵培养15天。
(3)有机溶剂浸提：在山杏叶发酵物中加入有机溶剂浸提1次；有机溶剂为60～90℃的石油醚。山杏叶发酵物和有机溶剂的质量比为1:6。
(4)水浴加热：将步骤(3)中浸提的液体(包括山杏叶发酵物和有机溶剂混合物料)在55℃水浴环境下加热3小时，促进山杏叶发酵物中角鲨烯释放，该步骤中需要保持角鲨烯不被氧化；
(5)过滤：对浸提液进行抽滤过滤，去除山杏叶发酵物残渣，留滤液；
(6)浓缩：将步骤(5)所述的滤液通过旋转蒸发去除有机溶剂，获得山杏叶角鲨烯粗提物0.23g，旋转蒸发是在75℃真空条件下进行。
该山杏叶角鲨烯粗提物可以用来生产保健食品。
实施例5：
一种山杏叶角鲨烯的制备方法，包括以下步骤：
(1)原料准备：选取无破损、颜色均匀的山杏叶，阴干至含水量为10％～15％，粉碎成山杏叶粉；山杏叶为秋天(每年阳历8月底到11月初)落叶，粉碎至110目，取100g。
(2)固体发酵：向步骤(1)的山杏叶粉内加入1g麸皮和1.5g红糖，接入活化好的酵母菌液体菌种，进行固体发酵得到山杏叶发酵物；接入酵母菌液体菌种量为山杏叶粉、麸皮和红糖混合物总质量的10％，固体发酵为30℃下发酵培养10天。
(3)有机溶剂浸提：在山杏叶发酵物中加入有机溶剂浸提1次；有机溶剂为60～90℃的石油醚。山杏叶发酵物和有机溶剂的质量比为1:6。
(4)水浴加热：将步骤(3)中浸提的液体(包括山杏叶发酵物和有机溶剂混合物料)在55℃水浴环境下加热3小时，促进山杏叶发酵物中角鲨烯释放，该步骤中需要保持角鲨烯不被氧化；
(5)过滤：对浸提液进行抽滤过滤，去除山杏叶发酵物残渣，留滤液；
(6)浓缩：将步骤(5)所述的滤液通过旋转蒸发去除有机溶剂，获得山杏叶角鲨烯粗提物0.22g，旋转蒸发是在65℃真空条件下进行。
该山杏叶角鲨烯粗提物可以用来生产保健食品。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明做任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质上对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化，均落入本发明的保护范围之内。